甲基莲心碱增强伊马替尼、多柔比星对K562/G01细胞敏感性的研究

目的 探讨甲基莲心碱(Nef)在耐伊马替尼多药耐药细胞株(K562/G01)对STI 571、多柔比星敏感作用的影响.方法 采用改良MTT法观察STI 571或DOX单用与联用Nef对K562/G01细胞增殖抑制的变化.结果 STI 571(20 μmol·L-1)或DOX(1 μmol·L-1)单用细胞抑制率(37.72±2.17)、(29.51±2.28);与Nef(8μmol·L-1)联用细胞抑制率明显升高(P＜0.01),分别为(88.64±3.04)、(51.93±3.52),逆转倍数分别为(2.35±0.04)、(1.76±0.02).结论 Nef能增强K562/G01细胞对STI 571、DOX的敏感性.     

蛋白激酶C抑制药enzastaurin对吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

目的：观察新型靶向制剂enzastaurin单独或联合吉非替尼对耐药人非小细胞肺癌细胞株的影响,设计合理的治疗药物组合。方法：CCK8法检测细胞增殖,Chou-Talalay联用指数法判定联合用药效果,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：单药吉非替尼及enzastaurin作用NCI-H460耐药肺癌细胞72 h的半数抑制浓度（IC50）分别为6.99μmol·L-1（95%CI 3.55~13.79μmol·L-1）,7.25μmol·L-1（95%CI 4.77~1.02μmol·L-1）。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强（P 〈0.05）,同时给药组抑制效果更显著（P〈0.01）。同时给药组、序贯给药组（先用吉非替尼）和序贯给药组（先用enzastaurin）吉非替尼对H460细胞的IC50值分别为0.006μmol·L-1（95%CI 0.002~0.020μmol·L-1）,0.02μmol·L-1（95%CI 0.011~0.037μmol·L-1）,0.085μmol·L-1（95%CI 0.042~0.170μmol·L-1）。联合指数法显示在吉非替尼浓度0.05μmol·L-1以上时,同时给药组联合指数均〈1。细胞周期分布实验结果显示同时给药组可显著提高G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,阻滞细胞于G1期。结论：蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。     

BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂STI571选择性诱导K562细胞凋亡

目的 探讨STI571抑制慢性髓性白血病（CML）细胞株增殖的机理及特异性。方法 选用非特异性的凋亡诱导剂阿霉素和BCR－ABL阴性的白血病细胞株MO7E作为对照，观察两种抑制剂作用下两种细胞形态学的改变和胞浆DNA电泳图的改变。结果 STI571可诱导K562细胞凋亡，而对MO7E细胞无致凋亡作用；阿霉素可诱导MO7E细胞凋亡，而对K562细胞无诱导凋亡作用。结论 STI571通过阻断BCR－ABL酪氨酸激酶活力，促进K562细胞凋亡达到抑制细胞增殖的目的，而对不表达BCR－ABL的细胞株无诱导凋亡的作用，提示STI571的作用具有一定的特异性。     

亚砷酸对人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究亚砷酸（ATO）对人骨髓间充质干细胞（MSC）增殖及凋亡的影响。方法：通过正常志愿者髂后上棘穿刺获得MSC,体外培养传代,取第3代细胞鉴定后进行实验。纯化的MSC与1、5、10μmol/L的ATO共孵育,分别在24、48、72h时采用HE染色观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡情况。结果：ATO可引起MSC形态明显改变;抑制MSC增殖,不同浓度（1、5、10μmol/L）ATO对MSC作用72h时的细胞增殖抑制率分别为（66.3±2.2）%、（81.1±1.7）%、（90.0±2.2）%;FCM检测表明ATO可诱导MSC凋亡,10μmol/L的ATO处理72h时引起（68.37±2.93）%的凋亡率。这3种作用均随ATO浓度及作用时间的增加而增强。结论：ATO可在体外抑制MSC增殖,并促进其凋亡。     

新型化合物XN4抑制急性粒细胞白血病细胞增殖与其诱导氧化性的DNA损伤的关系

目的研究XN4在体外抑制急性粒细胞白血病细胞(AML)增殖的作用与诱导DNA损伤的关系。方法 MTT法检测XN4对AML细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测AML细胞反应性氧自由基(ROS)、DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡;Western blot探讨XN4对相关蛋白表达的影响。结果 XN4明显抑制AML细胞增殖,半数抑制率(IC50)分别为(2.79±0.15)μmol·L-1和(2.76±0.20)μmol·L-1;XN4增加细胞ROS水平和r-H2AX的表达,诱导细胞阻滞在S期并增加细胞凋亡率;XN4能增加H2AX、ATM的磷酸化以及Parp和Caspase-3的切割,而减少CDK2和Cyclin E1的表达。结论 XN4通过激活ROS,诱导DNA的损伤和细胞周期S期阻滞,抑制DNA损伤修复和诱导细胞的凋亡,抑制HL-60及KG1α细胞的增殖,抗氧化剂NAC(N-乙酰半胱氨酸)能减少ROS的产生逆转XN4的作用。     

顺铂联合姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的：研究应用顺铂联合姜黄素对诱导胃癌细胞HGC27凋亡的影响及机制。方法：用CCK8法检测单独或联合使用不同剂量顺铂或/和姜黄素对胃癌细胞HGC27增殖的影响;用Hochest33258染色检测联合应用顺铂和姜黄素诱导胃癌细胞HGC27凋亡的发生率。用Western blot检测细胞凋亡相关分子PARP1蛋白剪切体和DNA损伤蛋白p-γH2AX的表达变化。结果：单用顺铂可以呈剂量依赖性地促进HGC27细胞凋亡。5μmol·L-1姜黄素对HGC27细胞增殖无明显作用,10μmol·L-1姜黄素反而轻微促进HGC27细胞增殖。20、40、80μmol·L-1姜黄素对HGC27细胞的增殖抑制率分别为10.97%、15.15%、32.93%。分析联合用药组：5μmol·L-1姜黄素联合顺铂组反而促进HGC27细胞生长;10μmol·L-1姜黄素联合不同剂量顺铂和单用顺铂组比较,组间抑制率没有统计学差异（P>0.05）。20μmol·L-1姜黄素联合4、6μmol·L-1顺铂有明显的促进细胞的凋亡作用,抑制率分别为70.68%、87.30%。 Hochest33258染色结果显示,联合用药组细胞凋亡小体和坏死细胞明显增多。 Western blot结果显示,在联合用药组HGC27细胞PARP1剪切体蛋白和p-γH2AX蛋白表达明显增加。结论：顺铂联合姜黄素可以促进胃癌细胞HGC27的凋亡,机制是姜黄素可以加重顺铂引起的细胞DNA双链损伤。     

新生霉素对STI571耐药K562/G01细胞的作用

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂新生霉素(novobiocin,NB)对STI571耐药K562/G01细胞生长的抑制作用,并研究NB和STI571联合应用对STI571敏感和耐药细胞的作用,并进一步探讨该作用与Bcr-Abl蛋白水平和Bcr-Abl激酶水平的关系。方法用MTT法检测NB对K562和K562/G01细胞生长的抑制作用,用金氏公式评价药物合用体外是否有协同作用,用蛋白免疫印迹法检测Bcr-Abl蛋白水平和p-Tyrosine水平。结果NB能抑制K562和K562/G01细胞增殖,IC50分别是0.4353mmol.L-1和0.3490mmol.L-1;NB和STI571联合应用对STI571敏感和耐药细胞均有协同作用;NB能使K562和K562/G01细胞内Bcr-Abl和p-Tyrosine蛋白含量减少。结论NB通过减少Bcr-Abl和p-Tyrosine蛋白含量,抑制STI571耐药细胞K562/G01的增殖,NB和STI571有协同效应。     

人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖及[Ca~（2＋）]_i的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖及[Ca2＋]i的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）研究人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖的影响,应用荧光分光光度法观察人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞内[Ca2＋]i的影响。结果：与对照组相比,吗啡慢性作用48h可显著抑制SK-N-SH细胞的增殖,细胞内游离钙离子浓度显著增高（P〈0.01）;单独加入16μmol.L-1Rb1可显著促进SK-N-SH细胞的增殖（P〈0.05）;人参皂苷Rb1（16μmol.L-1,32μmol.L-1）对细胞进行预处理能缓解吗啡对细胞的抑制作用（P〈0.05）。单独加入16μmol.L-1Rb1可使SK-N-SH细胞内[Ca2＋]i显著降低（P〈0.01）;慢性吗啡作用SK-N-SH细胞48h,能使细胞内[Ca2＋]i明显升高（P〈0.01）;慢性吗啡作用SK-N-SH后,加入（16μmol.L-1,32μmol.L-1）人参皂苷Rb1能有效地抑制吗啡引起的细胞内[Ca2＋]i升高（P〈0.01）。结论：人参皂苷Rb1可显著缓解吗啡对SK-N-SH细胞的抑制作用和吗啡引起的[Ca2＋]i升高。     

苯扎贝特协同顺铂抑制肺腺癌细胞生长和诱导凋亡

目的观察过氧化物酶体增殖因子激活受体α(PPARα)激动剂苯扎贝特联用顺铂对肺腺癌A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的协同效应及可能机制。方法采用CCK8法测定不同浓度苯扎贝特处理A549细胞的生长曲线,观察苯扎贝特、顺铂及两药联用对A549细胞的生长抑制作用,并应用中效原理评价两药联用效应;采用流式细胞技术分析苯扎贝特与顺铂联用对细胞凋亡的诱导作用,并通过qRT-PCR检测A549细胞中VEGF和HIF-1αmRNA的表达变化。结果苯扎贝特联合顺铂呈现明显协同抑制效应,两药联用时IC50值为15.92μmol·L-1,当苯扎贝特浓度小于588μmol·L-1,顺铂浓度小于206μmol·L-1,CI值小于1,即两药合用均产生协同作用。联合用药组细胞凋亡率明显高于单药组(P<0.05),并且联合用药组较单药组显著下调VEGF和HIF-1αmRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苯扎贝特联合顺铂对肺癌细胞具有协同抑制效应,并可有效诱导细胞凋亡,其机制可能与下调VEGF和HIF-1α的表达有关。     

塞来昔布与氟尿嘧啶联用对人胃癌细胞系SGC7901增殖的影响

目的：体外研究选择性环氧酶-2抑制剂塞来昔布（Celecoxib）与氟尿嘧啶（5-FU）联用对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖的相互作用。方法：采用MTT法观察不同浓度Celecoxib、5-FU单独和联合应用对SGC7901细胞生长的抑制作用,并使用中效原理判定两药合用的效果。结果：两种药物单独应用时,对细胞的抑制作用呈明显的剂量效应依赖关系;Celecoxib的中效浓度（IC50）为37.537μmol.L-1,5-FU的中效浓度为133.487μmol.L-1,这两种药物联用时存在＂加速抑制作用＂。应用中效原理分析显示,两种药物联用时存在协同效应,而与药物应用的先后顺序无关。结论：Celecoxib与5-FU在联合应用时的相互作用为协同效应,研究结果对提高胃癌的治疗效果具有一定的临床参考价值。     

白藜芦醇对髓系白血病干细胞增殖和凋亡的影响及其与allo-NK细胞的联合杀伤作用

目的探讨白藜芦醇(RES)对髓系白血病干细胞(CD34+CD38-KG1a细胞,以下简写为KG1a细胞)增殖和凋亡的影响,并初步探讨RES增强allo-NK细胞对KG1a细胞杀伤作用的机制。方法免疫磁珠分选法分选人外周血单个核细胞(PBMCs)中的CD16+CD56+CD3-NK细胞(以下简写为NK细胞)。流式细胞术检测细胞表面分子CD34、CD38、CD3、CD15和CD56。MTT法、甲基纤维素克隆形成实验检测RES对KG1a细胞增殖抑制作用。DAPI染色法和流式细胞术检测RES对KG1a细胞凋亡的影响。使用IC50的RES作用KG1a细胞24 h后清洗离心获得RES/KG1a细胞。LDH释放法检测NK细胞对KG1a细胞和RES/KG1a 2种细胞的杀伤能力。流式细胞术检测KG1a细胞和RES/KG1a细胞的表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3、MICA和MICB。结果免疫磁珠分选后,外周血单个核细胞中的NK细胞比例为(90.5±3.2)%;KG1a细胞纯度为(91.2±3.9)%。RES对KG1a细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,24 h的IC50=24.0μmol·L-1;48 h的IC50=13.7μmol·L-1。RES抑制KG1a细胞的克隆形成能力并诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性(P<0.05)。NK细胞对RES/KG1a细胞的杀伤能力比其对KG1a细胞的杀伤能力强(P<0.05)。与KG1a细胞比较,RES/KG1a细胞表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3表达明显上调(P<0.05),MICA和MICB变化不明显。结论 RES能够抑制KG1a细胞增值抑制并诱导细胞凋亡,联合NK细胞对KG1a细胞具有协同杀伤作用,这可能与KG1a细胞表面的ULBP1、ULBP2、ULBP3表达上调相关。     

生姜醇提取物对人肺腺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

目的:研究生姜醇提取物对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用浓度为10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物分别处理A549细胞24h,以未经生姜醇提取物处理的A549细胞为对照。MTT比色法检测A549细胞增殖能力;光镜观察细胞的生长情况、形态学改变;原位末端TdT酶标记技术(TUNNEL)检测细胞凋亡的情况。结果:MTT比色法结果表明,10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物抑制率分别为14.87%、24.72%、38.21%,与对照组(0.04%)比较抑制率显著增加(P<0.01),并随生姜醇提取物浓度增高而显著增加;光镜观察对照组细胞生长正常,凋亡细胞少见,而生姜醇提取物处理的A549细胞生长疏散,凋亡细胞的比例增加,程度随生姜醇提取物浓度增高而加重,尤以40μmol·L-1作用24h最显著;TUNNEL检测的10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物下的A549细胞凋亡细胞指数分别为(9.36±0.82)%、(13.74±1.15)%、(19.17±1.40)%,与对照组(4.81±0.36%)比较均有显著差异(P<0.01),并随生姜醇提取物浓度增高而显著增加。结论:生姜醇提取物能抑制人肺腺癌细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性,即随剂量的增加而抑制率增加。     

马蹄金素衍生物的合成及其抗HBV活性研究

目的对马蹄金素[N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇,MTS]进行结构修饰,以期寻找到抗乙肝病毒(HBV)活性更强、毒性更低的马蹄金素衍生物。方法以马蹄金素为先导化合物进行结构优化,合成一系列不同取代基团的马蹄金素衍生物并对其进行抗HBV活性测试。结果合成了马蹄金素衍生物共计9个,经体外活性筛选结果显示有4个衍生物具有抗HBV活性,4a(IC50:24.20μmol·L-1,SI:3.69)、5f(IC50:252.60μmol·L-1,SI:>3.96)、5g(IC50:0.82μmol·L-1,SI:52.57)、5h(IC50:1.44μmol·L-1,SI:59.97)。结论化合物5g和5h显示较强的抗HBV活性,选择指数较高,具有进一步研究开发的价值。     

地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株HL-60促凋亡和分化的影响

目的探讨地西他滨（DCA）和丙戊酸钠（VPA）联用对白血病细胞株HL-60促凋亡和分化诱导的协同作用。方法白血病细胞株HL-60分别与以下药物终浓度组作用48 h:对照组,DCA单药A组(1.0μmol·L^-1),DCA单药B组(4.0μmol·L^-1),VPA单药组(2.0 mmol·L^-1),联合用药A组(IDCA 1.0μmol·L^-1+VPA 2.0 mmol·L^-1),联合用药B组(DCA 4.0μmol·L^-1+VPA2.0 mmol·L^-1)。应用Annexin V-FTTC/PI标记法检测早期凋亡率,流式细胞术检测CD34、CD117平均荧光强度（MFI）以及CD11b、CD14表达率。结果联合用药A、B组的凋亡率高于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义（P<0.01）;联合用药A、B组的CD117和CD34 MFI低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义（P<0.01）;联合用药A组的CD11b和CD14表达率以及联合用药B组的CD11b表达率均低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义（P<0.01）。结论白血病细胞株HL-60中VPA能显著增强DCA的促凋亡分化作用。     

氨甲喋呤对映体药物对A549人肺腺癌细胞株增殖抑制作用及诱导凋亡作用

目的探讨氨甲喋呤对映体[（＋）MTX,（-）MTX]对A549细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法采用培养的A549细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶（PI）单染流式细胞术检测细胞周期;DNA梯度电泳检测凋亡。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,（＋）MTX和（-）MTX作用于A549细胞24,48,72h,均抑制细胞A549增值,但抑制强度为（＋）MTX〉（-）MTX,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变;用10μmol·L-1的（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞48h后,PI单染流式细胞术检测A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体干扰A549细胞DNA合成;DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中（＋）MTX最为明显。结论 （＋）MTX和（-）MTX对A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,（＋）MTX的抗A549细胞增殖作用明显强于（-）MTX。     

姜黄素固体脂质纳米粒单用或与顺铂联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究姜黄素固体脂质纳米粒(Cur-SLN)单用或与顺铂(DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:单用试验,分组为空白对照组、Cur组、Cur-SLN组(均以Cur计,终浓度为10、20、40、60、80μmo·lL-1);联用试验,分组为空白对照组、DDP组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组,各组DDP终浓度为1、2、3、4、5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1,检测上述各组分别对SKOV3细胞作用24、48、72h后细胞的生长抑制率。另设立空白对照组、DDP组、Cur组、Cur-SLN组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组(DDP终浓度均为2.5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1),检测各组对SKOV3细胞作用24h后细胞凋亡率及细胞周期调控因子Cyclin E、CDK2的表达。结果:相同浓度下,与Cur组比较,Cur-SLN组作用不同时间后细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,DDP+Cur组和DDP+Cur-SLN组细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05),且DDP+Cur-SLN组明显高于DDP+Cur组(P<0.05);与空白对照组比较,5个药物组细胞阻滞主要发生在G2期,细胞凋亡率和Cyclin E、CDK2表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),且DDP+Cur-SLN组明显高于其他组(P<0.05)。结论:Cur-SLN对人卵巢癌SKOV3细胞有明显的生长抑制及促凋亡作用,且与DDP联用有协同效果。     

尼美舒利抑制肝癌Hep3B细胞增殖及β-连环蛋白的转录活性的研究

目的:观察环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对体外培养的人肝细胞癌Hep3B细胞增殖和细胞内β-连环蛋白(β-catenin)转录活性的影响,以探讨尼美舒利抗增殖作用的分子机制。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Hep3B细胞内COX-2mRNA的表达水平;将细胞分别加入10、25、50、100、200μmol·L-1尼美舒利及尼美舒利(100μmol·L-1)+前列腺素E(2PGE2,10μmol·L-1)处理,CCK-8细胞计数法测定细胞增殖活性,双荧光素酶报告系统检测β-catenin的转录活性。同时各试验均设空白对照组进行比较。结果:Hep3B细胞高表达COX-2mRNA。与空白对照组比较,尼美舒利可浓度依赖性地抑制细胞的增殖(P<0.01),作用72h的半数抑制浓度(IC50)为76.33μmol·L-1;尼美舒利显著抑制Hep3B细胞内β-catenin的转录活性(P<0.05),加入PGE2后可显著减弱尼美舒利的作用(P<0.05)。结论:尼美舒利可能通过抑制COX-2活性和PGE2的生成,从而抑制β-catenin的转录活性发挥抗肝癌细胞增殖的作用。     

健康人血浆中内源性左卡尼汀及其酰化物的浓度研究

目的:探讨健康中国人食用标准饮食时血浆中内源性左卡尼汀(LC)及其酰化物浓度的变化,对其内源性LC及其酰化物的水平作系统的研究。方法:12名健康受试者均食用标准饮食,分别于禁食10h后,于0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0h时取5mL前臂静脉血,分离血浆后,-20℃保存。采用高效液相色谱-荧光法测定血浆中LC、乙酰左卡尼汀(ALC)、丙酰左卡尼汀(PLC)的浓度。结果:食用标准饮食时,LC、ALC、PLC0h的血药浓度分别为(40.25±5.32)、(2.33±0.62)、(0.61±0.22)μmol·L-1;平均血药浓度分别为(40.31±5.44)、(2.34±0.47)、(0.62±0.15)μmol·L-1。各时间点、不同性别受试者之间的血药浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:本方法可用作人体内源性LC及其酰化物血浆浓度的检测。