用聚合酶链反应技术检测流产和死胎组织的巨细胞病毒与弓…

作者通过人巨细胞病毒分离、套式聚合酶链反应限制酶切分析、弓形虫分离及一次性ＰＣＲ，对不明原因的流产，死胎组织进行ＨＣＭＶ与弓形虫检测。结果发现，２８份流产，死胎组织中，１例死胎肺组织ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，但病毒分离性；１例胎儿心、肺、脑、肝、肾、眼组织弓形虫ＤＮＡ阳性，其脑、肺眼、肝组织经动物接种后，在小白鼠腹水中找到弓形虫洋养体，但心、肾结果阴性。结果提示：临床上有些不明原因的流产，死胎可能是由于     

套式聚合酶链反应加限制酶谱分析检测母婴垂直传播巨细胞病毒

目的：克服一次性ＰＣＲ假阳性及非特异性条带干扰。方法：建立套式ＰＣＲ技术，对１０５份母－脐配对血进行套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ以及特异性ＩｇＡ测定。结果：母血ＨＣＭＶＤＮＡ阳性６份，脐血３份，母－脐传播率为３／６。３对被证实为母婴垂直传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ及ＩｇＡ均阳性，１对套式ＰＣＲ病毒分离，特异性ＩｇＡ阳性，但特异性ＩｇＭ阴性。结论：套式ＰＣＲ是一种敏感特异、简便快速、能早期诊断ＨＣＭＶ的检测手段，适用于孕妇及胎儿ＨＣＭＶ感染的监测。     

孕妇弓形虫感染及其可能导致的宫内传播

目的：探讨弓形虫感染与优生的关系，摸索早期诊断弓形虫感染的方法。方法：通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、血清学试验及部分动物接种，对３６７名各孕期孕妇外周静脉血、脐血及死胎组织进行弓形虫检测。结果：ＰＣＲＤＮＡ阳性７例，循环抗原（ＣＡｇ）阳性２例，特异性ＩｇＭ阳性１例。总阳性率１９％。对其中１例ＰＣＲＤＮＡ、ＣＡｇ阳性的孕妇血进行动物接种，结果阳性。２８例死胎组织中，发现一死胎心、肺、肝、肾、眼、脑组织弓形虫ＤＮＡ均阳性。结论：孕妇弓形虫感染的危害在我国（省）并非少见。开展对孕妇弓形虫感染的检测，将有利于优生优育工作的开展。ＰＣＲ较其它方法更具特异性及敏感性，且操作简便、快速，适合于孕妇弓形虫感染的监测。     

检测人巨细胞病毒抗原的原位免疫PCR技术

目的：建立用于诊断ＨＣＭＶ活动性感染的原位免疫ＰＣＲ方法。方法：ＨＣＭＶ ＡＤ１６９株感染的人胚肺成纤维细胞或先天畸形胎儿肾组织石蜡切片,依次加入抗ＨＣＭＶ单抗,生物素化二抗,链霉亲合素以及作为指示元件的生物素化ＤＮＡ,随后进行原位ＰＣＲ扩增,经酶显色反应判断结果。结果：应用本法检测ＨＣＭＶ感染的细胞可于感染后８ｈ清晰检出阳性信号;检测先天畸形胎儿肾组织ＨＣＭＶ感染,阳性率显著高于免疫组化法。结论     

巢式PCR检测先天性心脏病心脏石蜡标本中B19病毒的感染

目的：探讨微小病毒Ｂ１９与先天性心脏病（ＣＨＤ）的相关性及可能致畸机理。方法：采用病例对照研究，病例组为２９例ＣＨＤ尸解心脏组织，对照组为３０例同期非先天性畸形尸解心脏组织，应用巢式ＰＣＲ扩增Ｂ１９－ＤＮＡ，单纯疱疹病毒（ＨＳＶ），兔弓形虫（ＴＯＸ），巨细胞病毒（ＣＭＶ），结果：２９例ＣＨＤＢ１９－ＤＮＡ５例阳性，全瓿对照组为均阴性（Ｐ＝０．０２３７），ＨＳＶ，ＴＯＸ两组中均阴性，ＣＭＶ在两组中均     

应用PCR和ELISA法研究新生儿巨细胞病毒感染

人类巨细胞病毒 (ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ)是先天性病毒感染的重要病因之一 ,在人群中感染极为普遍。发达国家孕妇ＨＣＭＶ感染率在 5 5 %以上[1,2 ] ,我国多数学者报道孕妇ＨＣＭＶ感染率为 90 %以上[3 ,4 ] 。孕妇的原发性感染或复发性活动性感染均可能导致胎儿的先天性感染 ,造成死胎、流产、小头畸形、脑钙化、耳聋、神经系统发育异常等病理损害 ,对人口素质的提高构成严重的威胁。本研究采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术检测脐血、新生儿尿液中的ＨＣＭＶ ＤＮＡ ,用于诊断ＨＣＭＶ感染 ,与血清免疫学方法 (ＥＬＩＳＡ)检测ＨＣＭＶ ＩｇＭ作比较。1　材料与方法     

套式聚合酶链反应加限制酶谱分析检测母婴垂直传播巨细…

目的：克服一次性ＰＣＲ是性及非特异性条带干扰。方法：建立磁式ＰＣＲ技术，对１０５份母－脐配对血进行套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ以及特异性ＩｇＡ测定。结果：母血ＨＣＭＶＤＮＡ阳性６份，脐血３份，母－脐传播率为３／６。３对被主这为母婴生趣传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ及ＩｇＭ均阳性、１对套式ＰＣＲ病毒分离，特异性ＩｇＡ阳性，但特异性ＩｇＭ阴性。结论：套式ＰＣＲ是一种     

地中海贫血高危妊娠胎儿产前绒毛,羊水中巨细胞病毒DNA的 …

目的 了解地中海贫血高危妊娠胎儿宫内人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染状况。方法 应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）对４７例地中海贫血高危妊娠胎儿前绒毛组织、羊水细胞ＤＮＡ进行回顾性人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）检测。结果 产前绒毛组织２９例,检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ２例,阳性率为６。９％;羊水细胞１８例,检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ１例,阳性率为５．６％。结论 地中海贫血高危妊娠胎儿与本地区的正常人群一样,产     

用聚合酶链反应技术产前诊断早中孕期胎儿宫内巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ技术），选择３２例有病理妊娠史或孕妇巨细胞病毒ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者，在孕８￣２６周取绒毛或羊水检测巨细胞病毒胎儿宫内感染情况，检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为４３．７５％，其中绒毛为４５％，羊水为４１．６７％。追踪监测结果，４例羊水阳性引产的胎儿有不同程度的发育障碍和畸形，１例死胎。绒毛阳性３例胎停育，２例自然流产。进一步证实子胎儿宫内感染巨细胞病毒对胎儿有一定的危害。     

用聚合酶链反应法检测172例孕妇尿中巨细胞病毒－DNA

本文对１７２例孕妇的尿用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）进行巨细胞病毒－ＤＮＡ检测（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓＨＣＭＶ－ＤＮＡ），结果显示非正常孕妇（以前有自然流产、死胎、畸胎、不育症等）１２１人尿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者４３例，阳性率为３５．５％，而５１例正常孕妇中阳性者仅２例，阳性率为３．９％，表明活动性人巨细胞病毒感染是非正常孕妇的重要原因之一。２０例孕妇尿中ＮＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者用干扰素、转移因子等治疗后，１４例转阴。用ＰＣＲ法检测活动性人巨细胞病毒感染是一个比较准确、敏感、快速的方法，并是保证优生优育的重要手段之一。     

Rapid detection of human cytomegalovirus DNA in urine samples by polymerase chain reaction in vitro gene amplification

In the detection of human cytomegalovirus (HCMV) DNA in the urine by polymerase chain reaction (PCR). We have designed and synthesized two pairs of oligonucleotide primers (patent pending) corresponding to the specific and conserved DNA sequences of HCMV AD 169 strain. The sequences of the primers were checked that they did not have cross reaction with either normal human genomic DNA or with other herpesviruses. As less as 1fg of HCMV DNA (equal to the amount of DNA from four HCMV virions) in urine can be detected by the method A total of 47 urine specimens from infants suspected of HCMV infection was examined by PCR and conventional virus isolation simultaneously 31 samples were positive in both PCR and virus isolation; 12 samples were negative in either; 4 samples were positive in PCR but negative in virus isolation. So the samples were further examined by serology and the data showed that there was HCMV-specific IgM in all the virus isolation negative sera examined. The result suggests that HCMV in the above samples is possibly underdetected by virus isolation. Therefore the method described in the paper is a specific, sensitive, rapid conventional and non radioisotopic one for detection of HCMV in urine samples.     

孕妇及新生儿巨细胞病毒感染的分子生物学诊断

目的 :建立套式聚合酶链反应 ( n PCR)检测人巨细胞病毒 ( HCMV)。方法 :建立套式 PCR检测 HCMV DNA,同时结合病毒分离检测临床标本。结果 :在 2 3例新生儿肝炎综合征患儿中 ,10例病毒分离及套式 PCR均阳性 ;1例病毒分离阴性 ,但套式 PCR阳性。对 58例妊娠早期孕妇血标本进行检测 ,套式 PCR阳性率为 9% ,病毒分离阳性率则为 7%。结论 :套式 PCR是一种临床检测HCMV的快速有效手段。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的：探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染昆明小鼠的敏感性，建立HCMV致畸的动物模型。方法：昆明系小鼠40只，随机分为两组：对照组(8只)和接种病毒组(32只)，病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒7，15，30，60d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点，以免疫组织化学方法检查病毒抗原，PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果：接种HCMV AD169株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形，用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论：HCMV ADl69株可引起小鼠脑部发育畸形，这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的 :探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)感染昆明小鼠的敏感性 ,建立HCMV致畸的动物模型。方法 :昆明系小鼠 4 0只 ,随机分为两组 :对照组 (8只 )和接种病毒组 (32只 ) ,病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒 7,1 5 ,30 ,6 0d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点 ,以免疫组织化学方法检查病毒抗原 ,PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果 :接种HCMVAD1 69株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形 ,用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论 :HCMVAD1 69株可引起小鼠脑部发育畸形 ,这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据     

弓形体感染小鼠试验及基因快速诊断

为建立检测弓形体基因(Tox-DNA)的PCR快速诊断法.采用10只感染弓形体小鼠试验剖检取得的各脏器活检组织标本,32例畸形胎儿的脑、肺、肝、胎盘标本,29例正常产妇胎盘标本,及177例孕产妇和其它传染病人血液标本,用PCR法作了Tox-DNA测定.结果10只感染弓形体小鼠的脑、心、肺、肝、脾、肾、小肠、子宫/睾丸,腹水中均检出Tox-DNA.32例畸形胎儿的脑、肺、肝、胎盘中检出Tox-DNA 10例,阳性率31.25%,29例正常产妇胎盘对照Tox-DNA阳性1例,阳性率3.4%,两者比较差异有显著性,P<0.005.177例孕产妇及其它传染病人Tox-DNA阳性7例,阳性率3.95%.结论:小鼠感染弓形体可通过血液和淋巴侵犯各个脏器组织,引起病理性损害;孕产妇感染弓形体是致胎儿畸形的一个重要因素;PCR检测临床标本中Tox-DNA具有简便、快速、敏感、特异之优点,可用于弓形体病的早期诊断.     

应用多聚酶链反应检测原发性癫痫脑组织中病毒感染

目的检测临床诊断原发性癫痫手术标本中3种病毒感染的情况.方法应用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测30例原发性癫痫手术标本中单纯疱疹病毒(herpes simple virus,HSV)、人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测柯萨奇病毒B(coxsackievirus B,CVB)感染情况,并选用10例无癫痫病史的尸体解剖及脑肿瘤周围正常脑组织作为对照组.结果30例癫痫标本中8例(26%)HSV阳性,14例(46%)CVB阳性,其中有3例HSV和CVB共同阳性.HCMV均阴性.10例正常脑组织3种病毒均阳性,其中有3例HSV和CVB共同阳性.HCMV均阴性.10例正常脑组织3种病毒均阴性.结论临床诊断为原发性癫痫的病人有相当部分存在病毒感染,尤其是CVB和HSV.但因感染症状为一过性或处于亚临床状态或以癫痫为首要表现,而常被临床医生忽视.所以,对不明原因的癫痫病人进行详细的病史询问和病毒血清学、脑脊液检查对正确治疗是非常必要的,并且有时甚至可以使用实验性抗病毒的治疗.     

毒黄素对呼吸和循环系统的毒性研究

目的 了解毒黄素对呼吸和循环系统的毒性。方法 从生理和病理的角度试验了毒黄素对呼吸和循环系统的毒性研究。结果 毒黄素首先影响呼吸系统，继而影响循环系统，导致呼吸和循环系统衰竭而死亡。结论 毒黄素使肺脏、心脏和肾脏组织呈现明显的病理性损害，肝脏无显著改变，这项研究对加强早期毒黄素中毒的防治措施提供了理论依据。     

用多聚酶链反应方法检测IUD诱发出血的子宫内膜人巨细胞病毒感染的研究

用聚含酶链反应(PCR)技术检测73份置宫内节育器(IUD)诱发出血人群及50例置IUD后月经周期正常人群的子宫内膜病毒分离培养物中的HCMV—DNA,有9份为HCMV—DNA 阳性,其中8份是病毒分离阳性,用细胞学鉴定及单克隆抗体鉴定为HCMV,有1份为病毒分离阴性,而PCR检测为阳性.     

巨细胞病毒先天性感染对ICR鼠胚胎生长及脑组织发育的影响

目的探索人巨细胞病毒（HCMV ）先天性感染对胎鼠胚胎生长及脑组织发育的影响。方法 10周龄的ICR ♀♂鼠按1∶1配对,实验组于交配前及妊娠3天（E3）、7天（E7）、15天（E15）腹腔内接种HCMV悬液,对照组接种HF细胞上清液。于E0、E3、E6、E9、E12、E15、E19称取孕鼠体重。临产时剖腹取胚胎的大脑皮质,用常规组织切片及HE染色,检测组织的病理变化,同时取部分组织进行病毒分离。结果各实验组（除E15组）孕鼠自E15后体重较对照组明显降低。组织病理学检查发现,各实验组ICR胎鼠大脑皮质血管扩张、充血、出血,脑实质有单核细胞浸润,部分神经细胞变性坏死或凋亡及噬神经细胞现象,软化灶形成;受染的神经细胞核内出现HCMV特征性包涵体。E0、E3、E7、E15实验组大脑皮质病毒分离阳性率分别为60%、62%、67%、25%,组间差异显著（χ2=13.475,P＜0.05）,E15组低于其他3组。结论不同孕期ICR胎鼠大脑皮质均可先天性实验感染HCMV且大脑皮质损伤明显,胚胎发育迟缓。