选择性环氧合酶-2抑制剂Celebrex对胰腺癌新生血管生成的影响

探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对裸鼠胰腺癌PC-3细胞移植瘤生长和肿瘤组织新生血管生成的影响,为Celebrex的临床应用提供依据.本文采用体外观测Celebrex对移植瘤生长的影响,并选用Ⅳ型胶原作为肿瘤微血管标记物,测定移植瘤中微血管密度(MVD).结果显示,治疗组移植瘤生长曲线较对照组明显低平,对照组移植瘤近似体积为0.438 cm3,治疗组为0.212 cm3(抑瘤率为51.6%,P＜0.05).对照组肿瘤组织MVD为63.87±13.67,治疗组32.25±12.99,两组间差异有非常显著性(P＜0.01).表明COX-2可能参与了肿瘤新生血管的生成,选择性COX-2抑制剂Celebrex则具有抑制肿瘤生长和对抗肿瘤新生血管生成的作用.     

NS-398对肝癌SMMC-7721细胞血管生成影响的体内体外实验研究

目的 探讨NS-398对肝细胞癌MVD值、VEGF、MMP-9表达的影响。方法 采用RT-PCR和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞VEGF、MMP-9表达。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤MVD，ELISA法测定血清中PGE2水平。结果 在体外，NS-398可以呈剂量和时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达；在体内，可显著降低裸鼠移植瘤MVD、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达(P<0.001)，并能降低裸鼠血清中PGE2 水平(P<0.001)。结论 COX-2与肝细胞癌血管生成密切相关，NS-398可通过下调VEGF和MMP-9的表达而抑制肝细胞癌血管生成。     

HGF基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用

 目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用及其机制。方法：采用HGF基因重组质粒pVITRO2-HGF转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小;8周后获取瘤组织,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL) 和免疫组化检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度（MVD）,并进行相关分析。结果：造模成功率为96.7%。HGF转染组的瘤体积明显大于HGF转染+VP-16组(P<0.01)、未转染组与空载体组(P<0.01),HGF转染+VP-16组也大于对照组(P<0.01),未转染组与空载体组间无显著差异(P>0.05)。pVITRO2-HGF转染组凋亡指数显著低于对照组(P<0.01),经VP-16诱导后凋亡增加(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。pVITRO2-HGF转染组的MVD显著高于对照组(P<0.01),但经VP-16诱导后血管增生降低（P<0.01）,但仍高于对照组 (P<0.05),对照组间无显著差异(P>0.05) 。结论：HGF基因转染可显著促进裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,明显抑制凋亡的发生,这一效应可能与其促进肿瘤血管新生和抑制肿瘤细胞凋亡有关。     

IFN-α抑制HUVECs以及荷人肝癌裸小鼠血管生成的实验研究

目的: 检测IFN-α体内外对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的抑制作用，探讨IFN-α抑制肝癌血管生成的机制。方法： 运用细胞增殖抑制试验、MTT试验、管样结构形成试验、移动抑制试验以及裸鼠体内移植瘤生长和血管密度测定探讨IFN-α对HUVECs的抑制作用。结果： IFN-α对HUVECs的细胞增殖、移动和管样结构形成试验有明显的抑制作用，体内实验提示试验组移植瘤直径明显小于对照组，微血管密度（MVD）亦明显低于对照组。结论： IFN-α可以通过抑制肿瘤的血管新生，起到抑制肿瘤生长的作用。     

小鼠S180移植瘤血管生成作用及其调节机制的研究

目的：观察肉瘤180(S180)移植瘤发展过程中血管生成及血管生成调节因子的变化,并对其调节机制进行探讨。 方法： 利用Km小鼠的S180移植瘤模型，采用FⅧ因子免疫组化染色检测肿瘤血管生成，ELISA和EIA法检测荷瘤鼠肿瘤组织和血浆中血管内皮生长因子（VEGF）和内皮抑制素（endostatin）水平，采用多元回归分析肿瘤组织微血管计数、血管形态与瘤重变化的关系。 结果： 随着荷瘤时间延长，肿瘤组织内微血管计数，瘤内血管相对总量增加，血管的相对面积增大（P<0.05）；肿瘤组织匀浆中VEGF水平在荷瘤10 d、15 d均显著高于5 d组（P<0.05）；endostatin在肿瘤匀浆和血浆中均在荷瘤15 d达到最高（P<0.05）；V/E比值无显著变化；微血管计数、血管相对总面积与瘤重变化有相关性（P<0.01）。 结论： S180移植瘤病期发展中微血管数目增加，血管口径增大，且与瘤重变化呈正相关；肿瘤发展过程中肿瘤局部血管生成正调节因子逐渐增加，促进血管生成；肿瘤局部血管生成调节因子处于相对的平衡。     

奥沙利铂对人结肠癌细胞SW620荷瘤裸鼠抗肿瘤增殖作用

目的：探讨奥沙利铂对人结肠癌细胞（SW620）荷瘤裸鼠的抗肿瘤增殖作用.方法：制备裸鼠SW620移植瘤体内模型,设立荷瘤对照组（n=8）及奥沙利铂（20、40 mg·kg-1;n=8）治疗组,并增加正常裸鼠对照组（n=8）.14 d后,观察奥沙利铂对移植瘤体抑瘤率的影响,ELISA法检测移植瘤组织中肿瘤坏死因子α（TN-α）及γ型干扰素（IFN-γ）的含量,此外,Western blotting法检测移植瘤组织中Bcl-2表达.结果：与荷瘤模型对照组比较,奥沙利铂明显抑制肿瘤体生长（P＜0.01）,并增加植瘤组织中TNF-α、IFN-γ的含量（P＜0.01）.此外,有效下调移植瘤中Bcb2蛋白表达（P＜0.01）.结论：奥沙利铂有效发挥抗结肠癌作用,其机制与减少内源性Bcb2表达有关,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

NS-398抑制肝癌SMMC-7721细胞及组织MVD值、VEGF、MMP-9的表达

目的探讨NS-398对肝细胞癌MVD值、VEGF、MMP-9表达的影响。方法采用RT-PCR和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞VEGF、MMP-9表达。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤MVD,ELISA法测定血清中PGE2水平。结果在体外,NS-398可以呈剂量和时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达;在体内,可显著降低裸鼠移植瘤MVD、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达(P<0.001),并能降低裸鼠血清中PGE2水平(P<0.001)。结论COX-2与肝细胞癌血管生成密切相关,NS-398可通过下调VEGF和MMP-9的表达而抑制肝细胞癌血管生成。     

参慈胶囊联合顺铂抑制小鼠Lewis肺癌组织血管生成的机制研究

目的:探讨参慈胶囊及顺铂对Lewis肺癌组织生长及血管生成的抑制作用。方法:将40只C57BL/6小鼠自接种Lewis肺癌瘤株细胞建立实体瘤模型,随机分为参慈胶囊组、参慈胶囊+顺铂组、顺铂组、模型组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤小鼠均用药21 d,测量肿瘤重量并计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)表达情况;采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测Lewis肺癌荷瘤小鼠癌细胞表达血管内皮生长因子受体-2(KDR)mRNA的情况。结果:(1)在抑瘤率方面,参慈胶囊+顺铂组抑瘤率明显高于其它3组,差异显著(P0.01)。(2)参慈胶囊+顺铂组能降低Lewis肺癌组织VEGF、KDR的表达及MVD的形成,差异显著(P0.01)。结论:(1)参慈胶囊联合顺铂能抑制Lewis肺癌组织生长及血管生成,二者联用具有相加或者协同效应;(2)下调VEGF及其受体KDR的表达,可能是二者联合抗肿瘤血管生成的机制之一。     

血管生成素-Ⅱ在胃癌中的表达及其意义

目的：研究血管生成素-Ⅱ（Ang-Ⅱ）在胃癌和癌周正常组织中蹬表达及影响其表达的病理因素。方法：采用RT-PCR和免疫组化法检测72例胃癌组织和癌周正常组织中Ang-Ⅱ和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：Ang-Ⅱ在胃癌组织中的表达与癌周正常组织相比有显著差异（P<0.01）。在肿瘤组织中，Ang-Ⅱ和VEGF的表达相关（r=0.996，P<0.05）。Ang-Ⅱ的表达与肿瘤的分期（r=0.792，P<0.01）、血管侵犯（r=0.829，P<0.01）相关，而与肿瘤组织的分化类型（r=0.289，P=0.250）、淋巴结转移程度（r=0.290，P=0.259）、浆膜层侵犯（r=0.374，P=0.126）无关。结论：Ang-Ⅱ在胃癌中的表达与VEGF的表达、肿瘤的分期、血管侵犯相关。     

内皮抑素基因转移对乳腺癌细胞生长影响的体内和离体研究

目的：探讨内皮抑素(ES)基因转移在乳腺癌抗血管新生中的作用。 方法: 通过建立逆转录病毒介导的ES基因转移系统，用ES病毒转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。以聚合酶链反应（PCR）、MTT法和裸鼠成瘤实验分析ES的生物学特性及其功能。 结果： 脂质体转染与交互感染策略获得ES病毒生产细胞；以ES病毒转染MDA-MB-231细胞后，经PCR分析显示其内有ES基因整合并持续表达，其分泌的ES能明显抑制内皮细胞EA.hy926的增殖(P<0.05)，但对肿瘤细胞的离体生长无明显影响（P>0.05）；裸鼠皮下移植瘤模型表明，ES基因表达可明显抑制MDA-MB-231细胞的生长(P<0.01)；实验组的肿瘤微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子(VEGF)表达低于对照组(P<0.05)。 结论: 逆转录病毒载体介导的ES基因在乳腺癌细胞中可有效表达，能明显抑制血管内皮细胞生长，并通过旁分泌方式抑制血管新生，具有显著的抗肿瘤生长的作用。     

除痰解毒方通过EMT途径逆转肺癌吉非替尼耐药

目的:从上皮-间充质转化(EMT)途径探讨除痰解毒方逆转肺癌分子靶向耐药的机制。方法:建立人肺腺癌耐药细胞株H1975裸鼠模型(n=60),随机分为:模型组,吉非替尼(0. 04 g/kg)组,除痰解毒方低、中、高剂量(13. 52 g/kg、27. 04 g/kg和54. 08 g/kg)组,除痰解毒方中剂量(27. 04 g/kg)联合吉非替尼(0. 04 g/kg)组,每组10只。治疗2周,检测瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率,采用免疫组织化学法、Western blot法和real-time PCR法检测各组肿瘤组织中E-cadherin、Snail和vimentin蛋白及m RNA的变化。结果:与模型组及吉非替尼组比较,除痰解毒方中、高剂量组及联合用药组瘤体积和瘤质量显著降低(P 0. 05)。免疫组织化学法、Western blot法及realtime PCR法结果均显示除痰解毒方中剂量组和联合用药组E-cadherin蛋白及m RNA的表达水平显著上调,Snail和vimentin蛋白及m RNA表达水平较模型组与吉非替尼组显著下调(P 0. 05)。结论:除痰解毒方可抑制H1975细胞裸鼠移植瘤的生长,逆转肺癌对吉非替尼的耐药,其作用机制可能与调控EMT相关标志蛋白的表达有关。     

KLF17对裸鼠移植瘤生长的影响及其在体调控靶基因的筛选和功能分析

目的:研究Krüppel样因子17(Krüppel-like factor 17,KLF17)在裸鼠移植瘤中的作用并分析KLF17在体调控的靶基因及其功能和参与的信号通路。方法:慢病毒转染技术稳定上调人肺腺癌A549细胞及下调人肺腺癌H322细胞中KLF17的表达。11只BLAB/c nu/nu裸鼠分为上调组5只和下调组6只,分别通过左、右侧躯体皮下注射KLF17上调和下调的相应细胞及其对照细胞,观察KLF17对裸鼠移植瘤生长的影响;Real-time PCR及免疫组织化学染色分析裸鼠移植瘤组织中KLF17 mRNA及蛋白的表达,转录组测序技术分析上调KLF17表达后裸鼠移植瘤中差异表达的基因,通过The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库分析KLF17调控的差异基因的功能,Gene Ontology和KEGG PATHWAY富集分析差异基因的功能和可能参与的信号通路。结果 :上调A549细胞中KLF17的表达后,其裸鼠移植瘤生长速率显著低于空载体对照组(P0.05),下调H322细胞中KLF17表达后,其裸鼠移植瘤生长速率及移植瘤重量均显著高于空载体对照组(P0.01,P0.05)。在裸鼠移植瘤组织中,过表达组KLF17 mRNA及蛋白显著高于对照空载体组。转录组测序结果显示KLF17可能调控的基因有ras基因同源家族成员V(ras homolog family member V,RHOV)和冠蛋白1C(coronin 1C,CORO1C)等。TCGA数据库中肺腺癌患者10年累计生存时间在RHOV和CORO1C mRNA不同表达组明显不同,高表达RHOV及CORO1C的肺腺癌患者生存时间显著低于其低表达组。Gene Ontology和KEGG PATHWAY富集分析提示KLF17调控的靶基因(差异基因)可能与肿瘤细胞的刺激应答、生长及黏附有关,并且参与了细胞趋化性、黏附及细胞外基质受体相关的信号通路。结论:KLF17抑制裸鼠移植瘤的生长,并下调RHOV和CORO1C等癌基因,参与调控肿瘤黏附及生长相关信号通路。     

siRNA特异性沉默hTERT基因对人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响

目的:探讨靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的siRNA抑制人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响和机制。方法:构建针对hTERT基因的siRNA(pU6-hTERT-siRNA),LipofectamineTM2000转染LoVo细胞,以同源性的pU6作阴性对照,以未转染的细胞作空白对照。MTT法检测细胞生长率。建立裸鼠结肠癌皮下移植瘤模型,瘤内注射法将pU6-hTERT-siRNAs、pU6转导,观察各组移植瘤生长情况。RT-PCR和荧光定量PCR检测细胞株和移植瘤细胞hTERTmRNA水平的变化。Western blotting检测hTERT蛋白水平的变化。结果:LoVo细胞转染pU6-hTERT-siRNA72 h后,细胞增殖抑制率达42.1%,显著高于阴性对照组(3.2%),P0.01。裸鼠皮下移植瘤转染pU6-hTERT-siRNA14 d后,种植瘤体积为(85.9±18.7)mm3,显著小于阴性对照组[(157.4±55.6)mm3]和空白对照组[(155.2±54.2)mm3],P0.01。荧光定量PCR和Western blotting结果显示转染pU6-hTERT-siRNA后,细胞株和移植瘤内的hTERT mRNA以及细胞株蛋白水平表达显著减少(P0.01),阴性对照和空白对照间无显著差异。结论:pU6-hTERT-siRNA在体内外能有效抑制结肠癌LoVo细胞中hTERT基因表达,对裸鼠皮下结肠癌细胞移植瘤有明显的抑制生长作用。     

NK4基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的抑制作用

目的 探讨NK4基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的抑制作用及其机制.方法 采用NK4基因重组质粒pVITRO2-NK4转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小.8周后获取瘤组织,分别采用免疫组化和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度(microvessel density,MVD),并进行相关分析.结果 NK4基因转染组裸鼠移植瘤体积明显小于对照组(P<0.01),而对照组间差异无显著性(P>0.05);各组间裸鼠体重降低,差异无显著性(P<0.01).NK4基因转染组的淋巴瘤细胞AI值达237±10.94,而质粒pVITRO2转染组和未转染Raji组的AI值分别为79.7±30.8和81.7±22.2,NK4基因转染组明显高于对照组(P<0.001),而对照组间差异无显著性(P>0.05);NK4基因转染组MVD为4.7±1.52,而质粒pVITRO2转染组和未转染Raji组MVD分别为12.0±1.00和10.66±1.53,NK4基因转染组明显低于对照组(P<0.001),而对照组间差异无显著性(P>0.05).结论 NK4基因转染可明显抑制裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,其可能通过抑制肿瘤血管新生和促肿瘤细胞凋亡而发挥其效应.     

EGFL7基因沉默对裸鼠乳腺癌血管生成的影响

目的探讨类表皮生长因子域7（EGFL7）基因沉默对乳腺癌裸鼠模型瘤内血管生成的影响。方法构建EGFL7短发夹状RNA表达质粒并转染SGC-7901细胞（pshEGFL7组）,以空质粒转染为对照组。观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积。免疫组织化学法检测抗-CD34、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板反应蛋白（TSP1）表达;RT—PCR检测MMP-2和TIMP2表达。结果pshEGFL7组种植瘤体积为（1．86±0．65）cm^3,微血管密度（MVD）为20．84±6．38,分级为1～2级,对照组体积为（4．86±1．15）cm^3,MVD为39．48±9．01,分级为3～4级,两组种植瘤体积、MVD和分级的差异有统计学意义,P值均〈0．05。EGFL7组TSP1蛋白阳性表达,而VEGF蛋白为弱阳性或阴性表达,MMP-2mRNA表达下调,TIMP2mRNA表达上调,与对照组比较差异有统计学意义,P值均〈0．01。结论EGFL7基因沉默可降低乳腺痛种植瘤血管牛成．与调节MMP-2／TIMP2表汰和影响VEGF/TSP1平衡有关。     

抗HER-2工程抗体chA21对人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤血管生成的影响

目的 探讨抗HER-2工程抗体chA21对过表达HER-2的人卵巢癌细胞株SKOV3裸小鼠移植瘤血管生成的影响.方法 建立人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤模型,随机分成阴性对照组和chA21组,连续5周尾静脉注射给药,观察肿瘤生长变化;5周后处死裸鼠取下瘤体,利用组织芯片及免疫组化方法结合显微图像分析系统定量检测VEGF、DLL4表达情况,并用CD31免疫组化染色比较两组微血管密度(MVD)值.结果 chA21组肿瘤组织中VEGF、DLL4的表达及MVD值均显著低于阴性对照组(P<0.05).结论 抗HER-2工程抗体chA21能显著抑制人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的血管生成.     

地龙对哮喘模型小鼠肺组织α-SMA及纤维蛋白的抑制作用

目的： 探讨地龙对哮喘小鼠肺组织平滑肌肌动蛋白-α（α-SMA）及纤维连接蛋白（FN）的影响。方法： BALB/c小鼠80只,随机分为对照组（A组）、哮喘组（B组）、地龙大剂量治疗组（C组）及地龙小剂量治疗组（D组）各20只。以腹腔注射0.02%鸡卵清蛋白和1%鸡卵清蛋白雾化吸入建立慢性哮喘模型。治疗组在每次雾化激发前给予地龙干预。肺泡灌洗计数各炎症细胞,ELISA检测血清总IgE水平,分离右肺固定,石蜡切片,免疫组化,用Leica QWIN V3分析系统,计算表达阳性结果;取左肺置液氮中保存,留作RT-PCR,用AlphaImager 2200半定量分析系统分析。结果： 与对照组相比,哮喘组气道平滑肌肌动蛋白-α（α-SMA）及纤维连接蛋白（FN）阳性表达显著升高,哮喘组α-SMA mRNA及FN mRNA的表达上调;地龙大剂量治疗组的α-SMA及FN的阳性表达、α-SMA mRNA及FN mRNA的表达均显著低于哮喘组;地龙小剂量治疗组的α-SMA及FN的阳性表达、α-SMA mRNA及FN mRNA的表达亦低于哮喘组,但无显著差异。结论： 地龙可抑制慢性哮喘模型小鼠肺组织中α-SMA及FN表达,提示抑制α-SMA及FN的表达可能是地龙抑制哮喘气道重构的重要机制之一。