抗γ公共链抗体抑制T淋巴细胞增殖的试验

目的探讨抗γ公共链抗体体外抑制T细胞增殖的机理。方法分离BALBc、C57BL6脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养(MLC)。第1组于MLC同时加入抗γ公共链抗体;第2组于MLC第3天加入抗γ公共链抗体。MLC为阳性对照,单独BALBc小鼠脾细胞培养为阴性对照。1～5d取培养细胞,检测培养细胞的增殖(羧基荧光素乙酰乙酸CFSE染色)、细胞凋亡(PECD3,FITCannexinⅤ)、细胞周期(PI)。脾细胞survivin表达通过免疫细胞染色方法检测。结果阳性对照在第3天开始检测到明显的分裂峰而第1、2组都未出现分裂峰。第1、2组在第1～2天未发现细胞凋亡增加,分别于第3、4天检测到部分T细胞凋亡、M期细胞数下降及凋亡细胞数增加;第2组与阳性对照组M期细胞的百分比例差异有统计学意义[(25.97±12.85)%vs(6.36±4.81)%,P=0.008)]。MLC第3天后,在阳性对照组检测到survivin表达;阴性组及试验组均未检测到survivin,其中阳性对照组与第1组的survivin阳性细胞数百分比差异有统计学意义[(18.00±14.13)%vs(1.57±1.61)%,P=0.043]。结论阻断γ公共链可以通过诱导同种反应性T细胞凋亡途径从而抑制T细胞增殖。     

SLE患者外周血Vγ9链T细胞受体CDR3特征

为探讨Vγ9链T细胞受体(Tcell receptor,TCR)互补决定区3(complementarity determining region3,CDR3)是否参与自身免疫性疾病中γδT细胞的抗原识别过程,利用基因扫描技术和随机序列测定法对系统性红斑狼疮(systemic lupus er-ythematosus,SLE)患者和健康人外周血Vγ9TCR CDR3区的结构特征进行分析。结果显示,Vγ9CDR3序列的变化主要集中在J区等位基因的取用不同:健康人以表达JγP为主(82.86%),而SLE患者Jγ1/Jγ2(40.82%)和JγP(59.18%)表达率相近。两组人群相比,Jγ1/Jγ2和JγP表达率的差异均具有显著性。结果表明,SLE患者外周血Vγ9链T细胞受体具有与健康人不同的CDR3组成特点,提示其可能参与SLE病理过程中γδT细胞的抗原识别。本研究为寻找SLE中γδT细胞识别的自身抗原以及阐明γδT细胞在SLE中的独特作用奠定了基础。     

Trail受体的T细胞表达

细胞凋亡是生物体最重要的生理和病理现象之一,在细胞凋亡的调控系统中,Fas/Fas配体的作用已被广泛研究和报道[1]。新近,另一个重要的凋亡调节分子Trail(TNF-re-latedapotosis-inducingligand)在凋亡中的作用和意义,引起了学者们的极大兴趣和重视[2]。本文应用流式细胞术(flowcytometry),以Jurkat细胞为对象,测定Trail受体表达,现报道如下。1　材料与方法1.1　材料　重组人Trail(rhTrail)由瑞士巴塞尔大学医学微生物学研究所Erb教授实验室制备,是一种谷胱甘肽S转化酶(GST)融合蛋白。Jurkat细胞系人CD4阳性T细胞株,购自美国ATCC公…     

T细胞Trail受体表达及Trail诱导的T细胞凋亡

目的 :观察人T细胞Trail(TNF relatedapoptosis inducingligand)受体表达及Trail诱导T细胞凋亡的作用。方法 :通过荧光双标记 ,使用流式细胞仪检测Trail受体阳性细胞和凋亡细胞。结果 :静息Jurkat细胞表达高水平Trail受体〔(49 19±12 2 5 ) %〕 ,激活Jurkat细胞对Trail受体表达无影响。Trail诱导显著的Jurkat细胞凋亡〔(90 0 1± 2 6 71) %〕。正常人外周血淋巴细胞 (PBL)仅激活后表达Trail受体〔(2 5 2 7± 6 42 ) %〕 ,但无细胞凋亡发生。结论 :人T细胞表达Trail受体 ,Trail受体和Trail的相互作用对细胞凋亡有调控作用。     

γ氨基丁酸对人IL-2和IFN-γ诱导的杀伤细胞的作用研究

为研究γ氨基丁酸(GABA)及A受体激动剂(THIP)对人细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)的增殖、T细胞亚群和杀瘤活性的影响和作用机制;在体外用不同浓度的GABA和THIP与人CIK细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人CIK细胞的增殖能力、T细胞亚群和杀伤活性的变化。结果显示,GABA能显著的抑制CIK细胞的生长(P<0.01),并具有浓度依赖性,THIP对GABA的抑制细胞增殖有明显促进作用;GABA显著降低CIK细胞表面分子CD28分子的表达,降低CD8+T细胞的百分比,抑制CIK细胞对人结肠癌细胞株SW480的杀伤活性,THIP能够增强GABA的作用。上述结果提示,GABA能显著抑制CIK细胞的增殖,降低其细胞表面CD28分子的表达,降低CD8+T细胞的百分比,抑制CIK细胞的杀伤活性,这些作用主要是通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导。     

凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义。方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。用流式细胞术检测CD3、CD25、Survivin的表达及细胞凋亡。给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第 4~7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达。结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2 /M期 )。survivin 细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和survivin。survivin 细胞中仅部分细胞表达CD25。ConA刺激淋巴细胞后第 6天, 凋亡细胞的百分率明显增加 ( 22. 90% vs5. 23%P<0. 001)。于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后,于第 4~7天, 在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin。结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志。T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触。     

γ/δT细胞简介

γ/δT细胞是近 10多年来人们新认识到的一种T细胞亚群 ,该细胞有许多独特特征 ,在抗感染、抗过敏、肿瘤监测及自身免疫病中起着一定作用。本文对该细胞亚群的受体基因、抗原特异性、分布、作用等进行了综述。     

凋亡细胞体外抑制T细胞活化

目的：研究凋亡细胞对Ｔ细胞活化的影响。方法：以ＣｏｎＡ刺激小鼠脾细胞增殖体系为研究对象,观察凋亡细胞预处理后对ＣｏｎＡ刺激的脾细胞ＣＤ６９表达的影响。结果：凋亡细胞可以抑制Ｔ细胞活化,而活细胞或坏死细胞却不能。同时抑制效果与凋亡种类诱导方式无关,而与凋亡细胞数量密切相关。结论：研究证明了凋亡细胞可以主动抑制Ｔ细胞活化,这一发现拓宽了目前对凋亡的认识,表明凋亡细胞主动调节免疫反应在一些生命的基本现象     

未成熟树突状细胞对T细胞活化及其IFN-γ和IL-12表达的影响

目的:探讨未成熟树突状细胞(DC)对T细胞活化及其IFN-γ和IL-12表达的影响。方法:通过诱导Lewis大鼠骨髓前体细胞,获取未成熟(iDC)和成熟(mDC)两种状态的DC;将两种DC用乙酰胆碱受体(AChR)负载后进行T细胞重复刺激、交叉刺激和无关抗原刺激试验,观察T细胞增殖情况并测定T细胞IFN-γ、IL-12的表达水平。结果:(1)AChR负载的iDC可明显抑制T细胞增殖,且这种被抑制的T细胞对AChR负载的mDC的交叉刺激也不引起增殖,但对无关抗原OVA负载的mDC的刺激可产生明显增殖。(2)与mDC组比较,AChR负载的iDC初次和重复刺激均明显抑制T细胞IFN-γ和IL-12的表达。结论:iDC可诱导抗原特异性T细胞耐受,耐受机制可能与Th1细胞因子IFN-γ和IL-12的抑制有关。     

老年人淋巴细胞IL-2Rγ链的表达及其意义

目的为探讨IL-2Rγ链在衰老免疫机制中的作用。方法选择了正常青年人8名,健康老年人17名作为研究对象,青年组年龄18～35岁（平均24.9±5.8岁）,老年组年龄65～79岁（平均69.4±4.2岁）,观察了其外周血淋巴细胞对PHA应答增殖程度,CD132、CD45R阳性细胞百分率及时间动力学的变化,同时用自己设计合成的引物采用RT-PCR法对IL-2Rγ链的基因表达进行研究。结果显示老年人淋巴细胞对PHA应答增殖能力低于青年人,分别为0.199±0.055,0.279±0.054,P=0.0012;活化的淋巴细胞表面表达IL-2Rγ链减少,老年人为46.2%±7.7%,青年人为68.0%±11.8%,P<0.001;RT-PCR的结果证实此种改变发生在转录水平;老年人IL-2Rγ链表达的时间动力学曲线与青年人有差异。结论认为IL-2Rγ链对老年人免疫功能衰退可能起了重要的作用。     

抗Fc受体γ链单克隆抗体的研制及生物学特性鉴定

目的:制备Fc受体γ链的单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性进行鉴定,为研究受体γ链相关的疾病提供实验材料。方法:人工合成的蛋白多肽偶联后免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法筛选阳性克隆,Western blot、流式细胞术(FCM)检测鉴定抗体的特性及抗原识别位点。结果:通过细胞融合和亚克隆,共筛选出3株能稳定分泌抗体并且反应性好的杂交瘤细胞株5B6、7D3和8D4。其中7D3抗体反应性最强,2.5μg/mL与体内体外的γ链都能特异性反应。结论:获得了抗Fc受体γ链特异性的mAb,为进一步研究Fc受体γ链在相关疾病发生发展过程中所发挥的作用提供了良好的研究手段。     

对早期凋亡细胞的吞噬抑制T淋巴细胞活化的实验研究

目的:研究早期凋亡细胞及吞噬早期凋亡细胞的巨噬细胞对T淋巴细胞活化的影响。方法:体外以紫外线照射,诱导出早期凋亡的Jurkat细胞;建立早期凋亡细胞的吞噬模型;ELISA法分析早期凋亡细胞对LPS刺激下巨噬细胞分泌细胞因子的影响及在早期凋亡细胞和吞噬了早期凋亡细胞的巨噬细胞干预下,ConA刺激T淋巴细胞活化后CD69、CD25、CD71表达的变化。结果:巨噬细胞吞噬了早期凋亡细胞后,抑制性细胞因子(TGF_β1)的分泌明显上调,并且在一定程度上抑制了ConA刺激下的T淋巴细胞活化;具体表现为CD69、CD25、CD71等T淋巴细胞活化标志的表达受到明显抑制。当加入TGF_β1中和抗体后,这种抑制作用消失。结论:巨噬细胞吞噬了早期凋亡细胞后抑制ConA刺激下的T淋巴细胞CD69、CD25、CD71的表达,这种抑制作用依赖于的TGF_β1分泌增强。     

性别对T细胞受体抗体诱导的小鼠胸腺细胞亚群凋亡的影响

为分析抗TCR抗体诱导小鼠胸腺细胞的凋亡与性别的关系。用抗TCR抗体腹腔注射、体外包被诱导不同性别小鼠胸腺细胞的凋亡 ,并体外分析雌、雄小鼠在细胞周期凋亡敏感性的差异。腹腔注射抗TCR抗体 4 8h后 ,BALB/c小鼠成熟髓质区高表达TCR的单阳性细胞数目 (CD4 + CD8 、CD4 CD8+ )成倍增加 ,同时皮质区低表达TCR的不成熟双阳性细胞 (CD4 +CD8+ )数目减少。雄性小鼠的这种变化明显于雌性小鼠 ,体外刺激显示类似的结果。抗TCR抗体诱导的凋亡与G0 /G1期细胞的减少有关。结果表明不同性别小鼠在细胞凋亡的敏感性上有差异 ,雄性小鼠更易感。     

T淋巴细胞表达杀伤细胞抑制性受体的研究进展

Only in recent years,attentions have been drawn to the significance of expressing killer cell inhibitory receptors(KIR)in T cells.KIRs specifically bind to the corresponding region of the MHC class I molecules and transmit negative signals to prevent cytotoxity of T cells.When the ligands of KIRs are missing,the lysis of the target cells can‘t be avoided.Perhaps the existence of KIRs is the main mechanism for preventing T cells from attacking autologous tissues.The recognition mechanism of the interaction between the KIR^ donor T cells and the recipient‘s MHC class I molecule expressing tissue cells might shed light on the establishment of the immunotolerance for the prevention of allo-graft rejection and graft-versus-host disease.     

抗鼠T细胞受体抗体抑制胸腺细胞的迁出

目的 通过检测抗仓鼠T细胞受体抗体对胸腺T细胞输出的影响，进一步研究胸腺是提供外周免疫细胞输出的有关机理。方法 体内注射抗TCR抗体48h后FACS分析新迁出细胞在胸腺、淋巴结的表达。结果 小鼠成熟髓质区高表达T细胞受体的单阳性细胞数目成倍增加，同时皮质区低表达T细胞受体的不成熟双阳性细胞数目减少。成熟的单阳性胸腺细胞高表达归巢受体L-Selectin，表型分析(TCRαβ、CD69、HAS、Vβ7-integrin、Qa-2)显示增加的这群细胞为胸腺的新迁出细胞，此群成熟细胞的高表达，表明胸腺的细胞迁出受到了抑制。胸腺内注射异硫氰酸荧光素16h后，抗TCR抗体注射小鼠外周淋巴结及脾脏CD4^ 、CD8^ 新迁出细胞数量减少。结论 抗TCR抗体能抑制胸腺T细胞向外周迁移。     

IL-4、IL-10和抗IL-12受体β1 mAb抑制IL-23诱导正常人记忆T细胞 IFN-γ产生

目的 探讨重组人白介素23（IL-23）是否能够诱导正常人T细胞IFN-γ的产生,作用的靶细胞亚群和调节因素。方法 正常人PBMC在抗CD3（anti-CD3）单克隆抗体或anti-CD3和抗CD28（anti-CD28）单克隆抗体刺激的条件下与IL-23进行培养,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中IFN-γ的水平;同时采用流式细胞仪,在单个细胞水平上分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的T细胞亚群。结果 在未经任何刺激的情况下,PBMC产生很低或不产生IFN-γ。IL-23呈剂量依赖方式促进由anti-CD3活化的PBMC IFN-γ产生。细胞亚群分析的结果表明,IL-23诱导记忆CD4^＋和CD8^＋T细胞表达IFN-γ,对活化的CD4^＋T细胞作用较为明显。Th2细胞因子（IL-4、IL-10）和抗IL-12受体β1 mAb（IL-12Rβ1）抑制IL-23诱导T细胞IFN-γ产生。结论 IL-23促进活化的记忆CD4^＋和CD8^＋T细胞IFN-γ的产生。Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb抑制由IL-23诱导IFN-γ产生,提示这些细胞因子和抗体对IL-23引起的自身免疫病具有拮抗作用。     

IL-15通过Bcl-xl抑制CD4~+CD25~+调节性T细胞凋亡

目的探讨IL-15抑制CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)凋亡的作用及机制,为临床应用IL-15提供理论依据。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的Tregs,流式细胞仪检测该细胞纯度。将Tregs细胞培养液中加入Dynabeads CD3/CD28T cell expander,依据是否加入细胞因子分为三组:对照组(不加入任何细胞因子);IL-2组(100U/ml)和IL-15组(50ng/ml)。流式细胞仪检测细胞凋亡率,3H-TdR掺入法检测细胞因子存在下Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western-blot法检测细胞内Bcl-2、Bcl-xl及p-Bad(ser112)的变化。结果分选后Tregs纯度为95.2%,胞内因子染色Foxp3在Tregs中的表达率为94.2%。IL-2组和IL-15组的细胞凋亡率(即凋亡细胞与细胞总数之比)分别为(11.32±0.43)%和(9.89±5.38)%,二者之间无显著性差异,但均显著低于对照组(87.12±1.43)%,P<0.001。在细胞因子存在的情况下,IL-2组活化的Teff增殖较对照组和IL-15组显...     

中国HIV/AIDS患者T细胞及调节性T细胞CTLA-4表达与疾病进展关系研究

目的 对中国HIV感染者T细胞及凋节性T细胞CTLA-4表达与HIV疾病进展的相关性进行研究,探讨CTLA-4在HIV感染中的作用.方法 选取58名HIV/AIDS患者(长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组),应用流式细胞仪胞内染色技术检测T细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞内CTLA-4表达水平,分析其与CD4+T细胞、病毒载量、淋巴细胞活化凋亡水平的相关性.结果 长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组CD4+T细胞内CTLA-4表达水平依次增岛(P<0.05);与CD+T细胞显著负相关(P<0.01),与CD8+T细胞活化(CD38表达)、凋亡水平(CD95表达)及CD4+T细胞凋亡水平显著相关(P<0.05),与病毒载量无显著相关性.长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组CD8+T细胞内CTLA-4表达水平差异无统计学意义;与CD4+T细胞、病毒载量、CD4,'+>、CD8+T细胞活化及凋亡水平均无显著相关性.CD4+CD25+Foxp3+T细胞内CTLA-4表达水平长期不进展组明显低于无症状HIV组及AIDS纽(P<0.05);与CD4+T细胞显著负相关(P<0.05);与CD4+、CD8+T淋巴细胞活化(HLA-DR表达)显著相关(P<0.01).结论 中国HIV感染者CD4+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞内CTLA-4表达水平与疾病进展及免疫活化状态显著相关,参与HIV感染免疫平衡的调节.     

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。     

一种经济简单的方法扩增Vγ9Vδ2T细胞

目的体外以仲丁胺刺激健康人外周血PBMC中Vγ9Vδ2T细胞的增殖,为γδT细胞的过继免疫治疗建立效应细胞制备平台。方法淋巴细胞分离液分离健康人外周血的PBMC,以10~6/孔接种于24孔板,用含10%胎牛血清、1mmol/L仲丁烷和200U IL-2的1640完全培基连续培养2周。结果有效地扩增出了Vγ9Vδ2T细胞,其组成高达85%以上,所扩增出的Vγ9Vδ2T细胞能有效地杀伤Daudi细胞。结论使用小分子的胺基抗原能有效地扩增出有功能的Vγ9Vδ2T细胞,为γδT细胞的过继免疫治疗建立了效应细胞制备平台。