兔下颌骨骨折对颞下颌关节影响的实验研究

目的 观察下颌骨骨折对两侧颞下颌关节的影响，探讨损伤后颞下颌关节修复的机制。方法 采用新西兰大耳白兔30只。随机分为术后48h和1、3、5、8周5个时相组及一个对照组。每组5只，用多功能打击装王造成各组动物左侧下颌骨骨折。夹板坚固内固定骨折断，按时项处死动物取左侧颞下颌关节，观察伤侧颞下颌关节的组织学变化。用免疫组化方法检测髁状突软骨内VEGF及其受体Flt1的表达。结果 各时项标本均可见到颞下颌髁状突及关节盘不同程度的损伤，髁状突肥大细胞检测到VEGF及其受体Flt1的表达。结论 下颌骨骨折可致颞下颌关节损伤。VEGF和其受体Flt1可能参与颞下颌关节损伤的修复。     

颌面部爆炸伤早期血管内皮生长因子表达的免疫组化分析

目的　分析颌面部软组织爆炸伤早期愈合过程中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体Flt1的表达和变化,探讨VEGF在上述损伤愈合过程中的作用。方法　采用改进的家兔颌面部爆炸伤动物模型,以KTY04型雷管为爆炸源,复制颌面部爆炸损伤。选用ABC免疫组化染色法分别检测伤后6h、1d、2d、3d、5d和7d伤口组织中VEGF及其受体Flt1的表达,并与伤前组比较。结果　颌面部爆炸伤伤口组织中VEGF表达在伤后第一周内稳步上升,于伤后第一天起和伤前组比较,差异明显,伤后第3天开始,差异非常显著(P<0.01),伤后7天达峰值。VEGF受体Flt1的表达则在伤后3d内与伤前组比较无显著差异,伤后5～7d其蛋白质的表达明显加强。结论　VEGF在颌面部爆炸伤后的表达与创伤愈合过程中新生血管形成的时间相似,其受体Flt1的表达也多发生于此时期,说明VEGF参与调节了创伤愈合过程中的血管再生阶段,对毛细血管的发生有积极促进作用     

颌面部爆炸伤早期愈合过程中血管内皮生长因子的表达

目的：分析颌面部软组织爆炸伤早期愈合过程中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体KDR的表达和变化,探讨VEGF在上述损伤愈合过程中的作用。方法：采手改进家兔颌面部爆炸伤动物模型,以DTY－04型雷管为爆炸源,复制颌面部爆炸损伤。选用ABC免疫组化染色法分别检测伤后、1、2、3、5、7d伤口组织中VEGF及其受体KDR的表达,并与伤前组比较。结果：颌面部爆炸伤伤口组织中VEGF表达在伤后第一周内稳步上升,于伤后第一天起和伤前组比较,差异明显,伤后第3天开始,差异非常显著（P＜0．01）,伤后7d达峰值。VEGF受体KDR的表达则在伤后3d内与伤前组比较无显著差异,伤后5－7d其蛋白质的表达明显加强。结论：VEGF在颌面部爆炸伤后的表达与创伤愈合过程中新生血管形成的时间相似,其受体KDR的表达也多发生于此时期,说明VEGF参与调节了创伤愈合过程中的血管再生阶段,对毛细血管的发生有积极促进作用。     

下颌骨牵引成骨过程中VEGF及其受体的表达

目的:通过建立兔下颌骨牵引成骨实验动物模型,研究下颌骨牵引成骨过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体的表达及意义。方法:选用新西兰白兔30只,随机选取6只动物作空白对照组,24只动物右侧下颌骨植入外置式颌骨牵引器。经7d延迟期后,按1mm/d速率延长下颌骨7d,固定期8周。在延迟期第7d,牵引期第2、4、7d,固定期第1、3、6、8周分别处死3只动物,采用免疫组化方法,检测VEGF及其受体FLT-1(fms-like tyrosine kinase-1)、FLK-1(fetal liver kinese-1)的表达变化。结果:VEGF及其受体FLT-1、FLK-1的表达贯穿下颌骨牵引成骨全过程。下颌骨牵引成骨过程中不同时相多种组织细胞参与表达VEGF及其受体FLT-1、FLK-1,但在表达的变化上存在一定的差异。结论:VEGF通过与其受体特异性结合,在下颌骨牵引成骨血运重建及新骨生成过程中发挥重要作用。     

神经生长因子及其受体在下颌骨骨折愈合中的表达及意义

目的:探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体(p75和TrkA)在骨折愈合过程的表达及其对骨折愈合的影响。方法:将32只白兔随机分为8组(每组4只),4只无骨折作为健康对照组2,8只制作右下颌骨骨折模型,立即行钛板固定。术后实验组动物分别在1、3、5、7、14、21、28 d各取4只处死。切取下颌骨脱钙后制作骨组织切片,行HE染色、NGF及受体的免疫组化染色。结果:NGF在骨折愈合过程中表达阳性3,～5 d达到高峰,在未骨折组仅有轻度阳性表达。NGFR-TrkA在骨折愈合过程中表达强阳性7,d达到高峰,到21 d时软骨细胞强阳性。NGFR-p75在骨折愈合过程中表达阳性,5～7 d达到高峰,到21 d时仍为阳性表达。结论:在骨折愈合过程中NGF、p75和TrkA共同调节骨细胞活性,对骨的修复重建起到重要作用。     

血管内皮生长因子在颞下颌关节软骨细胞中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在颞下颌关节髁突软骨改建过程中的作用。方法：采用新西兰大耳白兔30只,分为术后24h和1、3、5、8周5个时间组及1个对照组,每组5只,用打击装置造成动物单侧下颌骨骨折,行钛合金小夹板坚强内固定,按时间分组处死动物取双侧颞下颌关节标本,观察髁突和关节盘软骨的组织学变化,应用免疫组化和原位杂交方法检测髁突软骨细胞内血管内皮生长因子及其受体Flt-1的表达,应用计算机图像分析系统计算阳性染色的灰度积分,应用SPSS10.0软件包进行配对q检验。结果：下颌外伤后双侧颞下颌关节髁突和关节盘均有不同程度损伤,髁突软骨增殖层和肥大层细胞胞质中检测到血管内皮生长因子及其受体Flt-1的表达,表达阳性强度随愈合时间而变化,各组阳性染色的灰度积分值差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论：血管内皮生长因子及其受体Flt-1对颞下颌关节髁突损伤的修复起重要的生物学作用。     

神经生长因子受体(p75)在下颌骨骨折愈合中的表达及意义的研究

目的：探讨神经生长因子受体-p75在骨折愈合过程的表达及其对骨折愈合的影响.方法：本实验选用32只白兔随机分为8组（每组4只）：对0、1、3、5、7、14、21、28 d组.制作右下颌骨骨折模型,立即行钛板固定.术后实验组动物分别在1、3、5、7、14、21、28 d处死.切取下颌骨脱钙后制作骨组织切片,分别行苏木精-伊红染色,NGFR-p75的免疫组化染色.结果：NGFR-p75在未骨折组仅仅弱阳性表达,而在骨折愈合过程中表达阳性,5～7 d达到高峰,到21 d与对照组比较无显著性差异.结论：NGFR-p75在骨折的愈合过程中,通过与NGF的结合,调节骨细胞的活性,对于骨折愈合过程中的修复重建起到重要作用.     

家兔颌面部爆炸伤早期血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的变化和作用

目的 :探讨颌面部软组织爆炸伤愈合过程中血管内皮细胞生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的分布和在伤口液中含量的动态变化 ,及其对血管再生的刺激作用。方法 :采用改进的家兔颌面部爆炸伤动物模型 ,选用聚乙烯醇 (PVA)海绵收集伤口液 ,ELISA法和免疫组化、原位杂交法分别检测VEGF和bFGF的含量及分布。结果 :颌面部爆炸伤伤口液中VEGF含量在伤后第 1周内稳步上升 ,于伤后第 3天达到 2 9ng ml± 2 7ng ml,和对照组相比 ,差异非常显著 (P <0 0 1) ,伤后 7d达峰值。伤口液中bFGF的含量在伤后 6h即达到峰值 ,为5 6 5pg ml± 436pg ml,之后迅速下降。VEGF的表达位于上皮细胞、血管内皮细胞及部分慢性炎症细胞 ;bFGF的转录出现于血管内皮细胞和成纤维细胞 ,部分巨噬细胞中也有阳性表达。结论 :VEGF和bFGF参与颌面部爆炸伤愈合过程中血管再生的两个不同阶段 ,二者有协同作用 ,bFGF刺激血管再生的启动 ,并诱导VEGF的合成 ,VEGF则调节和维持之后的血管再生过程。     

骨折愈合中纤维粘连蛋白和整合素β1的基因表达

目的　探讨骨折愈合过程中纤维粘连蛋白(FN)和整合素β1 (Itgβ1)基因时空表达变化规律。方法　取兔 下颌骨骨折愈合各时期标本的石蜡切片,采用原位逆转录多聚酶链式反应技术,检测骨折愈合过程的不同时期FN 和Itgβ1 mRNA的时空表达。结果　①骨折愈合过程中,FN mRNA和Itgβ1 mRNA在骨组织的多种细胞中广泛表 达,阳性信号出现于细胞浆和细胞核中;②整合素β1 mRNA在骨折5~7 d后表达增强,14~30 d最强,60~90 d时基 本接近正常;③FNmRNA骨折后3 d出现阳性表达,7~14 d达到峰值,然后急剧下降,30 d时有微弱表达,60 d后未 检测出表达。结论　骨折愈合过程中局部FNmRNA和Itgβ1 mRNA表达均增强,在时空关系上具有协同作用,提示 FN和Itgβ1对骨折愈合具有重要影响。     

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目的研究发育期SD大鼠髁状突颈部骨折对下颌髁状突软骨细胞中上游刺激因子1(USF1)表达的影响。方法本研究于2011年7—9月在昆明医科大学口腔医学院研究所完成。选择4周龄雄性SD大鼠12只,其中6只大鼠用于制作下颌单侧髁状突颈部骨折动物模型,6只大鼠为对照。分别在术后1、3、5周时处死大鼠,取出骨折侧、骨折对侧以及空白对照的髁状突软骨。采用免疫组织化学方法检测髁状突软骨细胞中USF1表达情况。结果术后1周,骨折对侧空白对照组与骨折侧的USF1表达有显著性差异(P<0.01);术后3周,空白对照组与骨折侧USF1表达有显著性差异(P<0.01)。骨折侧术后3周、5周与术后1周USF1表达有显著性差异(P<0.01)。结论单侧髁状突颈部骨折引起应力变化,使患侧髁状突软骨细胞中USF1表达异常,进而影响髁状突的生长发育。     

下颌骨骨折愈合过程中纤维粘连蛋白mRNA表达的研究

目的:探索下颌骨骨折愈合过程中纤维粘连蛋白mRNA的表达规律。方法:制作下颌骨骨折动物模型,对骨折愈合过程中不同时期的组织标本切片行mRNA原位杂交实验。结果:正常骨组织中没有检测到纤维粘连蛋白fibronectin,FN)的mRNA表达。骨折愈合过程中,在成纤维细胞、纤维细胞、血管内皮细胞、软骨细胞、破骨细胞和一些骨组织细胞中观察到FN的mRNA表达。表达的时间规律为骨折后3d出现明确阳性表达,逐步增强,7～14d达到峰值,其后急剧下降;至1月时,仅有微弱信号存在,2月后未再观察到阳性信号。结论:在下颌骨骨折愈合过程中,有多种类型的局部组织细胞出现了FNmRNA表达,合成的内源性细胞型纤维粘连蛋白(cellular fibronectin,cFN)对骨折愈合具有重要影响。     

骨折愈合中牙本质基质蛋白1与破骨细胞表达时间效应的观察

目的探讨骨折愈合过程中牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein 1，DMP1）与破骨细胞的时间效应。为研究DMP1在体内矿化重建中的作用提供参考。方法将40只成年Wistar雄性大鼠左侧下颌支骨折，建立下颌骨骨折模型。骨折后5、7、14、21d处死大鼠，取骨痂和对侧正常骨组织（对照组），分别采用HE染色、TRAP染色和免疫组织化学链霉抗生物素．蛋白过氧化物酶（streptavidin perosidase，sp）法染色切片检测。结果在对照组正常下颌支组织中没有DMP1的表达，偶见破骨细胞；实验组在骨折后14～21d是破骨细胞活动高峰。结论DMP1与破骨细胞在骨折愈合过程中具有一定的时间效应。     

颌骨骨折愈合过程中纤维粘连蛋白表达的免疫组化分析

目的：分析颌骨骨折愈合过程中总纤维粘连蛋白（tFN) 和细胞型纤维粘连蛋白(cFN）的表达和变化，探讨纤维粘连蛋白在颌骨骨折愈合过程中的作用。方法：以兔作为实验动物，制作下颌骨骨折动物模型，于骨折愈合的不同时期定期处死动物，获取标本，采用LsAB免疫组化染色法检测tFN和cFN的表达，而同期tFN和cFN表达强度的差异则体现了pFN的表达水平。结果：血浆型纤维粘连蛋（pFN)在正常组织中有表达，骨折后1d表达明显增强，5－7d时达峰值，骨折后3月在骨基质中仍有较强表达。cFN在骨折后3d出现表达，7d时达峰值，2周后开始减弱，1月时仅可观察到微弱表达，表达部位主要在骨周结缔组织基质。结论：颌骨骨折翕合过程中，pFN与cFN的表达存在着时空差异，提示pFN主要在血凝块形成、单核细胞吞噬作用、骨基质沉积、钙化等过程中发挥作用，cFN对细胞分化、增殖有重要调节作用。     

Spatial and temporal localization of FGF-2 and VEGF in healing tooth extraction sockets in a rabbit model.

PURPOSE: The purpose of this study was to test the hypothesis that spatial and temporal localization of growth factors FGF-2 and VEGF in a rabbit tooth extraction socket model correlate with the histologic events of healing. MATERIALS AND METHODS: Twenty-four male New Zealand white rabbits divided into 8 groups of 3 were used in the study. Incisor teeth were extracted from both jaws and the healing extraction socket with surrounding jaw bone was harvested at 48 hours, 4 days, 1, 2, 4, 8, 12, and 16 weeks. Tissues were fixed, decalcified, and processed for hematoxylin-eosin and immunohistochemical staining. The sections were stained to detect FGF-2 and VEGF. The stained sections were then imaged and an automated computer program was used to detect the brown diaminobenzidine stain that represented the growth factors of interest. Data was obtained in the form of percentage area and intensity of stain and analyzed using the analysis of variance (ANOVA - Tukey Kramer and Scheffe's post-test). RESULTS: Spatial and temporal differences in localization of FGF-2 and VEGF were observed across all time frames in both jaws. Statistically significant differences in percentage area and intensity of brown diaminobenzidine stain were seen temporally between FGF-2 and VEGF (P < .05). CONCLUSION: The results of this study showed positive correlation of histologic events to spatial and temporal localization of FGF-2 and VEGF in a rabbit tooth extraction model.     

Vascular endothelial growth factor (VEGF) response to dental trauma: a preliminary study in rats

Abstract –  Background : Successful periodontal healing and pulpal revascularization after trauma may be age-related. After dental trauma, age-related impaired angiogenesis may play a role in the revascularization rate during the healing process. Objectives : The aim of the present preliminary in vivo study was to detect the presence of vascular endothelial growth factor (VEGF) in venous and whole blood from the alveolar socket immediately post-tooth extraction. Materials and methods : The study consisted of 16 Wistar rats divided into two groups: eight young (6 weeks) with incomplete root development and open apices, and eight adult (4 months) with complete root development. One first mandibular molar was extracted and whole blood from the alveolar socket collected immediately and at 5, 10 and 15 min post-extraction. Venous blood samples were collected immediately pre- and 24-h post-extraction. All samples were tested for VEGF. Results : Increased VEGF levels were found in the venous blood 24 h post-extraction, with a significant difference in the young rats ( P  < 0.05). The increased VEGF serum concentration in the young rats was significantly higher (12.2 ± 4.6 pg ml⁻¹, median 12.1) than that in the adult rats (7.6 ± 3.8 pg ml⁻¹, median 6.7) ( P  = 0.037). VEGF at the extraction site was not significantly different at 15 min post-extraction. At the extraction site, there was no significant difference of VEGF concentration between young and adult rats. Conclusions : Young rats had higher post-extraction serum VEGF levels, which may contribute to the healing process after dental trauma.     

骨折愈合过程中蛋白聚糖增龄性变化

目的:通过建立小鼠股骨骨折模型,探讨蛋白聚糖的增龄性变化对骨折愈合的影响。方法:取2月龄及9月龄C57BL/6J小鼠,分别建立右侧股骨骨折模型,术后7 d收样,组织学染色观察其骨折愈合情况,实时定量PCR检测Col2、Col10、Sox9、Mmp9等软骨形成相关基因及Dmp1、Vcan、Dcn、Bgn等蛋白聚糖相关基因表达情况。结果:成功构建了小鼠股骨骨折模型,组织学染色可见9月龄小鼠骨折后骨痂形成较2月龄小鼠差;实时定量PCR结果显示,骨折愈合过程中9月龄小鼠Col10、Sox9、Mmp9等软骨形成相关基因和Dmp1、Vcan、Dcn、Bgn等蛋白聚糖相关基因较2月龄小鼠低(P<0.05)。结论:在骨折愈合过程中,衰老小鼠蛋白聚糖表达较低,提示可能与骨折增龄性愈合减缓相关。