玛咖对虚寒证及虚热证大鼠内分泌激素和物质代谢水平的影响

目的 研究玛咖对虚寒、虚热证大鼠环核苷酸、内分泌激素及物质代谢水平的影响,验证玛咖偏温中药药性。方法 SD大鼠分为空白组、虚寒模型组、虚寒肉桂组、虚寒玛咖高剂量组、虚寒玛咖低剂量组、虚热模型组、虚热黄柏组、虚热玛咖高剂量组、虚热玛咖低剂量组;采用每日肌肉注射氢化可的松琥珀酸钠、地塞米松磷酸钠注射液1次,连续21天的方法制备虚寒、虚热证动物模型;通过放免法检测环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)、三碘甲状腺原氨酸(three iodine thyroid,T3)、四碘甲状腺原氨酸(thyroxine,T4)、反三碘甲状腺原氨酸(reverse triiodothyronine,rT 3)、皮质酮(corticosterone,CORT)、睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)含量及总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、游离脂肪酸(free fat acid,FFA)、脂蛋白脂肪酶(lipoprteinlipase,LPL)、总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)和血糖(glucose,GLU)含量变化。结果 (1)玛咖高剂量能明显升高虚寒证大鼠血清cAMP、cAMP/cGMP、T3、T4、CORT、E2、TC、TG、FFA、LPL、TP、ALB、GLU值(P0.05),降低rT 3和T的含量(P0.05);(2)玛咖低剂量可以明显升高虚寒证大鼠血清cAMP/cGMP、T3、T4、CORT、E2、TC、TG、FFA、TP、ALB、GLU值(P0.05);(3)玛咖高剂量和玛咖低剂量均能明显降低虚热证大鼠血清E2、TC、TG、FFA值(P0.05),升高CORT、T含量(P0.05);(4)玛咖对虚热证大鼠cAMP、cAMP/cGMP、T3、T4、rT 3、TP、GLU、LPL指标的影响无统计学意义(P0.05)。结论 本实验采用同类比较、异类反证的方法,通过测定玛咖对虚寒、虚热证模型大鼠环核苷酸、内分泌激素及脂肪、蛋白质和糖代谢等相关指标的含量变化,证明了玛咖偏温药性。     

仙茅对类虚寒大鼠物质代谢及内分泌水平影响的实验研究

目的观察仙茅对类虚寒动物模型的物质代谢和内分泌影响,探讨仙茅辛热药性的表达。方法应用糖皮质激素氢化可的松塑造类虚寒动物模型,仙茅水提物干预类虚寒动物模型,放射免疫法检测三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、皮质酮、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP);氧化酶终点法检测葡萄糖;终点法检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC);双缩脲终点法检测总蛋白(TP);溴甲酚绿终点法检测白蛋白(Alb),探讨仙茅对类虚寒动物物质代谢和内分泌影响水平。结果与空白对照组比较,虚寒模型组葡萄糖、总胆固醇、总蛋白、白蛋白、促甲状腺素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、皮质酮降低,甘油三酯升高,有统计学意义(P<0.05,P<0.01);仙茅大剂量干预后,葡萄糖、总胆固醇、总蛋白、促甲状腺素、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、皮质酮显著升高,甘油三酯降低。结论仙茅可改善类虚寒动物物质代谢、内分泌及环核苷酸水平,体现辛热药性。     

黄芪四君汤对脾虚证大鼠甲状腺素及环核苷酸水平的影响

目的观察黄芪四君汤对脾虚证模型大鼠甲状腺激素及环核苷酸水平的影响,探讨该方防治脾虚证的作用机理。方法SD雄性大鼠随机分为3组:正常对照组,脾虚模型组,黄芪四君汤组。采用大黄复制脾虚证动物模型,观察各组动物血清甲状腺素(T4)、三碘甲腺原氨酸(T3)、促甲状腺素(TSH)及血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平的变化。结果与正常对照组比较,脾虚模型组大鼠血清T3、T4含量下降(P<0.01),血浆cAMP含量及cAMP/cGMP比值均升高(P<0.01)。黄芪四君汤能提高实验性脾虚证大鼠T3、T4水平及脾脏指数、胸腺指数,降低cAMP含量及cAMP/cGMP比值。结论黄芪四君汤能改善脾虚证模型大鼠的脾虚症状,其作用机理与调节甲状腺激素及cAMP、cGMP水平有关。     

浙贝乙素及其衍生物对豚鼠支气管平滑肌环磷酸腺苷的影响

目的:观察浙贝乙素及其衍生物对豚鼠支气管平滑肌内环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响。方法:采用氧化铝柱层析法分离环磷酸腺苷(cAMP),利用紫外分光光度法计算环磷酸腺苷(cAMP)的生成或消耗量来表示腺苷环化酶(AC)和磷酸二酯酶(PDE)的活力。结果:浙贝乙素衍生物各样品对腺苷环化酶(AC)的影响很低,对磷酸二酯酶(PDE)有抑制作用,从而提高环磷酸腺苷(cAMP)的水平。结论:浙贝乙素衍生物通过提高支气管平滑肌细胞内环磷酸腺苷的水平产生平喘作用。     

基于热敏感蛋白TRPV1的温热药性表达研究

目的:探讨温热药对虚寒动物的热敏感蛋白(transient receptor potential vanilloid type-1,TRPV1)及体内cAMP(Cyclic Adenosine monophosphate)/PKA(protein kinase A)信号通路影响。方法:建立大鼠虚寒模型,应用温热中药黑顺片(30 g生药/kg)、干姜(20 g生药/kg)、肉桂(10 g生药/kg)及仙茅(30 g生药/kg)进行干预,应用放免法检测血清促甲状腺素(thyroid stimulating hormone,TSH)、甲状腺素(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、皮质酮(Corticosterone,COR)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP),应用免疫组化法检测大鼠下丘脑、海马、背根神经节中热敏感蛋白(TRPV1)、磷酸化蛋白激酶A(Phospho-(Ser Thr)PKA,PPKA)蛋白表达。结果:虚寒组大鼠出现活动减退、爱扎堆、毛色枯萎等现象,血清中TSH、T3、T4、COR、cAMP、c GMP含量降低,大鼠下丘脑、海马、背根神经节中TRPV1、PPKA蛋白表达明显降低,黑顺片(30 g生药/kg kg)、干姜(20 g生药/kg)、肉桂(10 g生药/kg)及仙茅(30g生药/kg)干预后,大鼠活动性增加,毛色改善,血清中TSH、T3、T4、COR、cAMP、c GMP含量明显升高,大鼠下丘脑、海马、背根神经节中TRPV1、PPKA表达明显增强。结论:热性药可改善虚寒状态内分泌水平,其作用机制可能与增强虚寒机体时下调的TRPV1、PPKA蛋白表达有关,从而表达出温热药性。     

大鼠虚热证模型的建立与评价

目的:对热性中药致虚热证模型的复制和评价进行探究。方法:使用不同剂量热性中药附子、干姜、肉桂灌胃大鼠。每天观察大鼠的活动状态、毛发光泽、爪色、二便等一般状况,每天定时测定大鼠的肛温、粪便量、尿液量、饮水量、饮食量,并于体液消耗量出现明显差异时采集血液和相关组织器官,测定血清三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4),血浆环磷酸腺苷(cAMP)及环磷酸鸟苷(cGMP)含量的变化和相关脏器指数。结果:与空白组比较,各模型组大鼠饮水量、体液消耗量大多数升高,动物出现虚热证的证候;且血清中T4含量呈增高趋势,T3/T4降低。模型低剂量组和模型中剂量组的cAMP和cGMP含量与空白组比较大多数显著升高,而模型高剂量组含量则有所降低。结论:灌胃热性中药可以复制出虚热证模型,体液消耗量的增加对虚热证模型复制有一定的指导意义。     

针刺对多发梗塞性痴呆大鼠海马cAMP和cGMP含量的影响

目的:观察针刺足三里穴对多发梗塞性痴呆大鼠第二信使环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量的影响。方法:采用栓子注入法制备大鼠多发梗塞性痴呆(MID)模型;造模成功后分为模型组、针刺组和非穴组,并设正常组和假手术组作对照。针刺组在造模成功后第8天开始治疗,治疗后,采用放免法检测各组大鼠海马cAMP、cGMP含量。结果:与正常组比较,模型组海马cAMP含量明显下降(P0.01)。与模型组比较,针刺组cAMP含量升高(P0.01),接近正常组水平。与正常组比较,模型组cGMP含量未见明显异常变化,针刺组亦未见明显调节作用。结论:针刺足三里穴可以通过调节cAMP含量,介导血管平滑肌的松弛反应,改善脑血流供应。     

阿萨伊对虚热及虚寒证小鼠的生物学效应影响

目的探究阿萨伊对虚热、虚寒证小鼠的生物学效应的影响及验证阿萨伊性凉的药性假说。方法将昆明种雄性小鼠分为空白组、虚热模型组、虚热模型+生地黄组、虚热模型+阿萨伊组、虚寒模型组、虚寒模型+肉桂组、虚寒模型+阿萨伊组,以生地和肉桂做为对照药,采用每日灌胃给予甲状腺片溶液、氢化可的松溶液1次,连续14天的方法制备小鼠虚热、虚寒模型;采用冷热板示差法探讨了阿萨伊对小鼠温度趋向性的干预作用;通过放免法检测环核苷酸、甲状腺激素等生化指标变化。结果阿萨伊同生地黄一致,能改善甲状腺组小鼠的虚热状态,能够增加虚热小鼠体重,能使虚热小鼠在低温区停留比例明显下降(P0.001),能使环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)、cAMP/cGMP值明显下降(P0.05,P0.05,P0.001),也能使三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)水平有显著下降(P0.001,P0.01),表现出对虚热模型小鼠的调整作用;阿萨伊与肉桂相反,对虚寒模型小鼠的指标纠正不明显,仅能使T4含量明显上升(P0.01)。结论本文采用同类比较、异类反证的方法证明了阿萨伊的中药药性为寒凉。     

什么是cAMP与cGMP

cAMP 是3′,5′腺苷—磷酸(Cyclic Adenosine 3′,5′—Monophosphate)的缩写,通常称环—磷酸腺苷。cGMP 是3′,5′鸟苷—磷酸(Cyclic Guanosine 3′,5′—Monophosphate)的缩写,通常称环—磷酸鸟苷。它们都是环核苷酸的一种。cAMP 是细胞膜上的一种特异性腺苷酸环化酶催化细胞内的三磷酸腺苷(ATP)分解产生;cGMP 则由特异的鸟苷酸环化酶催化三磷酸鸟苷(GPT)生成。其来源于组织细胞(主要是肺和小肠),     

新外来中药紫锥菊对虚寒、虚热证小鼠生物学效应的影响

目的 对新外来中药紫锥菊中药寒热药性进行实验验证。方法 将110只小鼠随机分成11组,即空白组、虚热模型组、虚热西洋参组、虚热紫锥菊低剂量组、虚热紫锥菊中剂量组、虚热紫锥菊高剂量组、虚寒模型组、虚寒人参组、虚寒紫锥菊低剂量组、虚寒紫锥菊中剂量组和虚寒紫锥菊高剂量组,每组10只。虚热组小鼠灌胃甲状腺片溶液160 mg/kg,虚寒组小鼠灌胃氢化可的松溶液25 mg/kg,每日1次,连续14天制备虚热及虚寒模型。检测各组小鼠血清中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)、cAMP/cGMP、三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量变化。结果 与虚热模型组相比,紫锥菊组小鼠整体状态有一定程度改善,体质量、胸腺及脾脏指数明显改善(P&l...     

妇科虚寒证大鼠模型的创建

目的 模拟妇科虚寒证发生的病因,依据“寒邪伤阳”的中医学理论,创建妇科虚寒证模型.方法 将SD雌性大鼠按随机数字表法分为模型组和正常组,每组20只.模型组置于0～1℃冰水中并放入4℃冰箱中,2次/天,20 min/次,共30天.每天测定大鼠体温及观察动情周期的变化,当大鼠体温降低(与正常组之间比较差异有统计学意义),阴道细胞涂片显示动情周期紊乱时,显示造模成功.择动情间期处死大鼠,检测血液生殖内分泌激素[血清卵泡刺激素( FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)]、甲状腺功能[血清总三碘甲状腺原氨酸(T3)、总甲状腺素(T4)、促甲状腺素(TSH)]、肾上腺功能[血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(Cor)]、细胞免疫功能[血清白细胞介素-2(IL-2)]、能量检测[血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、cAMP/cGMP比值,乳酸脱氢酶(LDH)]及胸腺、脾脏、子宫、卵巢指数.结果 与正常组比较,第30天时模型组动物外观差,被毛无光泽,耳、爪紫暗;精神萎靡,蜷缩少动,反应迟钝,喜扎堆;饮水量、食量减少,体重减轻,体温降低显著,便溏;动情周期、间期延长;血浆cGMP含量、cAMP/cGMP比值、LDH、血清IL-2含量及E2、P、T、T3、LH、TSH均有不同程度的降低,胸腺和卵巢指数显著降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 采用延长冰箱冷冻加冰水浸泡时间的方法制作的妇科虚寒证大鼠模型,符合妇科虚寒证的临床特征.     

川芎挥发油对啤酒酵母发热模型大鼠下丘脑cAMP含量的影响

目的探讨川芎挥发油（CH）解热作用机理。方法采用大鼠啤酒酵母发热模型，腹腔注射给以高、中、低3个剂量CH观察大鼠直肠温度变化，然后以放射免疫法测定大鼠下丘脑组织中环磷酸腺苷（cAMP）含量。结果模型组大鼠肛温和下丘脑组织cAMP含量明显高于正常对照组，CH高、中剂量组均有明显的解热作用且在发挥解热作用的同时大鼠下丘脑组织中cAMP含量明显降低，低剂量组与模型组相比有降低作用趋势，但无明显差异。结论CH解热作用的机理之一可能为减少下丘脑组织中cAMP的含量使中枢体温调定点下调而达解热效应。     

基于证候理论观察白附片对正常和肾阳虚证大鼠心肌酶的影响

目的:观察白附片对正常大鼠和肾阳虚证大鼠心肌酶的影响,探索其对两种大鼠心脏毒性的差异。方法:80只SD雄性大鼠随机平均分为肾阳虚模型组和正常组;肾阳虚模型组采用肌注氢化可的松琥珀酸钠的方法造模;造模结束后,把两组大鼠各自随机分为低剂量、小剂量、中剂量和大剂量给药组和空白对照组,每组8只;对各给药组大鼠连续14dig不同浓度的白附片溶液;末次给药24h后处死动物,制备血清和心肌组织匀浆;检测血液肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH),放射性免疫法检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)、环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP),免疫比浊法检测心肌琥珀酸脱氢酶(SDH)和钠-钾三磷酸腺苷酶(Na+-K⁺-ATPase)。结果:与正常大鼠比较,模型大鼠血液中ACTH、COR、cAMP水平降低而cGMP升高;白附片可引起正常大鼠CK的升高和Na⁺-K⁺-ATPase的下降,而对模型大鼠没有影响;随着白附片剂量的增加,正常和模型大鼠的LDH有升高的趋势,而SDH有下降的趋势,而且正常大鼠变化的幅度更大。结论:白附片对正常大鼠的心脏毒性比对肾阳虚模型大鼠更突出;该研究为在证候理论指导下进行中药毒性评价的合理性和必要性提供了客观依据。     

强肌健力饮对脾虚证大鼠血清甲状腺激素水平的影响

目的:观察强肌健力饮对脾虚大鼠血清T3(三碘甲腺原氨酸)、T4(甲状腺素)、rT3(3,3′,5′-三碘甲腺原氨酸)、TSH(促甲状腺激素)含量的影响,以期进一步了解该方药对脾虚证的药理作用,为临床用药提供实验依据。方法:选用SD雄性大鼠,随机分为正常对照组(n=10)、脾虚模型组(n=12)、强肌低剂组(n=13)、强肌中剂组(n=13)、强肌高剂组(n=11)、四君子汤组(n=10)。采用大黄复制脾虚模型,分别于上午给予蒸馏水、大黄水煎剂灌胃;下午分别灌以等量的蒸馏水及相应剂量的强肌健力饮和四君子汤,连续用药20天,实验结束后取大鼠血清,观察各组大鼠甲状腺激素的含量变化。结果:与正常对照组比较,脾虚模型组血清T3、T4分泌减少,有显著性差异(P0.01);rT3分泌有所增加但尚未统计学差异,TSH无反馈性升高(P0.05)。强肌健力饮高剂量使下降的T3、T4含量均明显升高,有显著性差异(P0.01),强肌健力饮低剂量在恢复T4方面有明显作用(P0.01)。四君子汤对脾虚引起的T3、T4分泌减少亦有明显的恢复作用(P0.01)。结论:强肌健力饮对脾虚证大鼠有一定的保护作用,其作用机理之一与调节甲状腺激素水平有关。     

青钱柳对阴虚型2型糖尿病大鼠内分泌-免疫-环核苷酸系统的影响

目的:探讨青钱柳对阴虚型2型糖尿病大鼠内分泌、免疫功能及环核苷酸的影响。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为空白组7只和造模组53只。其中空白组给予普通饲料,造模组给予高脂饲料喂养8周。第9周,以0.2mg/kg的剂量皮下注射甲状腺素溶液1周。第10周,以30mg/kg的剂量一次性腹腔注射2%链脲佐菌素,并于72h后选择空腹血糖>11.1mmol/L的成模大鼠随机分为模型组,知柏地黄丸组,CPE低、中、高剂量组,每组7只;空白组和模型组给予无菌水,知柏地黄丸组给予知柏地黄丸混悬液(0.3g/kg),CPE低、中、高剂量组分别给予青钱柳叶水提取物(CPE)0.25、0.5、1g/kg。连续给药4周,给药期间检测空腹血糖(FBG),给药结束后,检测糖环磷酸腺苷、内分泌免疫等代谢指标。结果:与模型组比较,CPE低、高剂量组大鼠T3、T4含量显著下降(P<0.01,P<0.05);CPE低、中剂量组大鼠C4含量显著升高(P<0.01);CPE高剂量组大鼠T、C3含量显著升高(P<0.01,P<0.05);CPE中、高剂量组大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α、E2含量显著下降(P<0.05,P<0.01),IgG、IgM含量显著升高(P<0.05,P<0.01);CPE低、中、高剂量组大鼠COR含量显著升高(P<0.01,P<0.05),rT3、TP、ALB、UA、cAMP、cGMP的含量显著下降(P<0.01,P<0.05)。结论:CPE可调节阴虚型2型糖尿病大鼠的能量代谢异常,缓解内分泌激素紊乱,调节免疫物质的分泌和环核苷酸代谢。     

糖尿病大鼠病程不同阶段视网膜组织中内皮素-1水平的变化及意义

目的： 探索糖尿病视网膜病变发生发展的有关因素。方法： 对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠发病后第４ 、６、１２ 和１６ 周视网膜组织中内皮素１ （ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１ ,ＥＴ１）、环磷酸腺苷（ｃｙｃｌｉｃａｄｅｎｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ｃＡＭＰ） 和环磷酸鸟苷（ｃｙｃｌｉｃｇｕａｎｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ｃＧＭＰ） 的含量进行了检测。结果： 各阶段糖尿病组大鼠视网膜组织中ＥＴ１ 水平明显高于对照组,ｃＡＭＰ含量和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值则明显低于对照组, 随病程延长更为明显,ｃＧＭＰ含量无明显改变。结论：糖尿病视网膜病变的发生和发展可能与高血糖状态下视网膜组织中ＥＴ１ 水平升高所致的视网膜局部微循环功能障碍和代谢紊乱有关。     

补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响

目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素／环磷酸腺苷-蛋白激酶A（follicle stimulating hormone／cyclic adenosine monophosphate-protein kinaseA,FSH／cAMP-PKA）通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功能可能的分子机制。方法收集行体外受精一胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF．ET）患者卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养24h,以低、中、高剂量补肾调经方人、大鼠含药血清以及正常人、大鼠血清分别与体外培养的人卵巢颗粒细胞共同孵育48h,分为补肾调经方低、中、高剂量组以及对照组。采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇（estrogen,E2）、孕酮（progesterone,P）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的水平,采用蛋白印迹法和Real-timePCR分别检测卵泡刺激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）蛋白和FSHR、P450芳香化酶（P450 aromatase,P450arom）mRNA在颗粒细胞的表达。结果人含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组培养液中E2、cAMP水平均明显升高（P〈0．05）,补肾强经方中剂量纽P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均明显增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。大鼠含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组E2均升高（P〈0．01）,cAMP明显升高（P〈0．05,P〈0．01）,补肾调经方中剂量组P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组人卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达明显升高（P〈0．05,P〈0．01）。结论补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞FSH／cAMP-PKA通路的主要效应分子FSHR、cAMP、P450arom、E2,促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。