尾部悬吊大鼠胸主动脉和肺动脉舒张反应性的动态变化

目的研究模拟微重力(SM)时大小循环动脉血管舒张反应性随时间变化的过程,为SM时大小循环血管局部调节的适应机理和立位耐力降低机理的研究积累资料.方法采用-30°尾部悬吊大鼠模型模拟微重力的生理效应,研究对照组(CON组)、悬吊7d组(TS7组)和悬吊14d组(TS14组)离体灌流的胸主动脉(TA)和肺动脉(PA)环的反应性.结果TS7组TA和PA舒张反应显著增强;TS14组PA反应有减弱趋势而TA仍有增强.去内皮PA对硝普钠的舒张反应3组间无显著性意义.结论模拟微重力时大小循环动脉舒张反应的不同变化,是局部调节功能降低的表现,可能对SM后立位耐力降低有贡献.     

尾部悬吊大鼠肺动脉和胸主动脉血管反应性及一氧化氮合酶抑制剂的影响

目的进一步明确大小循环动脉对模拟微重力(simulated microgravity,SM)适应机理,阐明SM后立位耐力降低机理,为SM后立位耐力降低寻找新的对抗措施。方法一30。尾部悬吊(TS)大鼠模拟微重力的生理效应。尾部悬吊7d(TS7d)和14d(TSl4d)后的肺动脉(PA)和胸主动脉(TA)环对68mmol／LKCl、累加浓度的苯肾上腺素(PE)和乙酰胆碱(ACh)的反应性作了观察。加入10^-5mol／LNOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)孵育20min后重复检测对PE的收缩反应和ACh的舒张反应。结果TS7d、TSl4d大鼠PA和TA对KCl及PE的收缩反应非常显著降低;TS7d大鼠PA和TA对ACh的舒张反应显著或非常显著增强,TS14d大鼠PA无变化,TS14dTA仅有增强趋势。加入10^-5mol／L L-NAME后TS7d、TS14d大鼠PA对PE的收缩反应3组无差异,TS7d、TS14d大鼠TA对PE的收缩反应仍有降低;TS7dPA对ACh的舒张反应显著或非常显著降低,其余无变化。结论TS大鼠PA和TA收缩反应的降低可能归因于内皮舒张功能的增强。10^-5mol／LL-NAME可逆转TS后大鼠PA和部分逆转TA的收缩反应降低的实事表明其对内皮细胞的舒张功能有抑制作用．可用于抑制立位耐力降低。     

尾悬吊模拟失重大鼠肺组织一氧化氮合酶mRNA的研究

为探讨尾悬吊模拟失重大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOS mRNA)的变化，采用尾悬吊模拟失重法，将大鼠分为悬吊7天和21天及相应对照组4组，并采用原位杂交技术检测肺组织iNOS mRNA的表达情况，发现同正常对照组相比，7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平明显增高（P＜0．01），21天悬吊组模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平仍显著增高（P＜0．01），提示NO参与了在模拟失重条件下的肺组织损伤的过程。     

大鼠睡眠剥夺后下丘脑一氧化氮合酶mRNA表达的变化

目的观察快动眼睡眠剥夺大鼠下丘脑神经元型一氧化氮合酶 (nNOS )及诱导型一氧化氮合酶(iNOS )mRNA表达的时相变化。方法小站台水环境法剥夺大鼠睡眠 2 4h、48h及 72h后 ,用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR )检测其下丘脑nNOS及iNOSmRNA的表达。结果睡眠剥夺 2 4h组nNOSmRNA表达量显著增加 (P <0 .0 1 ) ,剥夺 48h组与对照组比较无显著差异 ,剥夺 72h组nNOSmRNA的表达量低于对照组水平 (P <0 .0 5 ) ;睡眠剥夺 2 4h和 48h组iNOSmRNA的表达量无显著变化 ,但剥夺 72h组iNOSmRNA的表达量大幅度增加 (P <0 .0 1 )。结论睡眠剥夺后NOS基因表达增加 ,可能是睡眠“反跳”现象的机理之一 ;持续的睡眠剥夺状态下较高水平的NO还可能参与了睡眠剥夺对机体功能的损伤     

大鼠弥漫性脑损伤后脑组织一氧化氮和一氧化氮合酶表达变化

一氧化氮（nitric oxide，NO）是一种重要的神经递质，具有调节脑血管张力、抑制血小板聚集等保护作用，同时过量的NO具有神经毒性作用。现在发现有3种酶可以催化NO的生成，即神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）。笔者通过大鼠弥漫性脑损伤模型，研究NO在弥漫性脑损伤中时程变化及3种NOS的作用。     

He-Ne激光照射对大鼠心肌微动脉内皮细胞和心肌组织内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的　探讨He Ne激光照射大鼠心前区对心肌微动脉内皮细胞和心肌组织内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)表达的影响。方法　将 12只Wistar大鼠随机分为对照组和激光照射组 ,每组 6只。激光照射组的照射剂量为 6 0 5J cm2 ,每天照射 1次 ,连续 10天。最后一次激光照射后 ,两组大鼠均于左心室前壁取材 ,采用免疫组织化学染色方法 ,观察心肌组织各层eNOS表达的变化。结果　激光照射组eNOS表达的平均光密度值为 0 2 6 3± 0 0 15 ,高于对照组的 0 2 2 7± 0 0 16 (t=17 35 ,P <0 0 1) ;并且在各级心肌微动脉内皮细胞核的一端可见eNOS表达的阳性颗粒 ,而对照组不明显。结论　以剂量为 6 0 5J cm2 的He Ne激光照射大鼠心前区 ,可使心肌微动脉内皮细胞中eNOS的表达增强 ,为阐明He Ne激光照射扩张微血管、改善微循环的作用机制 ,提供了实验形态学依据     

大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶羧基末端PDZ结合配体mRNA的表达

目的 探讨大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶（nNOS）羧基末端PDZ结合配体（carboxy-terminal PDZ ligand of nNOS，CAPON）mRNA的表达变化及其意义。方法采用脊髓横断模型，用实时荧光定量聚合酶链式反应（realtime-PCR）及原位杂交与免疫荧光技术结合的方法检测正常成年大鼠脊髓内以及脊髓损伤后不同时间点损伤段脊髓组织中CAPONmRNA的表达，采用cresylviolet染色计数脊髓组织内存活神经元。结果 CAPON mRNA在对照组大鼠脊髓内呈低水平表达于前角神经元，脊髓损伤后表达于灰质各部分神经元及白质。在损伤早期2h表达开始升高，于8h达到高峰，随后1d有下降趋势，3d时稍有上升，损伤后14d恢复至正常水平。而nNOSmRNA在损伤后2h迅速上调，于8h达高峰，随即下降至正常水平。在此过程中，有神经元凋亡现象的发生。损伤后2h存活神经元的数量即减少，随后稍有增多，但仍少于对照组，3d后存活神经元再度减少，持续至14d。结论 大鼠脊髓损伤后CAPONmRNA表达发生变化，提示CAPON可能通过调节nNOS的活性及亚细胞定位而影响神经元的凋亡，在脊髓损伤病理过程中发挥积极的调节作用。     

胃癌中一氧化氮合酶的表达及意义

目的：探讨胃癌中三种一氧化氮合酶的表达在胃癌发生、发展中的意义。方法：分别选取胃癌标本98例、正常及良性病变胃组织标本10例。所有标本以SABC法进行三种NOS鼠单克隆抗体免疫组织化学染色。结果：nNOS、eNOS和iNOS在正常及良性病变胃组织中均可见不同程度的表达，NOS在癌旁胃组织中的表达明显高于正常及癌组织，nNOS、eNOS和iNOS阳性率分别为28.6%（28例）、49.1%（48例）及50.0%（49例）。高分化腺癌中eNOS和iNOS的阳性率明显高于nNOS，而在其它类型癌组织中无明显差异。结论：NO是胃癌发生的重要的促发因素之一。三种NOS在不同类型癌组织中的不同表达，反映了肿瘤的异质性特点。     

地塞米松对尾悬吊大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶的影响

目的　研究地塞米松对模拟失重大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)表达的影响。方法　采用尾悬吊模拟失重大鼠模型 ,将健康雄性SD大鼠分为尾悬吊 7天组和地塞米松干预组 ,每组各 10只 ,并采用免疫印迹和免疫组化两种方法检测肺组织iNOS的表达。结果　同尾悬吊 7天组相比 ,地塞米松干预组大鼠肺组织iNOS表达明显减低 ,差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论　地塞米松通过抑制iNOS表达对模拟失重所致大鼠肺组织损伤起保护作用。     

90天模拟失重大鼠股直肌的细胞化学变化

本实验用琥珀酸脱氢酶(SDH)染色结合微机图像分析技术对尾部悬吊模拟失重90d 大鼠股直肌纤维的类型,横截面积和组织化学反应进行了定量分析。结果表明,悬吊组股直肌Ⅰ型和ⅡA 型纤维的横截面积较对照组明显缩小(P<0.01)。悬吊组股直肌Ⅰ型纤维比例显著下降(P<0.01),ⅡA 型纤维比例升高(P<0.05)。组化反应定量结果则显示:悬吊组股直肌Ⅰ型纤维SDH 含量较对照组显著减少(P<0.05),而肌糖原、肌脂类和碱性磷酸酶含量增加(P 值分别<0.01,<0.01和<0.05);悬吊组股直肌ⅡB 型纤维脂类含量增加(P<0.05),肌糖原、SDH 和ALP 无明显变化(P>0.05)。本工作的主要发现是,为期90d 的长期模拟失重可使大鼠股直肌纤维比例发生变化,氧化功能下降,并出现糖原和脂类物质蓄积。     

ROK在14 d尾部悬吊大鼠股动脉收缩中的作用

目的研究Rho连接激酶(Rho associated kinase,ROK)在14 d尾部悬吊大鼠股动脉收缩中的作用.方法采用14 d尾部悬吊大鼠(-30°)模拟失重效应,Wistar大鼠被随机分成2组自由活动组(对照组,CON)和悬吊组(TS14d),利用离体血管环灌流技术检测ROK抑制剂Y-27632对KCI、苯肾上腺素(PE)和U-46619诱导的大鼠股动脉收缩反应性的影响.结果 与对照组相比,悬吊组股动脉对68 mmol/L KCl和10-5 mol/L PE的收缩反应性显著下降,而对10-6 mol/L U-46619诱导的收缩反应下降不显著;在68 mmol/L KCI诱导的收缩中,Y-27632对收缩的抑制效应随剂量的增加而增强且在悬吊组更强,在Y-27632由10-6 mol/L增加到10-5 mol/L时,悬吊组股动脉的紧张性收缩(tonic contraction)几乎被完全抑制,在PE和U-46619诱导的收缩中,Y-27632对收缩的抑制效应在悬吊组较强;在Y-27632作用下,悬吊组收缩力下降的幅值较高,但下降的幅值在KCI和PE诱导的收缩中没有显著性差异.结论 14 d尾部悬吊增强了大鼠股动脉RhoA-ROK通路的活性,这种活性的增强可能在一定程度上对平滑肌收缩力的减弱起到了代偿作用.     

尾吊对大鼠心肌损伤及其机制探讨

目的 研究尾吊对大鼠心肌细胞的损伤作用及其机制.方法 雄性SD大鼠分为5组,采用鼠头低位30°尾吊方法模拟失重不同时间,测定各组动物血清LDH和CK-MB活性和血液儿茶酚胺和糖皮质激素浓度;检测线粒体ATP合成的速率和线粒体膜通透性转换孔(MPTP)开放程度.结果 尾吊2周出现明显的心肌缺血性ST段升高和T波高耸、血清LDH和CK-MB活性升高(P＜0.05).尾吊第2周开始血液中儿茶酚胺和糖皮质激素显著升高(P＜0.05),第3周开始出现心肌线粒体ATP酶合成活力的显著下降(P＜0.05)和线粒体膜通透性转换孔的开启.结论 循环血中儿茶酚胺和糖皮质激素的升高可能是尾吊致心肌损伤的重要内分泌机制,线粒体能量代谢的紊乱是介导心肌细胞损伤的重要细胞内机制.     

中药X方剂对7d尾部悬吊大鼠心血管脱锻炼的对抗效应

目的 揭示模拟失重大鼠心血管脱锻炼病理生理学变化;探索中药X方剂对抗模拟失重大鼠心血管脱锻炼的效应.方法 -30°7 d尾部悬吊模拟失重的生理效应.雄性Wistar大鼠被随机分成3组:自由活动对照组(Con)、7 d尾部悬吊组(TS7)和7 d尾部悬吊用药组(TS7+X-方剂).头向上倾斜90°60 min模拟立位应激时的生理效应.TS7+X-方剂组用X-方剂灌胃给药,其它组灌注等量的生理盐水.Power Lab生理记录系统检测模拟立位60 min颈动脉压、Ⅱ导心电,记录胸主动脉流量,分析计算心率、平均动脉压、每搏指数、心指数和总外周阻力.结果 TS7大鼠模拟立位期间心率和总外周阻力升高不足,平均动脉压、每搏指数和心指数降低更明显;TS7+X-方剂组大鼠以上变化得到不同程度的改善.结论 TS7组大鼠出现心血管脱锻炼,X-方剂能较好改善TS7大鼠心血管脱锻炼作用,与其改善颈-心反射和外周阻力贮备有关,其作用机理有待进一步研究.     

尾悬吊大鼠骨和骨髓中骨钙素的变化

目的研究模拟失重骨质和骨髓内骨钙素 (OC)以及骨和软骨钙盐代谢的形态学变化。方法选用2 0只SD大鼠 ,随机配对分为 1 4d和 2 8d尾悬吊组及相应的 2个自由活动组 ,每组 5只。组织标本行原位杂交及三色染色。结果尾吊组大鼠骨质和骨髓内OC的表达明显弱于对照组 (P <0 .0 5 ) ;尾吊组1 4dOC的表达明显强于 2 8d(P <0 .0 5 )。模拟失重导致股骨和软骨基质钙化障碍 ,原有钙化基质内钙盐脱钙明显 ,2 8d脱钙明显加重。结论大鼠后肢去负荷导致骨和骨髓OC含量的降低 ,骨和软骨钙盐代谢障碍 ,去负荷时间越长越显著     

大鼠胸主动脉血管内皮细胞的分离培养和纯化鉴定

目的探索分离、培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞的有效方法。方法取Wistar大鼠1只,无菌条件下打开胸腔取出胸主动脉,去除外周结缔组织及脂肪,使主动脉内膜翻出,用丝线结扎动脉两端后用烧热的镊子烫烙。置于50ml铺有鼠尾胶培养瓶中培养,加入含有20%新生牛血清的DMEM/F12培养液静止培养,6d后换液并弃主动脉。经0.125%胰酶差速消化传代,采用免疫细胞化学法鉴定血管内皮细胞标志分子Ⅷ因子在细胞中的表达情况。结果培养6d时有少量细胞自主动脉迁移出并贴壁生长;12～14d时贴壁细胞覆盖大部分培养瓶底,约70%的细胞汇合成单层;经胰酶差速消化传代细胞生长旺盛,细胞汇合后呈现典型的鹅卵石样内皮细胞特征;内皮细胞标志物Ⅷ因子表达阳性率达100%。结论本研究采用的方法简便易行,不需要胶原酶及内皮细胞生长补充物,更为经济适用,适用于细小血管内皮细胞的分离与培养。     

纤维结合蛋白对大鼠血管内皮细胞损伤修复的影响

目的：了解观察伤后输注纤维结合蛋白（Ｆｎ）对大鼠血管内皮细胞（ＶＥＣ）损伤修复的作用．方法：用大鼠尾静脉损伤及左股骨粉碎性骨折模型，实验分Ｆｎ治疗组和等渗盐水对照组，Ｆｎ治疗组于伤后２小时，输注Ｆｎ１．７ｍｇ／１００ｇ体重．结果：输注Ｆｎ可使血浆Ｆｎ和腹腔巨噬细胞（Ｐ－Ｍψ）表面Ｆｎ水平增高、Ｐ－Ｍψ吞噬功能增强、循环内皮细胞（ＣＥＣ）数量减少、内皮损伤区网格状支架增多、槽状结构变浅且有ＥＣ爬行现象．结论：伤后输注Ｆｎ促进损伤内皮的修复有一定作用．     

尾悬吊大鼠后肢动脉平滑肌细胞钾离子通道活性的改变

目的 观察模拟失重是否可引起大鼠后肢动脉平滑肌细胞钾离子通道功能改变，以阐明模拟失重所致后肢动脉血管收缩反应降低的机理。方法 用离体股动脉血管环制备测定l周及4周模拟失重大鼠股动脉对钾离子通道阻断剂盐酸四乙铵(TEA)和4-氨基吡啶(4-AP)收缩反应的变化。并采用膜片钳全细胞记录方法直接观察隐动脉平滑肌细胞(VSMCs)大电导钙激活钾离子通道(BKCa)和电压依赖性钾离子通道(Kv)电流密度的改变。结果 l周及4周模拟失重大鼠股动脉血管环对60mM KCl的收缩反应下降；对TEA或4-AP的收缩反应与其对60mM KCl收缩反应的比值在模拟失重l周及4周后则均显著升高，但该比值在模拟失重l周与4周组间无显著差异。膜片钳实验结果表明，l周模拟失重大鼠隐动脉VSMCs BKCa电流密度和Kv 电流密度均显著升高。结论 模拟失重大鼠股动脉对KCl的收缩反应降低；而后肢动脉平滑肌细胞BKCa及Kv活性增高，钾离子通道活性的改变可能是导致模拟失重大鼠后肢动脉收缩反应下降的原因之一。     

模拟失重对鼠大脑和小脑皮层超微结构的影响

目的 研究模拟失重条件下鼠脑皮层超微结构的变化及其可能的机制。方法 采用大鼠尾吊模型模拟失重,并于悬吊第7、14、21、28天心脏灌流取材,进行大脑皮层和小脑皮层超微结构的观察。结果模拟失重作用下,大脑皮层神经元内质网池扩张,高尔基器扁平囊扩张,线粒体肿胀、破裂;大脑皮层第Ⅳ层中的突触小泡数量减少;毛细血管管腔褶皱增多、基底膜变厚。小脑蚓部皮层浦肯野细胞的粗面内质网出现明显的脱粒和边集现象。上述变化于悬吊第14、21天表现最为明显,28d时趋于恢复正常。结论 模拟失重可引起鼠脑皮层超微结构的改变。超微结构随着模拟失重的进程而改变,有恢复的趋势,表现出适应性的变化。