黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞相互作用的影响

目的探讨黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞间相互作用的影响。方法内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、黄芪组,培养24h后,ELISA法检测各组细胞上清液IV型胶原（colIV）、纤维连接蛋白（Fn）的含量。结果在高糖高脂环境下,共培养和单培养细胞上清液ColIV、Fn含量升高（均P〈0．05）,共培养上清液C01IV、Fn较单培养升高（均P〈0．05）;黄芪组colIV、Fn含量较高糖高脂组下降（均P〈0．05）。结论高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,这种作用能促进ColIV、Fn产生。黄芪通过抑制高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞间的相互作用,减少ColIV、Fn的含量,发挥肾脏保护作用。     

银杏叶提取物对高糖环境下系膜细胞血小板源性生长因子-B表达的影响

目的:观察银杏叶提取物对高糖培养条件下系膜细胞外基质产生及血小板源性生长因子-B(PDGFB)表达的影响。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,分为对照组(葡萄糖终浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖终浓度为30 mmol/L)、银杏叶提取物干预组(12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L),采用实时定量PCR检测系膜细胞PDGF-B m RNA的表达、Western blot检测系膜细胞PDGF-B蛋白表达、ELISA检测上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(Fn)含量。结果:高糖组刺激24 h后,细胞上清液中Fn、ColⅣ含量、系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均高于对照组(P0.05);银杏叶提取物干预组(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用24 h后,细胞上清液Fn、ColⅣ含量均低于高糖组,系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均低于高糖组(P0.05);且银杏叶提取物浓度越高,该作用越明显。结论:银杏叶提取物可以呈浓度依赖性抑制系膜细胞PDGF-B的合成,从而达到减少细胞外基质聚集、保护肾脏的作用。     

解聚复肾宁对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨解聚复肾宁(黄芪、地黄、黄连、丹参、姜黄、葛根等)(JJFSN)治疗早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:高糖诱导系膜细胞(MC)增殖以及细胞外基质(ECM)分泌,制备不同浓度JJFSN含药血清作用于体外培养的MC,用MTT法检测细胞增殖,放射免疫技术(RIA)检测细胞培养上清中Ⅳ型胶原(ColⅣ)及层黏连蛋白(Ln)的含量。结果:JJFSN含药血清可抑制高糖诱导的MC过度增殖(P0.05),并且这种作用具有药物剂量和时间依赖关系。同时,JJFSN可逆转高糖对ColⅣ和Ln分泌的影响,降低MC培养上清中ColⅣ和Ln的含量(P0.05),并且这种作用随着JJFSN剂量的增加而增强。结论:JJFSN抑制高糖诱导的MC过度增殖并减少ECM的过量分泌,可能是其防治DN早期的作用机制。     

加味黄芪赤风汤含药血清对LPS诱导的小鼠肾小球系膜细胞ColⅣ、MMP-2 及TIMP-2表达的影响

目的探讨加味黄芪赤风汤对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,ColⅣ)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制酶2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)水平的影响。方法采用血清药理学方法制备正常血清及替米沙坦、加味黄芪赤风汤高、中、低剂量含药血清。体外培养GMCs,以LPS作为刺激因子,诱导系膜细胞增殖。将GMCs分为正常组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组)。采用ELISA法检测各组GMCs上清液中ColⅣ含量,Western blot法检测GMCs中MMP-2及TIMP-2蛋白表达水平。结果与正常组比较,LPS刺激72 h后,模型组GMCs上清ColⅣ含量明显增多,系膜细胞MMP-2及TIMP-2蛋白表达均明显上调,MMP-2/TIMP-2比例下调(均P0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组及替米沙坦组ColⅣ含量明显减少(P0.01);中药中、低剂量组MMP-2蛋白表达明显下调(P0.01,P0.05);替米沙坦组及中药高、中、低剂量组TIMP-2蛋白表达均下调(P0.01)。中药高剂量组TIMP-2蛋白表达水平明显低于中药低剂量组(P0.01);替米沙坦组、中药高、中剂量组MMP-2/TIMP-2比例明显上调(P0.01)。结论加味黄芪赤风汤可调节LPS诱导的GMSc ECM中MMP-2/TIMP-2比例失调,抑制ECM中ColⅣ的过度产生,促进ECM降解,减少ECM积聚,从而延缓肾小球硬化的进程。     

益气解毒活络中药有效成分对高糖刺激人肾小球系膜细胞增殖分化及ColIV、MCP-1 mRNA和蛋白表达影响

目的:观察高糖刺激下人肾小球系膜细增殖分化及Col IV、MCP-1 mRNA和蛋白活性表达变化,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的分子机制,讨论正交配伍中最优药物组合。方法:以体外培养人肾小球系膜细胞株,传代3~5代后接种于96孔培养板,采用4因素3水平分为正常对照组,高糖模型组、中药1、2、3、4、5、6、7、8、9组,以相应药物对HMCs干预24、48、72 h。MTT法检测24、48、72 h各时间点HMCs增殖分化情况;以qRT-PCR法检测48 h Col IV、MCP-1 mRNA表达;以ELISA法检测48 h Col IV、MCP-1蛋白活性表达。结果:(1)高糖环境刺激作用下HMCs及胞外基质均能够显著增殖,且在48 h达到顶峰;(2)益气解毒活络中药有效成分药防治DN作用机制与通过下调高糖作用下HMCs Col IV、MCP-1 mRNA及蛋白活性表达,进而抑制高糖刺激HMCs增殖相关;(3)益气解毒活络中药有效,最佳配伍为黄芪甲苷低剂量、盐酸小檗碱低剂量、水蛭素低剂量、木犀草苷低剂量。     

当归补血汤不同配比对高糖作用下大鼠肾组织系膜细胞增殖的影响

目的通过拆方研究探讨当归补血汤防治糖尿病肾病的主要作用药物,并阐述其立法理论,为临床开发药物寻找客观依据。方法采用当归补血汤不同配比及黄芪、当归单方水煎剂喂养大鼠后提取含药血清,干预高糖刺激下的肾小球系膜细胞,分正常对照组、高糖组、当归组、黄芪组、当归补血汤不同配比组(共3组)进行3个时段实验对比,用MTT法检测系膜细胞增殖情况。结果高糖能明显刺激体外培养的肾小球系膜细胞增殖(P0.05),而当归补血汤不同配比组和黄芪单方组能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P0.05),其中原方比例作用最强(P0.01)。结论当归补血汤能抑制高糖刺激下的肾小球系膜细胞增殖,而发挥作用的主要药物是黄芪,其立法理论在于补气,同时配伍少量当归,可使药效最佳。     

地龙成分对高糖刺激下人肾小球系膜细胞转化生长因子β1和结缔组织生长因子表达的研究

目的:研究地龙成分含药血清对高糖刺激下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖、分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响,并探讨其对糖尿病.肾脏疾病的可能防治机制.方法:以HMC为研究对象,将培养的HMC分为空白对照组、高糖刺激组、地龙成分低、中、高剂量组和福辛普利组,用家兔的含药血清给药,分别给予相应处理24h、48 h和72 h后,采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,48 h的上清液采用ELISA法检测FGF-β1和CTGF的表达.结果:在同一时间点内,地龙低、中、高剂量组对HMC增殖的抑制作用不断增加,福辛普利组对HMC增殖的抑制作用和地龙中剂量组相当,在24 h、48 h和72 h内,各药物干预组对HMC增殖的抑制作用也不断增大,以地龙高剂量组最佳;与空白对照组比较,高糖刺激组上清液中TGF-β1和CTGF的含量明显增多;与高糖刺激组比较,地龙成分低、中、高剂量组随着药物浓度的增加,TGF-β1和CTGF的含量减少,福辛普利组上清液中TGF-β1和CTGF的含量与地龙成分中剂量组相当,但高于高剂量组,都具有统计学意义.结论:地龙成分对HMC增殖的抑制作用在一定范围内呈浓度、时间依赖关系,能够降低TGF-β1和CTGF的含量,以高剂量组最佳,优于福辛普利组,提示地龙成分可能通过抑制HMc的异常增殖和下调TGF-β1和CTGF的表达而发挥对糖尿病肾病的保护作用.     

通络益肾方对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表达的影响

目的观察通络益肾方对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质调控系统MMP-9/TIMP-1、TGF-β1表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的可能机制。方法以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将培养的肾小球系膜细胞分为空白对照组、高糖培养组(高糖组)、通络益肾方高、中、低剂量组及西药对照组,用大鼠含药血清给药,分别给予相应处理48 h后,采用四甲偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞培养上清液TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的水平。结果与空白对照组比较,高糖组肾小球系膜细胞增殖明显(P<0.01),上清液中TGF-β1和TIMP-1水平显著增加,MMP-9水平减少(均P<0.01);通络益肾方高、中、低剂量均能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P<0.01或P<0.05),下调TGF-β1和TIMP-1表达,上调MMP-9表达(P<0.05或P<0.01),尤以高剂量组效果最佳,呈剂量依赖性;西药对照组上述指标表达水平和中药中剂量组相当(P>0.05)。结论通络益肾方可能通过抑制肾小球系膜细胞增殖和下调TGF-β1、促进细胞外基质的降解而拮抗糖尿病肾病肾小球硬化,发挥其肾保护作用。     

中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞增殖的影响

目的研究分别具有益气、养阴、清热、活血功效的中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响.方法采用 MTT 比色法,观察黄芪、白芍、山楂、知母、当归对体外高糖培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响.结果黄芪、白芍、山楂、知母对系膜细胞增殖有抑制作用,而当归无抑制作用.结论养阴益气、清热活血中药是治疗糖尿病肾病的有效药物.     

糖肾汤对氧化低密度脂蛋白诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达及细胞外基质分泌的影响

目的:观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达及转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞外基质分泌的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:培养大鼠系膜细胞,分为空白组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,RT-PCR检测系膜细胞mRNA表达,ELISA技术检测细胞上清液中TGF-β1、四型胶原(ColⅣ)和纤黏连蛋白(FN)含量。结果:糖肾汤、罗格列酮含药血清均能抑制ox-LDL诱导的TGF-β1、LOX-1 mRNA表达上调,及TGF-β1、FN、ColⅣ的分泌,其中糖肾汤含药血清呈剂量依赖性作用,中浓度作用最强。结论:糖肾汤可能通过降低ox-LDL受体LOX-1的表达以减少ox-LDL摄入及由此引起的细胞因子分泌和细胞外基质产生,从而起到防治糖尿病肾病的作用。