阿普卡林对低氧—复氧乳鼠心肌细胞保护作用的机制

目的 探讨低氧／复氧(H／R)对心肌细胞内Ca^2+浓度([Ca^2+]i)的影响。以及阿普卡林减轻H／R过程中钙超载的作用。方法 采用SD大鼠乳鼠(n=80)进行心肌细胞培养，用Ca^2+荧光指示剂Fluo-3／AM负载30min。然后分3组：(1)正常对照组；(2)H／R组：细胞低氧30min／复氧30min：(3)阿普卡林组：先加入终浓度为100μmol／L的阿普卡林，再行低氧30min／复氧30min。于两个实验组接受低氧处理前及刚开始复氧时、复氧30min后用激光共聚焦显微镜技术检测3个组心肌细胞[Ca^2+]i的变化。实验重复8次，共观察24个细胞。结果 对照组心肌细胞[Ca^2+]i荧光强度和荧光光密度值较低，分别为645．5U，80．3U及O．5％，O．3％。低氧30min后复氧即刻，[Ca^2+]i荧光光密度值开始增加，复氧30min后[Ca^2+]i荧光强度和荧光光密度值显著增高(与对照组比较，P&;lt;O．01)。而阿普卡林组细胞内荧光光密度值显著低于H／R组(χ^2=20．51，P&;lt;O．01)。结论 心肌细胞H／R导致钙超载；而阿普卡林有明显减轻心肌细胞H／R时Ca^2+超载的作用，从而保护心肌细胞。     

药物预适应对各部位心肌细胞缺氧再复氧的保护作用

目的：分析硝酸酯类药物预适应对不同部位的心肌细胞缺氧再复氧的保护作用。 方法：实验于2003-05／2005-09在泰山医学院中心实验室完成。取新生的Wistar大鼠100只，无菌取出心脏，培养不同部位的心肌细胞（心房、左心室、右心室），分为4组：①空白对照组：不作任何处理。②单纯缺氧／再复氧组：在含有体积分数为0．95的N2、0．03的CO2和0．02的O2混合气体的缺氧培养箱内孵育2h，正常培养箱内孵育1h。③L-精氨酸处理＋缺氧／再复氧组：先用10mmol／L L-精氨酸处理细胞2h，然后进行缺氧再复氧。④缺氧预适应组：先将细胞缺氧15min，再复氧15min，循环4次，然后进行缺氧再复氧。观察各组细胞坏死率、细胞凋亡情况、培养液中乳酸脱氢酶浓度及细胞内游离钙离子浓度等。 结果：①单纯缺氧／再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著高于空白对照组（P〈0．01），不同部位间比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②缺氧预适应组、L-精氨酸处理＋缺氧／再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著低于单纯缺氧／再复氧组（P〈0．05）。 结论：L-精氨酸的预适应同经典的缺氧预适应一样，可以对缺氧再复氧损伤产生明显的保护作用，其可能是通过降低心肌细胞内钙离子的浓度来发挥作用的，而不同部位的心肌细胞产生药物预适应的能力无明显差别。     

药物预适应对各部位心肌细胞缺氧再复氧的保护作用

目的:分析硝酸酯类药物预适应对不同部位的心肌细胞缺氧再复氧的保护作用。方法:实验于2003-05/2005-09在泰山医学院中心实验室完成。取新生的Wistar大鼠100只,无菌取出心脏,培养不同部位的心肌细胞(心房、左心室、右心室),分为4组:①空白对照组:不作任何处理。②单纯缺氧/再复氧组:在含有体积分数为0.95的N2、0.03的CO2和0.02的O2混合气体的缺氧培养箱内孵育2h,正常培养箱内孵育1h。③L-精氨酸处理 缺氧/再复氧组:先用10mmol/LL-精氨酸处理细胞2h,然后进行缺氧再复氧。④缺氧预适应组:先将细胞缺氧15min,再复氧15min,循环4次,然后进行缺氧再复氧。观察各组细胞坏死率、细胞凋亡情况、培养液中乳酸脱氢酶浓度及细胞内游离钙离子浓度等。结果:①单纯缺氧/再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著高于空白对照组(P<0.01),不同部位间比较差异无显著性意义(P>0.05)。②缺氧预适应组、L-精氨酸处理 缺氧/再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著低于单纯缺氧/再复氧组(P<0.05)。结论:L-精氨酸的预适应同经典的缺氧预适应一样,可以对缺氧再复氧损伤产生明显的保护作用,其可能是通过降低心肌细胞内钙离子的浓度来发挥作用的,而不同部位的心肌细胞产生药物预适应的能力无明显差别。     

芬太尼对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 采用乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,观察芬太尼与缺氧预适应对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响,探讨芬太尼能否直接作用于心肌细胞并模拟缺氧预透应(APC)样心肌保护作用,试图在细胞水平上为临床应用大剂量芬太尼减轻心肌缺血再灌注损伤提供理论依据.方法 以常规方法 制备与培养心肌细胞,分为4组:正常对照组(C组)不经任何处理;单纯缺氧复氧组(A/R组)、缺氧预适应组(AP组)及芬太尼组(F组)均经历2小时缺氧及1小时复氧.缺氧前,AP组预先经历20分钟缺氧及20分钟复氧;F组给予终浓度为50 ng/ml的芬太尼.分别以四甲基偶氮唑盐(MTT)快速比色法检测细胞存活情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率及透射电子显微镜观察细胞超微结构改变.结果 F组和AP组OD值均显著高于A/R组,细胞凋亡率显著低于A/R组;F组OD值与细胞凋亡率与AP组比较差异无显著性意义;电镜显示A/R组细胞超微结构改变呈典型的凋亡细胞形态学改变,AP组及F组细胞形态大致正常,凋亡细胞少见.结论 芬太尼对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤有保护作用,且其保护效应与APC的心肌保护作用相似.     

葛根素对缺氧再给氧损伤心肌细胞的保护作用

目的：观察葛根素对缺氧再给氧损伤心肌细胞的保护作用,从细胞水平揭示葛根素的作用.方法：[1]实验于2003-09/2004-02在锦州医学院科技楼完成.选用生后两三天的SD大鼠10只.[2]常规培养心肌细胞两三天后,为了减少血清中的成分对实验结果的影响,更换含0.4g/L的小牛血清的培养基.培养瓶内细胞用缺糖缺氧的溶液后,直接通入体积分数0.95氮气＋体积分数0.05二氧化碳培养.在上述缺糖缺氧3 h后,换用正常含糖含氧的Hanks液培养1和6 h（缺氧再给氧组）,在再给氧损伤之前,分别加入葛根素50,100及200 mg/L（缺氧＋50,100和200 mg/L葛根素再给氧组）.正常组：加入相等数量的培养基,不加入任何药物.[3]将心肌死亡细胞及活细胞剪下分别称质量.计算死亡细胞的相对质量.以确定心肌细胞单层的坏死范围（心肌细胞活力）.[4]通过计数器计数给药前后心肌细胞搏动频率的变化.[5]采用全自动生化分析仪测定培养液上清乳酸脱氢酶含量.[6]计量资料差异比较采用方差齐性分析和t检验.结果：[1]心肌细胞的活力：缺氧＋50和100及200mg/L葛根素再给氧组在再给氧1和6 h后明显高于缺氧再给氧组[（104.3&;#177;19.5）%,（83.4&;#177;18.2）%,（75.5&;#177;17.6）%,（190.2&;#177;36.7）%;（93.4&;#177;17.5）%,（71.8&;#177;16.1）%,（64.2&;#177;15.4）%,（183.4&;#177;32.8）%,P＜0.01].[2]心肌细胞的搏动频率：正常组和3个给药组在再给氧1和6 h后明显大于缺氧再给氧组（P＜0.01）.[3]心肌细胞培养液上清乳酸氢清酶含量：正常组和3个给药组在再给氧1和6 h后明显低于缺氧再给氧组（P＜0.01）.结论：葛根素可提高损伤心肌细胞活力和搏动频率,降低心肌细胞培养液上清乳酸脱氢酶的含量,该种作用与再给氧时间关系不大.     

葛根素对缺氧再给氧损伤心肌细胞的保护作用

目的:观察葛根素对缺氧再给氧损伤心肌细胞的保护作用,从细胞水平揭示葛根素的作用。方法:①实验于2003-09/2004-02在锦州医学院科技楼完成。选用生后两三天的SD大鼠10只。②常规培养心肌细胞两三天后,为了减少血清中的成分对实验结果的影响,更换含0.4g/L的小牛血清的培养基。培养瓶内细胞用缺糖缺氧的溶液后,直接通入体积分数0.95氮气+体积分数0.05二氧化碳培养。在上述缺糖缺氧3h后,换用正常含糖含氧的Hanks液培养1和6h(缺氧再给氧组),在再给氧损伤之前,分别加入葛根素50,100及200mg/L(缺氧+50,100和200mg/L葛根素再给氧组)。正常组:加入相等数量的培养基,不加入任何药物。③将心肌死亡细胞及活细胞剪下分别称质量。计算死亡细胞的相对质量。以确定心肌细胞单层的坏死范围(心肌细胞活力)。④通过计数器计数给药前后心肌细胞搏动频率的变化。⑤采用全自动生化分析仪测定培养液上清乳酸脱氢酶含量。⑥计量资料差异比较采用方差齐性分析和t检验。结果:①心肌细胞的活力:缺氧+50和100及200mg/L葛根素再给氧组在再给氧1和6h后明显高于缺氧再给氧组犤(104.3±19.5)%,(83.4±18.2)%,(75.5±17.6)%,(190.2±36.7)%;(93.4±17.5)%,(71.8±16.1)%,(64.2±15.4)%,(183.4±32.8)%,P<0.01犦。②心肌细胞的搏动频率:正常组和3个给药组在再给氧1和6h后明显大于缺氧再给氧组(P<0.01)。③心肌细胞培养液上清乳酸氢清酶含量:正常组和3个给药组在再给氧1和6h后明显低于缺氧再给氧组(P<0.01)。结论:葛根素可提高损伤心肌细胞活力和搏动频率,降低心肌细胞培养液上清乳酸脱氢酶的含量,该种作用与再给氧时间关系不大。     

C5-siRNA对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究C5-siRNA对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法用原代单层培养的心肌细胞分为4组:正常对照组(C组)、H/R组、H/R+C5-siRNA组、H/R+空载体病毒组。其中后三组均经历2小时缺氧和4小时复氧,H/R+C5-siRNA组及H/R+空载体病毒组在缺氧前2小时分别给予C5-siRNA及空载体病毒。用CKK-8快速比色法检测心肌细胞存活情况(OD值)及用Western Blot法及RT-PCR法检测C5。结果心肌细胞存活情况H/R+C5-siR-NA组显著高于H/R组及H/R+空载体病毒组,而C5表达量H/R+C5-siRNA组显著低于H/R组及H/R+空载体病毒组。结论 C5-siRNA对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其机理可能与降低C5表达有关。     

参三七皂甙Rg_1预适应对肥厚乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护

目的应用血管紧张素II刺激致新生SD大鼠心肌细胞肥厚,探讨参三七皂甙Rg1(Rg1)对缺氧复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。方法用AngII刺激致乳鼠(SD大鼠)心肌细胞肥厚,细胞H/R损伤前48h给予Rg10.01～10.00μmol/L预适应处理,检测各组心肌细胞表面积和细胞蛋白含量,测定心肌细胞凋亡率、细胞生存能力和培养液中乳酸脱氢酶、丙二醛及一氧化氮含量。结果与H/R损伤组相比,Rg10.01～10.00μmol/L预适应组细胞表面积和蛋白含量分别减少47.92%和46.99%;细胞生存率增加37.98%,细胞凋亡率降低85.29%;乳酸脱氢酶活性和丙二醛含量分别降低56.25%和70.78%,一氧化氮含量增加2.6倍。结论Rg1预适应可显著减轻AngII致肥厚心肌细胞缺氧复氧损伤,增强受损细胞生存能力,机制与抑制细胞凋亡、减少乳酸脱氢酶释放、增强一氧化氮活性,减少脂质过氧化有关。     

参三七皂甙Rg1预适应对肥厚乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护

目的 应用血管紧张素Ⅱ刺激致新生SD大鼠心肌细胞肥厚，探讨参三七皂甙Rg1(Rg1）对缺氧复氧（H/R）损伤的保护作用及机制。方法 用AngⅡ刺激致乳鼠（SD大鼠）心肌细胞肥厚，细胞H/R损伤前48h给予Rg10.01-10.00μmol/L预适应处理，检测各组心肌细胞表面积和细胞蛋白含量，测定心肌细胞凋亡率、细胞生存能力和培养液中乳酸脱氢酶、丙二醛及一氧化氮含量。结果 与H/R损伤组相比，Rg10.01-10.00μmol/L预适应组细胞表面积和蛋白含量分别减少47.92%和46.99%；细胞生存率增加37.98%，细胞凋亡率降低85.29%；乳酸脱氢本科活性和丙二醛含量分别降低56.25%和70.78%，一氧化氮含量增加2.6倍，结论 Rg1预适应可显减轻AngⅡ致肥厚心肌细胞缺氧复氧损伤，增强受损细胞生存能力，机制与抑制细胞凋亡、减少乳酸脱氢酶释放、增强一氧化氮活性，减少脂质过氧化有关。     

赤芍总苷对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

背景：现代药理学研究证实，赤芍总苷具有抑制血小板和红细胞聚集、抗凝和抗血栓、抗动脉粥样硬化、保护心脏和肝脏、抗肿瘤等广泛的药理活性。 目的：体外培养制备乳鼠损伤心肌细胞，通过细胞培养液中超氧化物歧化酶活性、丙二醛和一氧化氮含量的变化，分析赤芍总苷对损伤心肌细胞的保护作用。 设计：观察对比实验。 单位：西安交通大学生命科学与技术学院生物工程系，西安交通大学医学院骨病研究所。 材料：实验于2003-02／06在西安交通大学生命科学与技术学院生物工程系完成。选取出生1～3d的SD乳鼠44只，将培养48h的心肌细胞制备成42瓶用于实验，随机分为6组：正常对照组、药物损伤组、赤芍总苷0．625mg／L组、赤芍总苷3．125mg／L组、赤芍总苷15．625mg／L组、阳性对照组，7瓶／组。 方法：无菌条件下进行心肌细胞原代培养。正常对照组不加任何药物，药物损伤组加入异丙基肾上腺素使其终浓度为100mg／L，赤芍总苷0．625，3．125，15．625mg／L组加入异丙基肾上腺素30min后分别加入浓度为0．625，3．125，15．625mg／L的赤芍总苷，阳性对照组加入异丙基肾上腺素30min后加入辅酶Q10使其终浓度为100mg／L。然后进行各项指标检测，超氧化物歧化酶活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，丙二醛含量为硫代巴比妥酸法测定，一氧化氮含量用硝酸还原酶法测定。 主要观察指标：①各组细胞培养液中超氧化物歧化酶活性的测定。②各组细胞培养液中丙二醛和一氧化氮含量的比较。 结果：①各组细胞培养液中超氧化物歧化酶括性的测定：与正常对照组比较，药物损伤组总超氧化物歧化酶、CuZn-超氧化物歧化酶和Mn-超氧化物歧化酶水平均明显下降（P〈0．05或〈0．01）；而赤芍总苷各剂量组和阳性对照组上述指标均有不同程度的改善（P〈0．05或〈0．01）．其中赤芍总苷15．625mg／L组的保护作用接近或优于阳性对照组[（79．50&;#177;10．67），（80．30&;#177;13．50）；（48．24&;#177;13．26），（49．73&;#177;10．23）：（31．26&;#177;10．22），（30．57&;#177;9．57）μkat／L；P〉0．05]。②各组细胞培养液中丙二醛和一氧化氮含量的比较：药物损伤组明显高于正常对照组（P〈0．01），赤芍总苷各剂量组和阳性对照组均有降低丙二醛和一氧化氮含量的作用，并且赤芍总苷的保护作用呈剂量依赖性，随着赤芍总苷加入量的增高而加强，其中高剂量组的丙二醛含量接近正常对照组水平[（5．41&;#177;1．81），（4．48&;#177;0．94）μmol／L，P〉0．05]，一氧化氮含量与阳性对照组相近[（81．83&;#177;9．08），（82．41&;#177;12．37）mol／L，P〉0．05]。 结论：赤芍总苷对异丙基肾上腺素造成的心肌损伤具有保护作用，且呈现剂量依赖关系，可能与增强细胞抗氧化作用、减少自由基和脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关。     

培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤模型与黄芩苷的影响

目的:观察黄芩苷对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法:实验于2006-11/2007-01在郑州大学医学院药理实验室完成。①实验分组:选用出生1～3d的SD大鼠20只,雌雄不拘,培养乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型。实验分为5组:正常对照组以正常细胞培养,加入等数量的培养基,不加入任何药物,缺氧/复氧损伤模型组,缺氧/复氧损伤 0.1mg/L黄芩苷组,缺氧/复氧损伤 1mg/L黄芩苷组,缺氧/复氧损伤 10mg/L黄芩苷组。②实验评估:采用乳酸脱氢酶试剂盒测其释放量;采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活力;硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛含量;四唑盐比色法测定心肌细胞活力。结果:①丙二醛含量和乳酸脱氢酶活力:缺氧/复氧损伤组明显高于正常对照组(P<0.01),缺氧/复氧 10,1,0.1mg/L浓度黄芩苷组明显低于缺氧/复氧损伤组(P<0.01)。②心肌细胞超氧化物歧化酶活性:缺氧/复氧损伤组明显低于正常对照组(P<0.01),黄芩苷 10,1,0.1mg/L浓度黄芩苷组明显高于缺氧/复氧损伤组(P<0.01)。③心肌细胞活力:缺氧/复氧损伤组心肌细胞活力明显低于正常对照组,缺氧/复氧 10,1,0.1mg/L浓度黄芩苷组明显高于缺氧/复氧损伤组(P<0.01)。结论:黄芩苷具有对缺氧/复氧损伤所致心肌细胞的保护作用,可能与其抗氧化、抗自由基有关。     

应用Fura—2／AM和图像分析系统测定细胞内游离钙浓度

目的：测定培养大鼠心肌细胞游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）。方法：采用钙荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ结合图像分析技术。结果：静息时，心肌细胞内［Ｃａ２＋］ｉ为１３３．４６±４．９９ｎｍｏｌ／Ｌ（ｘ±ｓ），高Ｋ＋能引起细胞内［Ｃａ＋］ｉ升高。结论：本测定系统能更准确地反映细胞内［Ｃａ＋］ｉ变化，且能同步评估细胞形态学参数及观察细胞的形态学改变，灵敏度高，性能稳定，是研究Ｃａ２＋生物学功能的重要手段。     

降钙素基因相关肽对高脂复合缺氧／复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响

背景：前期研究表明,结扎冠状动脉可诱发大鼠传入神经纤维末梢逆向释放降钙素基因相关肽,提示降钙素基因相关肽参与了急性心肌缺血的病理生理过程。目的：观察降钙素基因相关肽对氧化低密度脂蛋白孵育缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法：20孔原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为5组：正常对照组、氧化低密度脂蛋白组、氧化低密度脂蛋白＋缺氧/复氧组、降钙素基因相关肽组和CGRP 8-37组。后4组均用氧化低密度脂蛋白孵育24 h,再建立心肌细胞缺氧/复氧模型;降钙素基因相关肽组在缺氧/复氧前30 min加入10-8 mol/L 降钙素基因相关肽,CGRP 8-37组在给予降钙素基因相关肽前30 min加入10-7 mol/L的降钙素基因相关肽1受体的竞争性拮抗剂CGRP 8-37。采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率并测定caspase-3活性。结果与结论：降钙素基因相关肽能明显抑制氧化低密度脂蛋白和缺氧/复氧处理的乳鼠心肌细胞caspase-3的激活,从而阻止凋亡的发生,并且该作用能被降钙素基因相关肽1受体的竞争性拮抗剂CGRP 8-37部分逆转,说明降钙素基因相关肽通过与降钙素基因相关肽1受体结合产生抗凋亡效应,进而抑制心肌细胞凋亡,对氧化低密度脂蛋白孵育乳鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用。     

夏枯草提取物对缺氧/复氧诱导心肌细胞氧化应激损伤保护作用及抗凋亡的机制

目的:观察不同浓度的夏枯草提取物(Prunellae Spica extract,PSE)对心肌细胞H9c2缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R模型。实验分为对照组、H/R组、H/R+PSE 20μg/mL组、H/R+PSE 40μg/mL组和H/R+PSE 80μg/mL组。采用CCK-8法检测H9c2心肌细胞存活率。检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CPK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,H/R组H9c2细胞的存活率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加,AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平显著增加,SOD水平显著降低(均P<0.05)。与H/R组相比,PSE能够显著促进细胞存活,抑制细胞凋亡,降低AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平,提高SOD水平(均P<0.05),并呈浓度依赖性。蛋白质印迹法检测显示:与对照组相比,H/R组H9c2细胞Bax和cleavedcaspase-3蛋白的表达显著增加(均P<0.05),Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达显著降低(均P<0.05);与H/R组相比,PSE能够显著抑制Bax和cleaved-caspase-3蛋白的表达(均P<0.05),促进Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达(均P<0.05)。结论:PSE对H9c2心肌细胞的H/R损伤具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

培养星形胶质细胞缺氧/复氧时水通道蛋白4表达的变化

目的:探讨缺氧/复氧对体外培养星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法:培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞分成两组:正常对照组和缺氧/复氧组.缺氧8 h后复氧.根据复氧时间不同,又分为复氧0、4、6、8、12、24 h 6个亚组.于各时间点以检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,Western blot法检测AQP4的表达.结果:缺氧8 h后随着复氧时间的延长,细胞存活率逐渐降低,至复氧12 h时,达最低,仅有对照组的81.3%,至复氧24 h,又有轻度增加;LDH的漏出率逐渐增多,至复氧24 h达最高峰.AQP4表达随着复氧时间延长而逐步增多,至复氧12 h时达最高峰,为正常对照组的(2.52±0.35)倍,24 h时略有下降.结论:缺氧/复氧过程能对体外培养的星形胶质细胞产生损伤作用的同时,发生了AQP4的表达时程变化.     

参附注射液对心肌细胞缺氧及缺氧/复氧时Fas/FasL表达的影响

目的 探讨参附注射液（SF）对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧／复氧时凋亡相关基因Fas／FasL蛋白表达的影响。方法 按常规培养新生4d乳鼠心肌细胞，于培养24h后进行缺氧及缺氧／复氧实验。以免疫组织化学方法检测心肌细胞Fas／FasL蛋白表达的变化。结果 缺氧4．5h及10．5h后，心肌细胞Fas／FasL蛋白的阳性表达指数（positive expression index，PEI）均显著高于对照。10．5h组与4．5h组无明显差异。参附注射液组PEI明显低于缺氧组（P〈0．05）。缺氧30min后再给氧4h与10h，心肌细胞Fas／FasL蛋白的PEI显著高于对照，复氧10h组与4h组无明显差异，参附注射液组PEI低于无SF组（P〈0．05）。结论 缺氧及缺氧／复氧时均有凋亡相关基因Fas及其配体FasL蛋白表达的增强，参附注射液可通过下调Fas／FasL蛋白表达，减少凋亡从而减轻缺氧损伤及缺氧／复氧损伤。     

Identification of IKr and its trafficking disruption induced by probucol in cultured neonatal rat cardiomyocytes

The human ether-a-go-go-related gene (hERG) encodes a channel that conducts the rapidly activating delayed rectifier K(+) current (I(Kr)), which is important for cardiac repolarization. Mutations in hERG reduce I(Kr) and cause congenital long QT syndrome (LQTS). More frequently, common medications can reduce I(Kr) and cause LQTS as a side effect. Protein trafficking abnormalities are responsible for most hERG mutation-related LQTS and are recently recognized as a mechanism for drug-induced LQTS. Whereas hERG trafficking has been studied in recombinant expression systems, there has been no reported study on cardiac I(Kr) trafficking at the protein level. In the present study, we identified that I(Kr) is present in cultured neonatal rat ventricular myocytes and can be robustly recorded using Cs(+) as the charge carrier. We further discovered that 4,4'-(isopropylidenedithio)-bis-(2,6-di-t-butylphenol) (probucol), a cholesterol-lowering drug that induces LQTS, disrupted I(Kr) trafficking and prolonged the cardiac action potential duration. Probucol did not directly block I(Kr). Probucol also disrupted hERG trafficking and did not block hERG channels expressed in human embryonic kidney 293 cells. We conclude that probucol induces LQTS by disrupting ether-a-go-go-related gene trafficking, and that primary culture of neonatal rat cardiomyocytes represents a useful system for studying native I(Kr) trafficking.     

参附注射液对体外缺氧复氧心肌细胞的影响

目的 观察参附注射液对体外缺氧复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3蛋白的影响,探讨其对缺氧复氧损伤心肌细胞保护作用机制.方法 在协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室进行以下实验:取出生1～2 d SD乳鼠,采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型.将培养的心肌细胞随机分为四组:(1)正常对照组(Con组)37℃、5%CO<,2>孵箱中持续孵育20 h,未经缺氧复氧处理;(2)缺氧复氧组(H/R组) 给予培养的心肌细胞单纯缺氧4 h,复氧16 h;(3)低剂量参附注射液组(L-SFI组)在缺氧前30min加入终质量浓度为50μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组;(4)高剂量参附注射液组(H-SFI组)在缺氧前30 min加入终质量浓度为100μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组.采用异硫氰酸荧光素(FTI℃)标记的Annexin V(Annexin V-FITC)及碘化丙锭(PI)双染流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用增强化学发光免疫印记技术(ECZ-Western blot)检测心肌细胞Bcl-2,Caspase-3蛋白水平.采用SPSS11.5统计软件进行分析,均数计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.结果 与Con组比较,H/R组细胞凋亡的各个阶段的凋亡率显著增加(P<0.01);与H/R组比较,L-SFI组和H-SFI组凋亡率明显下降(P<0.01).免疫印迹检测结果显示,与Con组比较,H/R组Bcl-2蛋白表达水平显著降低,出现Caspase-3相对分子质量17 000的裂解片断;与H/R组比较,不同浓度的参附注射液组Bcl-2蛋白的表达明显升高,伴随Caspase-3相对分子质量17 000片断的表达减少.结论 参附注射液可以减少缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Caspase-3蛋白的激活,发挥其抗凋亡的作用.     

环磷酸腺苷和一氧化氮在后适应保护缺氧/复氧损伤心肌细胞中的作用

背景：周期性的环磷酸腺苷浓度改变参与了预适应对缺血心脏的保护作用。目的：观察环磷酸腺苷和一氧化氮在缺氧/复氧心肌细胞后适应保护机制中的可能作用。方法：原代培养SD乳鼠心肌细胞,随机分为11组分别处理：正常对照组、缺氧/复氧组、心肌缺血后适应组、心肌缺血后适应＋咯利普兰组、心肌缺血后适应＋SQ22536或左旋精氨酸＋心肌缺血后适应组,咯利普兰、SQ22536或各浓度Nω-硝基精氨酸＋缺氧/复氧组。结果与结论：心肌缺血后适应能显著改善缺氧/复氧损伤造成的心肌细胞活力下降,减少乳酸脱氢酶、肌酸激酶的释放,降低一氧化氮、肿瘤坏死因子α和白细胞介素β的mRNA表达;咯利普兰能进一步增强后适应对心肌细胞的保护作用,而腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536可显著减弱该作用;20,100μmol/L非选择性一氧化氮合酶抑制剂Nω-硝基-左旋精氨酸能发挥类似于后适应的保护作用,而在1000μmol/L时则损伤心肌细胞（P〈0.05）。证实心肌缺血后适应对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护,可能是通过增强环磷酸腺苷信号抑制炎症过程实现的。