蛋白激酶C对缺血预处理家兔心肌热休克蛋白70 mRNA的影响

摘要目的:探讨心肌缺血预处理(IPC)过程中蛋白激酶(PKC)对热休克蛋白(HSP)70mRNA表达的影响。方法:在原位及离体家兔心脏缺血再灌注(I/R)、缺血预处理模型上分别应用PKC抑制剂和激动剂,观察对心肌的作用和对心肌HSP70mRNA的表达的影响。结果:缺血预处理和使用佛波酯(PMA)使心肌HSP70mRNA的表达、左心功能明显高于I/R组,磷脂酶A₂(PLA₂)活性及心律失常发生率明显低于该组;而使用多粘菌素B(PMB)则阻断了缺血预处理对心脏的保护作用,同时HSP70mRNA表达也明显低于IPC及PMA组。结论:PKC参与了缺血预处理过程中HSP70表达的调控。      

HSP90在乳腺癌细胞增殖中的作用与机制研究

目的：应用热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂格尔德霉素(GA)研究HSP90在乳腺癌细胞增殖中的作用,进而探讨相关机制。方法:培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s,采用MTT法检测GA对MDA-MB-435s细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,应用Western免疫印迹法检测细胞内Stat3磷酸化状态和突变型p53表达变化。结果:不同浓度GA对乳腺癌MDA-MB-435s细胞有生长抑制作用,呈时效量效依赖关系,GA作用后细胞呈现G2/M期阻滞。400nmol/LGA作用48h后,细胞内Stat3磷酸化水平明显低于对照组,同时突变型p53表达明显低于对照组。结论:抑制HSP90功能可明显抑制乳腺癌MDA-MB-435s细胞的增殖,此与下调细胞内Stat3磷酸化水平和突变型p53表达有关。     

热休克蛋白与动脉粥样硬化

脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种发生在血管内膜表面由于结构异常以及代谢紊乱而导致的疾病.     

苦参碱对病毒性心肌炎小鼠蛋白激酶B表达的影响

目的 评价苦参碱对柯萨奇B3型病毒（CVB3）感染的病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌组织蛋白激酶B（Akt）表达的影响,以探讨苦参碱保护心肌的作用机制.方法 实验采用雄性Balb/c小鼠连续3 d腹腔注射0.2ml 100TCID50的CVB3的方法制备VMC的动物模型.分为6组：苦参碱每日80 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg治疗组,利巴韦林组、病毒组及正常对照组.药物于末次注射病毒的60 min后开始,连续腹腔注射10 d,正常组给予同体积的生理盐水.分别于给药后第5天和第10天处死小鼠,应用Tunel标记法检测各组心肌细胞凋亡情况;于给药后第10天应用免疫组化及Western Blot法检测心肌组织磷酸化AktSer-473蛋白的表达.结果 与正常组比较,病毒组心肌组织凋亡明显增加（P＜0.05）;与病毒组比较,苦参碱各剂量组心肌组织凋亡明显减少（P＜0.05）.于给药后第10天,苦参碱每日40 mg/kg组磷酸化AktSer-473蛋白的表达明显上调（P＜0.05）.结论 苦参碱可能通过促进磷酸化AktSer-473蛋白的表达,抑制CVB3感染的VMC小鼠心肌组织凋亡.     

大鼠重型弥漫性脑创伤后ERK1/2信号途径的改变及意义

目的：探讨重型弥漫性脑创伤后细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号的改变及意义。方法:SD大鼠分为正常对照组、创伤组、ERK1/2抑制剂U0126高、低剂量组。Marmarou等法制作弥漫性脑创伤模型。伤后30min、1、6、24、48、72h光镜和电镜下观察伤后脑组织形态变化;Westernblotting法检测海马区磷酸化ERK1/2和c-Fos蛋白表达;TUNEL法检测海马区凋亡细胞;伤后3-7d水迷宫法测试动物学习记忆功能。结果:伤后,创伤组脑组织损伤严重,神经细胞出现变性坏死和凋亡改变、神经轴索变性断裂;磷酸化ERK1/2蛋白表达在伤后30min明显增高,6h达高峰,高表达状态持续至伤后24h;c-Fos在伤后30min明显增高,6h达高峰,24h接近正常水平;神经细胞凋亡数目伤后6h明显增多,72h达高峰;大鼠搜索安全岛时间延长。U0126干预后,脑组织形态损伤程度、磷酸化ERK1/2和c-Fos表达、神经细胞凋亡数目回降;大鼠搜索安全岛时间缩短;上述变化在U0126高剂量组中更为显著。结论:ERK1/2信号途径参与大鼠重型弥漫性脑创伤病理损伤过程,并在伤后神经细胞凋亡进程中发挥关键作用。     

烫伤大鼠早期小肠内热休克蛋白70表达的研究

目的探索大鼠烫伤早期小肠内热休克蛋白70（HSP70）的表达规律及临床意义。方法将30只健康Wistar大鼠分为6组：烫伤后2h．8h、24h、3d．7d和正常对照组。各组大鼠分别取小肠标本,HE染色观察组织结构变化,免疫组化染色结合图像分析测定HSP70的表达。结果大鼠烫伤后各组小肠组织HSP70的表达均迅速增加,与正常对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;烫伤大鼠早期HSP70在小肠表达强弱与其病理损伤评分成正相关关系（rs=0．943／1．000,P〈0．05）。结论大鼠烫伤后组织器官内HSP70的表达情况在一定条件下可以作为判断其损伤程度的指标。     

热休克蛋白70与家兔颈总动脉球囊损伤后增殖细胞核抗原表达的关系

目的：研究热休克蛋白70（HSP70）与经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄形成中细胞增生的关系。方法：复制家兔颈总动脉球囊损伤模型,用免疫组化方法检测术后3、9、14、28d损伤动脉壁中HSP70和增殖细胞核抗原（PC－NA）表达水平;用计算机图像分析系统定量,并对两者进行相关分析。结果：损伤动脉壁HSP70及PCNA检测呈阳性,正常动脉呈阴性。9d时两者表达指数均较各自3d时显著升高,14d均达峰值,28d显著降至3d时水平。时相相关分析两者显著正相关。结论：细胞增生活性升高伴随HSP70的产生增多;动脉损伤时机体可能通过HSP70合成增多而促进细胞再生,一定程度上促成再狭窄。     

Amyloid precursor protein, heat-shock proteins, and Bcl-2 form a complex in mitochondria and modulate mitochondria function and apoptosis in N2a cells

Neurons that degenerate in the brains of persons with Alzheimer's disease accumulate mitochondrial amyloid precursor protein (APP), which is thought to negatively affect mitochondrial function and cellular homeostasis. Because proteins that enter mitochondria require assistance from chaperone proteins, we hypothesized that heat-shock proteins (HSPs) help accumulate APP in mitochondria. We found that APP overexpression in N2a cells (APP cells) did not elicit mitochondrial dysfunction. Because cerebral hypoperfusion-associated energy deficiency is an important etiology for Alzheimer's disease, we also challenged the cells with serum starvation. APP/HSP/Bcl-2 complexes formed within the mitochondria of serum-starved APP cells, but not control cells. Mitochondria containing APP/HSP/Bcl-2 complexes induced apoptosis. We hypothesize that APP/HSP/Bcl-2 complexes diminish the functional capacities of HSPs and Bcl-2, which leads to mitochondrial injury and apoptosis.     

热应激对A549细胞HSP70、XPA修复酶表达的影响

目的研究热应激作用下A549细胞热休克蛋白70（HSP70）和XPA修复酶的表达规律及其可能的意义。方法利用免疫印迹方法（Western blot）检测A549细胞中HSP70、XPA修复酶的表达水平。结果A549细胞接受不同温度（39、41、42、43℃）处理2h后,HSP70表达水平随温度的增高而逐渐增加,并在42℃应激时表达最高,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）;细胞接受42℃应激1～4h,HSP70表达水平随应激时间的增加而递增,与对照组相比,细胞在42℃应激2～4h时HSP70表达显著上调（P〈0.05）。两处理组细胞XPA修复酶表达水平均无明显变化（P〉0.05）。结论高温能诱导HSP70的表达,并呈一定的温度-效应和时间-效应关系,而对XPA修复酶未见明显影响。     

蛋白激酶CK2与细胞凋亡

蛋白激酶CK2是调节细胞生存、生长和增殖的一个关键性细胞信号转导分子。CK2通过使一系列因子磷酸化等而发挥其抗凋亡作用 ,作为一种新的具有抗凋亡作用的蛋白激酶 ,它的分子作用机制的研究将有利于进一步探索细胞凋亡的分子机制     

应激活化蛋白激酶与蛋白激酶p38活性测定

应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）和Ｐ＾３２是丝裂素活化蛋白激酶家系（ＭＡＰＫｓ）的主要成员。与应激和某些炎性细胞因子引起的细胞反应有关，参与心血管疾病、细胞凋亡与机体的应激反应。本文主要介绍用免疫沉淀法提取ＳＡＰＫ和ｐ３８，据ＳＡＰＫ和ｐ３８分别可以磷酸化ｃ－Ｊｕｎ和ＡＴＦ－２的原理，采用聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）方法，分别测定ＳＡＰＫ和ｐ３８将＾３２Ｐ参入其特异性底物的量，反映其活性。     

应激与程序性细胞死亡

程序性细胞死亡又称为细胞凋亡,是受细胞外微环境和细胞内基因调控的一种细胞主动自杀性死亡方式。应激包括细胞受物理、化学以及机械因素刺激。许多处于应激状态下的细胞可发生凋亡, 本文着重就氧化应激和自由基、热休克、缺血和缺氧等因素诱导细胞凋亡及其机制进行综述     

应激活化的蛋白激酶在神经酰胺介导细胞凋亡中的作用

第二信使神经酰胺激活SAPK/JNK,活化的SAPK/JNK导致AP-1转录因子磷酸化,AP-1刺激自身表达,增强自身活性,介导细胞凋亡。神经酰胺及其代谢产物鞘氨醇和鞘氨醇-1磷酸酯分别激活JNK-p38路径和ERK路径,调节细胞增殖、分化或凋亡。     

尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡并下调HSP70基因表达

目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况及HSP70的表达水平;通过RNAi技术沉默HSP70基因表达,观察其对细胞凋亡的影响。结果:尼美舒利可抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡,导致caspase-9和PARP的剪切活化及HSP70的mRNA和蛋白表达下调;在人肝癌SMMC-7721细胞中转染靶向HSP70的siRNA可沉默HSP70表达、剪切活化caspase-9和PARP,进而显著促进细胞凋亡。结论:尼美舒利可诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡,这一作用可能与抑制HSP70表达有关。     

蛋白激酶C在细胞凋亡中的作用

蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对细胞凋亡有一定的作用。ＰＫＣ的活化可产生二种相反的结果：细胞增殖或细胞凋亡。ＰＫＣ可以通过多途径得以活化，它有多种同工酶，不同的同工酶有不同的功能是产生ＰＫＣ相反作用的主要原因，ＰＫＣ－β的选择性活化可导致细胞凋亡     

应激活化蛋白激酶研究进展

细胞对外来刺激产生反应需要细胞内各种信息传递途径的参与。丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫｓ）是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，能把有关信息传递到细胞核，调控基因表达。应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫｓ）是近年发现的胞浆丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，它属于ＭＡＰＫＳ家族新成员，在调控细胞对应激反应的信息核转导中起重要作用。     

中耳肺炎克雷伯杆菌感染诱导的急性期HSP70相关反应的定位观察

采用免疫组化技术研究细菌感染急性期时,中、内耳表达HSP70的部位及其意义。1　材料与方法1.1　主要材料　动物、细菌、培养基:见文献[1]。免疫组化试剂(SP法)、本实验的免疫组化试剂(SP法)均由北京中山生物技术有限公司提供。其中,一抗为山羊抗HSP70多克隆抗体。1.2　主要方法　将20只40耳豚鼠随机编号并随机分组,实验组共16只32耳。实验组又分为接种后1、3、5、7d/4个时段,每个时段4只8耳。另4只8耳用于正常对照。按文献[1]法制备活细菌悬液并接种于豚鼠中耳,在不同时段用4%多聚甲醛行活体心脏灌注取听泡。正常组同法取出听泡。制成片…     

汉坦病毒感染乳鼠脑组织中HSP70与病毒抗原关系

目的：探讨汉坦病毒（HTNV）感染诱导乳鼠脑组织热休克蛋白（HSPs)表达及热休克蛋白与病毒蛋白的相互关系。方法：采用免疫荧光法检测实验性乳鼠感染脑组织中病毒抗原及HSP70的表达,用ELISA、免疫印迹、免疫共沉淀方法分析病毒抗原和HSP70的表达。结果：HTNV感染诱导了乳鼠脑组织神经细胞高表达HSP70,组织中HTNV－NP与HSP70关系密切,免疫共沉淀结果显示HSP70和HTNV－NP结合形成复合物。结论：HTNV实验生乳鼠感染脑组织中高表达的HSP70与病毒核心抗原（HTNV－NP）形成非共价复合物,该复合物可能在病毒感染复制及宿主免疫反应中发挥作用。其潜在的应用价值是在肾综合征出血热的预防和治疗中利用该复合物制备特异性T淋巴细胞疫苗。     

Genetic and biochemical dissection of the mitochondrial protein-import machinery

Mitochondria import most of their proteins from the cytosol. A multi-subunit machinery accomplishes the translocation of precursor polypeptides into across the two mitochondrial membranes. Within recent years more than 20 different proteins have been identified which are involved in mitochondrial protein import. This review summarizes the successful genetic and biochemical approaches that led to the identification of these transport and folding components. The identification and functional characterization of the components can be seen as a paradigm for the molecular analysis of a complex biological process by a combination of biochemical and genetic procedures.     

热休克蛋白70对H2O2诱发大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

摘要目的:探讨热休克蛋白70(HSP₇₀)对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP₇₀,用过氧化氢(H₂O₂)造成心肌细胞损伤。采用免疫组化、DNALadder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶及琥珀酸脱氢酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标的方法。结果:温度诱导后HSP₇₀在胞浆中大量表达,H₂O₂损伤组与HSP₇₀保护组凋亡率(12.18±1.94,6.42±0.86,P<0.01)、细胞色素C氧化酶比活力(5.824±1.949,10.375±2.513)及琥珀酸脱氢酶比活力(0.884±0.152,1.174±0.214,P<0.01)有显著差异。电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体。结论:HSP₇₀可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。