多种细胞因子诱导的杀伤细胞体外扩增及对骨肉瘤细胞杀伤活性的研究

目的探讨不同人群来源的多种细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine—induced killer cells,CIK）细胞增殖及细胞毒活性的作用,为CIK细胞在骨肉瘤中的过继免疫治疗提供实验依据。方法通过向健康人及骨肉瘤患者各10名男性的外周血单核细胞（PBMC）中加入IL-2、IFN-γ、IL-1及抗CD3McAb,诱导出CIK细胞,用光镜、倒置显微镜观察细胞形态,细胞记数板法计数细胞,四甲基偶氮哇盐（MAW）法检测收获细胞对相应骨肉瘤细胞的细胞毒作用。结果二组均能成功诱导出CIK细胞,其中健康人组体外增殖能力、细胞毒作用均优于骨肉瘤患者组,各组CIK细胞随效靶浓度比的递增其杀瘤活性相应增加（P〈0．05）,二组CIK细胞对骨肉瘤细胞48h杀伤率明显高于24h（P〈0．05）。结论CIK细胞的体外增殖力及对骨肉瘤细胞的杀伤活性与机体状态有关,CIK细胞对骨肉瘤细胞杀伤活性存在量效及时效关系。     

脐血CIK细胞的体外增生及其抗肿瘤效应

 【摘要】　目的　研究脐血CIK细胞体外增生活性及对肿瘤细胞的杀伤活性，为CIK细胞在肿瘤过继免疫治疗中的应用提供实验依据。方法　脐血经密度梯度离心获得单个核细胞，以CD3单抗、重组人白细胞介素-2（rhIL-2）、重组人白细胞介素-1（rhIL-1）和重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）为诱导剂制备多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）。并设只加IL-2诱导成的LAK细胞和未加细胞因子的脐血单个核细胞（CBMNC）作为对照。培养前后分别用显微镜观察细胞形态，流式细胞术测定细胞表型的改变，锥虫蓝拒染法测定细胞增生水平，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定对肺癌细胞的杀伤活性。结果　实验发现，通过细胞因子的联合，可大量诱导出高活性的CIK细胞，CIK细胞在培养的第5天开始增生，第14天达到高峰，增生的细胞表型以CD+3 CD+56细胞为主。而LAK细胞的增生高峰出现在第7天，随后增生不明显；CBMNC表型无明显变化，增生不明显。CIK细胞针对肿瘤细胞的体外杀伤活性高于LAK细胞和CBMNC。结论　在体外细胞因子的联合作用下脐血能成功地诱导出大量的CIK细胞。脐血CIK细胞体外扩增快，杀伤活性强，对肿瘤细胞的作用优于传统的LAK细胞，为肿瘤的过继性免疫治疗提供了一个新的方向。     

CIK的体外增殖及体内外杀瘤活性的实验研究

目的:从人骨髓造血前体细胞体外培养扩增树突状细胞(dendritic cells,DCs),测定其表型及T细胞刺激活性.方法:采用Mini-MACS分离技术,从正常人骨髓、脐血分离CD34~ 造血干细胞,体外以重组hGM-CSF,hTNF-α,hIL-3诱导培养2周,流式细胞术检测扩增细胞的表面表型及细胞内IL-12的表达,体外同种混合淋巴细胞反应检测扩增DCs的T细胞刺激活性.结果:从正常人骨髓、脐血分离得到高纯度(>90%)的CD34~ 造血干细胞,经重组hGM-CSF,hTNF-α的共同诱导培养,扩增得到大量DCs,加人hIL-3可以进一步增加DCs产量;FACS检测表明,扩增的DCs表达HLA-DR,CD40,CD54,CD80,CD86分子,细胞内有hIL-12的P35,P40亚基的表达;与外周血单核细胞培养生成的DCs相比,由CD34~ 干细胞扩增的DCs具有更强的激发同种T细胞增殖的能力.结论:人CD34~ 干细胞体外经诱导培养,可以生成大量功能成熟的DCs,从而为进一步开展DCs的基础及临床研究打下了基础.     

人肺癌细胞NHE—1基因片段的克隆及其反义表达载体的构建

目的:动态观察CIK(cytokine induced killer)细胞的体外增殖,体外的细胞毒活性,及通过动物实验研究其体内的抗肿瘤作用.方法:通过提取健康供血者的PBMC,第0天加入γ-IFN,第1天加入IL-2、抗-CD3单抗和IL-1培养CIK细胞;在流式细胞仪上做动态培养物的表型分析;与LAK细胞作对比,分别用MIT法测定其体外细胞毒活性及对S180荷瘤鼠的体内抗肿瘤作用.结果:CIK细胞在培养2周后获得大量增殖,表型分析表明,CIK细胞属异质性细胞群,在培养的过程中,群体的CD3~ CD56~ 细胞大量扩增达1000多倍,是CIK细胞的主要效应细胞;实验证明,CIK细胞的体外细胞毒活性及对S180荷瘤鼠的体内抗肿瘤作用均强于LAK细胞;其较强的体内抗癌活性可能与荷瘤鼠主体内T细胞活化有关.结论:CIK细胞是一种强于LAK细胞的、新型、高效、具有广谱杀瘤活力的免疫活性细胞.     

PHA对CIK细胞体外扩增影响的研究

目的:观察植物血凝素PHA对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillercells,CIK)体外扩增的影响。方法:在外周血单个核细胞定向诱导CIK细胞时加或不加PHA,观察细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞的免疫表型,MTT法测定细胞的杀伤活性。结果:PHA能明显提高CIK细胞的扩增倍数及体外杀伤活性,P=0.041。结论:为CIK细胞的过继性免疫治疗提供一种新方法。     

体外扩增CIK细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901

目的：观察CIK细胞增殖情况，了解扩增后的最佳应用时机，并观察体外对SGC-7901的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外条件下经过多种细胞因子的共同刺激诱导成CIK细胞，计数培养不同时间的CIK细胞，用流式细胞术检测CIK细胞的表型特征。用MTT法检测杀伤活性，对比CIK细胞与5-FU对SGC-7901的杀伤作用，并观察了两者联合应用的效果。结果：CIK细胞随体外培养时间的延长，数量及杀伤活性均增加。体外培养20d增殖124倍，CD3^＋、CD56^＋双阳性细胞的比例达66．1％，其后两者数量增长缓慢；体外实验显示CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用，最高杀伤效率为73．13％，其杀伤作用优于5-FU，P〈0．05。二者联合应用杀伤作用降低。结论：CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性；体外培养15～20d时应用较为合适；联合应用时5-FU可降低CIK细胞的杀伤效率。     

共培养的树突细胞和CIK细胞对肺癌的体内外抑癌作用

背景与目的:细胞因子诱导的杀伤(cytokine-inducedkiller,CIK)细胞是高效的肿瘤杀伤细胞。树突细胞(dendriticcells,DCs)是体内最强的抗原递呈细胞,并且能够提高效应细胞的抗瘤活性。本实验将DCs和CIK细胞共培养观察DCs对CIK细胞的细胞表型、增殖活性及体内外的抗肺癌作用的影响。方法:从健康人外周血单个核细胞中常规诱导出DCs、CIK细胞后,将DCs和CIK细胞按1∶10比例共培养5天获得DC-CIK细胞。流式细胞仪测DC-CIK细胞表型变化,3H-TdR掺入法测定其体外的细胞毒活性,并用肺腺癌细胞株A549建立裸鼠模型观察DC-CIK体内的抗肿瘤效果。结果:在培养第14天,DC-CIK细胞与单独CIK细胞培养组相比,增殖速率提高[(17.0±1.8)倍vs.(10.9±2.0)倍,P<0.05],CD3 CD56 表达水平明显上调[(36.0±4.2)%vs.(25.7±2.9)%,P<0.05],同时对A549细胞的细胞毒活性明显增强(P<0.05)。裸鼠体内实验表明,接种肺癌细胞51天后DC-CIK组、CIK组的抑瘤率分别为62.9%、41.5%,与对照组相比DC-CIK组及CIK组均抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01),且DC-CIK组与CIK组抑瘤效应差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DCs与CIK细胞共培养可使CIK细胞获得更高的增殖活性和更强的抑癌作用。     

健康人和肝癌患者CIK体外增殖能力及对原代肝癌细胞抗肿瘤作用的比较研究

目的探讨源自健康人和肿瘤患者的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外增殖能力及对原代肝癌细胞的抗肿瘤作用的差异,进一步了解CIK的抗肿瘤作用.方法分离健康人和肝癌患者外周血单个核细胞经细胞因子激活诱导培养为CIK,流式细胞分析检测CIK免疫表型;用机械研磨法将新鲜肝癌组织标本分离成单细胞悬液;四甲基偶氮唑盐法榆测两种CI...     

树突状细胞对自体CIK细胞体外杀伤肺腺癌细胞影响的研究

目的:研究人外周血树突细胞(dendriticcell,DC)对自体CIK细胞体外杀伤肺腺癌细胞的影响,以期获得具有抗原特异性杀伤功能的细胞毒活性细胞,并分别对CIK、LAK和CD3AK的杀伤效果进行比较。方法:采用某一肺腺癌肿瘤患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMNC),经体外诱导分别扩增出CIK、LAK、CD3AK和DC细胞,再将靶细胞抗原孵育过的DC同三种细胞共同培养,通过镜下动态观察CIK联合DC对癌性胸腔积液中肿瘤细胞的杀伤活性,并利用MTT法检测CIK联合DC体外杀伤人肺腺癌细胞系(SPC-A1)的活性,同时比较CIK、LAK和CD3AK三种细胞的体外杀瘤活性。结果:CIK-A-DC的杀伤活性最强为92.3%,明显高于单纯CIK的59.7%和DC-CIK的79.8%,(P值分别为0.025和0.042),提示CIK-A-DC细胞对肿瘤杀伤的特异性。而DC-CIK的杀伤活性为79.8%,也高于单纯CIK对照组59.7%,P=0.034,说明DC具有明显增强CIK细胞杀瘤活性的功能。同时,不论从单纯CIK、LAK、CD3AK细胞毒活性,或是从三种细胞联合DC的细胞毒活性比较,CIK细胞较后两种细胞都具有更强的杀伤活性,P值分别为0.038和0.022。联合DC的自体CIK细胞体外杀瘤活性显著增强,CIK细胞的杀伤活性显著高于LAK、CD3AK两种细胞。结论:DC可明显提高自体CIK细胞的体外杀瘤活性。     

负载人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞在体外特异性杀伤的影响

目的 探讨人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原致敏的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在体外特异性杀伤的影响.方法 利用Ficoll密度梯度离心法提取脐血单核细胞,分别诱导CIK和DC细胞,并用流式细胞仪检测其免疫表型.采用Trizol提取结肠癌Lovo细胞总RNA作为肿瘤细胞抗原,转染脐血来源的DC.实验分为3组:转染Lovo DC共培养CIK组、未转染DC共培养CIK组和单纯CIK组.靶细胞为Lovo细胞,在效靶比为50∶1和20∶1的条件下以噻唑蓝法分别检测CIK的体外杀伤活性.结果 在效靶比为20∶1时,负载Lovo RNA抗原的DC能诱导出CIK对Lovo细胞最强的细胞毒杀伤力为(76.49±4.21)%,DC+CIK组次之为(53.84±2.15)%,CIK组细胞毒性最低为(32.20±3.07)%,且两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肿瘤细胞总RNA提取方法简单,易于临床实施,其作为抗原致敏DC能强化CIK的特异性杀伤,将有很好的临床应用前景.     

CIK体内外抗宫颈癌HeLa细胞的作用及其荷瘤小鼠体内分布特点

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对荧光素酶标记的人宫颈癌HeLa-luc细胞的体内外抗肿瘤作用,了解CIK回输荷瘤小鼠后在不同器官的分布特点。方法:由健康志愿者外周血单个核细胞体外诱导培养CIK,流式细胞术检测CIK表面分子的表达,RT-PCR法检测IFN-γmRNA的表达,MTT法和瑞氏-姬姆萨染色测定CIK对HeLa-luc细胞的杀伤作用。建立荷HeLa-luc瘤BALB/c裸鼠模型,体内成像系统观察荷瘤小鼠肿瘤大小变化及CIK治疗效果,共聚焦显微镜观察不同器官中CIK的分布情况。结果:CIK在体外诱导培养14～21 d,其生长达到高峰,此时CD3+CD56+T细胞的比例增加50倍以上,IFN-γmRNA表达水平也达到高峰。在效靶比为20∶1、40∶1时,CIK对HeLa-luc细胞的杀伤率分别为(51.16±2.64)%、(72.14±4.21)%,明显高于对照组的(16.33±3.09)%、(21.26±2.71)%(P<0.05)。CIK治疗5周和8周后,对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为47.18%、64.38%。CIK治疗组荷瘤小鼠外周血中IFN-γ水平为(61.92±6.49)pg/ml,明显高于对照组的(34.30±1.78)pg/ml(P<0.05)。CFSE标记的CIK经腹腔和瘤旁注射入荷瘤小鼠3 h,在肺、肝、脾、外周血、肿瘤中均可观察到绿色荧光;腹腔途径注射24 h时,肿瘤组织中CIK浓度达到高峰(20.56±1.72)%;瘤旁途径注射3 h时,肿瘤组织中CIK达到高峰(25.75±3.45)%。结论:CIK在体内外对宫颈癌HeLa-luc细胞均有较强的杀伤作用,CIK经不同途径注射荷瘤小鼠后可以广泛分布于全身器官,其到达各脏器的浓度与输注途径及时间密切相关。     

重组人纤维连接蛋白对CIK细胞增殖和杀伤活性的影响

目的 研究并探讨重组人纤维连接蛋白(RetroNectin,RN)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖、免疫特性及对人类K562、LOVO细胞杀伤活性的影响。方法 提取患者外周血单个核细胞,标本分为四组,对照组(CIK组):按常规方法诱导CIK增殖;C-CIK组:提前通过CD3 Ab包被诱导;R-CIK组:提前通过RetroNectin包被诱导;R+C-CIK组:提前通过RetroNectin及CD3 Ab包被诱导,记录各组免疫效应细胞不同时间段的增殖情况。流式细胞术检测各组细胞不同时间段的免疫表型变化;并用LDH法检测各组细胞对肿瘤细胞K562、LOVO杀伤活性。结果 R+C-CIK组细胞增殖倍数高于其他三组,差异有统计学意义(P＜0.05);R+C-CIK组及R-CIK组的CD3⁺CD56⁺双阳性细胞所占百分比较C-CIK及CIK组高,d12和d15时有统计学差异(P＜0.05);在效靶比20∶1和40∶1时,R+C-CIK及R-CIK组对K562的杀伤活性高于C-CIK及CIK组,杀伤活性有统计学差异(P＜0.05),R+C-CIK组、R-CIK组及C-CIK组细胞对结肠癌细胞系LOVO的杀伤活性高于CIK组,有统计学差异(P＜0.05)。结论 RetroNectin联合抗CD3MAb包被技术应用于CIK体外培养可以获得增殖率和活性更高的免疫活性细胞,是值得临床推荐的一种有效的培养方法。     

ＣＩＫ细胞及上清液抗胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１活性的研究*

目的：探讨由多种细胞因子诱导的杀伤细胞（ＣＩＫ）在体外的增殖情况,分析体外ＣＩＫ细胞对胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）在体外诱导成ＣＩＫ细胞,计数培养不同时间的ＣＩＫ细胞,并用流式细胞术动态分析其表型特征。倒置显微镜下观察ＣＩＫ细胞作用于ＳＧＣ-７９０１胃癌细胞的形态学变化;流式细胞仪检测ＣＩＫ细胞培养上清液对胃癌细胞的诱导凋亡作用;采用ＭＴＴ法检测ＣＩＫ细胞对ＳＧＣ-７９０１胃癌细胞株的杀伤活性。结果：ＣＩＫ细胞随体外培养时间的延长,数量及杀伤活性均增加。体外培养２１ｄ,细胞总数增殖倍数１１１.６３±１０.９７,ＣＤ３＋ＣＤ５６＋双阳性细胞数量亦增加,比例达（３５.８±９.７）％,其后两者数量逐渐降低。ＣＩＫ细胞上清液能够诱导胃癌细胞株凋亡;ＣＩＫ细胞对胃癌ＳＧＣ-７９０１细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤率为（７４.９１±２.７１）％。结论：ＣＩＫ细胞具有较强的抗胃癌细胞活性,体外培养１４～２１ｄ时具有较强的抗瘤活性,其主要通过直接杀伤及释放细胞因子诱导凋亡的作用杀伤肿瘤细胞。     

健康人和肿瘤患者CIK细胞的生物学特性比较

目的比较健康人和肿瘤患者外周血来源的CIK细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性;观察健康人CIK细胞对裸鼠体内移植瘤的预防和治疗作用。方法常规无菌采集健康人和肿瘤患者外周血单核细胞各10份,定向诱导成CIK细胞,然后直接活细胞计数法比较两者的扩增速度;流式细胞仪检测比较两者细胞表型;MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性。取30只裸鼠分为3个组,预防组：裸鼠先尾静脉注射CIK细胞,连续5天,第6天背部皮下接种A549细胞。治疗组：裸鼠于第一天接种A549细胞,次日,分为3组,第一组局部（接种A549部位）注射CIK细胞;第二组尾静脉注射CIK细胞;第三组局部（接种A549部位）及尾静脉均注射CIK细胞,均连续治疗5天。对照组：裸鼠,第一天背部皮下接种A549细胞,第二天开始在尾静脉注射生理盐水,连续5天。四周后处死全部裸鼠,测量肿瘤大小,称重,计算肿瘤体积,抑瘤率,并做病理检查。结果健康人CIK细胞的扩增速度显著高于肿瘤患者CIK细胞（P〈0．05）;流式细胞仪检测显示健康人CIK细胞CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞百分比显著高于患者CIK细胞（P〈0．05）;健康人CIK细胞对K562,LOVO的杀伤活性强于患者CIK细胞（P〈0．05）。对照组各裸鼠背部皮下移植瘤出现较早,并且以相近速率快速生长,体积较大;CIK细胞预防组及治疗组中局部注射组和尾静脉注射组的移植瘤出现较晚,生长较慢,体积较小,联合治疗组治疗效果更佳（P〈0．05）。结论体外实验中,健康人CIK细胞体外扩增快,CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞比例高,对肿瘤细胞的杀伤活性强于肿瘤患者CIK细胞。动物实验中,健康人CIK细胞对裸鼠移植瘤有预防和治疗作用。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对大肠癌细胞株LOVO体外杀伤作用的研究

目的研究树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对大肠癌细胞株LOVO的杀伤及诱导凋亡作用。方法 从健康供者外周血中提取出单个核细胞, 用不同的细胞因子诱导出DC及CIK细胞, 待DC成熟后将DC与CIK混合培养。细胞计数法测定细胞的增殖、MTT法测定细胞杀伤活性、透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡、Western Blot法检测效应细胞表面FasL表达。结果 DC细胞对CIK细胞具有很强的促增殖作用, 且DC-CIK细胞共培养组在各效靶比的杀伤活性均明显高于单独CIK细胞培养组(P＜0.01)。DC可以促进CIK诱导肿瘤细胞发生凋亡, 且DC-CIK、CIK细胞均大量表达FasL。结论 DC细胞可以显著提高CIK细胞的增殖活性和细胞毒活性, 其共培养的作用机制之一可能是通过Fas/FasL途径而实现。     

The CIK cells stimulated with combination of IL-2 and IL-15 provide an improved cytotoxic capacity against human lung adenocarcinoma

Generation of cytokine-induced killer (CIK) cells is an emerging approach in adoptive donor lymphocyte infusion for patients with a wide range of tumors. However, our previous in vitro studies have shown that the killing efficacy of CIK cells against lung cancer was lower than other tumor cells, while the underlying mechanisms are not clear. We explored the feasibility to improve CIK cells mediated cytotoxicity against lung cancer. Interleukin (IL)-15 is a pleiotropic cytokine that stimulates cytolytic activity and cytokine secretion of NK cells, which may enhance the cytotoxic activity of CIK cells. In this study, we intended to stimulate the CIK cells by IL-2 in combination with IL-15 in cell expansion to achieve enhanced cytotoxicity against lung cancer cells. The different phenotypes of IL-2 or combination of IL-2 and IL-15 stimulated cytokine-induced killer cells were determined, and the improved cytotoxicity of IL-2 and IL-15 induced CIK cells against lung adenocarcinoma were evaluated both in vitro and in vivo. CIK cells stimulated with both IL-2 and IL-15 has shown greater proliferative potential than CIK cells treated with IL-2 alone. IL-15 induction also has driven the expansion of CD3+CD56+ subset and significantly enhanced cytotoxicity against tumor cells. Further analysis has demonstrated that CIK_IL-2&_IL-15 injected mice models have shown significant tumor regression and lower expression level of CyclinD1 in tumor tissue. This study has provided preclinical evidences that CIK_IL-2&_IL-15 with enhanced cytotoxicity may offer alternative treatment option for patients with lung cancer.     

CIK细胞体内外抗肝癌细胞作用

目的：研究肝癌患者CIK（cytokine-induced killer) 细胞的体外杀伤自体肝癌原代细胞的细胞毒活性以及正常人CIK细胞在裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法：分别分离获得肝癌患者和下人的外周血单个核细胞（PBMC）,加入细胞因子,体外诱导成CIK细胞,用流式细胞仪对细胞作动态表型分析,并与正常人的CIK细胞作对比。用^51Cr释放法,测定肝癌患者的CIK细胞体外杀伤自体肿瘤细胞的细胞毒性活性。在Balb/c裸鼠皮下接种肝癌细胞BEL－7402,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用,并与LAK、PBMC细胞相对比。结果：肝癌患者的CIK细胞体外增殖力强,至培养28天时达到最大增值倍数300多,表型分析结果表明,CD^3 CD56^ 双阳性细胞得到了大量的扩增,其含量由原来的0．23％上升到第21天的17．8％。体外实验表明,肝癌患者的CIK细胞杀伤自体原代肝癌细胞的细胞毒性活性明显高于自体的PBMC细胞。裸鼠体内实验表明,肝癌患者的CIK细胞能够显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率可达84．7％,高于LAK细胞的52．8％及PBMC的37．1％（P＜0．05和P＜0．01）。结论：CIK细胞具有较强的体内外抗肝癌细胞活性,有可能应用于临床上肝癌的过继性免疫治疗。     

自身细胞因子诱导的杀伤细胞过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床观察

背景与目的:细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)具有增殖快、杀瘤活性强和杀瘤谱广的特点。但用于临床肿瘤治疗的报告较少,本文旨在评估用CIK细胞过继回输治疗晚期肿瘤的疗效。方法:用淋巴细胞分离液分离患者末梢血单个核细胞,然后将末梢血单个核细胞加入含有IFN-γ、IL-2和CD3单抗的培养基中进行培养扩增,再将培养后的CIK细胞回输给病人;患者一个疗程接受CIK细胞总数在5×109～15×109之间。在CIK细胞治疗前有47例患者做了化疗,3例做了放疗。化放疗与CIK细胞治疗间隔时间在2～4周以上。结果:在63例接受治疗者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为28例(44.46%)。20例CEA增高者,治疗后有14例减低,6例增加;10例AFP增高者,治疗后有9例减低,1例增加。CD3、CD4和CD8T淋巴细胞绝对值在CIK细胞治疗后均增加45%以上。治疗后63例中有51例患者有食欲增加、32例患者睡眠和体力改善,18例患者中有13例疼痛减轻,结论:用自身CIK细胞过继性回输治疗能明显提高癌症患者细胞免疫功能,改善临床体征,且无毒副作用。     

去甲斑蝥素对CIK细胞体外扩增及抗瘤活性的影响

目的 探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)增殖及CIK细胞杀伤活性的影响。方法 采用Ficoll密度梯度法提取脐血单个核细胞,定向诱导成CIK细胞,实验分为加入终浓度为30μmoL/L NCTD的NCTD-CIK组和不加NCTD的对照CIK组。通过细胞计数法、流式细胞术及MTT法观察CIK细胞的增殖、免疫表型及细胞毒活性的变化。结果 NCTD-CIK组细胞增殖率和抗瘤活性均明显高于对照CIK组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 NCTD促进CIK细胞扩增,增强其抗瘤活性,为CIK细胞的过继性免疫治疗提供了一种新的方法。     

CIK细胞体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性的研究

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞的体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性。方法：收集8名健康献血者和8名宫颈癌患者的新鲜外周血,分别通过常规方法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,应用相应细胞因子体外诱导分化出CIK细胞,动态观察CIK细胞的体外增殖活性、细胞表型和对HeLa细胞的杀伤活性;在BALB/c裸鼠皮下接种效应细胞,观察宫颈癌患者CIK细胞对接种HeLa细胞的荷瘤鼠的抑瘤作用,同时设淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells,LAK）和PBMC细胞作为对照。结果：源于健康人和宫颈癌患者的CIK细胞间的增殖活性无明显区别（P〉0.05）。表型分析结果表明,两种来源的CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞均得到了大量扩增,宫颈癌患者CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞在实验开始前约占0.13%,到实验后第28天上升到25.8%。体外实验表明,宫颈癌患者的CIK细胞杀伤宫颈癌HeLa细胞的细胞毒活性明显高于PBMC细胞。裸鼠体内实验表明,宫颈癌患者CIK细胞能够显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率可达80.6%,高于LAK细胞的59.1%和PBMC细胞的38.3%（P〈0.01）。CIK治疗后肿瘤体积明显比空白对照组缩小（P〈0.05）。结论：宫颈癌患者CIK细胞具有较强的体内外抗宫颈癌细胞活性,有可能用于临床上宫颈癌的过继性免疫治疗。