青春期糖尿病大鼠生殖腺内AR的基因表达和受体水平变化

目的 观察青春期糖尿病大鼠生殖腺内雄激素受体的基因表达及蛋白水平变化。方法 用STZ诱导青春期大鼠糖尿病模型,实验分正常对照组、糖尿病组及胰岛素治疗组,分别以Northern blot及放射配基法检测睾丸、附睾、前列腺内雄激素受体的mRNA及蛋白水平。结果mRNA水平:生殖腺内各部位的雄激素受体mRNA表达三组间均无差异;蛋白水平:生殖腺内各部位糖尿病组的雄激素受体水平均显著低于正常组。结论 糖尿病在翻译水平干扰了雄激素受体的合成,使受体水平下降。     

糖尿病雄性大鼠性腺5α-还原酶Ⅱ型活性变化

目的 :探讨大鼠青春期和成年期糖尿病时性腺 5α 还原酶Ⅱ型的活性变化。　方法 :取 4 0d和 90d龄雄性Wistar大鼠各 30只 ,分别分为对照组 (C)、糖尿病组 (D)和胰岛素治疗糖尿病组 (ID)。采用薄层层析法测定各组附睾头、附睾尾、前列腺和睾丸组织内 5α 还原酶 Ⅱ型的活性。　结果 :①青春期大鼠性腺的各部位内 ,5α 还原酶 Ⅱ 型的活性D组均明显低于C组 (P <0 .0 1) ,而ID组明显高于D组 (P <0 .0 1) ;②成年期大鼠性腺的各部位内 ,5α 还原酶 Ⅱ型的活性在C、D和ID组各组间差异无显著性 (P均 >0 .0 5 )。　结论 :青春期大鼠性腺内 5α 还原酶 Ⅱ型的活性更易受代谢环境、激素水平及局部特异性因素的影响 ,而成年期大鼠性腺内 5α 还原酶Ⅱ 型的活性相对稳定     

雄激素/雄激素受体对小鼠附睾Caveolin-1表达调控机制的研究

目的:探讨雄激素和雄激素受体(AR)对小鼠附睾Caveolin-1表达的调控机制。方法:通过搜索前期染色体免疫共沉淀-测序(ChIP-seq)实验得到的小鼠附睾AR结合位点的数据库,寻找Caveolin-1基因相关联的AR结合位点。分别取正常小鼠、睾丸阉割小鼠以及睾丸阉割后补充外源雄激素的小鼠的附睾组织,一方面,抽提总RNA,利用逆转录PCR以及逆转录荧光定量PCR检测Caveolin-1基因的mRNA表达水平;另一方面,利用AR抗体进行染色体免疫共沉淀(ChIP),采用ChIP-PCR以及ChIP-qPCR的方法,检测Caveolin-1基因相关联的AR结合位点在体内与AR的结合情况。结果:从小鼠附睾AR结合位点的数据库中找到两个Caveolin-1相关联的AR结合位点,均位于第二内含子区域。睾丸阉割后,Caveolin-1基因的表达显著升高(P<0.05),表达量是对照组的(1.8±0.17)倍;两个AR结合位点的富集倍数分别由正常状态下的(13.5±1.47)倍和(10.5±1.03)倍降至(1.05±0.17)倍和(1.4±0.14)倍(P<0.01)。补充雄激素后,Caveolin-1基因的表达又降至正常水平(P<0.05),为正常对照组的(1.03±0.06)倍。两个AR结合位点的富集倍数则分别升至(16.4±2.6)倍和(10.0±0.92)倍(P<0.01)。结论:Caveolin-1在小鼠附睾内是AR的一个直接靶基因,其表达受雄激素的负调控。该研究为理解雄激素/AR在小鼠附睾内的调控网络提供了新的视角。     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响

目的:研究银杏叶提取物(EGB)对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机均分成3组:正常对照组、2型糖尿病组、EGB治疗组。用光镜和透射电镜观察EGB对2型糖尿病大鼠睾丸的形态学改变;ELISA法检测血清LH、T水平;半定量RT-PCR检测睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a-羟化酶(P450c17)、3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(3β-HSD1)、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型(17β-HSD3)的mRNA水平。结果:糖尿病组光镜下睾丸间质细胞较正常对照组缩小;透射电镜下见到间质细胞核固缩,胞质内内质网减少。糖尿病组血清LH及T水平显著低于正常对照组(P<0.05);睾丸组织P450scc的mRNA水平显著低于正常对照组(P<0.01),StAR、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平也明显低于正常对照组(P<0.05),P450c17基因表达呈下降趋势(P>0.05);EGB治疗12周与糖尿病组比较睾丸组织病理改变较轻,血清LH、T含量升高(P<0.05),StAR、P450scc的mRNA水平升高(P<0.05),P450c17、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平呈上升趋势(P>0.05)。结论:EGB能减轻糖尿病大鼠睾丸损害并使2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞合成和分泌T能力增强。     

实验性精索静脉曲张对大鼠前列腺组织中睾酮水平及雄激素受体表达的影响

目的探讨实验性精索静脉曲张对大鼠前列腺组织中睾酮水平及雄激素受体表达的影响。方法将36只SD三级雄性大鼠随机分为实验组与对照组,每组18只,实验组建立精索静脉曲张模型,对照组接受假手术,于建模成功后第6、12和18周(各3个阶段,每阶段6只)采用放射免疫法测定血清中睾酮的含量、前列腺组织中睾酮的含量,并进行常规HE染色,观察前列腺组织上皮与基质的形态学变化,同时使用免疫组化法测定前列腺组织中雄激素受体的表达。结果实验组6周组、12周组、18周组血清睾酮、前列腺组织中睾酮水平明显低于同期对照组(P<0.05),且实验组12周组血清睾酮、前列腺组织中睾酮水平明显低于实验组6周组(P<0.05),实验组18周组血清睾酮、前列腺组织中睾酮水平明显低于实验组6周组、实验组12周组(P<0.05)。对照组前列腺组织正常,实验组随着时间的延长前列腺组织损伤越来越严重。实验组6周组前列腺组织中雄激素受体表达较同期对照组明显增强(P<0.05),实验组12周组、实验组18周组前列腺组织中雄激素受体表达较同期对照组与实验组6周组明显减弱(P<0.05)。结论实验性精索静脉曲张可降低大鼠前列腺组织中睾酮水平,导致前列腺组织中雄激素受体表达异常,影响前列腺功能的正常运转,这可能是男性不育或生育能力低下的原因之一。     

邻苯二甲酸酯类对青春期大鼠生殖系统发育及睾丸组织铜、锌及铜/锌比值的影响

目的 探讨邻苯二甲酸酯类对青春期大鼠生殖系统发育及睾丸中铜、锌含量及铜/锌比值的影响.方法 6周龄SD大鼠84只,随机分为4组(A、B、C、D组),每组21只,每天称重,灌胃给于等质量DEHP和DBP的混合物,剂量分别为0(对照组)、375、750、1500mg/kg体重.d-1.各组分别于染毒第1、2、4周末断头法处死7只大鼠,取睾丸和其它脏器,计算器官系数的变化.取约1mm3福尔马林固定的睾丸组织,经硝酸消化,用原子吸收分光光度计测睾丸组织中铜、锌的含量,并计算铜/锌比值的变化.结果 染毒1周,D组平均每日体重增加量显著低于对照组(P<0.05),C组和D组睾丸系数和精囊系数明显低于对照组(P<0.05),而前列腺系数则在各剂量组均明显低于对照组(P<0.01).睾丸中锌的含量在C组与对照组比较,差别显著(p<0.05),在D组与对照组比较,差异有高度统计学意义(P<0.01),铜/锌比值在D组与对照组比较,差别明显(P<0.05).染毒2周,D组睾丸系数、附睾系数、前列腺系数和精囊系数与对照组比较,明显降低(P<0.05),睾丸中铜的含量升高(P相似文献   

实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸和附睾中血管内皮生长因子及其受体1表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸、附睾中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体fms样酪氨酸激酶(Flt-1)蛋白表达的影响。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化SP法检测VEGF和Flt-1在ELV组及假手术对照组睾丸、附睾组织中的表达变化。结果:VEGF和Flt-1蛋白在ELV组和对照组大鼠睾丸、附睾中均有表达,其定位和表达量具有细胞特异性和区域特异性。经图像分析和统计检测显示,ELV2周和4周组双侧睾丸和附睾中VEGF蛋白的表达与相应对照组比较均显著增加(P<0.01和P<0.05);ELV2周组双侧睾丸和附睾中Flt-1蛋白的表达与相应对照组比较也显著增加(P<0.01和P<0.01),但4周时在双侧睾丸和左侧附睾中Flt-1蛋白的表达显著下降(P<0.01和P<0.05),而右侧附睾未见明显差异(P>0.05)。结论:实验性精索静脉曲张可造成青春期大鼠睾丸、附睾中VEGF和Flt-1的表达量变化,该变化可能会影响精子的发生和成熟,因而可能是VC引起男性生育力下降甚至不育的原因之一。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11 mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。     

麒麟丸对糖尿病大鼠睾丸保护作用机制初步探究

目的研究麒麟丸对糖尿病大鼠睾丸保护作用及可能机制。方法 6周龄清洁级雄性wistar大鼠,体质量180~220g,共60只,随机分A组(正常组)10只、B组(正常+麒麟丸)10只和模型组40只。模型组高脂高糖饮食1月后,应用链脲佐菌素制作糖尿病模型。成模25只随机分成C组(糖尿病组)12只,D组(糖尿病+麒麟丸)13只。B组和D组大鼠每天按0.36g/kg麒麟丸灌胃。动物中心饲养6周后测量大鼠体质量和血糖并取材,双侧睾丸称量后取右侧睾丸组织固定后制作免疫组化薄片观察终末糖基化产物(AGEs)及终末糖基化产物受体(RAGEs)表达,左侧睾丸提取蛋白后电泳观察RAGEs蛋白表达量,左侧附睾放在精子孵育液中剪碎后孵育计数左侧附睾中精子数。结果糖尿病组大鼠较正常组大鼠睾丸质量减轻,附睾精子数减少,AGEs累积增加,RAGEs表达量增高;(糖尿病+麒麟丸)组大鼠较糖尿病组大鼠睾丸质量增加,附睾精子数增加,AGEs累积减少,RAGEs表达降低;正常组大鼠和(正常+麒麟丸)组大鼠比较睾丸质量、附睾精子数、AGEs及RAGEs均无明显变化。结论麒麟丸可能干预糖尿大鼠睾丸组织中AGEs累积降低RAGEs的表达,干预AGEs通过RAGEs介导的信号通路作用,对糖尿病大鼠睾丸起保护作用。     

L-肉碱在奥硝唑所致大鼠睾丸和附睾损伤中的保护作用

目的:探讨L-肉碱(LC)在奥硝唑(ORN)所致大鼠附睾和睾丸损伤中的的保护作用。方法:40只雄性SD大鼠(200～230g)随机均分为5组:①A组:给予0.5%的羧甲基纤维素钠(溶剂)灌胃;②B组:每天给予400mg/kgORN灌胃;③C组:每天给予800mg/kgORN灌胃;④D组:每天给予[ORN(400mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃;⑤E组:每天给予[ORN(800mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃。上述各组均连续灌胃20d,末次给药24h后,所有大鼠麻醉后处死,分别取睾丸、附睾,进行称重和HE染色,计算睾丸、附睾系数并观察睾丸和附睾病理组织学改变。结果:①与A组相比,B组睾丸、附睾系数明显降低(P<0.05);而C组睾丸、附睾系数为极显著性降低(P<0.01);D组与A组相比无差异,E组与A组相比有极显著性差异(P<0.01);②HE染色显示,与A组相比,B组睾丸生精小管内各级生精细胞排列基本整齐,部分生精小管管腔内有脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目下降,有时可见散在的生精细胞;C组大鼠睾丸生精小管管腔内均可见坏死脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目明显减少,且有较多的非精子细胞成分。D组睾丸生精小管无明显改变,附睾管腔中精子数目也未见明显下降;E组睾丸生精小管管腔内精子数目减少,可见坏死脱落的生精细胞,附睾腔中精子数目明显减少,并伴有较多的非精子细胞成分。结论:奥硝唑(ORN)可导致雄性大鼠附睾和睾丸病理组织学改变,LC对ORN引起大鼠附睾和睾丸损伤具有一定的保护作用。     

Effect of testosterone deprivation on expression of the androgen receptor in rat prostate, epididymis and testis

Adult rats were treated with ethane dimethane sulphonate (EDS) to eliminate the Leydig cells. This treatment resulted in very low levels of testosterone in the blood and in the testis. Furthermore, histological evaluation of spermatogenesis showed no marked differences between control and EDS-treated animals. In the ventral prostate, 5 days after EDS-treatment, a 4.0 +/- 0.3-fold up-regulation of androgen receptor (AR) mRNA was observed, together with a 2.2 +/- 0.2-fold increase in actin mRNA. In the epididymis, a 2.0 +/- 0.5-fold increase in AR mRNA level was observed, without a change in actin mRNA level. In the testes of EDS-treated rats, the AR mRNA level was not changed (1.02 +/- 0.17-fold of controls), and there was also no change in actin mRNA level at 5 days after EDS-treatment. These results indicate that AR mRNA expression in the ventral prostate and epididymis is regulated differentially by testosterone when compared to regulation in the testis. Testicular androgen binding sites were assayed by Scatchard analysis of the binding of 3H-R1881 to a nuclear fraction, that was isolated by a method which involved the use of liquid nitrogen and high sucrose buffer. The number of specific binding sites per testis in EDS-treated rats with testosterone-implants, remained unaltered compared to control rats (9.1 +/- 1.4 pmol/testis). In these rats, 20% of the normal testicular testosterone level was sufficient to maintain the androgen receptor in a tight nuclear binding (transformed) form. In testes from EDS-treated rats without testosterone-implants, the AR did not fractionate into the nuclear fraction; however, the total testicular AR content in these animals was close to control levels, as measured by nuclear 3H-R1881 binding after receptor transformation through injection of a high dose of testosterone (10 mg) 2 h before killing the rats (testosterone pulse). In the different experimental groups, FSH was not required to maintain the total testicular AR content (ligand binding). Immunoprecipitation and Western blotting of the testicular AR using specific monoclonal and polyclonal antibodies indicated that the total testicular amount of immunodetectable AR protein in long-term testosterone deprived rats was very low when compared to that in control rats or rats with testosterone-implants. This is in disagreement with results obtained in the ligand binding assay, and may point to a structural modification of the AR in the testis that possibly occurs in the prolonged absence of androgens.     

睾丸外组织雄激素受体的分布及检测

雄激素受体 (AR)是介导雄激素在靶细胞中发挥作用的关键大分子 ,主要存在于男性睾丸组织中。本文综述了AR及其mRNA在泌尿生殖系统的前列腺、附睾、阴茎皮肤等睾丸外组织 ,头皮、海马旁回、脂肪等非泌尿生殖系统组织及在胃癌、喉癌等睾丸外肿瘤组织中的分布情况 ,并对AR的检测方法进行了复习 ,以进一步研究循环血中雄激素对人体各系统的作用     

青春期糖尿病鼠性腺重量与性行为观察

Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只，雄性，４０日龄，分为对照（Ｃ）组、胰岛素及时治疗糖尿病（ＤＣＩＲ）组、胰岛素延迟治疗糖尿病（ＤＤＩＲ）组和糖尿病（Ｄ）组。观察６０天。结果表明，糖尿病显著降低了睾丸、附睾、精囊腺和前列腺的重量，降低了附睾精子计数和性行为能力。胰岛素替代治疗明显改善了上述指标，及时治疗的效果优于延迟治疗     

雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶向降解的实验研究

目的:研究合成的嵌合分子DHT-PROTAC通过泛素蛋白酶体途径对雄激素非依赖性前列腺癌C4-2B细胞表达雄激素受体(AR)的靶向降解作用,以及AR降解后该细胞分泌、增殖和凋亡的变化。方法:实验细胞分3组:空白对照组(RPMI1640培养液)、溶剂对照组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]及实验组(100μmol/LDHT-PRO-TAC);制备细胞爬片,免疫组化和Western印迹检测C4-2B细胞中AR蛋白和Caspase-3表达情况的改变;ELISA法测定细胞培养液上清中PSA的浓度改变。噻唑兰(MTT)比色法检测细胞增殖抑制,细胞计数并绘制生长曲线观察细胞增殖能力。结果:与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后,C4-2B细胞中表达的AR蛋白明显减少,Western印迹检测结果表现为信号减弱(P<0.05);免疫组化见AR阳性细胞明显减少,阳性率降低达40%;与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后细胞培养上清液中PSA浓度降低约60%(P<0.05)。MTT试验显示随着DHT-PROTAC处理时间延长,对C4-2B细胞的抑制率逐渐增大,细胞生长呈时间依赖性抑制(P<0.05)。结论:嵌合分子DHT-PROTAC能靶向降解C4-2B细胞表达的AR,抑制细胞分泌PSA,并抑制该细胞的体外生长和增殖。