应用神经肽Y Y5受体反义基因治疗肥胖大鼠高Leptin血症效果的探讨

目的 :探讨神经肽YY5 (NPYY5 )受体反义基因治疗对肥胖大鼠高Leptin血症的改善作用及其机制。方法 :建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型 ,侧脑室插管后注射NPYY5受体反义、正义、错义寡核苷酸或生理盐水 ,观察大鼠腹膜后与生殖器周围脂肪组织温重的变化 ,并采用ELISA双抗体夹心法测定血清Leptin水平、放免法测定血清胰岛素水平。结果 :①高营养饮食诱导的肥胖模型大鼠血清Leptin水平、血清胰岛素水平、腹膜后脂肪湿重明显高于正常大鼠 ;②经NPYY5受体反义寡核苷酸干预后 ,肥胖大鼠血清Leptin水平、血清胰岛素水平、腹膜后脂肪组织温重均明显降低 ,但生殖器周围脂肪组织温重无明显变化 ;③大鼠血清Leption水平、血清胰岛素水平、腹膜后脂肪组织温重间均存在一定的正相关关系。结论 :侧腔室注射NPYY5受体反义寡核苷酸可显著改善肥胖大鼠的高Leptin血症 ,推测其机制可能与大鼠进食行为改变、腹膜后脂肪组织减少、血清胰岛素水平下降等因素有关     

应用神经肽Y Y5受体反义基因治疗肥胖大鼠高Leplin血症效果的探讨

目的：探讨神经肽Y Y5（NPY Y5）受体反义基因治疗对肥胖大鼠高Leptin血症的改善作用及其机制。方法：建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型，侧脑室插管后注射NPY Y5受体反义、正义、错义寡核苷酸或生理盐水，观察大鼠腹膜后与生殖器周围脂肪组织温重的变化，并采用ELISA双抗体夹心法测定血清Leptin水平、放免法测定血清胰岛素水平。结果：①高营养饮食诱导的肥胖模型大鼠血清Leptin水平、血清胰岛素水平、腹膜后脂肪湿重明显高于正常大鼠；②经NPY Y5受体反义寡核苷酸干预后，肥胖大鼠血清Leptin水平、血清胰岛素水平、腹膜后脂肪组织温重间均存在一定的正相关关系。结论：侧腔室注射NPY Y5受体反义寡核苷酸可显著改善肥胖大鼠的高Leptin血症，推测其机制可能与大鼠进食行为改变、腹膜后脂肪组织减少、血清胰岛素水平下降等因素有关。     

肥胖基因产物leptin与神经肽Y的研究进展

<正>LP是美国学者(1994年)首先发现被命名为leptin。来自希腊语leptos”(thin),其译法有许多,如:瘦因子、瘦蛋白、苗条因子、消脂素和肥胖蛋白等。LP由脂肪细胞合成分泌,反过来LP作用于下丘脑维持着体脂的稳定性。最近几项研究工作表明,LP调节能量代谢与体重的神经作用机制。其主要由两部分构成,一是melanocortin4 (MC4)受体系统;二是神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)递质系统。我们就最新有关LP和NPY之间关系的研究进展作一综述。     

β3肾上腺素能受体基因在肥胖大鼠神经肽Y Y5受体反义基因治疗中的作用

目的：探讨β3肾上腺素能受体基因在肥胖大鼠神经肽Y（NPY）Y5受体反义基因治疗中的作用。方法：建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型，侧脑室插管后注射NPY Y5受体反义、错义寡核苷酸或生理盐水，测定肥胖大鼠的腹腔内脂肪组织湿重与血脂，并采用RT-PCR技术检测腹膜后脂肪组织中β3肾上腺素能受体基因的表达水平。结果：①高营养饮食诱导下肥胖模型大鼠的腹腔脂肪组织湿重与血脂水平均明显高于正常大鼠；②经NPY Y5受体反义寡核苷酸干预后，肥胖大鼠的腹腔脂肪组织湿重与血脂水平均明显降低，腹膜后脂肪组织中β3肾上腺素能受体基因的表达水平则显著高于肥胖对照大鼠。结论：侧脑室注射NPY Y5受体反义寡核苷酸可显著降低肥胖大鼠的体脂、血脂，其机制可能与腹膜后脂肪组织β3肾上腺素能受体基因的表达上调有关。     

脂肪组织中TNF-α基因表达与神经肽Y Y5受体反义基因减肥降脂作用关系的研究

目的：探讨脂肪组织中TNF-α基因表达与神经肽Y（NPY）Y5受体反义基因减肥降脂作用的关系。方法：建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型，侧脑室插管后注射NPY Y5受体反义，错义寡核苷酸或生理盐水，观察肥胖大鼠腹腔内脂肪组织湿重与血脂的变化，采用RT－PCR技术检测腹膜后胎肪组织中TNF-α基因的表达水平。结果：（1）高营养饮食诱导下，肥胖大鼠腹腔内脂肪组织湿重与血脂水平均明显高于正常大鼠，腹膜后脂肪组织中TNF-α基因的表达水平则显著高于正常大鼠；（2）NPY Y5受体反义寡核苷酸干预后，肥胖大鼠腹腔内脂肪组织湿重与血脂水平均明显降低，腹膜后脂肪组织中TNF-α基因的表达水平则显著低于肥胖对照大鼠。结论：侧脑室注射NPY Y5受体反义寡核苷酸可显著低肥胖大鼠的体脂，血脂，其机制可能与腹膜后脂肪组织TNF-α基因的表达下调有关。     

神经肽Y-Y5受体反义基因治疗诱导大鼠脂肪细胞凋亡研究

目的：探讨神经肽Y-Y5受体反义基因治疗后正常SD大鼠减肥减重效应与外周白色脂肪细胞体积，数目变化的关系，方法：侧脑室插管，注射针对Y5受体编码起始区的反义，正义，错义寡聚脱氧核糖核酸及生理盐水，采用MPLAS-500多媒体彩色病理图分析系统计算平均脂肪细胞面积，基因组DNA提取物凝胶电泳检测脂肪细胞凋亡。RT-PCR分析凋亡相关基因Bcl-2,Bax表达的改变。结果：（1）Y5受体反义基因治疗后大鼠进食量与体重显降低，外周白色脂肪组织湿重与平均脂肪细胞面积明显减少；（2）脂肪组织基因组DNA提取物凝胶电泳出现凋亡特征性梯状条带；（3）凋亡相关基因Bcl-2表达下调，Bax表达上调。结论：平均脂肪细胞面积减小，脂肪细胞凋亡增加可能是Y5受体反义基因治疗减肥减重的重要原因。     

大鼠心脏中神经肽Y的Y1受体样免疫反应物质的定位

目的 为在细胞水平精确地确定神经肽Y（NPY）的Y1受体样免疫反应物质（-LI）在大鼠心脏中的分布。方法 用免疫组织化学方法对Y1受体-LI细胞进行了检测。结果 （1）一些心肌细胞含有Y1受体-LI,可见清晰的Y1受体免疫反应性（-Ir)条纹,此类细胞在心脏呈斑点状分布,接近外膜侧和室间隔的内膜侧分布较多,Y1受体-LI主要分布于心肌细胞膜、横小管膜和小泡上;（2）心脏内有Y1受体=LI的心内神经元,此类细胞有较长的突起呈离散分布,与Y1受体-LI心肌细胞或血管相邻,Y1受-LI神经元的外膜和胞质内有较强的Y1受体-LI,尤以其突起明显。结论 NPY对心脏作用的复杂性可能与Y1受体在心脏中多种细胞的广泛分布有关。     

大鼠脑血管内皮细胞中神经肽Y的Y1受体

目的 对脑血管内皮细胞中神经肽Ｙ（ＮＰＹ）的Ｙ１受体进行精确定位。方法 用针对ＮＰＹ的Ｙ１受体Ｃ末端肽片段的一种纯化的抗血清,用免疫组织化学方法和包埋前免疫金－银加强法观察Ｙ１受体在脑血管内皮细胞中的分布。结果 大脑皮质和髓质、丘脑、下岳脑、小脑和脑干的微血管有散在的含Ｙ１受体免疫反应的（－Ｉｒ）内皮细胞,孤立的脑底动脉及其分支的一些内皮细胞也具有Ｙ１受体免疫反应性（－ＬＩ）,Ｙ１受体－ＬＩ分布于     

针刺对肥胖大鼠食欲调节因子神经肽Y与瘦素的作用研究

目的观察针刺对肥胖大鼠食欲调节因子神经肽Y(NPY)、瘦素(leptin)的影响,探讨针灸减肥的细胞分子机制.方法用放射免疫法检测外周血和下丘脑NPY、Leptin的含量,用RT-PCR、 Northern Blot技术测定NPY、瘦素受体(OB-R)基因表达水平,观察针刺治疗前后肥胖大鼠体质量、Lee's指数和NPY、Leptin的含量及NPY、OB-R基因表达水平的变化.结果肥胖大鼠的体质量、Lee's指数和血清NPY、Leptin的含量及NPY基因表达明显高于正常大鼠,而下丘脑Leptin含量[(0.23±0.15)ng/mg]、OB-R基因表达(0.13±0.02)明显低于正常大鼠[(0.51±0.13)ng/mg,(0.21±0.03)],针刺治疗后,针刺组大鼠的体质量、Lee's指数和血清NPY、Leptin的含量及NPY基因表达显著下降,下丘脑Leptin含量[(0.58±0.08)ng/mg]、OB-R基因表达(0.18±0.02)明显回升.结论针刺对肥胖机体外周血及中枢NPY、Leptin具有良性调整作用,同时可促进OB-R基因表达和抑制NPY基因表达,这可能是针灸减肥的重要作用机制之一.     

针刺对肥胖大鼠食欲调节因子神经肽Y与瘦素的作用研究

目的观察针刺对肥胖大鼠食欲调节因子神经肽Y(NPY)、瘦素(leptin)的影响,探讨针灸减肥的细胞分子机制。方法用放射免疫法检测外周血和下丘脑NPY、Leptin的含量,用RTPCR、NorthernBlot技术测定NPY、瘦素受体(OBR)基因表达水平,观察针刺治疗前后肥胖大鼠体质量、Lee’s指数和NPY、Leptin的含量及NPY、OBR基因表达水平的变化。结果肥胖大鼠的体质量、Lee’s指数和血清NPY、Leptin的含量及NPY基因表达明显高于正常大鼠,而下丘脑Leptin含量[(0.23±0.15)ng/mg]、OBR基因表达(0.13±0.02)明显低于正常大鼠[(0.51±0.13)ng/mg,(0.21±0.03)],针刺治疗后,针刺组大鼠的体质量、Lee’s指数和血清NPY、Leptin的含量及NPY基因表达显著下降,下丘脑Leptin含量[(0.58±0.08)ng/mg]、OBR基因表达(0.18±0.02)明显回升。结论针刺对肥胖机体外周血及中枢NPY、Leptin具有良性调整作用,同时可促进OBR基因表达和抑制NPY基因表达,这可能是针灸减肥的重要作用机制之一。     

神经肽Y及其Y1受体在遗传性癫痫大鼠脑内的表达及意义

目的 探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马和颞叶皮质中神经肽Y(NPY)及其Y1受体(Y1R)的表达和分布.方法 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NPY和Y1R mRNA表达.ELISA试剂盒法检测TRM和Wistar大鼠海马和颞叶皮质中NPY浓度.Western blot检测Y1R蛋白表达.免疫荧光双标记法分析TRM及Wistar大鼠海马CA1、CA3和DG区以及颞叶皮质中NPY与Y1R的分布和共定位.结果 ELISA和RT-PCR结果均显示,TRM海马和颞叶皮质中NPY表达明显上调,与Wistar大鼠比较差异有统计学意义(P＜ 0.01).Western blot结果证实,TRM海马中Y1R蛋白表达明显低于Wistar大鼠,而在颞叶皮质中显著高于Wistar大鼠.免疫荧光分析发现NPY与Y1R在TRM海马CA1、CA3区神经元细胞和DG区颗粒细胞以及颞叶皮质神经元细胞中分布广泛,并存在共定位且主要定位在细胞膜上.结论 在TRM海马和颞叶皮质中,NPY及其Y1R表达出现异常变化,而这种异常表达可能与TRM癫痫发生机制有关.     

烫伤大鼠血浆神经肽Y含量的变化

为观察大鼠烫伤状态下血浆神经肽Y的含量变化 ,复制大鼠轻、中度和重度烫伤模型 ,分别测定其血浆中NPY的含量。结果 :大鼠烫伤后血浆NPY的含量较正常时明显升高 (P <0 .0 1) ,各组间差异非常显著 ,其升高的程度同烫伤的严重程度有密切关系。结果表明NPY在烫伤的病理生理改变中可能起重要作用。     

黄芪多糖对糖尿病大鼠神经肽Y及其Y_2受体表达的影响

目的：探讨黄芪多糖（APS）对糖尿病大鼠肾脏神经肽Y（NPY）及其Y2受体（Y2R）表达的影响。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组、糖尿病组和黄芪多糖干预组;采用放射免疫法检测血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率（UAER）、肾重/体重。结果：①APS干预能显著削弱糖尿病大鼠血糖、UAER和肾重/体重的增加;②APS干预后显著降低糖尿病大鼠血浆和肾皮质NPY水平（P〈0.01）;③APS干预组大鼠肾皮质NPYmRNA和Y2R蛋白表达显著低于糖尿病组（P〈0.05）。结论：APS对糖尿病肾病的保护作用机制可能与下调肾脏NPY及其Y2R的表达有关。     

黄芪多糖对糖尿病大鼠神经肽Y及其Y2受体表达的影响

目的:探讨黄芪多糖(APS)对糖尿病大鼠肾脏神经肽Y(NPY)及其Y2受体(Y2R)表达的影响。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组、糖尿病组和黄芪多糖干预组;采用放射免疫法检测血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾重/体重。结果:①APS干预能显著削弱糖尿病大鼠血糖、UAER和肾重/体重的增加;②APS干预后显著降低糖尿病大鼠血浆和肾皮质NPY水平(P<0.01);③APS干预组大鼠肾皮质NPYmRNA和Y2R蛋白表达显著低于糖尿病组(P<0.05)。结论:APS对糖尿病肾病的保护作用机制可能与下调肾脏NPY及其Y2R的表达有关。     

神经肽Y对培养的自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞的影响

应用细胞培养,~3(H-)胸腺嘧啶核苷和~3(H-)亮氨酸的掺入及细胞计数方法,研究缩血管物质神经肽Y(NPY)对血管平滑肌细胞生长的作用。结果发现,用神经肽Y作用48h后可促进离体培养的自发性高血压大鼠(SHR)动脉平滑肌细胞DNA合成增加28.0％,蛋白质合成增加54.6％,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);而细胞数无明显增加(P>0.05)。提示,NPY对培养的SHR动脉平滑肌细胞有促肥大效应;SHR血管壁上NPY分布密度增加是引起高血压时血管壁结构改变的重要因素之一。     

神经肽Y、维拉帕米对大鼠心肌细胞肥大的影响

通过测定培养的心肌细胞~3H-leucine(~3H-亮氨酸)掺入率和膜片钳全细胞记录方法记录Ca~(2 )电流(I_(ca)),研究神经肽Y(NPY)、维拉帕米对大鼠心肌细胞肥大的影响。结果:0.1μmol/L NPY促使培养的心肌细胞~3H-leucine掺入率增大,达(136.0±4.4)min~(-1),与对照组(91.0±4.O)min~(-1)相比,差异有显著性意义(p<0.01)。10nmol/L维拉帕米与NPY共同作用于心肌细胞24h,可使NPY促~3H-leucine掺入率增大的作用受到抑制(P<0.01)。NPY可显著增大心肌细胞I_(ca),为(12.0±3.1)pA,与对照组(5.5±2.4)pA比较,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:NPY促使培养的心肌细胞蛋白质合成率增大的作用可被维拉帕米阻断,而NPY增加细胞内游离钙,触发心肌蛋白质合成增加,可能是促进心肌肥大的机制之一。