胚胎源性PAF水平联合胚胎质量对体外受精-胚胎移植结局的预测价值

目的:探讨接受IVF/ICSI-ET治疗的不孕妇女Day3胚胎培养液中PAF水平对IVF结局的影响。方法:选取接受IVF/ICSI-ET助孕且当月移植新鲜胚胎的85例患者,按移植胚胎质量分为优质胚胎组(64例)和非优质胚胎组(21例)。于Day3收集移植胚胎的培养液并测定PAF含量。结果:移植优质胚胎组患者的植入率、临床妊娠率和活产率均明显高于移植非优质胚胎组,差异有统计学意义(P0.05)。优胚培养液中PAF水平明显高于非优胚培养液,差异有统计学意义(P0.05)。结论:优质胚胎及种植的胚胎可分泌更高水平的PAF,可通过联合胚胎质量和培养液中PAF水平挑选具有种植潜能的胚胎进行移植,从而改善IVF最终结局。     

废弃胚胎继续囊胚培养研究

目的:探讨体外受精治疗周期中废弃胚胎的体外发育潜能。方法:通过囊胚序贯培养法将无原核(0PN)、单个原核(1PN)、多个原核(≥3PN)和卵裂期发育延缓的2原核(2PN)废弃胚胎培养至囊胚期。比较不同来源胚胎囊胚形成情况和d3胚胎的卵裂球数、质量分级等;并利用废弃胚胎囊胚形成情况对体外受精妊娠结局进行预测。结果:共收集801个废弃胚胎,经序贯培养,形成209个囊胚(26.09%),其中58个为优质囊胚(27.75%)。1PN胚胎、0PN胚胎、d3卵裂球数为7-9-细胞胚胎、d3评分为Ⅰ-Ⅱ级胚胎以及卵裂球数为偶数的胚胎囊胚形成率较高(P均<0.05)。废弃胚胎中有囊胚形成者的临床妊娠率明显高于无囊胚形成者(P<0.05)。结论:废弃胚胎有不同程度的发育潜能,部分可发育为囊胚;特别是:①0PN和1PN胚胎;②d3的4-9-细胞胚胎,偶数卵裂球者更佳;③I级和Ⅱ级胚胎。     

非优质胚胎囊胚培养应用价值研究

目的探讨非优质胚胎囊胚培养是否为高效利用非优质胚胎的最佳选择,为制定更利于患者的助孕方案提供参考。方法选择2015年12月至2016年12月在中国医科大学附属盛京医院辅助生殖中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)的不孕患者308例。第3天无优质胚胎形成,按患者意愿分为两组:卵裂期移植组(196例)及囊胚培养组(112例)。比较两组累积临床妊娠率、种植率、流产率、治疗成本、移植周期。结果卵裂期移植组与囊胚培养组的种植率(26.4%vs.44.3%)、周期数[每例患者(1.12±0.37)个vs.(0.86±0.45)个]、治疗成本[每例患者(4433.67±2027.10)元vs.(4750.97±2067.06)元]比较,差异均有统计学意义(P0.05)。累积临床妊娠率(49.5%vs.44.6%)、流产率(4.1%vs.2.0%)比较,差异均无统计学意义(P0.05)。囊胚培养组具有较高的周期取消率。卵裂期移植组第3天胚胎数≥5枚的累积临床妊娠率显著高于囊胚培养组(81.6%vs.53.6%),差异有统计学意义(P0.05)。结论囊胚培养并不是高效利用非优质胚胎的最佳选择;卵裂期胚胎形态学评估预测胚胎植入潜能作用有限。     

囊胚和卵裂期胚胎的早期胚胎流产率比较

目的:探讨辅助生殖技术中囊胚培养是否能够筛选出更加具有发育潜能的胚胎,降低胚胎的早期流产率。方法:回顾性分析因单纯输卵管因素或/及男性因素接受囊胚期与第3日卵裂期胚胎移植获得妊娠后患者的流产率。总周期数1 673个,其中新鲜胚胎移植周期(fresh embryotransfer)932个(囊胚移植139个周期,卵裂期胚胎移植793个周期),冻融胚胎移植周期(frozen-thawed embryo transfer)741个(囊胚移植211个周期,卵裂期胚胎移植530个周期)。结果:Logistic回归分析表明无论新鲜胚胎移植组还是冻融胚胎移植组,囊胚期胚胎受孕后的早期胚胎流产率均低于第3日的卵裂期胚胎,并且囊胚移植和卵裂期胚胎移植的流产率均与妇女年龄呈正相关。结论:无论新鲜胚胎移植组还是冻融胚胎移植组,囊胚移植均比第3日卵裂期胚胎移植流产风险降低。年龄仍是影响移植后妊娠早期流产的重要因素。     

输卵管积液对小鼠胚胎体外发育的影响

目的 :了解输卵管积液是否具有胚治毒性。方法 :收集兔输卵管液和机械诱导的输卵管积液 ;小鼠超数排卵 ,收集 2 -细胞胚胎 ,随机分配到含有不同浓度输卵管积液、输卵管液 (正常对照 )和培养液 (空白对照 )中培养 ,观察并记录胚胎形态 ,同时测定新形成囊胚的细胞数和有丝分裂指数。结果 :1 0 0 %输卵管积液组囊胚形成率和胚胎孵化率均明显低于两对照组 (P<0 .0 0 1 ) ;而低浓度 (2 0 %和 1 0 % )积液组囊胚形成率和胚胎孵化率与两对照组相比 ,均无明显差异。各实验组囊胚的细胞数和有丝分裂指数均明显低于两对照组(P<0 .0 5)。结论 :机械诱导的输卵管积液 ,会影响早期种植前胚胎质量     

胚胎质量对其分泌生长因子的影响

目的 :研究小鼠胚胎质量对其分泌 EGF、TGF-β1、IGF- 的影响。方法 :取小鼠 2 -细胞胚胎 ,分为正常和异常两组 ,体外培养至囊胚期 ,对胚胎的形态学指标进行观测 ;检测胚胎培养液中 3种生长因子的含量并进行比较。结果 :正常组胚胎培养液中 EGF、IGF- 的含量显著高于异常组 ,且 EGF含量与胚胎生长发育的形态学指标呈正相关 ,但与着床指标相关不显著 ;IGF- 与胚胎生长发育及着床指标均呈正相关。TGF-β1的含量两组间差异无显著性。结论 :胚胎培养液中 EGF、IGF- 含量测定可反映胚胎生长发育能力 ,IGF- 还可反映胚胎着床能力 ,从而有利于了解胚胎功能状态及生存潜力 ,为胚胎质量的检测提供了一条新的思路。     

人类卵裂期胚胎sHLA-G表达与种植率和妊娠率的关系

目的:定量测定卵裂期胚胎可溶性人白细胞抗原G(sHLA-G)的表达,探讨sHLA-G分泌与胚胎种植率、妊娠率的关系。方法:收集40例体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的80份胚胎培养液样本,用ELISA法定量检测样本中sHLA-G的表达。结果:80份胚胎培养液样本中有35份sHLA-G表达阳性(≥2U/mL),阳性率43.8%,表达阳性组的平均含量为4.68±1.29U/mL;40例患者中27例至少1个移植胚胎培养液中sHLA-G表达阳性,19例妊娠,妊娠率70.4%(19/27),所有患者均移植2枚胚胎,种植率46.2%(25/54);sHLA-G表达阴性(<2U/mL)的13例患者中3例妊娠,妊娠率23.1%(3/13),种植率15.4%(4/26),两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:胚胎培养液中sHLA-G含量与胚胎种植率、妊娠率有关,可用于预测胚胎的发育潜能,将sHLA-G表达水平结合形态学评分可作为选择胚胎的一种临床工具。     

囊胚期与卵裂期胚胎培养及移植60例疗效比较

目的比较囊胚期与卵裂期胚胎培养及移植的疗效。方法2002年9月至2003年2月,中国医科大学第二医院采用序贯培养的方法,对30例(囊胚组)IVFET的患者进行囊胚培养及移植,并与30例(卵裂组)在胚胎卵裂期移植的IVFET患者作配对研究。囊胚组移植胚胎1～2枚,对照组移植胚胎3枚。比较两组的胚胎种植率、临床妊娠率及多胎妊娠率。结果囊胚组的胚胎种植率高于卵裂组(56.76%、17.78%),差异有显著性意义(χ2=9.44,P<0.05)。囊胚组的临床妊娠率高于卵裂组(59.29%、26.70%),差异有显著性意义(χ2=4.37,P<0.05)。囊胚组与卵裂组多胎妊娠率分别为31.25%、62.50%。结论囊胚期胚胎培养及移植的疗效优于卵裂期。     

干细胞条件培养液对小鼠体外成熟卵母细胞发育潜能的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)条件培养液对小鼠体外成熟卵母细胞发育潜能的影响。方法:分离、培养小鼠MSCs,获得MSCs条件培养液;收集4~6周小鼠生发泡期(GV)卵母细胞,在MSCs条件培养液中体外成熟(IVM);同时部分小鼠促排处理,收集体内成熟卵母细胞;体外受精(IVF)后,比较受精率、4-细胞形成率及囊胚形成率差异;Hoechst33342染色后观察内细胞团(ICM)和滋养层细胞形成情况,计数内细胞团数。结果:IVM卵母细胞IVF后的受精率、4-细胞形成率和囊胚形成率及囊胚内细胞总数与体内成熟组比较,无显著差异(P0.05);IVM组各时期的胚胎形态正常,囊胚内细胞染色后的荧光图像与体内成熟组基本一致。结论:MSCs条件培养液能保持小鼠IVM卵母细胞良好的质量和发育潜能,是一种较理想的IVM培养体系。     

体外受精胚胎细胞数量和碎片比例对囊胚形成的影响

目的:探讨体外受精(IVF)周期中胚胎细胞数量和碎片比例对囊胚形成的影响。方法:回顾性分析2 404个IVF周期患者的13 037个进行囊胚培养的胚胎。根据第3日细胞数量将胚胎分为2~3-细胞组(2C~3C)、4-细胞组(4C)、5-细胞组(5C)、6-细胞组(6C)、7-细胞组(7C)、8-细胞组(8C)、9-细胞组(9C)、10-细胞组(10C)、11-细胞组(11C)、12-细胞组(12C)、≥13-细胞组(≥13C),分析囊胚培养细胞数量和碎片比例与囊胚形成的关系。结果:碎片为1~2级的胚胎,8C组和≥13C组囊胚形成率明显高于其他各组(P0.05);7C、9C~12C组之间囊胚形成率无统计学差异(P0.05)。碎片为3级的胚胎,8C组的囊胚形成率高于其他各组(P0.05),且与碎片1~2级7C、9C~12C组的胚胎相比无统计学差异(P0.05);9C组囊胚形成率高于7C组,且差异显著(P0.05)。结论:第3日8C胚胎的发育潜能是最优的,可适当放宽对8C碎片的评估;随着碎片比例增大可减弱胚胎的发育潜能。     

不同精子来源及授精方式对剩余胚胎继续囊胚培养结局的影响

目的:探讨不同精子来源及不同授精方式对胚胎继续发育能力的影响。方法:分析499例患者499个取卵周期剩余胚胎继续培养形成囊胚的情况,按精子来源不同分为供精IVF(D-IVF)组和夫精IVF(H-IVF)组,按授精方式不同分为IVF组和ICSI组,ICSI组按精子来源分为新鲜精液组、附睾精子和睾丸精子组,比较不同精子来源及授精方式获得剩余胚胎的囊胚形成率、胚胎利用率和无囊胚移植率。结果:① D-IVF组和H-IVF组受精率、卵裂率、优质胚胎率、第3日和第5日胚胎种植率、临床妊娠率和流产率均无统计学差异(P0.05),组间剩余胚胎囊胚形成率、胚胎利用率和无囊胚移植率亦无统计学差异(P0.05);②ICSI组与IVF组比较,其受精率较高(P0.05),但优质胚胎率显著下降,有统计学差异(55.11%vs 61.30%,P0.05),组间第3日卵裂期胚胎和剩余胚胎囊胚种植率、临床妊娠率无统计学差异(P0.05),但ICSI组与IVF组比较,其剩余胚胎囊胚形成率、胚胎利用率稍低,无囊胚移植率较IVF组稍高,差异有统计学意义(56.13%vs 65.32%,48.18%vs 55.39%,21.68%vs 13.20%,P0.05)。③新鲜精液组的优质胚胎率、胚胎利用率显著低于附睾精子和睾丸精子组(P0.05),各组囊胚移植的种植率和临床妊娠率无统计学差异(P0.05)。结论:D-IVF可获得H-IVF相似的结局,其剩余胚胎都有较高的发育潜能,ICSI获得的剩余胚胎发育潜能低于IVF组。附睾精子和睾丸精子ICSI后获得的胚胎比新鲜精液精子ICSI后胚胎发育潜能高。针对不同的授精方式可能需要制定相应的剩余胚胎囊胚培养标准。     

融合期胚胎和囊胚移植的探讨

目的：探讨融合期胚胎和囊胚单胚胎移植的可行性.方法：选取苏北人民医院生殖医学中心冷冻胚胎解冻移植231个周期的患者为研究对象,比较卵裂期胚胎移植组、融合期胚胎移植组和囊胚移植组的胚胎种植率、临床妊娠率以及多胎的发生率.结果：融合期胚胎移植组平均移植胚胎数低于卵裂期胚胎移植组,差异有统计学意义[（1.35±0.50） 个vs.（1.73±0.59） 个,t=-4.902,P＜0.001],但其胚胎种植率和临床妊娠率高于卵裂期胚胎移植组,差异均有统计学意义（49.58% vs.23.00%,χ2=24.567,P＜0.001;53.41% vs.34.15%,χ2=7.805,P=0.005）;囊胚移植组胚胎种植率高于卵裂期胚胎移植组,差异有统计学意义（46.88% vs.23.00%,χ2=8.214,P=0.004）;3组间多胎发生率差异无统计学意义（χ2=2.231,P=0.328）.结论：进行融合期胚胎或囊胚移植可获得较高的胚胎种植率和周期移植妊娠率,降低多胎率,尤其应用于单胚胎移植有重要意义.     

人废弃胚胎单卵裂球体外发育潜能研究

目的:探讨体外受精治疗周期废弃胚胎来源的单卵裂球体外发育潜能。方法:收集21例患者授精培养后第3日不适于移植和冷冻的废弃胚胎共60枚,其中2-细胞期胚胎10枚,3-细胞期胚胎8枚,4-细胞期胚胎26枚,5-细胞期胚胎12枚,6-细胞期胚胎4枚。采用化学法去除透明带并分割胚胎获得单卵裂球,继续体外培养,每24h观察卵裂球发育情况。结果:60枚胚胎共获得229枚单卵裂球。以分割取得单卵裂球日作为第1日(d1),继续培养,其发育似乎遵循d2分裂、d3紧密化、d4出现囊胚腔、d5扩张,延续分割前的程序,但提前进入紧密化期,致使囊胚细胞数少,囊胚期体积亦比正常胚胎小。其中,4-细胞期废弃胚胎来源的卵裂球分裂率、紧密化率、囊胚形成率显著高于来自其它细胞数的单卵裂球(P<0.05),且其大部分内细胞团(ICM)细胞的碱性磷酸酶(AKP)表达呈阳性。结论:废弃胚胎来源的单卵裂球能在体外继续发育至囊胚,发育潜能与供体胚胎发育质量密切相关,其发育似乎延续原有供体卵裂球的节律,而形成囊胚所需时间明显缩短,细胞数亦明显减少,但囊胚ICM细胞显示AKP阳性,深信其利用价值会得到进一步证实。     

可溶性人类白细胞抗原G与胚胎发育关系的初步研究

目的:探讨卵裂期胚胎可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)表达与胚胎发育和种植的关系。方法:收集受精后第2日和第3日的单胚胎培养液300份,应用流式微球技术(CBA)检测其中sHLAG的含量,并设置阴性对照(不含有胚胎的胚胎培养上清液)。妊娠组和未妊娠组移植胚胎各100枚。A组移植胚胎均为sHLA-G阳性,B组移植胚胎至少1枚为sHLA-G阴性,C组移植胚胎均为sHLAG阴性。分析单胚胎培养液sHLA-G的表达与临床妊娠率和种植率的关系。结果:1妊娠组第3日胚胎培养液中平均sHLA-G水平明显高于未妊娠组(P0.05)。2妊娠组第3日平均sHLA-G水平高于第2日(P0.05),但未妊娠组第3日平均sHLA-G水平升高不明显(P0.05)。3A组种植率最高,其次是B组,C组最低(P0.05)。4优质胚胎(≥6-细胞Ⅱ级)的平均sHLA-G水平妊娠组明显高于未妊娠组(P0.05)。结论:胚胎培养液中sHLA-G的表达水平与胚胎的发育潜能及其种植能力间存在正相关关系。若将第3日sHLA-G浓度(尤其是第2日及第3日sHLA-G浓度变化情况)和胚胎形态学参数评估联合作为选择最优移植胚胎的标准,有望为单胚胎移植提供参考数据。     

人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻妊娠结局分析

目的探讨人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局。方法回顾性分析434个卵裂期胚胎（卵裂组）和102个囊胚解冻周期（囊胚组）的临床资料,比较采用玻璃化冷冻解冻后的复苏率及妊娠结局。结果囊胚组患者的临床妊娠率和胚胎种植率分别为63.73%（65/102）和45.79%（87/190）,卵裂组分别为42.82%（185/432）和24.17%（241/997）,两组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）;囊胚组患者的复苏率、流产率和异位妊娠率分别为98.45%（190/193）、12.31%（8/65）和0（0/65）,卵裂组分别为97.55%（997/1 022）、13.51%（25/185）和2.16%（4/185）,两组比较,差异均无统计学意义（P均〉0.05）。卵裂组中,卵裂球完全存活患者的临床妊娠率和胚胎种植率分别为44.62%（170/381）和25.57%（224/876）,非完全存活者分别为29.41%（15/51）和14.05%（17/121）,两组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。结论囊胚解冻移植的妊娠结局优于卵裂期胚胎,卵裂期胚胎解冻后胚胎的完整性影响胚胎种植。     

移植无原核胚胎出生健康子代

目的:观察无原核(PN)胚胎的发生率、影响因素及移植0PN胚胎周期的临床治疗结局。方法:回顾性分析4 424个IVF-ET周期移植0PN来源胚胎的结局。结果:0PN胚胎的发生率为11.3%。女方的年龄、获卵数及优质胚胎率与0PN的发生率相关。70个周期移植了112个0PN来源的卵裂期胚胎,获得的临床妊娠率为24.3%(17/70),植入率为17.0%(19/112),流产率为11.8%(2/17)。1例死产。13个周期活产13个健康子代,未见畸形的发生。对0PN来源的囊胚进行复苏周期移植,可获得与2PN囊胚相似的临床妊娠率及植入率,但流产率较高,差异有统计学意义。结论:IVF周期中,含有0PN优质胚胎的周期可能有较好的临床治疗结局。形态正常的0PN胚胎有较好的胚胎发育潜能,在无2PN胚胎的情况下,可考虑移植0PN来源胚胎。     

异常受精胚胎临床利用价值探讨

目的:探讨常规体外受精(IVF)和卵胞浆内单精子注射(ICSI)周期中异常受精胚胎的临床利用价值。方法:回顾性分析2013年4月至2015年6月在白求恩国际和平医院生殖中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗(包括常规IVF和ICSI)的955个周期的实验室和临床数据。结果:ICSI周期双原核(2 PN)受精率显著高于IVF周期2 PN受精率(88.20%vs 72.04%,P0.01),而ICSI周期的未见原核(0 PN)、单原核(1 PN)及多原核受精率均低于IVF周期(P0.01),差异有统计学意义。第5天(D5)0 PN的囊胚形成率和可利用囊胚率显著高于2 PN和1 PN组(P0.01)。新鲜移植周期和冻融卵裂胚移植周期,0 PN组种植率和临床妊娠率显著低于2 PN组(P0.01),但是冻融囊胚移植周期,0 PN组的种植率和临床妊娠率与2 PN组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:IVF/ICSI周期中没有2 PN胚胎可供选择移植时,可选择0 PN胚胎,囊胚培养是合理利用异常受精胚胎的有效手段。     

Ⅱ、Ⅲ级胚胎活检后体外发育能力的研究

目的:探讨形态学评价质量较差的胚胎有无活检价值,活检后能否正常发育。方法: 160个IVF和ICSI周期剩余的Ⅱ级、Ⅲ级胚胎,来自同一例患者分级相同的胚胎配对,随机分为实验组和对照组。实验组采用喷酸透明带打孔法取出1个卵裂球,对照组继续培养,对比两组囊胚的形成率、孵化率、囊胚细胞总数,并观察不同形态学特征的胚胎活检后的发育情况。结果:活检组胚胎囊胚形成率,囊胚总细胞数与对照组相比没有差别,但囊胚第6天孵出率活检组明显高于对照组;Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率、第6天孵化率、囊胚总细胞数均明显低于Ⅱ级胚胎;活检前细胞数少于7个的胚胎,活检后发育能力显著降低。结论:活检不影响胚胎体外继续发育的能力;Ⅱ级胚胎活检后具有较好的发育潜力,Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率较低,即使形成囊胚,细胞数也较少,不能正常发育;第3天活检时具有7个或7个以上卵裂球的胚胎具有较好的继续发育能力。     

囊胚期胚胎培养和移植

常规体外受精一胚胎移植过程胚胎种植率很少超过 2 5 % ,妊娠率国内报道为 15 %～ 38% ,国外报道为 2 0～ 47% ,采用序贯培养一囊胚移植的方法可以提高种植率和妊娠率。综合各生殖中心的报道 ,序贯培养的囊胚形成率为 35 %～ 70 % ,囊胚种植率为 45 %～ 5 0 % ,妊娠率达到 6 3%～ 71%。囊胚期胚胎培养和移植通过无创手段选择最具生命力的胚胎进行移植 ,淘汰具有遗传缺陷的胚胎 ,由于减少了移植胚胎数 ,降低了多胎妊娠的发生率。     

授精第3日发育迟缓胚胎的冷冻价值及可行性方案探讨

目的:探讨授精第3日发育迟缓(5~6-细胞)的胚胎冷冻价值及如何提高其利用价值的可行性方案。方法:回顾性分析进行冷冻复苏移植第3日发育迟缓胚胎的124个周期的临床资料,根据不同的复苏移植方案和培养条件,分为第3日冷冻,复苏移植周期提前1 d解冻者(A组,32个周期)、解冻后培养至囊胚再移植组(B组,62个周期)、当日解冻组(C组,30个周期),再与同期新鲜周期第3日发育迟缓行囊胚培养再冷冻复苏囊胚(复苏囊胚组,D组)的58个周期比较。结果:1各组在女方年龄、不孕年限、排卵日子宫内膜厚度、移植日激素水平等方面无统计学差异(P0.05)。2D组的周期临床妊娠率(55.4%)和种植率(42.2%)都高于其他组(P0.05)。A组和B组的周期取消率(12.5%和35.5%)均高于其他组(P0.05),B组的临床妊娠率(40.0%)高于C组(33.7%)(P0.05),但与A组(39.3%)比较无统计学差异(P0.05)。结论:1授精第3日5~6-细胞胚胎可以通过新鲜周期延长体外培养时间至第6日,获得囊胚后再进行冷冻复苏,可以得到更好的临床结局。2对于胚胎少的患者,可以在患者知情同意下选择5~6-细胞胚胎第3日直接冷冻,复苏周期提前解冻来挑选具有发育潜能的胚胎进行移植。