家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽促K562细胞凋亡作用及其机制研究

目的观察家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽对K562细胞核和线粒体膜电位及K562细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响,进而探讨家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽是否可以影响线粒体膜电位及促进K562细胞凋亡。方法首先采用Hoechst33258荧光标记法,将家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞,用荧光显微镜检测K562细胞核荧光强度的变化;其次采用荧光探针罗丹明123标记K562细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察K562细胞中罗丹明123荧光强度,以细胞内荧光强度表示线粒体膜电位大小;最后用caspase-3检测试剂盒和酶标仪测定K562细胞caspase-3的含量。结果采用Hoechst33258荧光标记法,用荧光显微镜观察到家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞后部分细胞核的荧光强度增强,说明其可以引起K562细胞发生凋亡;用罗丹明123标记,激光共聚焦显微镜观察发现,家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用组的K562细胞荧光强度值明显低于对照组(t1=21.30,t2=196.23,P<0.05),说明家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽可以使K562细胞线粒体膜电位降低;峰5、峰8组分作用组caspase-3的含量明显高于对照组(t1=146.92,t2=189.56,P<0.05),说明3龄幼虫抗肿瘤肽可以促进K562细胞发生凋亡。结论家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽峰5、峰8组分对K562细胞核具有损伤作用,可以引起K562细胞发生凋亡,作用机制是通过降低K562细胞线粒体膜电位,激活caspase-3,扰乱其生理功能,促使其凋亡。     

家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞K562作用的扫描电镜观察

目的观察K562细胞在昆虫抗菌肽作用下细胞表面的变化,探讨抗菌肽杀伤肿瘤细胞的机制。方法用针刺对家蝇幼虫感染大肠杆菌,诱导其产生抗菌肽,然后提取该抗菌肽,作用于K562细胞。36 h后用扫描电镜(SEM)观察其细胞表面变化。结果K562细胞表面出现大小不等的孔洞。结论抗菌肽杀伤肿瘤细胞可以从细胞表面穿孔来进行。     

家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果观察

目的研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果。方法针刺感染大肠杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经研磨、离心、层析等步骤提取其抗菌肽,所提取的抗菌肽作用于肿瘤细胞K562、Daudi、109及T24,以流式细胞仪检测其作用效果。结果抗菌肽对4种肿瘤细胞的有效杀伤力M1均在85%以上。结论家蝇幼虫抗菌肽可作为潜在的抗肿瘤药物开发。     

家蝇蛹抗菌肽对肿瘤细胞膜破坏作用

目的观察4种肿瘤细胞在家蝇蛹抗菌肽作用下细胞表面的变化,探讨抗菌肽杀伤肿瘤细胞的机制。方法用针刺对家蝇幼虫感染大肠埃希菌,诱导其产生抗菌肽,然后至蛹期提取该抗菌肽并作用于4种肿瘤细胞（人髓样白血病细胞株K562;人淋巴瘤细胞株Daudi;人食管癌细胞株Eca109;人膀胱癌细胞株T24）。36 h后用扫描电镜观察其细胞表面变化。结果4种肿瘤细胞表面出现大小不等的创伤,且大部分创伤为孔洞型。结论抗菌肽杀伤肿瘤细胞可能是从细胞表面穿孔产生作用     

昆虫抗菌肽两种提取方法的比较

目的 检测用两种不同方法提取的昆虫抗菌肽对作用细胞的影响。方法 对家蝇幼虫采用针刺感染大肠埃希菌诱导产生抗菌肽，经研磨、层析提取其抗菌肽，并通过流式细胞仪测定用生理盐水或磷酸缓冲液这两种方法提取的抗菌肽对癌细胞和正常细胞的影响。结果 两种方法处理的家蝇幼虫抗菌肽对人髓样白血病细胞（K562）均有杀伤作用；而对正常人淋巴细胞，生理盐水处理的抗菌肽比缓冲液伤害作用小。结论 缓冲液可能对细胞造成高渗作用促进细胞死亡；而生理盐水无此作用，对细胞不造成伤害。     

细胞浓度对穿孔 K562细胞活力和膜电压的影响

目的研究细胞浓度变化对穿孔K562细胞活力和膜电压的影响.方法在相同的强脉冲电场作用下,用长春新碱处理不同浓度的人红白血病K562细胞,用电穿孔仪对其进行电穿孔处理,然后检测作用后的细胞活力.结果不同浓度的K562细胞活力不同,且活力比和细胞浓度呈非线性关系.实验结果也间接表明在不同细胞浓度下,穿孔细胞膜膜电压变化是不相同的.结论细胞浓度是影响K562细胞活力和膜电压变化的一个重要因素.     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌抑制作用

目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽的抗菌机制.方法 利用透射电镜、十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及流式细胞仪等技术初步探索了家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌作用机理.结果 经20、40及80 μg/mL抗菌肽作用后,大肠埃希菌液的A570值分别增加了0.170、0.032、-0.030,对照组增加了0.363;菌体外胞内酶含量各组分别增加0.148、0.230、0.324,对照组无变化;电镜观察显示抗菌肽可使菌体皱缩,细胞内容物外泄;SDS-PAGE检测发现,作用后菌体的某些蛋白条带浓度降低或消失,有新的条带出现;流式细胞仪显示抗菌肽作用后处于细胞周期中复制期(R期)的细菌量只占总数的11.89％,而对照组占45.25％,比实验组高33％.结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽可通过改变细菌细胞膜的通透性,抑制细菌某些蛋白的合成等发挥抗菌作用.     

家蝇幼虫体外分泌型溶菌酶表达及分泌物抗菌抗炎活性

目的探讨家蝇幼虫体外分泌型溶菌酶的表达及分泌物抗菌抗炎活性。方法收集家蝇3日龄幼虫体外分泌物,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验检测溶菌酶表达,并采用比浊法测定溶菌酶含量;用超滤管对分泌物进行纯化,得到分子量为10～30 kDa组分并进行抑菌曲线测定和细胞水平抗炎活性筛选。结果家蝇幼虫体外分泌物中存在溶菌酶,含量为(0.432±0.01)μg/mg;家蝇幼虫体外分泌物中的10～30 kDa组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长均存在抑制作用;与对照组[(0.42±0.02)μmol/L]比较,脂多糖组RAW264.7细胞中NO含量[(15.34±2.05)μmol/L]明显升高,分泌物组RAW264.7细胞中NO含量[(7.32±0.62)μmol/L]明显下降,表明家蝇幼虫体外分泌物中的10～30 kDa组分具有一定的抗炎功效。结论家蝇幼虫体外分泌物10～30 kDa组分中含有溶菌酶,具有抗菌抗炎活性。     

黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响及与羟基脲对细胞增殖抑制的比较

目的观察黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响;比较该抗菌肽与羟基脲对K562细胞的增殖抑制作用。方法用流式细胞仪检测黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响。黄粉虫抗菌肽与羟基脲分别设置5个浓度组,用MTT比色法分别求出2种药物不同浓度对K562的抑制率,根据浓度和抑制率用SPSS软件求出回归方程和IC50。结果细胞周期G0/G1期和G2/M期细胞比例增加,S期细胞比例下降。其中只有G0/G1期和S期与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.01）。说明抗菌肽可使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而抑制S期DNA的合成。抗菌肽和羟基脲的IC50分别为29.98和3644.45μg/ml。结论抗菌肽可通过影响细胞周期来发挥抗K562细胞的作用。抗菌肽明显优于羟基脲对K562细胞的增殖抑制作用,有较好的应用前景。     

家蝇幼虫抗弓形虫抗菌肽分离纯化

目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化具有抗弓形虫作用的抗菌肽.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,将家蝇幼虫抗菌肽进行分离纯化,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和血细胞计数法筛选对弓形虫速殖子有抑制作用的抗菌肽.结果 经Resource S阳离子柱和Superdex G75凝胶柱层析后,筛选出2种对弓形虫速殖子有杀伤作用的抗菌肽.结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,而且不止一种,但其效果有所不同.     

家蝇成虫抗菌肽对4种肿瘤细胞的作用观察

目的观察家蝇成虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果。方法针刺感染大肠埃希菌诱导家蝇成虫产生抗菌肽,经研磨、离心、层析等步骤提取其抗菌肽,将其作用于肿瘤细胞109、K562、Daudi及T24,以流式细胞仪检测其作用效果。结果该抗菌肽对4种肿瘤细胞的有效杀伤力M1均在85%以上。结论家蝇成虫抗菌肽可作为潜在的抗肿瘤药物开发。     

黄粉虫幼虫抗肿瘤细胞K562抗菌肽的分离纯化

目的从黄粉虫幼虫体内分离纯化具有抗肿瘤细胞K562的抗菌肽。方法通过超声诱导黄粉虫幼虫大量表达抗菌肽。然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化黄粉虫幼虫抗菌肽,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法和光镜观察法筛选对K562有杀伤作用的抗菌肽。结果离心上清液上样固相萃取柱,经10％、30％、80％的乙腈水溶液洗脱,只有80％的乙腈水溶液分离组分有活性（P〈O．01）。该活性组分经反相高效液相色谱纯化后分离出5个具有抗肿瘤活性的峰物质,这5个峰活性都较强（P〈0．01）,其中峰9、峰4能初步确定为抗菌肽,其他3种有待于进一步的实验证明。结论黄粉虫幼虫体内存在抗肿瘤细胞K562的抗菌肽和抗菌物质,而且不止一种。     

舍蝇抗菌肽的提取及其对肿瘤细胞生长的抑制作用

目的：研究含蝇抗菌肽的提取对肿瘤细胞生长的抑制作用；方法：对舍蝇幼虫采用针刺损伤及金黄色葡萄球菌感染诱导方法，并通过研磨、加热、阳离子交换柱层析及Sephadex G—50葡聚糖凝胶柱层析等步骤提取抗菌肽；结果：经SDS—PAGE电泳分离到2条带，分子量分别为4kD，9．6kD；结论：提取的舍蝇抗菌肽能有效地抑制人胃癌细胞MGC80—3和BGC—823，人乳腺癌细胞MCF—7及人肺癌细胞SPC—A—1的体外增殖，并且呈浓度依赖关系。     

家蝇抗菌肽对弓形虫的抑制作用研究

目的研究家蝇抗菌肽对弓形虫速殖子的抑制作用。方法对家蝇幼虫针刺感染细菌，诱导其产生抗菌肽，以离心法提取其血淋巴中所含的抗菌肽。结果家蝇血淋巴中抗菌肽有杀伤弓形虫速殖子的作用。结论提取的血淋巴中含有抑制弓形虫的成分。     

感染大肠埃希菌后家蝇幼虫血细胞来源的初步研究

目的探讨家蝇3龄幼虫感染大肠埃希菌后大量增加的血细胞来源。方法观察对照组及感染大肠埃希菌后4、8、16h组家蝇3龄幼虫血淋巴的血细胞总数（THC）变化;用流式细胞仪检测感染前后各组家蝇3龄幼虫血细胞周期的变化。结果感染后4、8、16h组THC与对照组比较均有显著增加,感染后8 h组THC最高,达（38 920±2274）/μl;对照组幼虫血细胞增殖指数（PI）为15.98%;感染后各组G2/M期和S期细胞增多,PI值均明显增加;感染后4 h组PI值最高,达44.34%。结论家蝇幼虫血细胞自身具有分裂能力,是其造血功能的重要补充。