抗T4单克隆抗体的制备和特性鉴定

采用T4 BSA联结物免疫BALB/c小鼠 ,通过杂交瘤技术 ,获得 4株稳定分泌高特异性抗T4单克隆抗体的杂交瘤细胞系 ,并制取到含高效价单克隆抗体的腹水。放免分析结果显示 ,所得的 4株单抗对T4均表现高亲和性和高特异性 :Ka>10 8L/Mol,与T2交叉反应未测出 ,与T3交叉反应 <0 4 0 % ,与rT3交叉反应为 <0 2 2 %。采用T4 10D11株单抗替代多抗应用于放免药盒 (RIA )与商品药盒进行比较 ,同时测定 96例临床血样 ,结果表明 ,两者之间有极显著的正相关 (Y =1 12X 3 15 ,r=0 985 0 ) ,为这些单抗的应用提供了基础     

抗人DAF单克隆抗体的制备及鉴定

以初步纯化的人红细胞膜ＤＡＦ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,成功地获得３株（ＤＧ３、ＤＧ９和ＤＡ１１）抗人ＤＡＦ单克隆抗体。经间接ＥＬＩＳＡ测定,３株杂交瘤细胞培养上清及腹水的抗体效价分别为１０－３～１０－４及１０－６～１０－７;３株单抗的重链为小鼠ＩｇＧ１亚类,轻链为κ型。结合还原条件下的免疫印迹实验及３株单抗对ＤＡＦ促衰变活性的抑制作用,推测ＤＧ９识别的抗原表位为ＳＣＲ１,而ＤＧ３和ＤＡ１１为ＳＣＲ２至ＳＣＲ４。     

抗人肺鳞癌单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备和鉴定抗人肺鳞癌单克隆抗体(mAb),为肺癌的早期诊断和靶向治疗提供候选抗体药物及为肺癌抗原的筛选提供工具。方法:用肺癌细胞株YTMLC-90做抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,间接ELISA和有限稀释法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞获得mAb。染色体计数法鉴定杂交瘤细胞,并进行mAb同种型鉴定;对细胞培养上清液和腹水中的mAb采用间接ELISA法进行初步特异性检测及效价测定;采用Western blot法鉴定其与不同组织抗原结合活性;采用免疫组化染色法鉴定其在肺癌组织中的分布。结果:筛选出5株可稳定分泌抗肺鳞癌mAb的杂交瘤细胞株E2、F9、E11、D5和C6,分泌的抗体均为IgG1亚类,κ亚型。C6染色体数目为89～112条,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶1 004和1∶104,ELSA和Western blot结果显示其能特异性与肺癌细胞结合,未见与其他高发癌组织和正常组织结合。结论:成功地制备了能够特异识别肺癌组织的mAb。     

两株鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的: 制备鼠抗人PD-1单克隆抗体(mAb)及鉴定其生物学特性.方法: 以基因转染细胞PD-1/L929为免疫原, 免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合, 经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析, 筛选分泌鼠抗人PD-1分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、 Western blot、竞争结合抑制试验及肿瘤细胞株测定等方法对mAb进行生物学特性鉴定.结果: 获得了2株持续稳定分泌鼠抗人PD-1mAb的杂交瘤细胞株, 命名为1F2和5F10.对其生物学特性的鉴定结果表明, 均为条带相对分子质量在(Mr)55 000左右的免疫球蛋白, 具有不同的PD-1结合位点;1F2 mAb可识别SKHep-1和7721细胞株表面的PD-1分子, 而5F10可识别Raji细胞株的PD-1分子.结论: 成功获得了2株鼠抗人PD-1杂交瘤及其分泌的mAb.     

抗ICAM-1单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:制备有生物学活性的抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:以纯品ICAM-1为抗原免疫BALB/c小鼠4次。采用杂交瘤技术,经3次亚克隆筛选稳定分泌抗人ICAM-1 mAb的杂交瘤细胞株。采用动物体内诱生的方法大量制备mAb。以protein G对其进行纯化后,用间接ELISA法测定mAb的效价并鉴定其Ig亚类。用Western blot鉴定mAb的特异性。结果:筛选出4株可稳定分泌抗人ICAM-1 mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为B9株、F1株、C11株和D6株。4株mAb的Ig亚类均为IgG1。4株mAb培养上清的效价均为1∶1 000;腹水的效价B9株与D6株为1∶2×105,F1株与C11株为1∶4×105。纯化后mAb的蛋白浓度为1.2 g/L,均可与ICAM-1特异性结合。结论:成功制备出效价高、特异性良好的4株抗ICAM-1 mAb,为进一步研究ICAM-1的生物学功能和临床应用奠定了基础。     

抗硝基酪氨酸单克隆抗体的制备与鉴定

硝基酪氨酸 (nitrotyrosine ,NT)为活性氮 (reactivenitrogenspecies,RNS)对蛋白酪氨酸残基氧化修饰的产物 ,是体内RNS形成的重要生物标记物[1,2 ] 。目前 ,NT的检测主要采用HPLC、HPLC EC及GC MS等方法 ,需要大型仪器和专业人员操作 ,并需进行样品的预处理 ,费时费力 ;而且样品的处理过程还会人为地产生NT ,影响检测结果的准确性[3 ,4] 。免疫学技术为检测NT开辟了一条新的途径 ,将NT与载体蛋白的连接物作为免疫原 ,制备针对NT的mAb ,然后用于ELISA、Westernblot、免疫组化染色和免疫电镜研究。用ELISA法定量测定NT时 ,…     

抗阿莫西林单克隆抗体的制备、纯化与鉴定

目的: 制备抗阿莫西林小鼠单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其特性,为快速检测动物原性食品中残留的阿莫西林提供基础.方法: 将小分子的阿莫西林交联在大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)上,KLH交联物用于免疫BALB/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,通过融合,筛选制备抗阿莫西林mAb,并通过ELISA方法测定抗体亲和力,检测单抗与氨苄西林和头孢唑啉的交叉反应.结果: 通过ELISA筛选出5株可以稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,其亚型4株为IgG1/κ,1株为IgG2a/κ.亲和力在2.1×109~4.7×109.这5株mAb与氨苄西林的交叉反应为100%,与头孢唑啉没有交叉反应.结论: 获得5株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗阿莫西林抗体的杂交瘤细胞株,同时因为与氨苄西林的交叉反应为100%,这使得进一步研发动物源性食品中阿莫西林和氨苄西林残留的免疫检测技术和产品成为可能.     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)的单克隆抗体(mAb).方法:利用从人工流产刮宫物中提取的HCG免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞同NS-1小鼠骨髓瘤细胞融合, 采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞株, 并对mAb的亚型、亲和力及特异性进行鉴定.结果:共获得26株能稳定分泌抗HCG特异性mAb的杂交瘤细胞株.mAb的亚类均为IgG1, 亲和力介于1.14×108～2.0×108 mol/L之间, 其中4株mAb与HCG的β亚基有较强的反应, 而与黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)均无交叉反应.结论:成功获得4株鼠抗人HCG mAb的杂交瘤细胞株, 其分泌的mAb能特异识别人HCG的β亚基, 可用于早孕、肿瘤等诊断的进一步研究.     

阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞对细胞骨架的影响

目的观察阪崎杆菌侵袭人脑血管内皮细胞后,细胞骨架中微丝和微管的变化。方法用荧光染色技术观察阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞后,细胞骨架中的微丝和微管的变化,观察微丝和微管的抑制剂对阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞的影响。结果阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞后,细胞骨架结构发生明显的改变,微丝和微管部分断裂,模糊,散在分布,微丝抑制剂(细胞松弛素D)和微管抑制剂(秋水仙素)可以抑制阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞。结论阪崎杆菌侵袭人脑血管内皮细胞破坏细胞骨架结构,微丝和微管抑制剂抑制阪崎杆菌侵袭。     

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

两株鼠抗人VSIG4单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究

目的:制备鼠抗人vSIG4分子单克隆抗体(mAb)及对其生物学特性进行鉴定.方法:以高表达膜型VSIG4分子的基因转染细胞L929/VSIC4L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经流式细胞术检测和多次;隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人VSIG4分子的杂交瘤细胞株;采用间接免疫荧光法、western blot、竞争抑制试验及MTT增殖试验等单对抗的生物学特征进行鉴定.结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人VSIG4 mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为9A7和9D5.对mAb生物学特性的研究结果表明,2株mAb均能识别巨噬细胞以及jurkat、THP-1、H446等肿瘤细胞株表面的VSIG4分子.对T细胞增殖抑制的阻断实验显示,这2株抗体对VSIG4分子抑制T细胞增殖均有阻断作用.结论:成功地获得了2株鼠抗人VSIG4功能性mAb,为进一步研究VSIG4及其未知受体的生物学功能奠定了基础.     

C-myc单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备与鉴定鼠抗C-myc蛋白单克隆抗体。方法利用C-myc蛋白做免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA法筛选、有限稀释法克隆、单克隆抗体Ig亚型鉴定,获得2株能够稳定分泌抗C-myc特异性抗体的杂交瘤细胞株,再将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔诱使小鼠产生腹水。结果获得2株可稳定分泌抗C-myc抗体的杂交瘤细胞株,命名为SHH-1H11,SHH-2A9,Ig亚型分别为IgG1亚类和IgM。细胞培养上清效价分别为1:10240、1:5 120;小鼠腹水效价分别为1:64 000、1:32 000。结论制备的C-myc单克隆抗体仅与C-myc蛋白反应,与其他蛋白没有交叉反应,表明获得的单克隆抗体的特异性很高。     

Production of human monoclonal IgG antibodies reacting with cytomegalovirus (CMV)

A human monoclonal antibody (MoAb) reacting with cytomegalovirus (CMV) has been produced using somatic cell hybridization between Epstein-Barr virus (EBV) infected B lymphocytes and a human-mouse heteromyeloma cell line (SHM-D33). The hybrids were selected in HAT medium containing 5 × 10⁻⁷ ouabain. The median level of Ig production was 5 (0.1−20) μg/10⁶ cells/day. One selected hybridoma (IB-8E9H5) has been maintained in continuous culture for more than 30 months with a stable IgG2, λ production. Molecular hybridization using EBV-specific probes demonstrate that our hybrids have lost the IR-1 EBV sequence during fusion. Unexpectedly, these blotting experiments revealed the presence of multiple EBNA-1 sequences dispersed among the genomic DNA of the SHM-D33 cell line. Screening for anti-CMV specificity was performed by ELISA and confirmed by immunofluorescence staining. Thus far, three CMV reference strains and 14 local strains are stained by the MoAb as early as 3 h after CMV infection of human fibroblasts, apparently through the recognition of a nuclear viral antigen of 67 kDa. In conclusion, this technique permits (a) the removal of the EBV genome contained in the lymphoblastoid parental cell line and (b) the production of human anti-CMV MoAb with potential applications in the prevention of life threatening CMV infections.     

层粘连蛋白特异性受体--整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性。方法：利用整合素α6 cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体，在大肠杆菌中表达GST－整合素α6胞外区融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb/C小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤，氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛后，分析其亚类及进行免疫细胞化学鉴定。结果：经ELISA双筛，获得了一株能稳定分泌对整合素α6胞外区的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌抗体亚类为IgG1。免疫细胞化学显示此单抗在人肝癌细胞系BEL－7402呈强阳性反应。结论：通过原核表达产物制备并纯化了针对整合素α6胞外区的单克隆抗体，对分离纯化α6亚单位、研究其生物学作用及鉴定正常和疾病状态下是否表达整合素α6及其水平具有重要意义。     

Production and characterization of monoclonal antibodies against non-A1c glycated hemoglobin

Hybridomas secreting monoclonal antibodies specific for hemoglobin nonenzymatically glycated in the non-A_1c position were produced by fusion of SP 2/0 myeloma cells with spleen cells from BALB/c mice immunized with nonenzymatically glycated hemoglobin prepared from human erythrocytes. Wells containing hydridomas secreting antibodies against glycohemoglobin were identified by binding, in an enzyme-linked immunosorbent assay, to purified glycated hemoglobin. The colony designated E85, which secreted antibodies discriminating between glycated versus unglycated hemoglobin, was cloned at least four times by limiting dilution and used for further study, performed with purified monoclonal antibody. Specificity of E85 was demonstrated by immunoblotting and by ELISA, wherein the monoclonal antibody reacted with glycated hemoglobin but not with hemoglobin A_1c or with unglycated hemoglobin. Immunoblotting of human plasma with E85 on nitrocellulose yielded no reactive proteins, indicating site specificity for glycated epitopes residing in hemoglobin but not in other nonenzymatically glycated proteins present in plasma. E85 differs from other antibodies raised against glycated hemoglobin and other glycated proteins, which recognize hemoglobin glycated at the N terminal valine of the β chain (HbA_1c) or which recognize glycated residues only after reductive conversion to glucitollysine and which do not discriminate between different glycated proteins. Thus, this report describes the establishment of the first hybridoma secreting monoclonal antibody raised against a physiologic (unreduced) form of non-A_1c glycohemoglobin, and for the glycated epitope when it resides in glycohemoglobin but not in other proteins or in hemoglobin A_1c.     

抗8种主要呼吸道病毒单抗杂交瘤细胞库的建立和临床应用

目的：为了对流感病毒甲型和乙型、副流感病毒１、２和３型、呼吸道合胞病毒及腺病毒３、７型主要呼吸道病毒进行快诊。方法：从１９８６至１９９７年应用杂交瘤单抗技术,制备出上４类８种抗病毒单抗细胞库,连同用于连接物的抗碱性磷酸酶单抗细胞株,共有１１７株单抗细胞株。将以上４类８种病毒单抗连接抗碱性磷酸酶单抗复合物,以兔抗鼠搭桥进行ＡＰＡＡＰ桥联快速诊断。结果：获得满意结果,此技术结果清晰,无内源性酶干扰,只     

杀虫剂西维因单克隆抗体的研制及鉴定

目的 制备特异性的西维因单克隆抗体。方法 合成了西维因的半抗原并对其进行了结构鉴定，将半抗原与牛血清白蛋白和卵清蛋白共价偶联分别制备免疫抗原和包被抗原。再将免疫的Balb／c小鼠脾脏细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，建立一株分泌西维因单克隆抗体的杂交瘤细胞。分析该杂交瘤细胞的染色体，并以间接酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测了单克隆抗体免疫球蛋白的类型及其与西维因的亲和性和特异性。结果 杂交瘤细胞的平均染色体数目为98条，它分泌IgG1亚类的单克隆抗体；该单克隆抗体与西维因的亲和性较高(IC50=52ng，mL)而与西维因结构类似物的交叉反应很小。结论 本实验成功的制备了西维因特异性的单克隆抗体，为其ELISA方法的建立提供了条件。     

分泌高效价抗碱性磷酸酶McAb杂交瘤系的建立及其在APAAP免疫组化研究中的应用

用碱性磷酸酶长程多途径免疫BALB/C小鼠,采用反向间接ELISA法筛选融合孔上清,获得2株稳定分泌抗碱性磷酸酶McAb杂交瘤细胞株,腹水效价比国外报道高15～30倍,在APAAP免疫组化检测CD抗原、病毒抗原、肿瘤抗原以及细菌菌毛抗原等研究中均获得满意结果。