巢式PCR法检测鼠肝脾标本伯氏疏螺旋体

目的应用巢式PCR方法检测鼠肝脾组织中伯氏疏螺旋体外膜蛋白A（ospa）基因,了解淳安县鼠中伯氏疏螺旋体感染情况。方法于2012年8月收集淳安县102份鼠肝脾标本,采用巢式PCR法检测伯氏疏螺旋体ospA基因特异片段,统计标本阳性率。结果在38只黑线姬鼠中检测到伯氏疏螺旋体ospA基因特异片段阳性标本3份,在13只黄毛鼠中检测到伯氏疏螺旋体ospA基因特异片段阳性标本3份,鼠伯氏疏螺旋体总阳性率为5．88％（6／102）。结论淳安县鼠中检测到伯氏疏螺旋体ospA基因片段,有引起蜱媒传染病莱姆病发生的潜在可能,应引起公共卫生部门的重视。     

伯氏疏螺旋体5S～23SrRNA和D剃基因在浙江省鼠标本检测中的应用

目的探索5S～23SrRNA和ospA基因序列在伯氏疏螺旋体检测中的应用,了解浙江省鼠中感染伯氏疏螺旋体状况。方法用PCR方法,检测磐安县100只鼠标本中5S～23SrRNA和ospA基因特异片段。对检测到的阳性结果进行测序。结果检测100只鼠标本,其中3只鼠标本伯氏疏螺旋体的5S～23SrRNA基因片段为阳性,5只鼠标本伯氏疏螺旋体的ospA基因片段为阳性,与参考核酸序列基本一致。结论 利用ospA和5S～23S rRNA基因能从标本中检测到伯氏疏螺旋体。     

浙江省在鼠形动物中检测到伯氏疏螺旋体

目的了解鼠形动物中自然感染伯氏疏螺旋体的状况。方法用巢式聚合酶链反应扩增鼠中的伯氏疏螺旋体5S--23SrRNA间隔区片段，对阳性产物进行测序。结果在浙江省金华市金东区捕获鼠形动物128只，在黄毛鼠、姬鼠、臭鼬鼯中共检测到阳性12份，阳性率分别为9．68％、14．28％和25．00％，并对其中2份进行测序分析，与伯氏疏螺旋体的法雷斯疏螺旋体相同，基因区间序列号分别为AB091447BvalaiOS115和DQ188933BvalaiQX13P25，相似率达100％。结论初步认为浙江省存在伯氏疏螺旋体病原。黄毛鼠、姬鼠、臭鼠句鼯可能为伯氏疏螺旋体的法雷斯疏螺旋体宿主，尚需进一步调查。     

一组长角血蜱中检出莱姆病螺旋体和斑点热群立克次体复合感染

目的 了解浙江省山区野生动物和蜱中莱姆病、斑点热、埃立克体病(无形体病)的感染情况.方法 采用巢式PCR对采集的鼠、蜱标本进行莱姆病伯氏疏螺旋体、斑点热群立克次体、埃立克体(无形体)特异性核酸片段检测分析.结果 从121份鼠标本和105组蜱标本中检出阳性结果 14份.鼠标本中检出伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段1份和埃立克体(无形体)16SrDNA 5'端片段2份.蜱标本中检出阳性11份,包括伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段3份和斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因5'端片段8份.其中1组长角血蜱成虫标本为伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染,5S～23S rRNA基因间隔区和ompA基因片段均阳性,分别与伯氏疏螺旋体法雷氏基因型和马赛立克次体株等关系较近.结论 在同一组长角血蜱成虫中同时检出莱姆病疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染.     

浙江大盘山脉鼠类中巴贝西原虫的分子流行病学调查

本文旨在了解浙江省大盘山脉鼠类感染巴贝西原虫的流行病学情况。捕获大盘山脉磐安县区域的鼠类共231份,取肝脾标本进行PCR检测。所检测到的PCR阳性结果进行序列测定,并进行分析。从231份鼠肝脾标本中检测发现3例DNA阳性片段,来自针毛鼠和社鼠。核酸序列分析显示与巴贝西原虫DNA片段高度相似。利用PCR方法检测到巴贝西原虫DNA,提示浙江大盘山脉存在鼠类感染巴贝西原虫的状况。     

浙江省在鼠类中检测到巴贝西原虫DNA片段

目的用聚合酶链反应(PCR)检测浙江省淳安县鼠中感染巴贝西原虫的情况。方法利用PCR方法检测淳安县106份鼠肝、脾标本,对检测到的阳性片段,进行序列测定和分析。结果 PCR检测结果显示,3份标本呈阳性,其中2份来自黄胸鼠,1份来自褐家鼠;PCR产物序列与巴贝西原虫高度相似,相似率均为99%。结论浙江省淳安县鼠类中检测到巴贝西原虫DNA片段,提示该地区可能有巴贝西原虫感染。     

巢式PCR和实时荧光定量PCR在莱姆病宿主动物监测中的应用评价

目的应用巢式PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测啮齿动物中伯氏疏螺旋体的带菌率,对2种方法在莱姆病宿主动物监测中的应用效果进行评价。方法2017年7-9月,在新疆维吾尔自治区(新疆)古尔图地区野外放置鼠夹,采集啮齿动物,并鉴别种类;采用巢式PCR和qRT-PCR 2种方法检测标本携带伯氏疏螺旋体情况,并对2种方法的检测结果进行统计学分析。对巢式PCR检测的阳性标本进行测序和序列比对分析,以初步确定伯氏疏螺旋体的基因型别。结果共检测啮齿动物标本134份,巢式PCR和qRT-PCR检测阳性率分别为13.43%和12.69%,差异无统计学意义(χ~2=0.000,P=1.000);阳性标本均为长尾黄鼠,总阳性率为20.15%,其中8份标本经2种方法检测结果均为阳性;10份巢式PCR检测为阳性的标本经qRT-PCR检测为阴性,9份qRT-PCR检测为阳性的标本经巢式PCR检测为阴性。采用q RT-PCR方法共检出伯氏疏螺旋体阳性17份,阳性样本Ct值为33.49~37.89。结论2种方法均可用于啮齿动物的伯氏疏螺旋体检测,同时使用2种方法可提高伯氏疏螺旋体的检出率。巢式PCR方法检测可以了解新疆古尔图地区啮齿动物感染伯氏疏螺旋体的基因型别;而qRT-PCR方法则可对标本中的细菌载量进行定量分析。     

青海省互助、泽库和祁连县啮齿类动物伯氏疏螺旋体调查

目的调查确定青海省3县啮齿类标本中伯氏疏螺旋体带菌情况。方法从青海省互助、泽库和祁连县共采集啮齿类动物202只,采用巢式PCR方法检测其伯氏疏螺旋体的带菌率。结果采用巢式PCR方法检测啮齿类动物标本202份,阳性49份,伯氏疏螺旋体平均阳性率为24.26%。其中互助县标本共67份,阳性12份,阳性率为17.91%;泽库县标本共78份,阳性27份,阳性率为34.62%;祁连县标本共57只,阳性10份,阳性率为17.54%。3个县的啮齿类动物伯氏疏螺旋体阳性率差异有统计学意义(χ2=7.40,P<0.05)。结论青海省互助、泽库和祁连县啮齿类动物中均存在伯氏疏螺旋体感染,应进一步对当地的媒介和人群进行调查,从而为当地莱姆病的防控提供参考。     

吉林省珲春地区蜱中伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体复合感染研究

目的了解吉林省珲春地区伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的复合感染情况.方法运用PCR方法对吉林省珲春地区采集的蜱标本,进行伯氏疏螺旋体5S～23S rRNA间隔区基因与斑点热群立克次体外膜蛋白A（ompA）基因的检测.测序并用PHYLIP软件进行序列分析.结果全沟硬蜱中伯氏疏螺旋体感染率为36.0%,在全沟硬蜱中检测到了斑点热群立克次体的感染,其感染率为2 0%.二者的复合感染率为2.0%;森林革蜱中伯氏疏螺旋体感染率30.9%,斑点热群立克次体感染率29.1%,二者的复合感染率16.8%.伯氏疏螺旋体的序列分析显示吉林地区的伯氏疏螺旋体都属于B.garinii基因型,同源性较高.对斑点热阳性片段序列分析表明新测序列与斯洛伐克新发现的IRS3株和IRS4株核苷酸序列同源性为97%.结论吉林省珲春地区全沟硬蜱及森林革蜱中检测到伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的感染,并检测到2种病原体的复合感染情况.     

黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物携带病原体调查

目的 调查黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物携带病原体状况.方法 2014年4-9月,采集啮齿动物样本107只,解剖取脏器肺、肾、肝、肾和膀胱样本,采用PCR方法分别扩增10种鼠传病原体的特异性核酸片段,通过基因测序进一步鉴定.结果 在107份鼠肺中共检出汉城型汉坦病毒RNA核酸阳性样本5份,感染率为4.67％;107份鼠肾中共检出钩端螺旋体DNA核酸阳性样本6份,感染率为5.61％;107份鼠脾中共检出巴尔通体DNA核酸阳性样本7份,感染率为6.54％,嗜吞噬细胞无形体4份,感染率为3.74％;107份鼠肝、鼠脾中鼠疫菌、巴贝西原虫、斑点热群立克次体、恙虫病立克次体、莫氏立克次体的DNA核酸检测结果均为阴性;107份鼠膀胱中伯氏疏螺旋体的DNA核酸检测结果为阴性;在鼠体内还存在复合感染情况,感染率为2.80％.结论 黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物中存在汉坦病毒、钩端螺旋体、巴尔通体和嗜吞噬细胞无形体的感染.     

三种蜱媒传染病在媒介蜱和鼠类中复合感染的研究

目的 了解中国部分地区埃立克体病和其他蜱媒传染病病原体的复合感染情况。方法 运用聚合酶链反应方法对内蒙古自治区、黑龙江省、北京市的蜱和鼠类标本粒细胞埃立克体、莱姆病螺旋体、斑点热群立克次体的感染进行检测，对福建省的蜱和鼠脾脏标本中查菲埃立克体、斑点热立克次体及莱姆病螺旋体的感染情况进行检测。结果 内蒙古采集的全沟硬蜱408只，人粒细胞埃立克体感染率68％，莱姆病螺旋体感染率7．8％，斑点热群立克次体感染率45．6％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本5份(5／408)，粒细胞埃立克体与斑点热群立克次体复合感染标本1份(1／408)。黑龙江采集的46只全沟硬蜱中人粒细胞埃立克体感染率6．5％，莱姆病螺旋体感染率10．8％，斑点热群立克次体感染率34．8％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本1份(1／46)。北京市采集的蜱类标本922只，有2只检测到莱姆病螺旋体的DNA片段。福建省宁化地区采集的优势蜱种越原血蜱283组(659只)中，查菲埃立克体最小阳性率为3．8％(25组阳性)，38份野鼠脾脏的阳性率为564％(21只阳性)，检测出有2只(2／659)蜱同时感染了粒细胞埃立克体和斑点热群立克次体，野鼠的脾脏标本中，也发现有一只同时感染了查菲埃立克体和斑点热立克次体。结论 人粒细胞埃立克体和莱姆病螺旋体复合感染以及查菲埃立克体和斑点热群立克次体复合感染可能在特定地区发生；其地区的蜱类、鼠类存在着极低的复合感染。     

用聚合酶链方法对北京林区莱姆病疫源地及莱姆病病原体基因型的探索性研究

目的：进一步明确北京林区是否存在莱姆病的自然疫源地及其分布，方法基于莱姆病螺旋体外膜蛋白A基因建立半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reactio,PCR)方法，对从北京6个林区采集的蜱和鼠进行检测和基因分型，选择阳性标准本进行克隆和序列测定，与已知序进行同源性比较，间接免疫荧光法检测抗莱姆病螺旋体IgG抗体，从长角血蜱中分离莱姆病螺旋体。结果：从门头沟区东灵山采集的标本中检测到莱姆病螺旋体DNA片段，3只游离全沟硬蜱1只检测阳性，57只寄全沟硬蜱若蜱中1只检测阳性；119只野鼠中9只检测阳性，其中8只，B.garinii阳性，1只B.afzelii阳性。50份野鼠血清有5份莱姆病螺旋体IgG抗体阳性，采集采的160只长角血蜱（20只／组）。未分离到莱姆病螺旋体菌株。结论：北京门头沟区东灵山可能存在莱姆病的自然疫源地，包括两个基因型，全沟硬蜱可能是莱姆病的传播媒体，野鼠可能是贮存宿主。     

我国滇西北山区家犬莱姆病螺旋体基因的检测及序列分析

目的了解滇西北山区莱姆病伯氏疏螺旋体的自然感染及基因分型情况。方法以山区农村家犬作为指示动物,使用真空采血管抽取家犬全血,应用巢式PCR扩增犬血中伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA间隔区片段,然后对阳性片段进行测序,并将所测序列与GenBank中注册的基因序列进行比较分析。结果共检测贡山、福贡2个县3个乡镇山村63只家犬血液,其中发现9只犬为阳性,阳性率14.29%。基因序列分析结果显示,当地犬感染的伯氏疏螺旋体为Borrelia garinii。结论首次证实云南省西北部山区家犬中存在莱姆病Borrelia garinii型伯氏疏螺旋体感染。     

Acarological risk of exposure to agents of tick-borne zoonoses in the first recognized Italian focus of Lyme borreliosis

Acarological risk was calculated as the probability of encountering at least one host-seeking Ixodes ricinus tick infected by the pathogen Borrelia burgdorferi sensu lato, in 100 m transects in the province of Genoa, Italy. The seasonal pattern of I. ricinus was studied using generalized estimating equations (GEE) with negative binomial error, to consider overdispersion of tick counts and repeated sampling of the same dragging sites from April 1998 to March 1999. Prevalence of infection by B. burgdorferi s.l. was evaluated by PCR and hybridization with genospecies-specific probes. Acarological risk (R) peaked in April (R = 0.2, 95% CI 0.13-0.26) and November (R = 0.29, 95% CI 0.10-0.46). Borrelia garinii and B. valaisiana were the most common genospecies at our study site suggesting a major role of birds as reservoirs. DNA from Anaplasma phagocytophilum, the agent of granulocytic ehrlichiosis in humans and animals, was amplified from an adult I. ricinus.     

大兴安岭林区蜱和鼠中莱姆病螺旋体感染及其基因分型研究

目的 了解内蒙古大兴安岭林区蜱和鼠中伯氏疏螺旋体的感染及基因分型情况。方法 应用巢式PCR扩增蜱和鼠中伯氏疏螺旋体5S-23SrRNA间隔区片段，对阳性产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析和单链构象多态性（SSCP）分析，RFLP分析显示特殊带型的样本测序分析。结果 检测全沟硬蜱1336只，293只阳性，阳性率为21．93％；森林革蜱144只，6只阳性，阳性率为4．17％；嗜群血蜱144只，未发现有伯氏疏螺旋体感染。检测鼠9种145只，感染伯氏疏螺旋体的4种5只，感染率为3．45％；其中检测8只棕背鼠平，2只阳性。RFLP分析及序列分析显示蜱中有B．garinii20047亚型、B．gariniiNT29亚型、B．afzelii基因型以及不同基因型或亚型伯氏疏螺旋体的混合感染；鼠感染的伯氏疏螺旋体包括B．garinii20047亚型和B．gariniiNT29亚型。SSCP分析结果显示带型多于36种。结论 大兴安岭林区蜱及鼠中均存在伯氏疏螺旋体的感染，其中全沟硬蜱的感染率较高；B．garinii型为主要基因型，且该地区伯氏疏螺旋体存在遗传多态性。单只蜱中存在同时感染不同基因型伯氏疏螺旋体的情况，人和宿主动物是否存在不同基因型伯氏疏螺旋体混合感染尚待进一步研究。全沟硬蜱和棕背鼾分别是该林区伯氏疏螺旋体的主要媒介和主要储存宿主。     

Prevalence of Borrelia burgdorferi sensu lato species among patients in the Czech Republic; direct sequencing analysis and real-time polymerase chain reaction

The spread of borreliosis depends on geographical, environmental and climatic factors as well as on the pathogenesis of the causative agent of the group of Borrelia burgdorferi sensu lato. The rise in the incidence of the disease and emergence of new symptoms are of concern. Relationships between genospecies and symptoms, their geographical spread and possible interference of other pathogens are the subject of the present study. Eighty-seven patients with borreliosis from Central and Eastern Bohemia and Moravia were enrolled in the study. Forty-nine patients of group 1 showed clinical positivity, 21 patients of group 2 tested positive at PCR screening and 17 patients of group 3 were culture positive. Forty-eight patients and 17 isolated strains showed positivity for plasmids and the Borrelia burgdorferi sensu lato genome in conventional nested PCR. Borrelial genotypes and subtypes were detected by direct sequencing of OspA and OspC products. Quantitative data were determined from specific product melting temperature curves for real time PCR. Based on sequencing of the OspA gene, B. garinii (subtypes 6, 5, 4 and 3), B. burgdorferi s.s. and B. afzelii were detected in 14 (51.8%), 8 (29.6%) and 5 (18.5%) out of 27 Central Bohemian patients, respectively. Eastern Bohemian patients showed predominance of B. garinii subtype 5 and co-infection with Anaplasmaphagocytophilum in 7.6%. The predominant causative agent in 25 Moravian patients was B. afzelii (11 patients, i.e. 44%), followed by B. burgdorferi s.s. (9 patients, 36%) and B. garinii 5 patients, i.e. 20%). Sequences of two hypervariable regions of the OspA and OspC genes and distances in phylogenetic trees showed differences not only between genospecies and subtypes but also between wild strains detected by direct sequencing from patient specimens and in vitro cultured strains. The greatest differences were found for patients with long-term borrelial infection.