标记免疫分析的质量控制和标准化(二)

二标记免疫分析的标准化问题几十年来,免疫学从多克隆抗体发展到单克隆抗体的应用,标记方法从放射性核素、酶、胶体金标记的显色反应到荧光、化学发光标记测量荧光或化学发光等,形成了“标记免疫分析”这一独立学科。在应用方面,不断更新的商业化试剂盒,同时由于标记免疫分析的     

点免疫金渗滤法筛选胶体金标记抗人IgG 的研究

目的:应用点免疫金渗滤法筛选适宜胶体金标记的抗人IgG(以下简称二抗),并运用多个评价指标进行比较和分析。方法:选择三个不同公司的二抗用胶体金标记,根据棋盘滴定法确定最佳标记条件;运用点免疫金渗滤法对三种二抗的胶体金标记后检测效能进行比较,采用包虫病人和健康对照血清,用包虫病特异性抗原检测包虫病患者血清中的特异性抗体,评价最优的二抗,并与酶联免疫吸附测定法进行比较。结果:A、B、C 三种二抗标记的最佳标记条件为:pH 均为8.5,加入量分别为38.4、24、19.2 g/ ml,综合评价二抗B 检测效能最优。将其与酶联免疫吸附测定法检测效能进行比较,两种方法检测结果的Kappa=0.895(P<0.05),吻合度较强。结论:应用点免疫金渗滤法,以及本文提出的评价指标,能够筛选出最佳二抗,对检测试剂盒中二抗的选择具有重要的参考价值。     

量子点荧光标记应用于生物学的研究进展

量子点标记作为一种新型的荧光标记方法，应用于生物学领域的研究有其不可比拟的优势，短短数年在生物化学、细胞生物学、免疫化学等学科的研究中显示了它的巨大发展潜力。本就量子点优于传统有机荧光染料的性质、量子点标记近年来在生物领域中的研究进展和应用前景作一阐述。     

量子点荧光标记应用于生物学的研究进展

量子点标记作为一种新型的荧光标记方法,应用于生物学领域的研究有其不可比拟的优势,短短数年在生物化学、细胞生物学、免疫化学等学科的研究中显示了它的巨大发展潜力。本文就量子点优于传统有机荧光染料的性质、量子点标记近年来在生物领域中的研究进展和应用前景作一阐述。     

量子点技术在荧光标记免疫分析中的发展与应用

量子点是一种新型荧光标记材料,与传统荧光染料相比具有激发波长宽,发射波长窄而对称,不同粒径和组成的量子点其发射波长不同等优点.应用不同发射波长的量子点对不同的待检分析物同时进行标记,可以达到多个指标同时检测的目的.量子点作为荧光标记物已在免疫分析领域及医学诊断研究中得到了广泛的应用,并显示出了巨大的发展前景.     

荧光标记生物大分子及其应用

近年来，对生物大分子进行荧光标记的技术受到很大重视并取得了迅速进展，此技术广泛应用于细胞内外物质的检测、核酸杂交测序及疾病诊断等诸多方面。本就生物大分子的荧光标记及其应用作一简要综述。     

化学发光和发光标记技术

化学发光免疫分析是继放射免疫分析和酶联免疫分析后建立起来的一种高灵敏、高特异性的免疫分析技术。化学发光标记是化学发光免疫分析的关键技术,不仅在小分子、大分子物质的标记分析中用于标记物的制备,而且在基因探针标记、肿瘤标记和诊断以及导向药物研究中广为采用。本文简要介绍了化学发光和发光标记技术。     

羊抗兔IgG的铕标记及其应用效果

本文报道羊抗兔IgG铕(Eu)标记条件及其免疫分析效果的研究结果。最适标记条件是PH值9.0～10.0,螯合剂用量为80～320倍,反应时间12～24 h,标记比是11.19～15.30。标记物用于hAFP及兔抗hAFP IgG固相包被量、兔抗hSOD-1抗血清稀释度、竞争法分析hAFP和间接法分析兔抗hAFP IgG的检测,结果均较为满意。     

荧光标记生物大分子及其应用

近年来,对生物大分子进行荧光标记的技术受到很大重视并取得了迅速进展,此技术广泛应用于细胞内外物质的检测、核酸杂交测序及疾病诊断等诸多方面。本文就生物大分子的荧光标记及其应用作一简要综述。     

C-myc标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响

目的 探讨在不同的免疫学检测方法中，与单链抗体相连的亲和标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响。方法 在制备“VH-连接链-VL”型结构抗乙酰胆碱受体单链抗体时，将c-myc标记肽与单链抗体的VL连接，应用先将抗c-myc抗体固定单链抗体的固相放射免疫测定法、直接将单链抗体与乙酰胆碱受体结合的液相放射免疫测定法，分别测定单链抗体与乙酰胆碱受体的结合活性。结果 在固相放射免疫测定法中，单链抗体不能与乙酰胆碱受体结合；在液相放射免疫测定法中，单链抗体则能与乙酰胆碱受体结合。结论 在应用不同的免疫学检测方法中，与单链抗体相连的c-myc标记肽可影响单链抗体与抗原的结合活性。     

一种新的测定血管壁通透性的方法

给ＳＤ大鼠静脉注射荧光标记白蛋白，通过检测其肺、肾组织匀浆中荧光标记白蛋白的含量，定量分析其血管壁通透性变化。该方法与伊文氏蓝方法相比，能更准确反映血管壁对大分子物质的通透性的变化，又避免了使用核素标记白蛋白时放射性的污染，为进一步研究血管壁通透性的变化提供了一种更准确而又方便的新方法。本实验还测定了烫伤１２ｈ后大鼠肺、肾血管壁通透性的变化。     

质粒DNA荧光修饰方法的研究

目的 研究一种质粒DNA荧光标记的简便方法,以便进行DNA递送的示踪.方法 质粒经 溴激活后,于不同温度下存放不同时间,再与1,10-二氨基葵烷形成氨基衍生物.氨基修饰质粒与荧光素异硫氰酸酯( FITC)反应,制备出荧光标记的质粒,纯化并收集产物,计算其标记效率,评估溴激活质粒在不同温度下存放不同时长对标记反应的影响;观察荧光标记对质粒转染效率的影响,并用激光共聚焦显微镜观察和流式细胞仪检测示踪效果.结果 实验数据显示溴活化的质粒随存放时间的延长标记效率反而下降,存放4℃较室温(25℃)的标记效率更高,提示溴活化质粒不适宜存放;而与没有标记的质粒相比,荧光标记的质粒对转染效率几乎没有影响.荧光标记的质粒应用于流式细胞仪检测和激光共聚焦显微观察都取得了较好的示踪效果.结论 本研究建立了一种荧光标记质粒DNA的简便方法,并且在基因递送的示踪实验中获得了较好的效果.     

介绍一种新的复合免疫标记技术—光镜荧光免疫标记结合电镜免疫金标记

荧光免疫细胞化学已广泛应用于病理学、临床检验学等许多方面,尤其在各类白血病细胞的免疫分型诊断中发挥了重要的作用.许多学者认为该技术虽有一定的灵敏性和特异性,但仍有某些缺点,例如荧光标本不能长期保存,且要在性能较好的荧光显微镜下观察,对有些荧光标记比较弱的样品,不能明确诊断.因此常常需要另做其它指标,     

壳聚糖载基因纳米粒子荧光标记的优化研究

目的研究荧光素异硫氰酸酯（FITC）与壳聚糖反应的主要影响因素，观察荧光标记对纳米粒子表征和转染效率的影响，以期建立一种快速、稳定并且适宜壳聚糖纳米载体示踪的荧光标记方法。方法FITC与壳聚糖在不同反应物比例、溶液pH及温度条件下反应，纯化并收获产物，计算其标记效率。采用复凝聚法制备荧光标记的壳聚糖载基因纳米粒子，并检测其表征及对Hela细胞转染效率。结果在该实验中，标记效率随着pH增大而增加，弱碱性（pH 7．5）时最佳；随着反应温度的升高，标记效率也随之上升；标记效率还随FITC添加的比例增大而升高。壳聚糖纳米粒子表征和转染效率实验显示最佳的壳聚糖标记条件是反应物壳聚糖与FITC的添加比例为25：1，在pH7．5、室温25℃条件下反应4h。结论优化的壳聚糖荧光标记方案的标记率比以前文献报道的方法高近3倍，用标记的壳聚糖制备的基因纳米粒子粒径及细胞转染效率与未标记壳聚糖制备的纳米粒子相近，可以达到较好的示踪效果。     

化学发光标记及发光免疫分析

化学发光标记及发光免疫分析张丽民上海第二军医大学，上海２００４３３化学发光标记（ＣＬＬ）及发光免疫分析（ＬＩＡ）是一种灵敏度高、特异性强、检测快速，无放射危害的分析技术。七十年代末以来，ＣＬＬ及ＬＩＡ得到了迅速发展。本文综述了该项技术的机理、实验技术...     

试论HOOK效应的分子基础

以ＩＲＭＡ、ＩＥＭＡ、ＥＬＩＳＡ和ＴＲ－ＦＩＡ等为代表的，在液相ＲＩＡ（Ｂｅｒｓｏｎ等，１９５９）基础上发展起来的新一代固相标记免疫测定法（ＳＬＩＡ），既敏感又便捷，加之普遍采用单抗（ｍＡｂ）替代多抗（ｐＡｂ），检测抗原的特异性更高。然而，由于ＲＦ、...     

外泌体标记方法的研究现状

外泌体是细胞分泌的直径为30～150 nm的胞外囊泡,可以运送多种生物活性分子(如RNA、脂质和蛋白质),介导细胞间的信息交流。现已发现,外泌体在各种生理和病理过程中发挥着重要的作用。为了研究外泌体的生物学作用,现已开发出了多种外泌体标记方法进行外泌体的功能研究。根据现有的文献报道,文章将结合外泌体自身的结构特点,对不同的外泌体标记方法,包括荧光染料、荧光蛋白、荧光素酶和物理标记等作一综述。     

微量核酸样品的双重限制性荧光标记技术

目的采用双重限制性荧光标记技术(doub le restriction fluorescent labeling,DRFL)标记微量核酸样品,提高基因芯片用于病原体检测的灵敏度。方法以限制性显示技术处理SARS-CoV核酸样品,分别采用传统限制性荧光标记技术(直接采用荧光标记的通用引物标记)和双重限制性荧光标记技术(荧光标记的通用引物和荧光标记的dNTP的双重荧光标记)标记,进一步在同等条件下与基因芯片进行杂交、清洗和芯片扫描检测。通过对杂交结果的分析,比较2种标记方法的标记效果。结果以DRFL方法标记SARS基因片段,其荧光强度均值比传统荧光标记方法提高了3.5835倍。结论DRFL技术有效地提高单位分子标记片段的荧光强度值,提高了检测的灵敏度,可用于微量病原体核酸样品的基因芯片检测。     

荧光染料CFSE作为细胞标记的特性研究

探讨荧光染料CFSE在作为细胞标记时的特性。方法 :应用激光共聚焦扫描显微术 ,观察CFSE在细胞中的准确定位。利用MTT比色法测定CFSE标记的细胞及未标记细胞的增殖情况 ;通过细胞计数和流式细胞仪 (FCM) ,测定细胞在不加任何刺激及诱导的情况下细胞数及平均荧光强度的变化趋势。结果 :在共聚焦显微镜下 ,可见CFSE标记的细胞的细胞膜、细胞核及细胞质中都带有绿色荧光 ,以胞核荧光最强。利用MTT比色法测定标记及未标记细胞的A值无显著差异。连续 6d记录的细胞数与FCM测定的平均荧光强度呈负相关。结论 :CFSE可作为细胞的标记物 ,用于细胞移植的体内检测、细胞增殖试验及细胞分裂周期的估算等研究     

电鳐乙酰胆碱酯酶标记第二抗体酶联免疫吸附测定法

目的:以电鳐乙酰胆碱酯酶标记二抗,建立该酶的酶联免疫吸附方法。方法:采用改良高碘酸钠氧化法。结果:标记过程中对AChE的酶活性影响较大的因素有pH值,温度以及NaIO4浓度。AChE酶标记的羊抗小鼠IgG的效价至少高于HRP,酶标记的羊抗小鼠IgG一个数量级。结论:制备的乙酰胆碱酯酶标记第二抗体在酶联免疫吸附测定法中高效地取代辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶标记第二抗体。