八宝丹抑制胃癌细胞增殖与诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨八宝丹(BBD)对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响。方法体外培养胃癌细胞AGS和MGC-803,采用不同浓度的BBD(0、0.25、0.5、0.75、1 mg/m L)进行干预,MTT法检测细胞活力,计算BBD对细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞生长密度;台盼蓝染色法检测细胞数量;细胞集落形成实验检测细胞集落形成能力;Hoechst染色检测细胞凋亡。结果 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的细胞活力,抑制细胞增殖,使细胞密度下降,减少细胞数量,抑制细胞集落形成能力,诱导细胞凋亡。结论 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的增殖及诱导细胞凋亡。     

白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究

目的探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402增殖的影响,同时观察BEL-7402细胞形态的变化,采用集落形成实验考察白头翁皂苷D对BEL-7402细胞集落形成的影响;Hoechest 33342染色观察BEL-7402细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化;采用Western blotting法检测BEL-7402细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖有抑制作用;集落形成实验结果显示白头翁皂苷D能明显抑制BEL-7402细胞集落的形成,白头翁皂苷D(25.00μg/m L)能显著诱导BEL-7402细胞凋亡;白头翁皂苷D(18.75、25.00μg/m L)能显著降低BEL-7402细胞线粒体膜电位;白头翁皂苷D(12.50、18.75、25.00μg/m L)可显著上调BEL-7402细胞中Caspase-3的表达;白头翁皂苷D(25.00μg/m L)可显著下调Bcl-2的表达。结论白头翁皂苷D有良好的体外抗肝癌作用,其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用

目的:观察沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用。方法:采用MTT法观察沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的抑制作用,进一步观察沙苑子黄酮对HepG2细胞形态、超微结构、生长曲线以及集落形成的影响。结果:沙苑子黄酮可明显抑制HepG2肿瘤细胞的增殖和集落的形成,50μg/mL剂量组集落形成率为25.6(P<0.01),远低于对照组;光镜及透射电镜可以发现细胞形态有凋亡特征变化。结论:沙苑子黄酮体外对人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

扶正柔肝颗粒对肝癌HepG2细胞增殖、迁移、克隆形成及凋亡的影响

目的:观察扶正柔肝颗粒对肝癌HepG2细胞增殖、迁移、克隆形成及凋亡的影响。方法:分别采用MTT法、划痕实验法、平板克隆形成和Annexin V/PI双染法实验,观察扶正柔肝颗粒体外对肝癌HepG2细胞增殖、迁移、克隆形成和凋亡的影响。结果:扶正柔肝作用于HepG2细胞48h后,其对细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(21.0±1.3)mg/mL,当用药浓度为10mg/mL时HepG2细胞没有发生迁移;用药浓度为5mg/mL时,HepG2细胞集落基本无法形成;浓度为20mg/mL时,其早期凋亡率与5-Fu组无显著性差异(P0.05),扶正柔肝颗粒有显著抑制细胞增殖、抑制细胞迁移、抑制集落形成及诱导HepG2细胞早期凋亡的作用,且这种作用会随其给药浓度的增加、给药时间的延长而随之增强。结论:扶正柔肝颗粒可以明显抑制人肝癌HepG2细胞的增殖、集落形成和迁移,其作用呈明显的剂量-效应关系,并能显著诱导该细胞早期调亡,为肝癌治疗提供新的药物研究方向。     

雷公藤红素联合米托蒽醌对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察雷公藤红素（Celastrol,Cela）联合米托蒽醌（Mitoxantrone,MIT）对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响。方法：通过MTT法检测Cela、MIT单独或联合用药对肝癌HepG2细胞增殖能力的抑制作用；通过集落形成实验观察Cela、MIT单独及联合用药对肝癌HepG2细胞集落形成的影响；通过流式细胞实验检测Cela、MIT单独及联合用药对促进肝癌HepG2细胞凋亡的影响；Western blot法检测Cela、MIT单独及联合用药对肝癌HepG2细胞细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：MTT、集落形成和流式细胞实验结果表明，Cela、MIT单独用药对肝癌HepG2细胞增殖能力有抑制作用，促进其凋亡，联合用药后抑制作用更为显著（P <0.05）; Western blot结果表明，与对照组比较，Cela、MIT单独用药组能显著减少Bcl-2蛋白的表达（P <0.05），上调Bax蛋白的表达（P <0.05），联合用药组较单用药组效果更为显著（P <0.05）。结论：雷公藤红素协同米托蒽醌能显著减少肝癌HepG2细胞增殖，诱导其凋亡。     

三叶青黄酮诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞诱导凋亡的作用.方法 通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测三叶青黄酮对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析三叶青黄酮对肝癌细胞的诱导凋亡作用.结果 三叶青黄酮能显著的抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,并具有浓度依赖性.光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰.结论 三叶青黄酮对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,有抗肝癌的药用价值.     

新疆多伞阿魏对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用研究

目的:研究新疆多伞阿魏提取物对胃癌细胞株SGC-7901增殖抑制作用及作用机制。方法:采用二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT法)检测新疆多伞阿魏不同提取物对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,筛选出抑制作用最强的提取物W3。光镜下观察W3不同浓度对SGC-7901细胞形态的影响,TUNLE凋亡染色实验检测W3诱导SGC-7901细胞凋亡作用,流式细胞仪进一步检测其对细胞凋亡率的影响。结果:多伞阿魏提取物W3能显著抑制SGC-7901细胞增殖,同时具有诱导细胞凋亡作用,且呈剂量依赖关系。结论:多伞阿魏提取物W3抑制胃癌细胞增殖作用可能与诱导细胞凋亡有关。     

黄芪甲苷抑制放线菌素D诱导的HepG2细胞凋亡作用研究

目的:探究不同浓度的黄芪甲苷(Astragaloside IV,As-IV)对肝癌细胞的作用及其作用机制。方法:采用不同浓度黄芪甲苷,按照不同作用时间处理肝癌细胞;采用MTT法检测不同浓度黄芪甲苷对肝癌细胞的毒性作用;运用放线菌素D(Actinomycin D,ActD)诱导细胞凋亡构建肝癌细胞凋亡模型,采用Hoechst33258染色法和流式细胞术验证肝癌细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测一定浓度的黄芪甲苷处理放线菌素D诱导后的肝癌细胞凋亡率,采用western blot法验证黄芪甲苷对蛋白激酶α(Protein kinase Cα,PKC-α)蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ExtracelluLar reguLated protein kinases,ERK)通路蛋白的影响。结果:浓度为40μmol/L的黄芪甲苷处理24h细胞活性为0μmol/L时的80%,不会显著影响肝癌细胞活性,且黄芪甲苷对肝癌细胞活性的影响呈剂量和时间依赖性。放线菌素D浓度为2μg/mL处理24h时肝癌细胞凋亡率为45%,可有效诱导肝癌细胞凋亡。40μmol/L黄芪甲苷处理24h可有效抑制2μg/mL放线菌素D诱导的肝癌细胞凋亡,细胞凋亡率为8%,显著低于2μg/mL放线菌素D处理组细胞凋亡率27%(P0.05),并可有效抑制细胞膜PKC-α和p-ERK1/2表达量升高。结论:黄芪甲苷可通过抑制PKC-α活化后从细胞质向细胞膜迁移,有效抑制放线菌素D诱导的肝癌细胞凋亡。     

双灵固本散对肝癌细胞端粒酶及细胞凋亡的研究

目的：观察双灵固本散对肝癌细胞端粒酶的抑制及细胞凋亡的诱导作用。方法：将肝癌细胞接种于培养板及培养皿中，将双灵固本散粉剂稀释成不同的浓度加入，观察细胞增殖情况、其端粒酶的活性情况，通过光镜、扫描电镜和透射电镜观察细胞的凋亡情况。结果：双灵固本散实验组对肝癌细胞增殖有抑制作用，对肝癌细胞有明显的诱导凋亡作用，对肝癌细胞端粒酶活性有明显抑制作用。结论：双灵固本散能明显抑制肝癌细胞端粒酶的活性，抑制其细胞增殖，诱导其细胞凋亡。     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:观察积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:用不同浓度的积雪草酸处理人肝癌SMMC-7721细胞;MTT法检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测积雪草酸对肝癌细胞迁移的影响;Western blot法检测积雪草酸对凋亡相关基因Bcl-2和Bax及上皮间质转化标志基因E-cadherin表达的影响。结果:与对照组比较,25、50、100μmol/L的积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用,差异均有统计学意义(P0.01)。流式细胞术结果显示,50μmol/L的积雪草酸处理后,肝癌细胞凋亡率显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室法检测结果发现,TGF-β能显著促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。1、10μmol/L的积雪草酸处理能够显著抑制TGF-β诱导的肝癌细胞迁移。积雪草酸处理后,人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白水平显著下降,Bax蛋白水平显著上调。TGF-β处理24 h后,SMMC-7721细胞E-cadherin表达水平显著降低,而不同浓度的积雪草酸均能抑制TGF-β诱导的E-cadherin表达水平下调。结论:积雪草酸能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

银杏外种皮提取物对小鼠肝癌的抑制作用及其对Survivin表达的影响

目的研究银杏外种皮提取物(Ginkgo biloba exocarp extracts,GBEE)对小鼠肝癌的抑制作用及其凋亡机制。方法体外培养H22小鼠肝癌细胞,采用MTT法检测细胞增殖;建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型,连续灌胃给药9天后剥离瘤块、称取瘤质量,计算对肝癌移植瘤生长的抑瘤率;应用荧光染色法观察H22肝癌细胞的凋亡形态、计数凋亡细胞并计算凋亡率;应用流式细胞术检测H22肝癌细胞的凋亡率;应用ELISA法检测H22肝癌细胞培养上清中基因蛋白Survivin的含量。结果 GBEE(0.625~160μg·ml-1)对H22细胞的体外增殖皆有抑制作用,抑制率为1.57%~54.97%,具有浓度依耐性;GBEE(50~200mg·kg-1)对小鼠H22肝癌移植性实体瘤生长具有抑制作用,抑制率分别为34.76%、40.11%和50.80%,具有量效关系;GBEE可诱导H22细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达。结论 GBEE对小鼠肝癌具有抑制作用,其作用机制与下调Survivin表达而诱导癌细胞凋亡有关。     

黄芩甙对人肝癌细胞BEL-7402增殖、凋亡和分化的影响

目的：研究黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系增殖、凋亡和分化的影响。方法：培养BEL-7402细胞,应用MTT实验和软琼脂克隆形成实验观察黄芩甙对肝癌细胞增殖的作用,流式细胞术测定细胞凋亡率。光镜、电子显微镜观察细胞形态、超微结构,酶促反应试剂盒检测细胞浆中ALP、γ-GT活性,放免法检测细胞AFP、白蛋白分泌量和细胞内cAMP含量。结果：黄芩甙能明显抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡。黄芩甙作用后肝癌细胞趋于成熟分化,γ-GT降低,ALP比活力明显升高,ALP耐热型同工酶即胎盘型ALP活性显著低于对照,AFP合成和分泌量显著性降低,AIb分泌显著升高,细胞内cAMP含量增加。结论：黄芩甙能抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,诱导肝癌细胞分化,     

诺丽果发酵液抑制肝癌细胞Bel7402增殖及促凋亡作用观察

目的:探讨诺丽果发酵液在体外对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度诺丽果发酵液对Bel7402细胞增殖的影响;流式细胞分析以及DAPI染色法检测诺丽果发酵液作用后细胞凋亡情况,最后用Western blotting技术分析诺丽果发酵液对肝癌细胞抗凋亡基因Survivin表达的影响。结果:与对照组相比用50%的诺丽果发酵液处理肝癌细胞Bel7402后细胞增殖受到明显抑制,抑制率为10. 7%。当用100%的诺丽果发酵液处理肝癌细胞,细胞增殖抑制率为60%抑制效果有统计学意义。说明诺丽果发酵液能显著抑制肝癌细胞Bel7402的增殖;流式细胞仪分析以及DAPI染色法检测发现诺丽果发酵液作用Bel7402细胞后,细胞凋亡比例显著增多,用75%的诺丽果发酵液处理肝癌细胞,细胞的凋亡率为11%,用100%的诺丽果发酵液处理肝癌细胞,细胞凋亡率为14%,显著高于对照组的7. 6%。同时诺丽果发酵液原液处理肝癌细胞Bel7402后,细胞的Survivin表达量与对照组相比明显降低。结论:诺丽果发酵液在体外能抑制肝癌Bel7402细胞的增殖并诱导肝癌细胞凋亡。     

藤黄酸促进bax和p53表达诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的：观察藤黄酸(gambogic acids，GA)对肝癌细胞凋亡的诱导作用并探讨其分子作用机制。方法与结果：采用MTT比色法检测藤黄酸对人肝癌和人正常肝细胞增殖作用的影响，结果表明，藤黄酸对人肝细胞性肝癌SMMC-7721细胞株和QGY-7701细胞株有明显增殖抑制作用，并呈剂量依赖性，而对正常人肝组织L-02细胞株作用相对较弱；光镜及电镜形态学观察结果显示，给予GA后，肝癌细胞发生明显的细胞凋亡形态学变化，如细胞体积变小，细胞核固缩，出现凋亡小体等；采用RT-PCR和Western blotting方法检测bax mRNA以及bax和p53蛋白表达变化，结果表明GA可诱导bax mRNA及bax和D53蛋白表达上调；琼脂糖凝胶电泳显示，给予GA后，SMMC-7721裸小鼠移植瘤组织呈现典型的DNA ladder电泳梯状条带。结论：藤黄酸可显著抑制人肝癌细胞的增殖，其分子作用机制可能通过促进bax和p53表达上调，从而诱导人肝细胞性肝癌细胞凋亡。     

莪术挥发油抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究

[目的]探讨莪术挥发油对肝癌细胞生长抑制的作用机制。[方法]用荧光显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化，采用噻唑氮蓝(MTT)法检测莪术油对细胞生长的抑制作用，并用流式细胞仪检测细胞周期的阻滞及凋亡率。[结果]MTT结果表明莪术油浓度与细胞生长抑制率成正比。荧光显微镜观察结果显示，1．0mg／mL的莪术挥发油作用24h后可有效诱导肝癌细胞凋亡，细胞形态产生明显的凋亡特征，细胞核凹陷或固缩成均一的致密物。流式细胞仪检测结果表明，莪术油作用后细胞凋亡率可达28.15％，细胞周期被阻滞在S期。[结论]莪术挥发油可抑制肝癌细胞SMMG772l的生长，诱导凋亡及阻滞细胞周期是其抑制生长的重要机制。     

β-榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究

目的：研究中药莪术提取物β-榄香烯对人肝癌HepG2 细胞增殖抑制及诱导凋亡,以及小鼠肝癌H22 荷瘤小鼠凋亡相关蛋白表达的作用。方法:体外培养人肝癌HepG2 细胞,MTT 法检测β-榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI 双染检测细胞凋亡。通过建立H22 小鼠肝癌荷瘤模型,观察β-榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对HepG2 细胞具有抑制增殖的作用,呈剂量和时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI 法检测到早期凋亡细胞。不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,各药物浓度组Caspase-3 蛋白均上调（P<0.05）,P65 蛋白均下调。结论：β-榄香烯可有效抑制人肝癌HepG2 细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡,并且与上调凋亡相关蛋白Caspase-3、下调NF-κB P65 相关。     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇对Hepa 1-6肝癌细胞凋亡和ROS的影响

目的:观察白藜芦醇对小鼠肝癌Hepa 1-6细胞凋亡及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)作用。方法:MTT比色法检测白藜芦醇对Hepa 1-6细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot法检测活化型Caspase-3;2',7'-二氯氢化荧光素乙二脂(DCF-DA)染色法结合荧光酶标仪检测细胞内ROS的产生。结果:与对照组比较,20、40、80μmol/L白藜芦醇作用24、48、72 h均可显著抑制肝癌Hepa1-6细胞增殖,呈一定的时间与剂量依赖性。不同浓度白藜芦醇作用48 h可促使Hepa 1-6细胞凋亡,呈现细胞凋亡形态改变,同时伴有活化型Caspase-3及ROS的产生。结论:白藜芦醇可以抑制Hepa 1-6细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,可能与Caspase-3活化及细胞内ROS水平升高相关。     

叶下珠复方对人肝癌HePG_2细胞增殖及细胞信号传导通路的影响

目的观察叶下珠复方药物血清对人肝癌HePG2细胞体外增殖的抑制作用并探讨其机制。方法用叶下珠复方药物血清处理HePG2人肝癌细胞株,MTT法检测该药对肝癌细胞株增殖的抑制作用,用流式细胞仪检测该复方诱导肿瘤细胞凋亡情况。通过RT-PCR检测该药对细胞信号传导和转录激活因子3(STAT3)及其下游靶基因bcl-2的表达。结果叶下珠复方药物血清对HePG2细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,该抑制作用与药物呈时间浓度关系。不同浓度的叶下珠复方处理HePG2细胞后bcl-2、stat3的mRNA水平明显下调(P0.05)。结论叶下珠复方在体外能抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖的不同信号通路有关。     

苦参碱和氧化苦参碱对SMMC-7721细胞增殖及Stat3,Stat5基因表达的影响

目的：观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖及Stat3, Stat5基因表达的影响。方法：苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，MTT法检测其对肝癌细胞增殖的影响，双荧光染色观察细胞凋亡率，RT-PCR法检测其对SMMC-7721细胞Stat3, Stat5 mRNA的影响。结果：苦参碱和氧化苦参碱作用于肝癌细胞后，能显著抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡，并呈时间剂量依赖性；二者均能下调Stat3, Stat5 mRNA表达水平。以相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌细胞Stat3, Stat5 mRNA下调作用更显著(P<0.05或P<0.01)。结论：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖，其机制可能与下调Stat3, Stat5的基因表达，抑制细胞信号传导通路有关。