平肝潜阳法对偏头痛肝阳上亢型大鼠模型肾上腺组织蛋白质组的影响

目的探讨平肝潜阳法对偏头痛肝阳上亢型大鼠模型作用的分子机制。方法用电刺激SD大鼠三叉神经节的方法并灌服附子汤制造偏头痛肝阳上亢型模型。采用双向凝胶电泳（2-DE）技术分离大鼠肾上腺组织的总蛋白，图像分析识别差异表达的蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获得相应的肽质量指纹图（PMF），搜索数据库鉴定蛋白质。结果得到分辨率及重复性较好的正常对照组、偏头痛肝阳上亢型大鼠、中药治疗组大鼠肾上腺组织的2-DE图谱，质谱分析鉴定得到其中的8个差异蛋白质点。结论平肝潜阳药物可能通过调节多种与能量代谢有关的蛋白和泛素的表达而起到治疗偏头痛肝阳上亢证的作用。     

快速埋线对偏头痛肝阳上亢证大鼠肾上腺蛋白质的影响

目的从蛋白质组学角度探讨偏头痛肝阳上亢证证候相关蛋白及快速埋线缓解疼痛和改善肝阳上亢证症状的机制。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离正常大鼠及肝阳上亢证大鼠经快速埋线治疗前、后肾上腺的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析。结果与正常组匹配,肝阳上亢证组与快速埋线组大鼠肾上腺图象匹配率分别为85%、89%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点PI3-8,分子量M r14.4-75kD范围。与正常组比较,肝阳上亢证组中蛋白质点表达上升2倍及以上的点有10个,下降2倍及以上的点有12个。而在快速埋线组中这些表达上升的点均有下降,有11个点下降达2倍以上,其中有7个下降后接近于正常组;而表达下降的点均有上升,有8个点上升达2倍以上,其中有5个点上升后接近于正常组。结论这些有显著差异的蛋白质可能是偏头痛肝阳上亢证证候相关蛋白;快速埋线缓解头痛和改善临床症状也可能与上述蛋白质的改变有关。     

高血压脑出血肝阳化风证患者外周血单个核细胞的蛋白质组学研究

目的通过高血压脑出血肝阳化风证、高血压病肝阳上亢证及健康对照组外周血单个核细胞的双向凝胶电泳图谱的建立,鉴定并分析差异表达的蛋白质,以探讨肝阳上亢证与肝阳化风证证本质内涵。方法用淋巴细胞分离液分离出高血压脑出血肝阳化风证组、高血压病肝阳上亢证组及健康对照组外周血单个核细胞,采用二维凝胶电泳分离三组总蛋白质,获得差异表达蛋白质,制备蛋白质组表达图谱,PDQuest软件分析,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)和数据库对差异表达的蛋白质分析鉴定。结果建立了高血压病肝阳上亢证,高血压脑出血肝阳化风证及健康对照外周血单个核细胞蛋白质表达图谱,经比较发现,肝阳上亢证与肝阳化风证有6个相同表达的蛋白质,18个差异表达的蛋白质。鉴定出的蛋白质涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、细胞信号转导蛋白、抗氧化蛋白、血液蛋白等。结论高血压病肝阳上亢证与高血压脑出血肝阳化风证具有相同和差异表达的蛋白质,提示高血压病肝阳上亢证和高血压脑出血肝阳化风证有共同的物质基础和不同的本质内涵,为"肝阳化风证"证本质的深入研究奠定了基础。     

椎动脉缺血型颈椎病肝阳化风证患者外周血淋巴细胞蛋白质组学研究

目的采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,建立椎动脉缺血型颈椎病肝阳化风证和肝阳上亢证高分辨率的二维凝胶电泳图谱,从蛋白质组学角度探讨椎动脉缺血型颈椎病中医肝阳化风证和肝阳上亢证的本质内涵。方法设颈椎病肝阳化风证组、颈椎病肝阳上亢证组及健康人对照组3组,取外周静脉血分离淋巴细胞提取蛋白质,经双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色获取凝胶图谱,以PDQuestV7.3.1软件对三组表达图谱进行差异分析,选定差异蛋白点进行质谱分析和SWISS-PROT数据库检索鉴定蛋白质。结果建立了颈椎病肝阳化风证组、肝阳上亢证组、健康人组外周静脉血淋巴细胞2-DE图谱;通过分析比较,发现16个蛋白质点在肝阳化风证组中异常表达,12个蛋白质点在肝阳上亢证组中异常表达,肝阳化风证组与肝阳上亢证组比较,分析发现16个差异蛋白点,3个相同蛋白质点。结论颈椎病(椎动脉缺血型)肝阳化风证与肝阳上亢证有差异蛋白又有相同的蛋白,提示同病异证在共同的物质基础上存在着不同的本质内涵。     

急性脑外伤组织双向凝胶电泳分析

目的利用蛋白质组学方法，寻找急性脑外伤组织的特异蛋白质。方法提取脑外伤患者伤灶组织及正常组织的总蛋白质，通过双向凝胶电泳分离蛋白质，经生物质谱鉴定由图像分析软件所得出的具有表达差异的蛋白质点。结果2组蛋白斑点总体分布相似，主要分布在等电点p13—8，分子量Mr14．4—75kD，分析发现脑外伤组与正常组相比，有18个蛋白质上调和20个蛋白质下调，进一步质谱鉴定，其中7个蛋白质分别为NSFL1辅助因子、硫氧还蛋白、泛素羧基末端水解酶同工酶L1、血小板活化因子乙酰基水解酶IB—r亚单位、谷氨酸脱氢酶前体、二氢嘧啶酶相关蛋白2和微管蛋白。结论脑外伤组与正常组相比蛋白质的表达具有差异。推测，这些蛋白质的变化可能与脑外伤的发展变化具有密切的关系。     

高血压大鼠肝阳上亢证的下丘脑双向凝胶电泳分析

目的通过双向凝胶电泳建立高血压肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑分辨率高、重复性好的蛋白质表达图谱,并分析其差异蛋白质。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析。结果两种状态下的大鼠下丘脑图象平均匹配率达92%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点pI3-8,分子量M r14.4~75kD范围。高血压肝阳上亢大鼠下丘脑约有777±27个蛋白质点,正常大鼠下丘脑约有780±31个蛋白质点。与正常大鼠比较肝阳上亢大鼠有22个点表达上升2倍及以上,有25个点表达下降2倍及以上。结论在肝阳上亢状态下有22个蛋白质表达明显增加,还有25个蛋白质表达明显减少。这些蛋白质的变化可能与高血压肝阳上亢的形成有关。     

高血压脑出血肝阳化风证与肝阳上亢证患者血清蛋白质组学研究

目的初步建立高血压脑出血肝阳化风证、高血压肝阳上亢证及健康对照的血清蛋白质组表达图谱,初步鉴定其差异表达的蛋白质。方法各组血清均以试剂盒去除白蛋白及IgG,以BCA法测血清蛋白浓度。以双向凝胶电泳分离各组血清蛋白质,考马斯亮蓝染色,扫描凝胶成像,以PDQuest软件对各组血清蛋白质组表达图谱进行差异分析,选定差异点进行MALDI-TOF质谱分析。Mascot软件搜索MSDB和SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果⑴初步建立三组血清蛋白质表达图谱。⑵8个蛋白质点在三组血清中呈现差异表达,初步鉴定其中的5个蛋白质:血清淀粉样前体蛋白,铜蓝蛋白,维生素D结合蛋白,载脂蛋白C-III和转铁蛋白。结论得到鉴定的5个蛋白质可能与高血压脑出血肝阳化风证发病过程相关。     

泛素羧基末端水解酶在肝阳化风证中的表达

目的比较泛素羧基末端水解酶在不同证中的表达及其意义。方法SD大鼠分为正常组,肝阳上亢组,肝阳化风组(包括出血性中风肝阳化风和缺血性肝阳化风)正常组不做处理,肝阳上亢组大鼠加灌附子汤4周复制肝阳上亢证动物模型,脑出血肝阳化风组大鼠加灌附子汤4周后用Ⅶ胶原酶诱导脑出血模型,复制成脑出血肝阳化风模型。脑缺血肝阳化风组大鼠加灌附子汤4周后用线栓法造成脑缺血模型,复制成缺血性肝阳化风模型。PCR法检测正常组,肝阳上亢组,肝阳化风组泛素羧基末端水解酶的基因表达情况。结果与正常组与肝阳上亢组比较,肝阳化风组泛素羧基末端水解酶表达显著下降(P<0.01)。结论泛素羧基末端水解酶在生理情况下降解突变、损伤和错误折叠蛋白质的主要途径,肝阳化风证泛素羧基末端水解酶的下降明显,提示肝阳化风证的泛素的再利用受阻,导致蛋白质异常聚积,泛素羧基末端水解酶可能成为判断疾病发展到某一阶段的标志。     

职业性三氯乙烯药疹样皮炎患者血清蛋白质差异表达分析

目的 比较职业性三氯乙烯药疹样皮炎(OMDTE)患者发病急性期与治愈后的血清蛋白质表达谱.方法 患者血清经前处理后,双向凝胶电泳分离蛋白质,软件分析凝胶图像,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱鉴定差异表达蛋白斑点.结果 与治愈后的血清蛋白质表达谱比较,在发病急性期发现41个明显差异表达的蛋白斑点,鉴定出31个蛋白.上调的蛋白有S100钙结合蛋白A8、钙网蛋白、血清淀粉样蛋白A、亮氨酸氨基肽酶、谷胱甘肤过氧化物酶等;下调的蛋白有视黄醇结合蛋白、乙酰辅酶A羧化酶、羧肽酶N等;涉及的功能通路包括炎症反应、氧化应激、视黄醇代谢、脂肪酸代谢、激肤和过敏毒素的调节等.结论 OMDTE患者在发病急性期血清蛋白质存在明显的差异表达,鉴定的差异表达蛋白质不仅为其发病机制研究提供候选靶标,并且可能作为生物标志物应用于早期诊治.     

三甲基氯化锡诱导的非洲绿猴肾细胞蛋白质表达谱改变

目的 分析三甲基氯化锡(trimethyltin chloride,TMT-Cl)诱导的非洲绿猴肾细胞(vero细胞)和正常vero细胞之间差异表达蛋白质,以寻找相关的标志物,探讨TMT-Cl所致肾损伤的分子机制.方法 通过双向凝胶电泳和液相色谱-电喷雾线性离子阱质谱技术比较TMT-Cl染毒的vero细胞和正常vero细胞之间蛋白质表达谱的差异,蛋白免疫印迹技术分析其中的2个差异蛋白Annexin A1和α6-Tubulin的表达以验证双向电泳的结果,反转录荧光定量聚合酶链式反应技术进一步分析Annexin AI和α6-Tubulin在mRNA水平的表达.结果 比较TMT-Cl染毒的vero细胞和正常vero细胞蛋白质表达谱,共获得15个差异蛋白点,9个通过质谱分析得到鉴定,3个上调,6个下调.与对照组比较,各TMT-Cl染毒组α6-Tubulin蛋白质和mRNA表达水平均下调,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,各染毒剂量组Annexin A1蛋白表达水平均上调,25和50 μmol/L组mRNA表达水平下调,100 μmol/L组的mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 双向凝胶电泳结合质谱分析筛选到的9个差异表达蛋白与TMT-Cl所致肾细胞毒性密切相关,可作为早期诊断、治疗及疗效评价的候选生物标志物.     

布地奈德对哮喘大鼠肺组织病理改变及TRAF2表达的影响

【目的】 观察哮喘大鼠肺组织病理改变和TRAF2表达的水平,探讨布地奈德治疗哮喘的可能作用机制。 【方法】 采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组和布地奈德组,HE染色观察肺组织炎性改变,免疫组织化学法检测肺组织TRAF2的表达。 【结果】 哮喘组大鼠的毛发、体重、活动度等一般情况改变和肺组织炎性改变较对照组有显著变化,布地奈德能明显减轻上述改变。哮喘组(0.317±0.041 OD值)支气管壁TRAF2的光密度值显著高于对照组(0.220±0.057 OD值)(P＜0.01);布地奈德组支气管壁(0.236±0.033 OD值)TRAF2的光密度值显著低于哮喘组(P＜0.01),与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但肺组织中其表达水平却显著高于哮喘组。 【结论】 哮喘大鼠TRAF2的表达水平增强,它可能参与了哮喘的气道炎症过程;布地奈德能减轻气道炎症,其机制可能是部分通过TRAF2途经。     

姜黄素对2型糖尿病大鼠心肌内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78、caspase-12表达的影响

目的探讨姜黄素对2型糖尿病大鼠心肌内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase-12,caspase-12)表达的影响。方法采用高脂饲料喂养大鼠4周,并一次性腹腔注射35 mg/kg链脲佐菌素建立2型糖尿病模型。造模成功大鼠随机分为模型对照组,姜黄素200、400 mg/kg剂量组和卡托普利(60 mg/kg)组,给药组连续灌胃给药12周。测定各组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平及心重指数、心电图;HE染色观察心肌病理变化;Masson染色观察心肌胶原纤维表达水平;免疫组化法检测心肌组织GRP78与caspase-12蛋白的表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清FBG、LDH水平升高,心重指数增大,形态学观察发现心肌细胞肥大、细胞间胶原纤维增多,心肌组织中GRP78、caspase-12蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组比较,姜黄素400 mg/kg组大鼠FBG、LDH水平降低,心重指数降低,细胞间胶原纤维明显减少,心肌组织中GRP-78、caspase-12蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素对2型糖尿病大鼠心肌组织具有保护作用,其机制可能与降低血糖,并减少GRP78、caspase-12蛋白表达,阻断内质网应激启动的相关凋亡有关。     

亲代谢型谷氨酸受体5在Homer 1a RNA干扰大鼠学习记忆障碍中的作用

目的 Homer 1a RNA干扰(RNA interference,RNAi)后的Sprague Dawley (SD)大鼠在Morris水迷宫中表现学习记忆能力障碍,本研究旨在通过检测Homer 1a RNAi后大鼠不同脑区亲代谢型谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR 5)的表达情况,来初步探讨Homer 1a RNAi致大鼠学习记忆障碍的分子机制。方法 将24只SD大鼠随机分为两组: Homer 1a RNAi组(RNAi组,n=12)和对照组(Nc组,n=12),运用侧脑室注射技术,分别向两组大鼠的侧脑室注射针对Homer 1a 的RNAi慢病毒和无义病毒,等待病毒起效时间7 d,完成相应的行为学检测(Morris水迷宫)后,利用荧光定量PCR 和Western blot 技术检测不同脑组织(前额叶、纹状体、海马)mGluR5 mRNA 和蛋白表达情况。 结果 RNAi组大鼠纹状体和海马mGluR5 mRNA和蛋白表达均较对照组显著降低(纹状体:mRNA t=6.67,蛋白t=3.10;海马:mRNA t=3.08;蛋白t=2.89,P值均<0.05或<0.01),前额叶mGluR5 mRNA和蛋白表达较对照组差异无统计学意义(mRNA t=1.58,蛋白t=1.66,P值均>0.05)。 结论 Homer 1a RNAi后大鼠脑组织Homer 1a相关基因mGluR5表达下调,提示mGluR5可能作为Homer 1a的下游基因,参与Homer 1a RNAi后大鼠学习记忆的损伤过程。     

碘缺乏对大鼠仔鼠小脑c-fos和c-jun蛋白表达的影响

目的研究碘缺乏对大鼠仔鼠小脑c-fos和c-jun蛋白表达的影响.方法选择健康Wistar大鼠30只(雌性20只,雄性10只),将雌鼠随机分成碘缺乏组及对照组,每组10只.碘缺乏组大鼠于合笼前1周开始喂饲低碘饲料(含碘20～40 ng/g),饮去离子水,直至仔鼠生后30 d;对照组大鼠喂饲标准饲料(含碘145～186 ng/g),饮自来水.取生后第20、30、60天仔鼠,测定体重、血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)水平,并取小脑组织进行免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)染色,用图像分析方法分析大鼠仔鼠小脑皮质c-fos和c-jun蛋白表达情况.结果碘缺乏组仔鼠生后第20、30、60天时,体重均低于对照组(均P＜0.01),血清T3、T4水平均低于对照组(均P＜0.01),小脑组织c-fos和c-jun染色强度均低于对照组(均P＜0.05),总积分光密度值均低于对照组(均P＜0.05).结论碘缺乏可降低大鼠仔鼠小脑组织c-fos和c-jun蛋白表达,影响神经系统的发育.     

驱铅颗粒对铅中毒大鼠海马区细胞凋亡作用研究

目的 探讨核因子κB（NF-κB）、p53在铅中毒导致的大鼠脑组织海马区细胞凋亡及中药的治疗作用. 方法 60只大鼠随机分为2组,其中空白组12只,饮用双蒸水;造模组48只,饮用0.02％醋酸铅水,连续60 d以制作大鼠慢性铅中毒模型,然后将造模动物随机分为4组：中药高剂量（按3.0 g·kg-1 ·d-1的剂量灌胃）、中药低剂量（按0.6 g·kg-1·d-1的剂量灌胃）、EDTA组（依地酸钠钙加普鲁卡因肌肉内注射,50 mg·kg-1 ·d-1,连续注射4d为1个疗程,休息4d后进行下一个疗程,连续治疗7个疗程）及病理组（不予任何治疗）,连续60 d后观察治疗前后血液中铅、锌、钙等元素含量变化,并用TUNEL法检测各组动物脑组织海马区细胞凋亡,RT-PCR检测NZ-κB p65、p53 mRNA表达;免疫组化方法检测NF-κB p65蛋白表达,Western Blot方法检测p53表达. 结果 与空白组比较,病理组细胞凋亡、NF-κB p65及p53mRNA和蛋白表达均显著增高（P＜0.01）,与病理组比较,中药高、低剂量治疗组血铅含量显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡显著减少（P＜0.01）,NF-κBp65及p53 mRNA和蛋白表达均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）. 结论 铅通过诱导的大鼠海马区NF-κB p65、p53高表达而促进细胞凋亡,中药驱铅颗粒能抑制NF-κB p65、p53的表达增高而减轻脑组织凋亡程度.     

白藜芦醇改善大鼠被动回避记忆及机制研究

目的 观察白藜芦醇(Res)对大鼠被动回避记忆及海马中NR2A、NR2B和p-NR2B表达的影响。方法 将雌性Wistar大鼠随机分为记忆减退模型组、Res 20、40、80 mg/kg干组、雌二醇组和假手术组。用去卵巢合并D-半乳糖腹腔注射的方法建立记忆减退模型。12周后,用避暗实验检测被动回避记忆,用real-time PCR和Western blot检测NR2A和NR2B基因、总蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果 模型组和假手术组相比,大鼠进入暗室的潜伏期较短( P <0.01),错误次数增多( P <0.01),NR2A和NR2B的基因和蛋白表达降低( P <0.05),p-NR2B/NR2B比值显著升高( P <0.05)。Res干预组及ERT组与模型组比较,进入暗室的潜伏期延长( P <0.01),错误次数减少( P <0.01),NR2A和NR2B基因的表达显著升高(Res干预组、雌二醇组vs模型组: P <0.05, P <0.01);3个Res组及ERT 组NR2A和NR2B蛋白表达明显增加(Res 80mg/kg、其余干预组vs模型组: P <0.01, P <0.05;)。3个干预组及雌二醇组p-NR2B/NR2B均有下降(Res 80mg/kg、雌二醇组vs模型组: P <0.01, P <0.05)。结论 Res上调NR2A和 NR2B基因的表达并且促进其蛋白表达,减少p-NR2B的表达,可能是其改善被动记忆的机制之一。     

染矽尘大鼠早期肺组织蛋白质双向电泳图谱差异分析

目的 应用比较蛋白质组学方法分析染矽尘大鼠早期肺组织蛋白质表达的变化,寻找矽肺发病早期差异表达蛋白,以探讨矽肺发生发展的相关机制.方法 采用随机数字表法将Wistar大鼠分为对照组和染矽尘组(每组4只).气管暴露法建立染矽尘大鼠模型,14 d时处死大鼠取肺组织,提取总蛋白,双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异蛋白.免疫印迹法(Western blotting)检测差异蛋白在肺组织中的表达.结果 初步筛选出存在明显差异的11个蛋白点,经质谱鉴定得到6种蛋白质.与对照组相比,染矽尘组组织蛋白酶D前体、硫氧还蛋白过氧化物酶-1(peroxiredoxin-1,Prx-1)、热休克71 000同源蛋白(heat shockcognate 71 000 protein,HSP7C)、不均一核糖核酸核蛋白A3(hnRNPA3)、表皮脂肪酸结合蛋白(E-FABP)表达上调,两组中吸光度值(A值)分别为116.50±12.56、148.75±22.40;40.00±1.63、66.00±13.93;51.25±7.37、92.75±8.69;83.00±6.48、122.75±24.62;50.75±6.50、93.50±23.10;100.25±19.99、142.50±21.21;差异有统计学意义(t值分别为-2.51、-3.71、-7.28、-3.12、-3.56、-2.90,P值均<0.05).而SEC14类蛋白3表达下调,两组A值为153.00±11.28、109.75±18.32,差异有统计学意义(t=4.02,P<0.01).Western blotting结果显示差异表达蛋白Prx-1在染矽尘组与对照组中A值分别为0.61±0.05、0.35±0.05,染矽尘组中表达上调(t=-7.24,P<0.01),与双向电泳结果一致.结论 应用2-DE建立了染矽尘大鼠早期肺组织双向电泳图谱,分离并初步鉴定了6种与矽肺相关的差异表达的蛋白质,为研究矽肺发生发展相关机制提供了新的线索.