白藜芦醇对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇(Res)对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及炎性细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)]基因表达的调节。方法分别用1mg/LLPS或25mmol/LRes+1mg/LLPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞,采用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测细胞中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA和蛋白的表达。结果LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量在刺激后6～12h明显高于正常对照组(P<0.001),而Res+LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组(P<0.005)。结论LPS可诱导巨噬细胞NF-κB活化,导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强,而Res能抑制NF-κB活化而调节TNF-α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

亚甲蓝对LPS诱导巨噬细胞炎性反应的影响

目的观察亚甲蓝对脂多糖(LPS)诱导小鼠RAW246.7巨噬细胞炎性反应因子表达和细胞NF-κB活性的影响,以初步探讨亚甲蓝在LPS诱导巨噬细胞炎性反应中的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,利用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞建立体外内毒素炎性反应模型。进行实验分组:Ⅰ组(对照组):完全无血清培养基孵育;Ⅱ组(模型组):在无血清培养基中加入浓度为1 g/m L的LPS进行孵育;Ⅲ组(亚甲蓝组):完全无血清培养基中加入亚甲蓝20μmol/L,2 h后加入1 g/m L的LPS孵育,细胞培养24 h后:1实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)观察IL-6、IL-8、MCP-1 m RNA的表达;2酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-6、IL-8、MCP-1蛋白水平;3荧光素酶报告实验(luciferase activity assay)检测细胞中NF-κB的活性。结果LPS刺激巨噬细胞后,细胞中炎性反应因子m RNA和蛋白表达增高,而亚甲蓝预处理能够减弱LPS对炎性反应因子的诱导作用;LPS可以诱导巨噬细胞NF-κB活化,亚甲蓝能够抑制NF-κB的激活。结论亚甲蓝可以通过抑制NF-κB的激活调控LPS诱导的炎性反应。     

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。     

竹荪醇提物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响

目的探讨竹荪醇提物对LPS诱导的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)的分泌,TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的m RNA水平以及核转录因子(NF-κB)p65蛋白表达的影响及可能的抗炎机制。方法以不同浓度(100、200、400μg/ml)的竹荪醇提物作用于LPS(1μg/ml)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用ELISA法和Griess法检测炎性介质TNF-α和NO的分泌量;RT-PCR法测定促炎介质TNF-α、iNOS、IL-6和抗炎介质IL-10的m RNA水平;Western blot检测NF-κB p65蛋白的表达水平。结果与LPS组相比,200、400μg/ml的竹荪醇提物能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放(P0.01);且不同程度抑制RAW264.7细胞中促炎介质iNOS、TNF-α和IL-6的m RNA表达水平(P0.01),剂量依赖性的促进抗炎介质IL-10的m RNA表达水平(P0.01);不同浓度的竹荪醇提物均可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞中NF-κB p65蛋白的表达,差异有统计学意义(P0.01)。结论竹荪醇提物可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放,其抗炎作用的发挥可能与抑制NF-κB p65蛋白的表达,从而调节炎性介质的基因水平有关。     

恒河猴细菌感染性子宫出血模型内膜组织NF-kB活性及TNF-α、IL-1mRNA表达的实验研究

目的:探讨核因子κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)在恒河猴细菌感染性子宫出血模型中的变化。方法:选择月经正常的雌性育龄恒河猴7只,随机分为模型组4只和正常对照组3只,通过官腔细菌接种制作细菌感染性子宫出血模型。用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测模型组及正常对照组恒河猴子宫内膜组织NF-κB与靶基因DNA的结合活性,用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测两组恒河猴子宫内膜组织TNF-α、IL-1mRNA的表达。结果:模型组NF-κB活性及TNF-α、IL-1mRNA的表达量均明显高于正常对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:NF-κB活化及TNF-α、IL-1mRNA的高度表达可能参与了恒河猴细菌感染性子宫出血发病机制。     

恒河猴细菌感染性子宫出血模型内膜组织NF-κB活性及TNF-α、IL-1mRNA表达的实验研究

目的:探讨核因子κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)在恒河猴细菌感染性子宫出血模型中的变化。方法:选择月经正常的雌性育龄恒河猴7只,随机分为模型组4只和正常对照组3只,通过官腔细菌接种制作细菌感染性子宫出血模型。用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测模型组及正常对照组恒河猴子宫内膜组织NF-κB与靶基因DNA的结合活性,用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测两组恒河猴子宫内膜组织TNF-α、IL-1mRNA的表达。结果:模型组NF-κB活性及TNF-α、IL-1mRNA的表达量均明显高于正常对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:NF-κB活化及TNF-α、IL-1mRNA的高度表达可能参与了恒河猴细菌感染性子宫出血发病机制。     

BBI抑制LPS诱导的肠道上皮细胞炎性因子的表达

目的探讨大豆来源的胰蛋白酶抑制剂(BBI)对LPS诱导的肠道上皮细胞炎性因子表达的抑制作用及其机制。方法用MTT法检测LPS和BBI对肠道上皮细胞的毒性作用。先用BBI预处理肠道上皮细胞,再用LPS刺激,采用实时荧光定量PCR检测细胞内炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-8和MCP-1)的表达,通过NF-κB-luc荧光素酶质粒和蛋白质印迹法(Western Blot)检测NF-κB的活性。结果 LPS最大浓度(10 000 ng/mL)和BBI最大浓度(1 000μg/mL)对细胞均无毒性作用。LPS处理可显著地上调肠道上皮细胞炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-8和MCP-1)的表达,其上调作用和LPS的浓度成正相关;LPS处理肠道上皮细胞3 h后炎性因子表达最高,随时间延长有所下降;LPS对肠道上皮细胞炎性因子的上调作用具有剂量和时间效应;BBI预处理肠道上皮细胞6 h时,BBI对LPS诱导肠道上皮细胞炎性因子表达的抑制作用最明显,且具有剂量效应。结论通过对肠道上皮细胞内NF-κB的抑制,BBI能够显著地抑制LPS诱导炎症因子的表达。     

LncRNA-MIAT在LPS致COPD中的表达及在炎症浸润与肺纤维化中的机制

目的 探讨长链非编码RNA MIAT(LncRNA-MIAT)在细菌脂多糖(LPS)致慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠肺部炎症浸润与肺纤维化的相关机制。方法 将大鼠分为对照组、模型组、过表达LncRNA-MIAT组、敲低LncRNA-MIAT组，采用LPS诱导构建慢性阻塞性肺病大鼠模型，苏木精-伊红染色法染色观察肺组织炎症浸润与纤维化损伤程度，实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺组织中LncRNA-MIAT和TOLL样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)mRNA水平，蛋白质免疫印迹法检测TLR4/NF-κB蛋白表达，酶联免疫吸附法检测肺组织中白细胞介素(IL)-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平，并分析。结果 对照组肺泡和气管结构清晰，未见炎症浸润；模型组、过表达LncRNA-MIAT组、敲低LncRNA-MIAT组大鼠出现不同程度炎细胞浸润，上皮结构紊乱，存在纤维化现象；模型组大鼠肺组织中的LncRNA-MIAT和TLR4、NF-κB mRNA水平及TLR4、NF-κB蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05); LncRNA-MIAT过...     

细菌脂多糖对急性胰腺炎大鼠核因子-κB及肿瘤坏死因子的影响

目的探讨细菌脂多糖(LPS)对大鼠实验性急性胰腺炎(AP)核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA及病理改变的影响,了解LPS在AP发生中的作用.方法 24只Wistar大鼠分为3组:AP组、LPS干预组及对照组;AP组蛙皮素诱导产生AP;LPS干预组在AP组基础上,给予腹腔内注射大剂量LPS(2mg/kg);对胰腺组织标本进行病理评分;RT-PCR检测胰腺组织中TNF-α mRNA表达的变化;应用流式细胞术(FCM)检测NF-κB表达的改变.结果与AP组相比,病理结果显示,LPS干预组胰腺组织水肿程度及炎性细胞浸润和坏死明显加重,胰腺组织损伤程度明显加重(病理评分7.21±0.53us,3.65±0.37,P＜0.01);FCM显示由于LPS的作用,NF-κB的表达明显上调(61.28±7.56us,41.13±11.72,P＜0.05),胰腺组织内炎性介质TNF-αmRNA的表达也同步上调(3.798±0.438us,2.856±0.365,P＜0.05).结论 LPS有加重AP病情的作用,其可能机制是LPS通过激活NF-κB及TNF-α从而实现了上述病理损害.     

嗜黏蛋白阿克曼菌脂多糖对小鼠巨噬细胞的影响

目的 提取、鉴定嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila,AKK）的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,初步探讨AKK的LPS对小鼠巨噬细胞的影响。方法 试剂盒法提取AKK的LPS并纯化,ELISA法定量;BCA法、紫外分光光度法、SDS-PAGE和银染鉴定提取的LPS的纯度和结构;鲎试剂法检测LPS活性。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分为正常对照组、大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS组和AKK LPS组。经LPS作用后,CCK-8法检测细胞活性;RT-qPCR测定NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平。结果 纯化的细菌LPS平均产率为7.14%,蛋白、核酸含量分别为0.005 6‰和2.12%;银染结果显示AKK的LPS条带分布与E.coli的LPS不同;鲎试剂测定其活性为7.10×107EU/ml;部分干预浓度下,AKK LPS干预组细胞存活率低于E.coli LPS组;刺激6 h、12 h、24 h后,与正常对照组相比,AKK LPS干预组细胞内NF-κB的mRNA表达水平在...     

谷氨酰胺对内毒素诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α表达和NF-κB活化的影响

目的:探讨Gln对内毒素(LPS)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞肿瘤坏死凶子(TNF)-α表达和NF-κB活性的影响. 方法:原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,分为0、0.5、2.0、10.0 mmol/L Gin及10 mmol/L Gin、空白对照共六个组,作用8 h后,前四组1μg/mL LPS刺激24 h.用ELISA法测定细胞上清TNF- α的水平,电泳迁移率改变试验(EMSA)检测细胞内NF-κB活性. 结果:Gln预处理可降低LPS诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α的表达,并且其作用呈剂量依赖性,在10 mmol/L浓度最为显著;Gln预处理对NF-κB活性有明显地抑制作用. 结论:Gin预处理可抑制NF-κB活性,并降低LPS诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α的表达,从而起到免疫调节的作用.     

泰斯巴汀对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞A549损伤的保护作用及机制研究

目的探讨泰斯巴汀对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞A549损伤的影响和其作用机制。方法将肺泡上皮细胞A549分为3组,依次为Control组、SP组和SP+泰斯巴汀组。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax和Bcl2)、炎性因子(IL-6和IL-10)以及NF-κB信号通路相关蛋白(NF-κB p65、NF-κB p-p65和TNF-α)的表达水平。结果 SP感染可抑制A549细胞存活,泰斯巴汀可减轻SP对A549细胞存活的抑制作用,并呈一定的浓度依赖性。SP组A549细胞凋亡率、Bax、IL-6、NF-κB p65、NF-κB p-p65和TNF-α的表达水平显著高于Control组,而Bcl2和IL-10的表达水平显著低于Control组。SP+泰斯巴汀组A549细胞凋亡率、Bax、IL-6、NF-κB p65、NF-κB p-p65和TNF-α的表达水平显著低于SP组,而Bcl2和IL-10的表达水平显著高于SP组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论泰斯巴汀通过抑制NF-κB信号通路,能够抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和促炎因子表达,对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤具有保护作用。     

儿童肥胖症合并肺炎支原体感染TLR4/NF-κB信号通路与致炎细胞因子水平的关系

目的探讨肥胖症合并肺炎支原体(MP)感染患儿Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路与致炎细胞因子水平的相关性。方法选取2018年5月-2020年8月淮安市第二人民医院收治的68例肥胖症合并MP感染患儿作为研究组;另收集同期收治的肥胖症患儿60例为肥胖组,以及健康体检的健康儿童60名为健康组,检测和比较三组外周血TLR4、NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)mRNA相对表达量和血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,分析TLR4、NF-κB、IκB与血清致炎细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α之间的关系;并采用单因素、多因素Logisitic回归分析肥胖症患儿发生MP感染的危险因素。结果三组TLR4、NF-κB、IκB mRNA相对表达量和血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均有统计学差异(P0.05),研究组和肥胖组TLR4、NF-κB mRNA相对表达量及血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于健康组,IκB mRNA低于健康组(P0.05),且研究组TLR4、NF-κB mRNA相对表达量高于肥胖组,IκB mRNA低于肥胖组;相关性分析结果显示,肥胖症合并MP感染患儿TLR4、NF-κB表达分别与IL-6、IL-8和TNF-α呈正相关性(P0.05),IκB与IL-6、IL-8、TNF-α均呈负相关性(P0.05)。多因素分析结果显示,年龄3～7岁、处于低补体状态和有流行接触史是肥胖症患儿发生MP感染的独立危险因素(P0.05)。结论肥胖症合并MP感染患儿TLR4/NF-κB信号通路处于过度活化状态,并可能通过该途径促进IL-6、IL-8、TNF-α等致炎细胞因子释放,诱导发生肺部炎症反应。     

人早孕蜕膜基质细胞对育龄期女性外周血Treg的影响

目的：探讨人早孕蜕膜基质细胞（DSCs）对育龄女性外周血Treg细胞的影响。方法：分离培养育龄期女性外周血淋巴细胞（PBLC）;分离培养正常人早孕DSCs并传至第3代或第4代,后分为4组。①对照组：单纯培养PBLC;②共培养组：PBLC+DSCs培养组;③脂多糖（LPS）刺激组：PBLC+DSCs+LPS培养组;④吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）阻断组：PBLC+DSCs+LPS+PDTC培养组。蛋白质印迹法（Western blotting）检测核因子κB抑制因子α（IκBα）蛋白表达水平;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测FoxP3 mRNA表达水平;流式细胞仪检测Treg细胞亚群比例。结果：分离培养的人原代DSCs的纯度大于95%。Western blotting和RT-PCR结果显示,共培养组IκBα蛋白、FoxP3 mRNA表达明显高于其余3组（P＜0.0５）;与共培养组相比,LPS刺激组IκBα蛋白、FoxP3 mRNA表达降低（P＜0.05）,与LPS刺激组相比,PDTC阻断组IκBα蛋白、FoxP3 mRNA表达升高,但仍低于共培养组（P＜0.05）。流式细胞术检测显示,共培养组Treg细胞亚群比例高于其余3组（P＜0.05）;与共培养组相比,LPS刺激组Treg细胞亚群比例下降;PDTC阻断组Treg细胞亚群比例高于LPS刺激组,但仍低于共培养组（P＜0.05）。结论：人早孕DSCs能上调育龄期女性外周血淋巴细胞中Treg细胞亚群比例,加入LPS刺激后Treg细胞亚群比例下降,可能与级联活化IκB激酶,降解IκBα,活化NF-κB信号通路,从而抑制FoxP3表达增高有关。     

妊娠期糖尿病患者外周血甘露糖结合凝集素变化及作用机制研究

目的探讨妊娠期糖尿病患者外周血甘露糖结合凝集素(MBL)变化及作用机制。方法选取2017年6月-2018年10月医院收治的妊娠期糖尿病患者156例为妊娠期糖尿病组,另选正常孕妇100例为正常对照组;酶联免疫吸附法检测血浆MBL、白细胞介素-6 (IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平; Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,RT-PCR和Western blot检测Tlr4、NF-κB mRNA和蛋白表达;使用不同浓度的重组MBL处理妊娠期糖尿病患者外周血单个核细胞分为4个亚组,检测细胞培养上清液中MBL、IL-6、IL-8、TNF-α水平以及细胞中Tlr4、NF-κB mRNA和蛋白表达。结果妊娠期糖尿病组患者血浆MBL水平明显低于正常对照组,IL-6、IL-8、TNF-α水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。妊娠期糖尿病组Tlr4、NF-κB mRNA相对表达量明显高于正常对照组,Tlr4、NF-κB蛋白相对表达量明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。细胞培养上清液中MBL、IL-6、IL-8、TNF-α水平在4个亚组间差异有统计学意义(P0.01); MBL 0.5μg/ml组、MBL 1μg/ml组MBL水平明显高于空白对照组,IL-6、IL-8、TNF-α水平明显低于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.01); MBL 0.1μg/ml组MBL、IL-6、IL-8、TNF-α水平与空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。Tlr4、NF-κB mRNA和蛋白相对表达量在4个亚组间差异有统计学意义(P0.01); MBL 0.5μg/ml组、MBL 1μg/ml组Tlr4、NF-κB mRNA和蛋白相对表达量明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P 0.01); MBL 0.1μg/ml组Tlr4、NF-κB mRNA和蛋白相对表达量与空白对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论妊娠期糖尿病发生可能与MBL低表达降低了对Tlr4/NF-κB信号通路及炎症反应的抑制作用有关。     

儿童川崎病并发EB病毒感染NF-κB信号通路表达及其影响

目的 探究儿童川崎病(KD)并发EB病毒(EBV)感染核因子κB(NF-κB)信号通路表达及其对细胞炎症因子释放和冠脉损伤(CAL)的影响。方法 选取2017年12月—2020年12月抚州市第一人民医院儿科收治的KD患儿89例,根据EBV DNA检测结果分为EBV感染组30例和无EBV感染组59例,采用酶联免疫吸附法检测患儿血清炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及其特异性组织抑制剂1(TIMP-1)、NF-κB及其抑制蛋白(IκBα)表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(PCR)检测NF-κB、IκB mRNA水平,统计两组患儿CAL发生率。结果 EBV感染组患儿外周血白细胞计数、血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、TNF-α、MMP-2、MMP-9、NF-κB及其mRNA水平高于无EBV感染组,TIMP-1、IκBα及其mRNA水平均低于无EBV感染组(P<0.05); EBV感染组CAL发生率为43.33%(13/30),高于无EBV感染组(P<0.05)。结论 合并EBV感染的川崎病患儿外周血炎症细胞因子水平上调,CAL发生率明显升高,EBV感染可能通过激活NF-κB信号通路介导炎症反应造成CAL。     

IL-6调控TLR4/NF-κB炎症信号促进人胰腺癌细胞增殖的实验研究

目的探讨白细胞介素-6(IL-6)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖的影响及其调控Toll受体4(TLR4)/核转录因子kappaB(NF-κB)信号通路作用机制。方法 MTT法检测IL-6对BxPC-3细胞增殖的影响并计算增殖率;台盼蓝拒染法检测IL-6对BxPC-3细胞生长的影响并绘制生长曲线;克隆形成实验观察IL-6对BxPC-3细胞克隆形成的影响并计算克隆形成率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-6对BxPC-3细胞TLR4、髓样化因子(MyD88)、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平的影响;Westen blot法检测IL-6对BxPC-3细胞TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β及TNF-α蛋白表达水平的影响。结果与阴性对照组比较,IL-6可促进BxPC-3胰腺癌细胞生长,升高细胞增值率和克隆形成率;IL-6干预后,BxPC-3胰腺癌细胞TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β和TNF-α等因子的mRNA和蛋白表达水平均明显上调。结论 IL-6可促进BxPC-3胰腺癌细胞生长增殖,其机制可能与上调TLR4/NF-κB信号通路有关。     

不同粒径汽车尾气颗粒物对A549细胞TNF-α等炎性因子及NF-κB的影响

目的 探讨并比较不同粒径汽车尾气颗粒物对人肺癌上皮细胞A549肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、核转录因子-κB(NF-κB)的mRNA及NF-κB蛋白表达的影响.方法 以不同粒径(0.18～3.2 μm)汽车尾气颗粒物混悬液(1 00 μg/ml)染毒A549细胞,48 h后RT-PCR法检测细胞TNF-α 、IL-6及NF-κB(P65)基因表达水平,Western Blot法检测胞浆及胞核内NF-κB(P65)蛋白表达水平.结果 与对照组相比,各染毒组细胞的TNF-α、IL-6及NF-κB(P65) mRNA表达水平均上升(P＜0.05),由高到低依次为0.56～、0.32～、0.18～、1.0～和1.8～3.2 μm组,两两之间(除0.18～和0.32～μ m组之间、1.0～和1.8～3.2 μm组之间)差异均有统计学意义(P＜0.05);各组TNF-α、IL-6 mRNA水平与NF-κB(P65) mRNA水平显著相关(r=0.944,0.890,P＜0.05).与对照组相比,除1.8～3.2 μm组无统计学意义外,其余各组胞浆NF-κB (P65)蛋白水平均降低(P＜0.05),由高到低依次为1.0～、0.18～、0.32～、0.56～μm组;而胞核NF-κB( P65)蛋白水平均升高(P＜0.05),由低到高依次为1.0～、0.18～、0.32～、0.56～μm组.结论 不同粒径汽车尾气颗粒物作用于A549细胞后均可使TNF-α、IL-6、NF-κB mRNA表达升高、NF-κB活化,活化的NF-κB由细胞质进入细胞核发挥其调控炎症反应的作用.各染毒组中以0.56～μm组炎性损伤效应最强,粒径是影响颗粒物毒性作用大小的重要因素之一.     

高流量鼻导管氧疗联合氨溴索对ARDS大鼠肺炎症损伤的影响及作用机制的研究

目的 研究高流量鼻导管(high-flow nasal cannula,HFNC)氧疗联合氨溴索(ambroxol,AMB)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的ARDS大鼠肺炎症损伤的保护作用及机制。方法 实验分为正常对照组、ARDS对照组、HFNC氧疗组、AMB治疗组、联合(HFNC+AMB)治疗组。用LPS“两次打击”法建立ARDS大鼠模型,观察五组大鼠动脉血气分析、肺湿/干重比、肺组织病理改变及肺损伤评分,用ELISA法检测肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性,qPCR法检测肺组织炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α及核转录因子NF-κB mRNA水平,组织免疫荧光染色法定位肺组织NF-κB表达情况。结果 HFNC氧疗组、AMB治疗组、联合(HFNC+AMB)治疗组均能显著提高动脉血氧分压,增加血氧饱和度,降低肺湿/干重比,改善肺组织病理损伤情况;降低肺组织MPO活性( P ＜0.05);抑制炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的产生( P ＜0.05);下调核转录因子NF-κB的表达( P ＜0.05)。结论 HFNC氧疗、AMB治疗及二者联合干预的方式均能通过下调ARDS大鼠转录因子NF-κB水平,进而抑制炎性细胞因子的过度表达,发挥对ARDS的治疗作用,且HFNC氧疗联合AMB的干预效果最佳。     

不同剂量维拉帕米对内毒素血症大鼠肝细胞因子表达和NF-κB活化的影响

目的:观察不同剂量维拉帕米对内毒素(LPS)刺激的大鼠肝致炎/抗炎细胞因子的表达及对核因子κB(NF-κB)活化的调控作用.方法:56只SD大鼠随机分为七组:A组为等渗盐水对照组;B组为等渗盐水 LPS10mg/kg;C、D、E、F组为不同剂量维拉帕米组,分别给予维拉帕米1、2.5、5和10 mg/kg LPS 10 mg/kg;G组为维拉帕米对照组,维拉帕米10 mg/kg.取大鼠肝匀浆和血清,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织中炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)、IL-10.电泳迁移率变动分析实验(EMSA)测定肝NF-κB的表达,同时检测血清转氨酶水平.结果:内毒素可诱导肝组织中TNF-α、IL-6和IL-10表达增加(P＜0.01),血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平升高(P＜0.01),同时诱导肝组织NF-κB的活化(P＜0.01).维拉帕米可不同程度地降低内毒素诱导的肝TNF-α、IL-6和NF-κB的生成,降低血清ALT和AST水平,增加肝组织IL-10的表达,并且与维垃帕米剂量相关.结论:不同剂量维拉帕米以剂量依赖方式调节内毒素诱导的大鼠肝致炎/抗炎因子的表达,同时抑制NF-κB的活化,改善内毒素诱导的急性肝损伤.