钾通道在重组改构人肿瘤坏死因子抑制肺癌细胞增殖中的作用

背景与目的 随着膜片钳技术和分子生物学技术的发展，及其在肿瘤细胞膜离子通道研究中的应用，肿瘤细胞膜离子通道已逐渐成为肿瘤基础研究的热点。本研究旨在探讨钾通道（K^＋通道）在重组改构人肿瘤坏死因子（rmhTNF）抑制肺腺癌细胞A-549增殖、促进凋亡中的作用。方法 以人肺腺癌细胞系A-549为研究对象，采用全细胞膜片钳技术记录应用rmhTNF前后细胞膜K^＋电流特性变化，分析rmhTNF对细胞膜K^＋电流的影响；用MTT法检测rmhTNF对细胞增殖的影响；流式细胞仪检测rmhTNF作用后细胞周期分配及凋亡率。结果 经rmhTNF作用48h后肺癌细胞膜上跨膜K^＋电流幅值明显降低（P＜0．01），且与rmhTNF存在剂量依赖关系。MTT实验显示rmhTNF抑制肺癌细胞的体外增殖，随rmhTNF浓度的增加，抑制率由14．56％增至38．68％。流式细胞仪检测细胞周期分配发生变化，G1期由53．02％增至72．93％（P〈0．01），且细胞凋亡率由2．08％增至8．68％（P＜0．01）。结论 rmhTNF可抑制肺癌细胞膜K^＋通道的表达。rmhTNF通过使A-549细胞周期受阻于G1期，激发细胞凋亡而抑制肺癌细胞增殖。在rmhTNF抑制人肺腺癌A-549细胞增殖、促进其凋亡的作用中细胞膜K^＋通道起着一定的作用。     

四乙胺对宫颈癌SiHa细胞增殖及电压门控钾通道的抑制效应

背景与目的:多种钾通道涉及恶性肿瘤细胞增殖的调控,为了探讨电压门控钾通道对宫颈癌细胞增殖的影响,本研究以人宫颈癌细胞SiHa为研究对象,观察电压门控钾通道阻滞剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)对肿瘤细胞增殖和钾离子电流的作用。方法:以TEA作用于体外培养的SiHa细胞,通过MTT法、Hoechst33258染色、流式细胞术及全细胞膜片钳技术,分别检测TEA对肿瘤细胞的增殖、细胞凋亡、细胞周期及细胞膜电压门控钾通道的影响。结果:TEA对SiHa细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,并能诱导细胞凋亡、使细胞周期阻滞于G0/G1期,10mmol/LTEA可将峰值外向钾离子电流显著降低[(260±12)pAvs.(58±6)pA,P<0.01]。结论:电压门控钾通道对SiHa细胞增殖的调控具有重要作用,阻断电压门控钾通道可抑制SiHa细胞增殖。     

人肝癌HCC-9204细胞膜钾离子通道特性的研究

目的研究人肝癌HCC-9204细胞膜钾离子通道的特性。方法人肝癌细胞株HCC-9204传代培养72 h后,以膜片钳全细胞记录方式检测细胞膜钾离子通道电流。结果HCC-9204细胞膜静息膜电位为-21.2±1.8mV,细胞膜电容为12.5±2.6pF;HCC-9204细胞所记录到的跨膜电流具有电压依赖及不失活等特性,能被高浓度K 通道阻断剂TEA或4-AP阻断。结论人肝癌HCC-9204细胞膜存在钾离子通道,其主要类型可能是电压依赖性钾通道。     

ATRA对A549生物学特性及E-CD/catenins表达的影响

目的：探讨诱导分化剂全反维甲酸（ATRA）对肺腺癌A549细胞增殖和E－CD／catenins复合物表达的影响。方法：用细胞生长率分析不同浓度ATRA处理不同时相的A549细胞的增殖特性变化；用免疫组织化学法检测ATRA处理前后A549细胞的E－CD／catenins复合物各成分（E－CD、α-和β-catenin)的表达情况。结果：无ATRA处理组A549细胞增殖力最强，而各处理组细胞增殖能力均有较大降低；免疫组化结果显示无ATRA处理组细胞基本不表达E－CD和α-catenin，而β－catenin主要呈膜表达阳性；处理后的A549细胞E－CD、α-和β－catenin表达水平均有明显增强，并且三者的表达形式均以细胞膜表达为主。结论：ATRA可抑制肺腺癌A549细胞增殖、增强E－CD／catenins复合物表达和膜定位。     

纤维连接蛋白在不同类型肺癌细胞侵袭过程中的作用及机制

目的 观察和探讨纤维连接蛋白(FN)对不同类型肺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法 在FN包被的培养板和FN滤膜的Boyden浸润小室等体外侵袭模型中，比较小细胞肿癌细胞系054A和肺腺癌细胞系A549粘附及迁移能力的差别，并检测FN对肿瘤细胞增殖活性的影响。分别给予细胞抗α3整合素、抗α5整合素、抗β1整合素单抗预处理后，观察侵袭性的变化。结果 FN增强A549细胞粘附、迁移及增殖活性的作用明显大于054A细胞。这种作用在A549细胞能被抗α3、抗α5和抗β1单抗抑制，而在054A细胞能被抗α3和抗β1单抗抑制。结论 FN对不同类型肺癌细胞侵袭能力的影响不同，可能与细胞膜整合素受体的差异有关。     

PI3K/AKT抑制剂对人肺癌细胞株生长的影响

目的 研究PI3K／Akt特异性抑制剂LY294002对人肺腺癌细胞株（A549）增殖的影响。方法 用免疫细胞化学S-P法检测对照组和LY294002干预组A549细胞p-Akt蛋白的表达，MTT法检测对照组和LY294002干预组（LY294002 5μmol／L，10μmol／L，20μmol／L，40μmol／L）干预24h，48h、72h后A549细胞增殖的抑制率。结果 LY294002以剂量、时间依赖性方式抑制A549细胞的生长，各个LY294002干预组与对照组相比p-Akt蛋白的表达降低，有统计学意义（P〈0．01）。结论 LY294002对人肺腺癌A549细胞有抑制生长的作用。LY294002对p-Akt表达的抑制可能是细胞增殖受抑的重要原因。     

榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达的影响

目的：观察榄香烯乳对人肺腺癌细胞株A549细胞hnRNP A2／B1 mRNA及蛋白表达的影响。方法：选用A549细胞株，应用MTT法检测细胞增殖，显微镜下观察细胞形态变化，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测hnRNPA2／B1mRNA表达，蛋白印迹法检测hnRNP A2／B1蛋白表达。结果：榄香烯乳对A549细胞体外增殖有显著抑制作用，且呈时间和剂量依赖性，其IC50值为15μg／ml，hnRNPA2／B1mRNA及蛋白表达水平均有下降。结论：榄香烯乳可抑制肺腺癌A549细胞增殖，致其hnRNPA2／B1的mRNA和蛋白表达水平均有下降。     

沙立度胺及其对映体对人肺腺癌A549细胞VEGF和MMP-9蛋白表达的影响

[目的]观察沙立度胺(TD)及其对映体(S-TD)对人肺腺癌A549细胞增殖及对VEGF、MMP-9蛋白分泌的影响。[方法]体外培养A549细胞,采用MTT比色法,测定不同质量浓度的TD,S-TD对A549细胞增殖的影响;双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液中的VEGF和MMP-9蛋白含量。[结果]2.0～200.0μg/mlTD、S-TD作用48h,对A549细胞增殖无显著抑制作用(P>0.05);200.0μg/mlTD、S-TD对A549细胞VEGF蛋白分泌量有抑制活性作用,100.0～200.0μg/ml对MMP-9蛋白分泌具有抑制作用。[结论]TD及S-TD在体外对人肺腺癌A549细胞没有明显的增殖抑制作用;TD及S-TD在高浓度时抑制VEGF、MMP-9蛋白的分泌从而抑制肿瘤的增殖,但TD及S-TD活性无差异。     

阿司匹林抑制肺癌细胞增殖的实验研究

 目的 观察阿司匹林在体外对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）法观察阿司匹林及与奥沙利铂联用抑制A549细胞的增殖；采用流式细胞仪（FCM）观察阿司匹林处理后A549细胞周期分布的变化；采用HE染色和DNA末端原位标记染色技术（TUNEL）观察阿司匹林处理后诱导A549细胞凋亡的作用。结果 MTT显示阿司匹林呈剂量依赖方式抑制A549细胞增殖。阿司匹林作用后，FCM显示G0／G1期细胞比例增加，S期和G／M期细胞比例降低，TUNEL显示细胞凋亡指数（AI）由3．67％±1．15％增加到26．33％±2．52％，呈一定剂量效应关系。光镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化。阿司匹林（2．5mmol／L）与奥沙利铂（≥6．25ug／mL）联用可增强抑制A549增殖的作用，二者呈协同或相加作用。结论 阿司匹林可抑制肺腺癌细胞A549的增殖，其影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡可能是其重要的机制。阿司匹林及与奥沙利铂联用有显著的协同抗增殖效应。     

HuR siRNA对肺腺癌A549 细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨HuR siRNA 对人肺腺癌A549 株细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能机制。方法：HuR siRNA 瞬时转染肺腺癌A549 细胞24 h 后,CCK-8 实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,qPCR和Western blotting 检测HuR及基质金属蛋白酶（MMP）-9 基因mRNA和蛋白质表达。结果：HuR siRNA能够抑制人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移及侵袭;HuR siRNA 显著降低A549 细胞HuR、MMP-9 mRNA和蛋白表达（P＜0.01）。结论：下调HuR能抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其机制与下调MMP-9 有关。