ASPP1基因mRNA在肿瘤细胞株中的表达初探

目的 建立p53凋亡刺激蛋白基因(ASPP1)mRNA表达水平的RT-PCR测定方法;并应用该方法测定ASPP1 mRNA在正常人单核细胞与白血病细胞株Jurkat,HL-60、K562中的表达水平.方法 应用单核细胞分离液分离正常人血液单核细胞,用RPMI 1640培养液培养细胞株Jurkat、HL-60.K562,所得细胞用Tripure分离试剂提取总RNA,用RT-PCR扩增.取ASPP1基因和β-actin基因的扩增产物各10μl,行溴钇锭染色,在琼脂糖凝胶上进行电泳,检测AsfIP1 mRNA的表达水平.对ASPP1基因表达量与β-actin表达量的比值进行比较,从而计算ASPP1在各细胞株的相对表达量.结果 在正常人单核细胞和各自血病细胞株中均有ASPP1基因的mRNA表达,ASPP1与β-actin的比值在正常人单核细胞中为0.545±0.019,而在白血病细胞株Jurkat、HL-60、K-562中分别为0.155±0.081、0.199±0.016、0.191±0.015,可见ASPP1 mRNA在正常细胞中的表达水平比在白血病细胞株Jurkat、HL-60、K-562中的表达水平高(P＜0.01).结论 在肿瘤的发生、发展中,ASPP1与p53共同作用,形成ASPP-p53复合物作用于原凋亡基因启动子,能特异性增强p53结合DNA的能力,促进p53诱导细胞凋亡的作用.ASPP1的这种功能在抑制正常细胞恶性转化的过程中有重要作用.     

人乳腺珠蛋白mRNA在腋窝淋巴结及外周血中的表达规律及其临床意义

目的探讨人乳腺珠蛋白mRNA（hMAM mRNA）在乳腺癌组织、腋窝淋巴结及外周血中表达的意义。方法应用实时荧光定量PCR（RQ-PCR）技术检测乳腺癌组织、腋窝淋巴结及外周血中hMAMmRNA的表达情况,并取乳腺良性肿瘤、健康志愿者外周血作为阴性对照。结果（1）在15例新鲜乳腺癌组织中有14例hMAM mRNA表达阳性,表达的敏感性为93%,在乳腺良性肿瘤及非乳腺组织中不表达;（2）在30例腋窝淋巴结中hMAM mRNA总的阳性表达率63%,其中病理阳性淋巴结hMAM mRNA的表达率为94.4%,病理阴性的淋巴结hMAM mRNA的表达为25%;（3）54例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA的阳性表达率为29%;其中Ⅰ期10%,Ⅱ期21%,Ⅲ期45%,Ⅳ期80%。20例乳腺纤维瘤及20例健康志愿者外周血中均未检测出hMAM mRNA的表达;hMAM mRNA的阳性表达与肿瘤临床分期有关。结论人乳腺珠蛋白是检测乳腺癌微转移的特异性指标,可以反映乳腺癌患者微转移情况,对患者预后判断有重要意义。     

食管反流促进肿瘤发生与抑癌基因mRNA表达的相关性

为研究胃二十指肠食管反流的大鼠诱癌过程中食管组织内p53,p16,p21等抑癌基因的mRNA表达，制作3种食管反流动物模型及对照组，术后均注射致癌剂，用原位杂交法检测术后20，26周时食管组织中p53,p16,p21基因的mRNA表达。结果显示，各反流组食管上皮中p53的mRNA表达均较对照组显著增强，其中十二指肠食管反流组（D组），十二指肠胃食管反流组（DG组）的表达较胃食管反流组（G组）更强，D组与DG组结果相似；D，DG组的p16,p21基因mRNA表达较C组减弱，而G组与C组相比差异无显著性意义。提示胃液及十二指肠内容物反流可改变抑癌基因在转录水平的表达，促进大鼠食管肿瘤的发生，其中十二指肠内容物的作用较强。     

RASSF1A及p53蛋白在胃黏膜病变中的表达及意义

Ras相关区域家族1A(RASSF1A)是新近发现的候选抑癌基因,其表达与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,与p53基因的相关性也日益受到广大学者的关注。本研究检测胃癌及相应正常组织中RASSF1A与p53蛋白的表达情况,以分析RASSF1A与p53在胃癌发生、发展中的作用。     

Ki-67、p53、mdm2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及其意义

少量表达.mdrrd蛋白在中耳胆脂瘤上皮细胞的LI为36.1±7.0,显著高于外耳道皮肤上皮细胞(1.7±0.5,t=3.325,P=0.003).Pearson相关分析发现中耳胆脂瘤上皮细胞p53、mdm2蛋白表达存在正相关(r=0.499,P=0.031).结论 与正常外耳道皮肤上皮细胞比较,中耳胆脂瘤上皮细胞具有过度增殖的趋势.p53、mdm2异常表达与中耳胆脂瘤发生密切相关,二者在上皮细胞层的分布特性与其病理状态相关.     

p53、rasp21及C-myc癌基因蛋白在胃癌中的表达及分布特征

目的通过对胃癌标本中p53、rasp21及C-myc癌基因蛋白的表达分析,探讨其在胃癌发生中的作用。方法用免疫组化方法检测了60例胃癌标本中p53、rasp21及C-myc的表达及分布。结果p53、rasp21及C-myc在胃癌中的阳性表达分别为51.7％、40.0％、66．7％;胃癌旁正常黏膜七皮的阳性率分别为1．6％、13．3％、15．0％,与肿瘤区相比较有显著差异（P〈0．01）。rasp21及Cmyc在肿瘤区与肿瘤移行区、癌旁正常黏膜区染色强度比较有差异（P〈0．05）。p53及C-myc阳性表达与肿瘤的分化程度有关,即分化越差,其阳性表达越高。结论p53、rasp21及C-myc与胃癌的发生、发展密切相关,p53及Gmyc在肿瘤分化过程中可能起重要作用。     

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O及P53在胃癌中的表达及其与预后的关系

目的检测受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)、P53蛋白在胃癌组织中的表达,分析其与临床病理特征及预后的关系。方法回顾性分析2004年1月-2007年12月,在解放军总医院行D2根治术后并行氟尿嘧啶为主的辅助化疗4周期以上的Ⅱ-ⅢC期胃癌患者共61例,应用免疫组化法检测胃癌组织、癌旁组织和转移淋巴结中PTPRO蛋白表达,同时检测胃癌组织中P53蛋白表达,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果 61例标本中,PTPRO在胃癌组织、癌旁组织、转移淋巴结中阳性率分别为65.6%、94.8%6、5.9%(P<0.01);P53在胃癌组织阳性率为36.2%;P53表达与PTPRO表达无相关性(r=0.169,P=0.20)。单因素分析显示,与临床分期晚、P53阳性的患者比较,P53阴性(P=0.022)、临床分期越早(P=0.000)的患者中位无病生存期(MDFS)越长(P<0.05);P53阴性(P=0.001)、临床分期越早(P=0.001)的患者中位生存时间(MST)越长(P<0.05)。多因素分析显示临床分期(P=0.001)、PTPRO蛋白表达(P=0.018)、P53蛋白表达(P=0.031)是影响胃癌术后患者DFS的独立影响因素,而临床分期(P=0.005)、PTPRO蛋白表达(P=0.014)、P53蛋白表达(P=0.033)、组织学分级(P=0.020)是影响其总生存期(OS)的独立影响因素。结论 PTPRO在胃癌组织中的表达显著减少。对于胃癌D2根治术后行氟尿嘧啶为主辅助化疗的患者,PTPRO和P53蛋白表达有望成为预测疗效的分子标记物。     

KLK6 mRNA在乳腺癌中的表达及其临床病理和生物学意义

目的 对正常乳腺组织和癌组织KLK6 mRNA进行定量,分析其表达与临床病理特征的关系,并探讨乳腺癌细胞株MCF-7中KLK6基因被沉默后细胞增殖及凋亡的变化.方法 应用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除组织中KLK6基因mRNA的表达量,并分析KLK6 mRNA的表达量与ER、PR及肿瘤转移情况的相关性.以体外化学合成的siRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7中KLK6基因的表达,分析细胞周期、细胞凋亡及细胞形态的变化.结果 KLK6 mRNA在73%(35/48)的乳腺癌组织中表达水平增高,明显高于正常组织(P＜0.01),有淋巴结转移的患者癌组织中的表达水平明显低于未转移组(P＜0.05);ER( )组低于ER(-)组(P＜0.05);PR( )组与PR(-)组差异不明显(P＞0.05);与乳腺癌相关基因CerbB-2的表达无相关性(P＞0.05).MCF-7细胞中KLK6基因表达沉默后,S期细胞增加13.23%,细胞凋亡无明显变化.结论 KLK6 mRNA在乳腺癌组织表达增高,并与ER状态及肿瘤转移情况有关.体外MCF-7细胞株和体内移植瘤KLK6基因表达沉默后肿瘤细胞生长加快.提示KLK6基因表达受雌激素下调的影响,是促乳腺癌细胞增殖的抑制因子,从而为乳腺癌的防治提供了新思路.     

^99Tc^m—hTERT mRNA反义分子探针荷MCF-7乳腺癌裸鼠显像

目的制备^99Tc^m-人端粒酶催化亚单位（hTERT）mRNA反义寡核苷酸（ASON）显像分子探针并验证其在荷MCF-7乳腺癌裸鼠早期诊断中的价值。方法采用双功能螯合剂法制备^99Tc^m-hTERT mRNA无义寡核苷酸（SON）、ASON探针。建立荷MCF-7乳腺癌裸鼠模型,运用阳离子脂质体介导法进行活体显像。采用SPSS12．0软件进行单因素方差分析。结果^99Tc^m-hTERT mRNA ASON标记率达到（76±5）％,放化纯〉96％,比活度达到1850kBq／μg。室温放置和健康人血清孵育24h后的放化纯均〉93％。SON与ASON的标记率基本一致。注射后4h反义组荷瘤裸鼠右上肢接种肿瘤部位可见放射性摄取,6～8h后显影清晰;无义组始终未见肿瘤部位放射性浓聚。反义组有和无脂质体介导的肿瘤／非肿瘤组织放射性（T／NT）比值分别为8．02±0．03和7．55±0．12,差异无统计学意义（t=-1．99,P〉0．05）;无义组有和无脂质体介导的T／NT比值分别为1．23±0．06和1．33±0．15,差异无统计学意义（t=0．42,P〉0．05）。但是分别比较反义组与无义组、脂质体介导组与无介导组间差异均有统计学意义（t=26．30和28．71,P均〈0．001）。结论^99Tc^m-hTERT mRNA ASON在荷瘤裸鼠活体内可与高表达hTERT基因的人乳腺癌MCF－7肿瘤组织特异靶向结合,在肿瘤分子功能显像中具有潜在应用价值。     

CyclinD1、p21WAF1、p53及Ki-67在肝细胞癌中的表达及与预后的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)中cyclin D1、p21、p53及Ki-67蛋白的表达及其与HCC预后的关系。方法选择2000年1月-2005年1月在解放军总医院行手术切除的80例HCC患者的肝组织标本,采用EliVision法进行cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67免疫组化染色,分析其表达水平与HCC病理特征的关系,并进行生存分析。结果 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在HCC中的阳性表达率分别为38.8%、40.5%、65.4%及80.0%,均明显高于癌旁肝组织(分别为19.0%、11.5%、0.0%、6.3%,P<0.005)。相关分析显示,cyclin D1阳性表达与核分级呈正相关(P=0.041),p21WAF1及p53阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.032、P=0.031)和血管浸润(P=0.036、P=0.011)呈正相关,Ki-67阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、核分级(P=0.045)和血管浸润(P=0.001)呈正相关。生存分析显示,cyclin D1及Ki-67高表达者预后较差。Ki-67阳性表达与p53(P=0.000)及p21WAF1(P=0.047)阳性表达有明显相关性,其他各蛋白之间表达无明显相关。Cox回归模型分析显示,肿瘤大小(P=0.042)、肿瘤数目(P=0.004)及血管浸润(P=0.000)为HCC的独立预后因素。结论 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67可能参与了HCC的生物学进程;cyclin D1及Ki-67阳性表达对HCC预后的判断有一定价值。     

基质金属蛋白酶-13在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在乳腺癌组织中的表达及意义,分析MMP-13的表达与乳腺癌病理类型、临床分期、组织学分级以及淋巴结转移之间的关系。方法选择70例乳腺癌标本,并以30例乳腺增生症标本为对照,采用免疫组化SP法检测组织中MMP-13的表达情况,结合病理类型、临床分期、组织学分级以及有无淋巴结转移进行分析。结果乳腺癌组织中MMP-13的阳性表达率（72.8%）显著高于乳腺增生症（13.3%）,且乳腺癌组织MMP-13表达阳性积分亦显著高于乳腺增生症（P〈0.05）;MMP-13的表达与乳腺癌组织的临床分期、组织学分级及淋巴结转移有关（P〈0.05）,而与乳腺癌组织的病理类型无关（P〉0.05）。结论乳腺癌的转移与MMP-13的表达有关,乳腺癌组织中的MMP-13为高表达。     

雷公藤内酯醇对人宫颈癌CaSki细胞株的体外作用研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度(0、5、10、20ng/ml)TPL作用24、48、72h后对CaSki细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,细胞免疫化学法检测Ki-67及p53蛋白表达的改变。结果倒置相差显微镜观察可见TPL处理后细胞皱缩变圆变粗糙,体积缩小,且不断地脱落悬浮于培养液中,数量减少,细胞间隙增大,且随药物浓度增加及作用时间延长,这种变化趋于明显。5、10、20ng/ml TPL在体外对CaSki细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖方式(P<0.01)。免疫细胞化学检测显示TPL作用后CaSki细胞Ki-67及p53蛋白表达下调,且呈剂量、时间依赖方式(P<0.01)。结论 TPL可抑制CaSki细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制癌细胞Ki-67及p53蛋白表达有关。     

p21^WAF1和p53在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨p21WAF1和p53蛋白在宫颈鳞癌发生发展中的表达以及相互关系。方法采用免疫组化方法研究50例宫颈鳞癌和30例正常子宫颈组织p21WAF1和p53蛋白的表达。结果宫颈鳞癌组织中p21WAF1蛋白阳性表达率42.0%,明显低于正常对照组73.33%（P〈0.05）;p53蛋白的阳性表达率为54%,明显高于正常对照组6.67%（P〈0.05）。p21WAF1与p53表达存在明显负相关。结论 p21WAF1蛋白的低表达和p53蛋白的高表达与宫颈鳞癌的发生发展相关。     

乳腺珠蛋白在乳腺癌、良性病变及正常乳腺组织中的表达及其临床意义

目的检测乳腺癌、良性乳腺病变及正常乳腺组织中人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)的表达,探讨乳腺珠蛋白在乳腺各种病变中的临床应用价值,并与传统乳腺癌标志物进行比较。方法选取48例乳腺癌、26例良性乳腺疾病及10例正常乳腺组织标本,其石蜡切片进行免疫组化染色。结果乳腺癌、良性乳腺疾病及正常组织中,hMAM表达阳性率分别为72.9%、88.3%和40%。其表达与患者年龄、病理分型及肿瘤大小、分级、淋巴结转移等无关,而与孕激素受体(PR)呈负相关。结论乳腺珠蛋白在乳腺癌、良性病变及乳腺正常组织中均存在高表达,未发现其表达与乳腺癌预后等相关。     

乳腺珠蛋白在乳腺癌、良性病变及正常乳腺组织中的表达及其临床意义

目的检测乳腺癌、良性乳腺病变及正常乳腺组织中人乳腺珠蛋白（human mammaglobin,hMAM）的表达,探讨乳腺珠蛋白在乳腺各种病变中的临床应用价值,并与传统乳腺癌标志物进行比较。方法选取48例乳腺癌、26例良性乳腺疾病及10例正常乳腺组织标本,其石蜡切片进行免疫组化染色。结果乳腺癌、良性乳腺疾病及正常组织中,hMAM表达阳性率分别为72.9%、88.3%和40%。其表达与患者年龄、病理分型及肿瘤大小、分级、淋巴结转移等无关,而与孕激素受体（PR）呈负相关。结论乳腺珠蛋白在乳腺癌、良性病变及乳腺正常组织中均存在高表达,未发现其表达与乳腺癌预后等相关。     

p53蛋白在云锡矿工肺癌中的表达

ｐ５３蛋白在云锡矿工肺癌中的表达秦全红王德文孙世荃杨绍和高亚兵云锡矿工肺癌的高发起因于既往井下氡子体和含砷矿尘的暴露［１］。Ｔａｌｏｒ等［２，３］对铀矿工肺癌研究，认为氡致肺癌与ｐ５３基因有关。为了探讨ｐ５３基因在云锡矿工肺癌病因中的作用，本文对云锡...     

肝细胞肝癌组织及细胞株中PTPeta的表达及意义研究

目的 检测人肝细胞肝癌组织及细胞株SMMC7721中蛋白酪氨酸磷酸酶eta(PTPeta)的表达,观察肿瘤细胞生长密度对其表达的影响.方法 采用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织及SMMC7721细胞中PTPeta蛋白的表达;采用RT-PCR法检测不同生长密度(1×103、5×103、l×104、5×104/cm2)SMMC7721细胞中PTPeta的表达变化情况.结果 免疫组化检测结果表明肝细胞肝癌组织中PTPeta表达呈阳性,SMMC7721细胞中存在PTPeta表达,且定位于细胞膜;RT-PCR检测结果显示,当细胞密度为l×103、5×103、l×104、5×104/cm2时,PTPeta mRNA的表达量分别为0.425±0.031、0.659±0.041、0.771±0.043、0.885±0.045,PTPeta表达随着肿瘤细胞生长密度的增高而增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 PTPeta在肝细胞肝癌组织及细胞中表达,且随肿瘤细胞生长密度增高而表达增加.PTPeta 可能通过增加肝癌细胞黏附、维持恶性肿瘤细胞内环境稳定等,在恶性肿瘤细胞增殖及播散转移的过程中起重要作用.     

ALDH1和CD55表达在乳腺癌预后评估中的意义

目的探讨乳腺癌组织乙醛脱氢酶1(ALDH1)阳性表达及CD55高表达在乳腺癌患者预后评估中的价值。方法应用免疫组化法对65例随访5～8年的乳腺癌患者的组织标本进行ALDH1和CD55表达检测,判定ALDH1阳性表达及CD55高表达标本,分析各临床疾病特征与CD55高表达及ALDH1阳性表达的关系。计算患者的5年生存率,分析其与CD55高表达、ALDH1阳性的相关性;分析5年生存率与临床疾病特征的相关性,并进一步筛选影响患者预后的独立危险因素。结果65例乳腺癌组织标本中,ALDH1阳性表达占24.6%(16/65),CD55高表达占33.8%(22/65)。ALDH1阳性表达和CD55高表达与乳腺癌患者绝经状况、肿瘤组织学类型、组织学分级、肿瘤直径、是否发生淋巴结转移、雌激素受体和孕酮受体表达情况、表皮生长因子受体2(Her2)表达情况、术后是否接受其他治疗均无关(P>0.05),与肿瘤是否复发密切相关(P<0.01)。与ALDH1阴性、CD55低表达患者相比,ALDH1阳性表达、CD55高表达患者的5年生存率显著降低(P<0.001)。Logistic回归分析显示,ALDH1阳性表达、CD55高表达、肿瘤直径...     

结直肠癌中组织因子和p53蛋白表达的相关性及其意义

目的 研究组织因子（TF）和p53蛋白在结直肠癌组织中表达的相关性并探讨其意义。方法 应用免疫组织化学方法检测43例结直肠癌标本中TF和p53蛋白的表达情况。结果 43例结直肠癌组织中19例（44．2％）TF表达阳性,21例（48．8％）p53蛋白表达阳性;TF表达阳性者中78．9％（15／19）淋巴结转移阳性,p53蛋白表达阳性者中85．7％（18／21）淋巴结转移阳性,两者的表达均与淋巴结转移密切相关（r=0.414和0．588,P〈O．01）;p53蛋白阳性表达组TF阳性率为66．7％（14／21）,而p53蛋白阴性表达组TF阳性率为22.7％（5／22）,二者呈正相关（r=0.442,P=0.003）。结论 结直肠癌组织中TF和p53蛋白表达与肿瘤淋巴转移密切相关,TF的表达与p53蛋白的表达具有显著相关性。