骨肉瘤端粒酶逆转录酶的表达及其临床意义

目的研究骨肉瘤中人端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达,为分子免疫学方法治疗骨肉瘤提供基础。方法分别用免疫细胞／组织化学法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人骨肉瘤细胞株U2－OS、MG－63、SAOS－2及15例骨肉瘤组织中hTERT表达及端粒酶活性状态。结果HeLa细胞hTERT表达率最高,为95．16％±3．83％;MG-63、SAOS-2、U2-OS细胞系中hTERT阳性率分别为8．75％±1．31％、5．26％±1．22％、2．33％±0．83％;骨肉瘤组织中hTERT表达阳性率26．7％（4／15）。结论hTERT在骨肉瘤的表达率相对较低,仍需用新的研究方法寻找其他分子免疫学治疗骨肉瘤的靶点。     

端粒酶逆转录酶基因hTERT在膀胱移行细胞癌组织中的表达意义

目的 研究端粒酶逆转录酶基因hTERT在膀胱移行细胞癌（TCC）中的表达,探讨其在TCC发生、发展及预后复发中的意义。方法 采用兔抗人hTERT多克隆抗体及S－P免疫组化法检测在56例TCC及10例正常膀胱组织中的表达。结果 hTERT在TCC中阳性表达率为64.3%,与在正常膀胱组织表达率0％相比,有显性差异（P＜0.05）。hTERT在Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ级TCC中的表达率分别为43.8%（7／16）,57.7%（15／26）,100％（14／14）,Ⅰ与Ⅲ级、Ⅱ与Ⅲ级、Ⅰ＋Ⅱ与Ⅲ级比较差异显（P＜0.05）,hTERT在浅表性及浸润性TCC中的表达率为53.1%（17／32）,79.2%（19／24）,两差异显（P＜0.05）。hTERT阳性表达率与患复发有显相关性（P＜0.05）。结论 hTERT表达异常可能与膀胱肿瘤的发生、发展有关。检测hTERT表达可作为预测膀胱肿瘤预后复发的潜在指标。     

骨肉瘤组织中c-myc蛋白表达及其临床意义

目的探讨c－myc基因与骨肉瘤发生发展及预后的关系。方法用S－P免疫络化法，对50例骨肉瘤石蜡包埋标本进行了c－mycp67表达水平的研究。结果骨肉瘤c－mycp67蛋白阳性率高达72％，c－mycp67表达与骨肉瘤患者性别、年龄、病理类型、肿瘤分期等均无明显关系，而c－mycp67阳性表达骨肉瘤患者的3年生存率低于c－mycp67阴性表达者。结论c－mycp67表达可能对判断骨肉瘤预后有一定意义。     

端粒酶基因hTR在乳腺癌组织中的表达

目的研究端粒酶基因hTR在乳腺癌组织和乳腺纤维腺瘤中的表达及意义。方法应用原位杂交的方法检测端粒酶基因hTR在30例乳腺癌和25例乳腺纤维腺瘤中的表达。结果30例乳腺癌中hTR表达阳性率为90%,25例乳腺纤维腺瘤中为16%,乳腺癌组织中hTR的表达与乳腺纤维腺瘤比较差异有显著性(P<0.01)。乳腺癌组织中hTR的表达与肿瘤分型、淋巴结转移、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论端粒酶基因hTR表达检测在乳腺癌诊断中有一定价值。     

端粒酶逆转录酶基因hTERT突变表达载体在膀胱癌细胞T24中的表达

目的 构建端粒酶逆转录酶基因（hTERT）缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT，并转孜膀胱癌细胞株T24中，观察其稳定表达，探讨其对端粒酶性调控机制及成为膀胱肿瘤基因治疗新靶点的可能性，方法 将PCR扩增的hTERT缺失突变体片段用EcoRⅠ与SalⅠ酶切，并连接到真核表达载体pEGFP-C1上，构建成hTERT缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT；利用DNA－磷酸钙共沉淀法将pEGFP-hTERT导入膀胱癌细胞株T24中，应用荧光显微镜、与衰老相关的β－半乳糖苷酶染色等方法观察转染细胞中hTERT-GFP融合蛋白定位表达及对膀胱癌细胞生长的影响。结果 酶切鉴定证实hTERT缺失突变体体已克隆到pEGFP-C1的EcoRⅠ与SalⅠ位点之间，在转染细胞中观察到与其融合的绿色荧光蛋白的稳定表达，定位于细胞核内；转染细胞2wk后与衰老相关β－半乳糖苷酶表达增加，细胞生长受抑制。结论 构建的端粒酶逆转录酶基因hTERT缺失突变真核表达载体pEGFP-hTERT可在膀胱癌细胞T24中稳定表达。突变型hTERT蛋白可入细胞核中竞争性影响端粒酶的功能，进而抑制膀胱癌细胞的生长。     

卵巢癌微血管密度与人类端粒酶及人类端粒酶转录酶表达的关系

目的:探讨卵巢癌微血管密度(MVD)与人类端粒酶(hTR)、人类端粒酶转录酶(hTRT)表达的关系。方法:免疫组化S-P法检测55例卵巢癌微血管密度;原位分子杂交方法检测55例卵巢癌hTR和hTRT。结果:55例卵巢癌中,MVD≤21个/mm2的卵巢癌hTR、hTRT阳性表达与MVD>21个/mm2的卵巢癌hTR、hTRT阳性表达比较,有高度显著性差异,P<0.01。结论:卵巢癌MVD与hTR、hTRT表达呈正相关,MVD>21个/mm2的卵巢癌可能生长较快,恶性度高,提示预后不良。这一发现对进一步探讨卵巢癌的发生发展规律提供了分子学基础。     

骨肉瘤端粒酶表达与化疗耐药49例临床分析

目的研究骨肉瘤端粒酶与化疗耐药、多药耐药基因（mdrl）以及细胞凋亡抑制基因（bcl-2）的相关性,探讨骨肉瘤端粒酶的表达在化疗耐药中的作用。方法49例骨肉瘤石蜡标本以原位杂交检测其端粒酶、mdrlmRNA的表达,以免疫组化（S-P法）检测其bcl-2蛋白的表达,结合临床分析骨肉瘤的端粒酶表达活性与化疗耐药以及与mdrl和bcl-2表达的关系。结果49例骨肉瘤端粒酶的表达活性与化疗耐药负相关,与bcl-2表达活性正相关．而与mdrl表达不相关。结论骨肉瘤的端粒酶与肿瘤化疗耐药有关,机制可能在于端粒酶与bcl-2间的相互协同作用。     

肺癌组织中hTERT和P16基因的表达

目的 :研究端粒酶逆转录酶 (hTERT)和P16基因在肺癌组织中的表达 ,探讨肺癌发生过程中端粒酶激活的分子机制。方法 :应用原位逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和端粒重复序列扩增法 (TRAP)分别对 4 7例肺癌及相应癌旁肺组织中hTERTmRNA与端粒酶活性进行检测 ,采用免疫组化SP法测定上述组织标本中P16蛋白表达。结果 :hTERTmRNA与端粒酶活性在肺癌组织中阳性表达率分别为 78.7%和 72 .3% ,均明显高于相应癌旁肺组织 (P <0 .0 1)。肺癌中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈明显正相关 (r=0 .70 2 ,P <0 .0 1)。P16蛋白在肺癌中阳性表达率为 2 9.8% ,显著低于癌旁肺组织 (93.6 % ,P <0 .0 1)。P16蛋白表达与hTERTmRNA表达及端粒酶活性均呈显著负相关 (r分别为 - 0 .74 5 ,- 0 .70 2 ,P均 <0 .0 1)。结论 :hTERTmRNA表达上调和P16蛋白表达缺失与肺癌的发生密切相关 ,并可能在肺癌端粒酶活性调节中发挥重要作用。     

食管癌及癌前病变中hTERT基因的表达意义

目的:探讨食管癌及癌前病变组织吕端粒酶 经亚单位（hTERT)基因的表达意义以及与细胞增殖的关系。方法：采用原位杂交法检测42例食管癌组织、37例不典型增生组织及12例正常食管组织中hTERTmRNA的表达；用免疫组化S－P法检测Ki-67抗原表达，反映细胞增殖活性。结果：在正常食管黏膜－不典型增生－食管癌组织中，hTERTmRNA的阳性表达率分别为0，51．4％，83．3％；Ki-67抗原的阳性表达率分别为0，56．7％，88．1％。癌组织中hTERTmRNA与Ki-67抗原阳性表达率较正常食管黏膜、不典型增生组织差异有显性（P＜0．01）；食管癌组织中hTERTmRNA与Ki-67抗原表达与临床分期、淋巴结转移有关（P＜0．05）；结果还显示hTERTmRNA和Ki-67抗原表达具有显相关性（r=0.978)。结论：端粒酶活化在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用，hTERTmRNA的表达与细胞增殖活性有关。hTERT基因表达的检测有望成为早期诊断食管癌及判定食管肿瘤预后的良好指标。     

EZH2mRNA在骨肉瘤中的表达及意义

目的 探讨EZH2 mRNA在骨肉瘤中的异常表达与骨肉瘤发生发展的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应检测50例骨肉瘤组织中EZH2 mRNA的表达情况,并以正常骨组织作对照,对结果进行统计学分析.结果 EZH2 mRNA在骨肉瘤组织及正常骨组织中阳性表达率分别为66.0%和6.7%,差异有统计学意义(P<0.05);EZH2 mRNA在骨肉瘤组织中的阳性表达率与病理分级有关(P<0.05),而与性别、年龄及病理类型无关(P>0.05).结论 EZH2 mRNA参与了骨肉瘤的发生与发展,EZH2 mRNA可能成为骨肉瘤一个潜在的基因治疗靶点.     

男性不育症患者睾丸组织中端粒酶RNA表达状况的研究

目的 为探讨人端粒酶RNA（hTR)基因在男性不育症患者睾丸组织中的表达及其意义。方法 应用核酸原位杂交技术对47例男性不育症患者睾丸组织和10例正常睾丸组织中端粒酶hTR基因的表达进行检测和定位，并应用HPIAS-1000高清晰度图像处理系统对hTR阳性信号进行图像分析，结果 端粒酶hTR基因阳性表达与生殖细胞（精原细胞、精母细胞、精子细胞）的分布定位一致，在精细胞不发育（唯Sertoli细胞综合征）患者睾丸组织中无端粒酶hTR基因的表达。结论 提示端粒酶活性的缺乏可能是生殖细胞发育停滞的原因，但不是唯一的原因。可能还有端粒酶以外的因素起作用，对端粒酶研究有助于了解它在男性生殖中的作用，并为男性不育症在端粒酶途径的基因治疗提供理论和实验依据。     

大肠癌中hTERT和bcl-2基因表达与端粒酶活性的关系

目的 :探讨端粒酶逆转录酶 (hTERT)和bcl 2基因在大肠癌发生过程中的作用及其与端粒酶活性的关系。方法 :采用原位RT PCR和免疫组化S P法分别对 4 6例大肠癌及其相应正常大肠组织中hTERTmRNA与bcl 2蛋白表达进行检测 ,并用TRAP法测定上述组织标本中端粒酶活性。结果 :大肠癌组织中hTERTmRNA与bcl 2蛋白阳性表达率分别为 87.0 %和 71.7% ,它们与正常大肠组织比较差异均有显著性 (P <0 .0 1)。大肠癌中端粒酶活性阳性率为 80 .4 % ,明显高于正常大肠组织 (P <0 .0 1)。hTERTmRNA及bcl 2蛋白阳性表达分别与端粒酶活性呈显著正相关 (r分别为 0 .70和 0 .5 7,P均 <0 .0 5 )。结论 :hTERTmRNA及bcl 2蛋白过度表达与大肠癌的发生密切相关 ,并可能参与大肠癌端粒酶活性调节     

恶性黑色素瘤人端粒酶RNA原位杂交研究及意义

应用原位杂交法检测恶性黑色素瘤,黑色素细胞痣和正常皮肤中的ｈＴＲ表达。结果显示：①恶性黑色素瘤,黑色素细胞痣和正常皮肤的ｈＴＲ阳性表达率分别为８６３％,６２５％和１６７％;恶性黑色素瘤的ｈＴＲ阳性表达率显著高于黑色素细胞痣和正常皮肤的阳性表达率（Ｐ＜０．０１）。②转移性恶性黑色素瘤的ｈＴＲ阳性表达强度显著强于原发性恶性黑色素瘤者（Ｐ＜０．０５）。提示ｈＴＲ能间接地反映端粒酶的活性。ｈＴＲ可作为恶性黑色素瘤的诊断和转移预测的新标志物。     

端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白质在正常肺组织和正常人外周血淋巴细胞表达的研究

用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了6例豚鼠正常肺组织、10～18例癌旁正常肺组织和14例正常人外周血端粒酶逆转录酶(TERT)亚基的mRNA和相应蛋白质表达.结果显示,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞,肺泡巨噬细胞和少数肺泡上皮细胞有TERTmRNA和蛋白质表达.正常人外周血淋巴细胞中TERT原位杂交阳性表达细胞数为(17.26±8.57)%,免疫组织化学阳性细胞表达数为(28.10±16.78)%.提示①正常肺组织支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、少数肺泡上皮细胞和外周血淋巴细胞有TERTmRNA和蛋白质表达;②正常肺组织中上述细胞TERTmRNA和蛋白质的表达在生理状况下对于保证支气管上皮和肺泡上皮细胞再生,维持上皮组织的完整性可能起着重要的作用,同时有利于肺泡巨噬细胞发挥其肺内"卫士”功能;③淋巴细胞TERT表达对于维持机体的免疫功能可能有重要作用.     

骨肉瘤细胞中端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义

目的研究不同骨肉瘤细胞中人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA成分的表达情况。方法用全基因组芯片检测人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOB1．19中hTERTmRNA表达;用逆转录PCR、实时定量PCR法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOBl．19中hTERTmRNA表达。结果全基因组芯片法显示MG-63、SAOS-2、U2-OS、hFOB1．19细胞系中hTERTmRNA表达强度分别为0．9、-0．1、-0．8、11．4,各细胞系均处于相对低表达水平;荧光实时定量PCR法显示MG-63、Hela细胞系中hTERTmRNA相对表达水平分别为1．00±0．08和2．13±0．11,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论hTERTmRNA在骨肉瘤各细胞系中表达率较低,端粒延伸替代机制可能在骨肉瘤端粒维持方面发挥重要作用。     

hTERT mRNA在食管癌组织中的表达及意义

目的 研究凋亡调控基因hTERT mRNA在食管癌癌组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测52例食管癌组织、30例癌旁食管组织（距离肿瘤至少5 cm）和7例非食管癌黏膜组织中hTERT mRNA的表达情况.结果 hTERT mRNA在食管癌组织和癌旁食管组织中表达的阳性率明显高于非食管癌组织（P＜0.05）,食管癌组织中的表达阳性率与癌旁食管组织的表达阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）;hTERT mRNA在食管癌组织中的表达与患者年龄、病理类型、分化程度、浸润程度、淋巴转移和临床分期无相关性（P＞0.05）.结论 hTERT mRNA在食管癌组织中的表达可能是早期事件,检测hTERT mRNA的表达可能对食管癌的早期诊断及治疗具有指导意义.     

原位杂交检测人肿瘤组织中大肠癌相关新基因SNC66的表达

目的：探讨大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌，胃癌，肝癌，肺癌和乳腺癌中的表达以及该基因与肿瘤发生的相互关系。方法：采用cRNA/mRNA原位杂交的方法，用体外转录制备的地高辛标记的cRNA探针对上述3种肿瘤组织及同一患者的相应正常组织作表面情况的配对研究。结果：SNC66基因只在上皮细胞及淋巴细胞表达，且在胃肠道上皮细胞中呈现从隐窝到绒毛顶端的梯度降低表达，淋巴小结内淋巴细胞的表达高于间质离散的淋巴细胞。SNC66基因在不同的肿瘤组织中表达差异很大，其中在大肠癌和胃癌组织中存在明显的表达缺陷。结论：SNC66基因不仅结构上同源于IgAl基因，而且表达行为亦类似于IgAl基因，它在不同肿瘤组织以及肿瘤组织与正常组织之间的表达有差异，且在消化道肿瘤中低表达，可能为一新的肿瘤标记物。     

骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因DNA序列分析及其mRNA、p21蛋白表达

[目的]通过检测骨肉瘤组织中p21 WAF1/CIP1基因的表达及其DNA序列变化,探讨它们与骨肉瘤生物学特性之间的关系及其对预后的评价.[方法]采用原位杂交及免疫组化法检测45例人骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达.采用PCR-SSCP方法检测骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因DNA变化.采用双脱氧核苷酸末端终止法进行DNA的直接测序.[结果]①p21蛋白表达阳性率在骨肉瘤中为18%(8/45);②p21 WAF1/CIP1基因mRNA表达阳性率在骨肉瘤中为42%(19/45);③DNA序列分析结果显示,骨肉瘤中p21 WAF1/CIP1基因第三外显子(exon3)的cDNA全长序列的609位碱基处发生C→T改变,发生率为47%(17/36).exon2a的cDNA全长序列的187位、303位碱基处发生G→T改变,发生率为6%(2/36).exon2b的cDNA全长序列的522位碱基处发生G→A改变,发生率为2.7%(1/36).[结论]①随着骨肿瘤恶性度的升高,p21 WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达下降.②p21 WAF1/CIP1基因mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响.③本实验对中国人群骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因DNA多态性位点进行了新的定位,这些位点可能会对今后对该基因的研究提供有意义的参考.     

泌尿系肿瘤人端粒酶催化基团mRNA的表达

目的　探讨泌尿系肿瘤中端粒酶催化基因 (hTRT)mRNA的表达与肿瘤分期和分级的关系。方法　应用原位杂交技术对膀胱癌、肾癌标本和膀胱、肾脏正常组织进行hTRTmRNA表达检测。结果　 48例膀胱癌标本中 42例hTRTmRNA阳性表达 ,hTRTmRNA阳性率为 88% ,对照组 30例中 2例正常膀胱组织黏膜阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分级与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。 2 9例肾癌组织hTRTmRNA阳性 2 5例 ,阳性率为 86 % ,对照组 30例中 2例肾脏正常组织hTRTmRNA阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分期与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。结论　hTRTmRNA在肾癌和膀胱癌中有异常阳性表达 ,但其表达情况与肿瘤的分期和分级无相关性