IRAK-M在内毒素诱导Kupffer细胞耐受中的表达及其意义

目的:观察内毒素耐受状态TKupffer细胞中白介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)的表达并探讨其在Kupffer细胞内毒素耐受形成中的作用.方法:通过脂多糖(LPS,10μg/L)预处理建立内毒素耐受Kupffer细胞模型,并与对照组细胞进行比较;在LPS(100 μg/L)刺激后不同时点,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中TNF-α水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中TNF-α和IRAK-M的mRNA表达,TransAM NF-kB Kit检测细胞中NF-kB活性,蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中IRAK-M蛋白表达.结果:LPS刺激在两组细胞中均引起TNF-α释放增加.TNF-α mRNA表达以及NF-kB活性增强,但耐受组细胞的三种指标明显低于对照组(P＜0.05);对照组细胞在LPS刺激24 h后才能检测出IRAK-M mRNA的表达,而耐受组细胞在LPS刺激前已可检测到IRAK-M的基因表达,且该表达在LPS刺激后迅速增强,于6 h达高峰,24 h时仍明显高于对照组(P＜0.05);对照组细胞在LPS刺激24 h后才有微弱的IRAK-M蛋白表达,而耐受组细胞在LPS刺激前已有IRAK-M的蛋白表达,并随LPS刺激进一步上调,两组有显著差异(P＜0.01).结论:内毒素耐受状态下,Kupffer细胞中的IRAK-M表达明显增强,IRAK-M可能在Kupffer细胞内毒素耐受形成中起重要作用.     

急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3及TGF-β1 mRNA的表达及罗格列酮的干预

目的: 观察D-氨基半乳糖(D-Ga lN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达,并探讨罗格列酮的干预作用.方法: ♂昆明小鼠随机分为3组: 正常组、对照组、干预组.对照组和干预组以D-Ga lN/LPS腹腔注射构建小鼠急性肝衰竭模型,正常组则相应予以生理盐水腹腔注射;干预组于造模前2 h予以罗格列酮灌胃,正常组和对照组则相应予以生理盐水灌胃.比较各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织病变程度及肝组织TNF-α、Caspase-3,TGF-β1 mRNA的表达水平.结果: D-GalN联合LPS腹腔注射成功构建了小鼠急性肝衰竭模型,对照组肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达较正常组明显增高( P＜0.001);干预组小鼠血清ALT,AST水平明显低于对照组(403.6±76.1 U/L vs 3664.8±646.1 U/L,464.6±63.0 U/L vs 3514.0±468.9 U/L,均P＜0.001),肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA表达水平明显低于对照组(0.270±0.042 vs 0.459±0.072,0.388±0.033 vs 0.553±0.033,0.261±0.031 vs 0.403±0.042,均P＜0.001);与对照组比较,干预组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞以变性为主,未见明显坏死.结论: 罗格列酮可能通过下调T N F - α、Caspase-3、TGF-β1的表达对D-GalN/LPS小鼠急性肝衰竭起保护作用.     

内毒素刺激Kupffer细胞对肝星状细胞前胶原基因表达的影响

背景：肠源性内毒素血症对肝纤维化具有启动作用,肝星状细胞（HSC）活化是肝纤维化发生、发展的中心环节。目的：探讨内毒素刺激Kupffer细胞对HSC前胶原基因表达的影响及其可能机制。方法：改良链酶蛋白酶、胶原酶原位灌流和密度梯度离心分离大鼠肝脏Kupffer细胞和HSC。以RNA斑点杂交检测脂多糖（LPS）、Kupffer细胞、LPS与Kupffer细胞共培养和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对HSC前胶原mRNA表达的影响,放射免疫法检测LPS对Kupffer细胞和HSC产生TNF-α的影响,RNA印迹法检测LPS和TNF-α对Kupffer细胞和HSC转化生长因子-β（TGF-β）mRNA表达的影响结果：经低浓度（0.5、1、5μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清可增加HSCⅠ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA表达,经高浓度（10、15、20μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清、单独LPS、未经处理的Kupffer细胞培养上清、单独TN-α均无此作用。Kupffer细胞培养上清中的TNF-α含量随LPS浓度梯度的增加而递增,HSC培养上清中的TNF-α含量则无明显变化。TNF-α不能增加HSC TGF-βmRNA表达,但能增加Kupffer细胞TGF-βmRNA表达;经LPS或TNF-α处理的Kupffer细胞培养上清能增加HSC TGF-βmRNA表达。结论：低浓度内毒素能上调HSC前胶原基因表达,该作用有赖于内毒素激活Kupffer细胞所产生的活性介质的参与。     

甘氨酸对内毒素性肝损害保护作用的机制

目的:探讨甘氨酸(Gly)对内毒素(LPS)性肝损害的保护机制．方法:BALB／c小鼠随机分为三组,LPS组(n= 50)经腹腔注射10 mg／kg的LPS,Gly组(n=50) 在注射相同剂量LPS前3 d开始喂饲含50 g／L 的Gly的饲料,正常生理盐水对照组(n=50), 经腹腔注射等体积的生理盐水,光镜观察组织病理学改变,免疫组织化学法检测TLR4表达水平:ELISA法检测血浆TNF-α,IL-10浓度及 RT-PCR检测肝组织中TNF-α,IL-10及TLR4的 mRNA表达水平．结果:Gly能明显提高小鼠存活率,肝脏病理损害程度减轻:Gly组TNF-α水平显著低于LPS 组,差异有统计学意义(708．83±51．29 ng／L vs 1852．8±126．64 ng／L,F=786．21,P<0．05);Gly 组IL-10N加且高峰前移,与LPS组比较差异有统计学意义(418．64±38．86 ng／L vs 211．15 ±26．44 ng／L,P<0．05);Gly组肝组织中TNF-α及TLR4表达也明显减弱,IL-10表达明显增强, 与LPS组比较差异均有统计学意义(分别为 TNF-α A值:1．59±0．14 vs 0．91±0．11;TLR4 A值:0．97±0．12 vs 0．53±0．11;IL-10A值:0．62 ±0．08 vs 1．06±0．15;P均<0．05)．结论:Gly能明显减轻LPS所致的肝损害,其机制可能与其下调肝细胞的TLR4表达,同时上调IL-10的水平有关．     

Toll样受体4在CCl_4诱导的大鼠慢性肝损伤过程中的表达

背景:Toll样受体4(TLR4)在内毒素的信号转导过程中具有重要作用。目的:动态观察在CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤过程中,肝组织和Kupffer细胞TLR4基因表达的变化,探讨TLR4在肝损伤中的作用。方法:以CCl4诱导慢性肝损伤纤维化大鼠模型,分离肝Kupffer细胞,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA的表达;将Kupffer细胞分别与不同浓度的脂多糖(LPS)孵育,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清的肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。以基质显色法测定大鼠血浆内毒素水平。结果:正常大鼠肝组织TLR4 mRNA表达水平较低,Kupffer细胞未检测到TLR4 mRNA表达;CCl4处理2-6周大鼠的肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA表达水平显著增高(P<0．05)。CCl4处理4周和6周大鼠Kupffer细胞的TNF-α基础分泌水平显著高于正常大鼠(P<0．05); 在LPS的刺激下,TNF-α的分泌水平较基础值进一步增高(P<0．05),呈浓度依赖性。大鼠血浆内毒素水平在肝损伤过程中逐渐增高．相关分析显示在慢性肝损伤的早、中期,肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA的表达与血浆内毒素水平呈正相关。结论:在CCl4诱导的慢性肝损伤过程中,大鼠肝脏TLR4基因表达上调,与Kupffer细胞活化和肝脏的炎症损伤有关。     

丙酮酸乙酯对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响,探讨丙酮酸乙酯治疗急性坏死性胰腺炎肺损伤的机制.方法:逆行性胰胆管注射50 g/L牛磺胆酸钠制作ANP模型.随机分成3组,对照组、ANP组和EP治疗组(40 mg/kg,每隔6h静脉注射一次).ELISA法检测血清TNF-α和IL-1β水平;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织HMGB1 mRNA表达,并观察血氧变化及肺组织的病理变化.结果:ANP组血清TNF-α和IL-1β水平在建模后6h达高峰,12h下降,在此两时点治疗组血清TNF-α和IL-1β水平明显低于ANP组(TNF-α:131.6±29.6 ng/L vs 196.3±16.3 ng/L,65.0±16.6 ng/L vs 90.2±20.1 ng/L,P<0.05;IL-1β:194.9±26.8 ng/L vs 223.0±34.8 ng/L,105.2±24.0 ng/L vs 130.4±23.0 ng/L,P<0.05).ANP组大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达水平在ANP后12h明显升高,至24h仍维持在高水平.治疗组肺组织HMGB1 mRNA表达水平在各时间点均明显低于ANP组(0.68±0.11 vs 0.88±0.11,0.81±0.11 vs 1.04±0.10,1.08±0.08 vs 1.33±0.15,P<0.05),且同期肺损伤比ANP组轻.治疗组PaO_2均明显高于ANP组.结论:丙酮酸乙酯能显著抑制TNF-α、IL-1β和HMGB1等早晚期炎症因子,改善低氧血症,对ANP肺损伤有明显保护作用.     

脑出血致多器官功能障碍综合征大鼠TNF-α mRNA基因表达与血清内毒素的相关性

目的观察大鼠脑出血致多器官功能障碍综合征(MODS)模型TNF-αmRNA基因表达与血清内毒素的变化规律及相关性,探讨脑源性多器官功能障碍综合征(CMODS)的可能发生机制。方法将54只Wistar大鼠随机分为9组:正常对照组;假手术组;脑出血组,分为4、8、12、24、36、48和72h时相点的7个亚组,每组6只。向大鼠尾状核内注射Ⅶ型胶原酶0.8U建立脑出血模型;分别采用偶氮显色法鲎试验定量测定血清内毒素和原位杂交技术测定肺、肝、小肠和肾组织TNF-αmRNA水平;使用CMIA真彩色医学图像分析系统,检测TNF-αmRNA的相对含量。结果脑出血组血清内毒素含量较正常对照组、假手术组明显升高(P0.01,P0.001),血清内毒素于术后8h开始升高,24～36h达高峰,72h仍维持较高水平。脑出血组肺、肝、小肠和肾组织TNF-αmRNA的表达自8h开始升高,24～36h达高峰,12～48h各器官组织与正常组和假手术组比较,差异均有统计学意义(均P0.01);肺、肝、小肠和肾组织中TNF-αmRNA的表达与血清内毒素均存在显著相关性。结论大鼠脑出血致MODS模型存在内毒素血症和TNF-α在各脏器的异常表达,提示内毒素血症刺激炎症因子TNF-α的异常释放,诱发全身炎症反应,导致MODS的发生。     

绿茶多酚对实验性酒精性肝损伤大鼠的治疗作用

目的:研究绿茶多酚及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠酒精性肝损伤的治疗作用,并探讨其作用机制.方法:将48只大鼠随机分为正常对照组、模型组、茶多酚治疗Ⅰ组、Ⅱ组、EGCG治疗Ⅰ组、Ⅱ组,每组8只大鼠.以酒精 0.5mL鱼油灌胃制作酒精性肝病模型.茶多酚治疗Ⅰ、Ⅱ组另外分别给予200mg/kg、100mg/kg茶多酚灌胃治疗,EGCGⅠ、Ⅱ治疗组则分别给予100mg/kg、50mg/kgEGCG灌胃治疗.5wk后处死大鼠,观察各组大鼠肝脏病理变化,并测定血清转氨酶及血浆内毒素水平,采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-1、IL-18水平,并应用RT-PCR方法检测大鼠肝组织CD14、LBP、TNF-α、IL-1、IL-18mRNA的表达,并应用图像分析系统对其进行半定量分析.结果:模型组大鼠肝组织表现肝细胞中度脂肪变性,点状坏死,炎性细胞浸润,其血清ALT、TNF-α、IL-1、IL-18及血浆内毒素水平与正常对照组相比,显著升高(P<0.05或P<0.01);模型组肝组织CD14、LBP、TNF-α、IL-1、IL-18mRNA的表达与对照组相比显著增强(P<0.05或P<0.01).茶多酚、EGCG高低剂量分别同时处理显著降低了酒精性肝损伤大鼠血清ALT、TNF-α、IL-1、IL-18与血浆内毒素水平及肝组织CD14、LBP、TNF-α、IL-1、IL-18mRNA的表达(P<0.05或P<0.01),肝组织仍可见肝细胞脂肪变性,但未见坏死及炎性细胞浸润.结论:茶多酚及EGCG可减轻酒精性肝损伤大鼠肝脏的炎症与坏死,其可能机制包括降低内毒素血症,抑制Kupffer细胞活性与促炎细胞因子的表达与分泌.     

肝硬化腹水患者内毒素、细胞因子水平的检测及临床意义

探讨肝硬化腹水患者体内前炎症细胞因子TNF-α、IL-6及内毒素水平的变化、相互关系及临床意义。对45例患者的腹水、血液标本,采用鲎试剂三肽显色基质偶氮法检测内毒素水平,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-6水平。1.自发性细菌性腹膜炎(SBP)组、无菌性腹水(SA)组和健康对照组血浆内毒素水平分别为(0.265±0.010)U/L,(0.098±0.015)U/L,(0.029±0.003)U/L(P<0.05);TNF-α分别为(1387.9±115.6)ng/L,(487.5±29.2)ng/L,(84.3±5.8)ng/L(P<0.05);IL-6分别为(2149.1±160.9)ng/L,(639.7±42.6)ng/L,(94.7±8.5)ng/L(P<0.05);2.SBP组、SA组腹水内毒素水平分别为(0.264±0.007)U/L,(0.055±0.009)U/L(P<0.05);TNF-α分别为(1561.2±109.7)ng/L,(215.2±12.9)ng/L(P<0.05);IL-6分别为(2571.0±268.1)ng/L,(280.7±20.1)ng/L(P<0.05);3.血浆内毒素与TNF-α、IL-6水平正相关(r=0.857,P<0.001;r=0.885,P<0.001);TNF-α与IL-6水平正相关(r=0.957,P<0.001)。1.肝炎肝硬化腹水患者存在不等程度的内毒素血症和细胞因子血症;2.血浆内毒素水平升高与TNF-α、IL-6水平升高相关,提示内毒素可刺激产生多种前炎症细胞因子,进而促进并发症的发生发展,影响预后。     

Normal mice express idiotypes related to autoantibody idiotypes of lupus mice

Spleen and fetal liver B cells of normal mice synthesized idiotypes shared by anti-DNA autoantibodies of genetically autoimmune mice. Some of the idiotypes were specific for DNA; the majority, however, were not. The findings indicate that the autoantibody idiotypes are related to a conserved family of antibody variable regions that are present in normal animals.     

Non-Hodgkin lymphomas of mice

Studies of lymphoid neoplasms occurring in normal or genetically engineered mice have revealed parallels and differences to non-Hodgkin lymphomas (NHL) of humans. Some mouse lymphomas have strong histologic similarities to the human NHL subsets including precursor B- and T-cell lymphoblastic, small lymphocytic, splenic marginal zone, and diffuse large-cell B-cell lymphomas (DLCL); whether molecular parallels also exist is under study. Others mouse types such as sIg+ lymphoblastic B-cell lymphoma have no histologic equivalent in human NHL even though they share molecular deregulation of BCL6 with human DLCL. Finally, Burkitt lymphoma does not appear to occur naturally in mice, but it can be induced with appropriately engineered transgenes.     

Mechanical ventilation of mice

Due to growing interest in murine functional genomics research, there is an increasing need for physiological stable in vivo murine models. Of special importance is support and control of ventilation by artificial respiration, which is difficult to execute as a consequence of the small size of the animal and the technically demanding breathing pattern. In addition, numerous genetically altered mice show depressed spontaneous ventilation or impaired respiratory responses. After an introduction in murine respiratory physiology we describe options for ventilatory support, its monitoring and the potential side effects. This review will provide an overview on current possibilities in the field of airway support in mouse research.     

Idiotypic manipulation in mice: BALB/c mice can express the crossreactive idiotype of A/J mice.

The response of A/J mice to arsonate-coupled keyhole limpet hemocyanin is characterized by a crossreactive idiotype (CRIA). CRIA+ antibodies are restricted to the Igh-Ic haplotype and are never expressed in BALB/c mice after immunization with antigen. Studies at the DNA level suggest that the gene encoding the CRIA heavy chain in A/J mice is probably absent in the genome of BALB/c mice. Despite this, using the immunization cascade tool, we have been able to induce the expression of CRIA+ antibodies in BALB/c mice. These studies led to an apparent paradox, whose understanding will provide new insights into the regulatory mechanisms of the immune system. We suggest that clones secreting CRIA-like Igs in BALB/c mice are "somatic variants" that could arise from gene conversion events.