骨形态发生蛋白7/Smads信号通路及其在肝纤维化进程中的作用

肝纤维化是由于各种病因导致肝损伤后,机体对损伤进行修复的过程。近年来研究发现骨形态发生蛋白(BMP)7及其下游的Smads蛋白可以通过不同的途径拮抗转化生长因子(TGF)β1的致肝纤维化作用,包括诱导细胞外基质降解,抑制细胞凋亡,减少多种促炎症因子的表达,促进肝细胞再生等,探讨了BMP-7/Smads信号通路在肝纤维化过程中的作用。     

SnoN的基本特征、生物学功能及其在肝纤维化中的作用

SnoN是一种核转录共抑制因子,在细胞核和细胞浆中均能阻断TGFβ1/Smad信号转导,是该信号通路的重要负调控因子之一。SnoN在肝纤维化发生发展中的作用已有研究报道,并日益引起人们的关注。因此,本文回顾了有关SnoN方面的研究进展,对其基本特征、生物学功能及其在肝纤维化中的作用作一综述。     

糖尿病心肌病心肌细胞纤维化的病理改变

目的研究糖尿病(DM)大鼠不同病程心肌纤维化及其相关病理变化。方法选取18只DM心肌模型后大鼠随机分为DM大鼠1个月组(DM1组)、3个月组(DM3组)、6个月组(DM6组),每组6只。另选18只健康大鼠作为对照组。采用氯胺T法测定羟脯氨酸含量,为心肌胶原总含量。免疫组织化学染色测定心肌胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ和心肌细胞心肌型α肌动蛋白(α-actin)及转化生长因子β1(TGF-β1)平均积分吸光度(A)。光镜和透射电镜下观察心肌病理变化。结果DM6组心肌胶原总含量明显高于DM1组和DM3组(P<0.01)。与对照组比较,DM3组心肌胶原蛋白Ⅰ表达伴随TGF-β1的表达开始明显增加(P<0.01)。心肌细胞心肌型α-actin表达较对照组明显减少(P<0.01)。各组大鼠心肌横切面可见粗大胶原纤维相互连接成网状,排列紊乱,分布不匀。α-actin表达明显减少,有糖原沉积现象。结论胶原蛋白Ⅰ呈现持续性增加是DM大鼠心肌纤维化的主要原因。TGF-β1参与了心肌纤维化发生的早期过程。糖原沉积和心肌细胞心肌型α-actin表达减少是DM心肌病的病理基础。     

激活素和卵泡抑素mRNA在肝纤维化形成过程中的作用

目的 观察四氯化碳（ＣＣｌ４）诱导实验性肝纤维化模型大鼠肝纤维化形成过程中激活素（ＡＣＴ）βＡ、βＣ、βＥ及卵泡抑素（ＦＳ）ｍＲＮＡ的表达。方法 ４０％ＣＣｌ４皮下注射制备大鼠实验性肝纤维化模型，注射 ＣＣｌ４后１、２、３、４、５、６、７周分批处死动物，每次 ６～１２只，采用半定量 ＲＴ—ＰＣＲ检测 ＡＣＴ βＡ、βＣ、βＥ亚基及 ＦＳｍＲＮＡ的表达。结果 正常肝脏可检测到ＡＣＴ βＡ、βＣ、βＥ及ＦＳ亚基ｍＲＮＡ，往射ＣＣｌ４２～３周后，βＡ水平下降至检测不到的水平，４周以后，又逐渐升高，注射 ６～７周时其表达水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）；注射ＣＣｌ４１～４周可检测到βＣ亚基ｍＲＮＡ，５～７周后其表达水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。βＥ亚基ｍＲＮＡ在 ＣＣｌ４注射１～５周后水平下降至检测下到的水平，注射 ６～７周后其表达水平则明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。ＣＣｌ４注射后的各个时期均未检测到ＦＳ ｍＲＮＡ表达。结论 肝纤维化形成过程中ＡＣＴ、ＦＳ表达发生了不同的变化，ＡＣＴ—ＦＳ系统失衡可能参与了肝纤维化的形成。     

Regulatory effects of lipopolysaccharide in murine macrophage proliferation

ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｆｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｍｕｒｉｎｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＦＡＮＫａｉＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ;ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ;ｇｒａｎｕｌｏ...     

结缔组织生长因子诱导大鼠前体细胞(WB-F344)向肝脏实质细胞分化

目的观察结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）对大鼠肝脏前体细胞（WB—F344）分化的影响,进一步观察细胞外基质的变化。方法采用MTF法检测CTGF对WB—F344细胞活性的影响。采用Wester Rblotting方法分别检测CTGF诱导WB—F344细胞后胆管细胞标志物CK-19及肝细胞标记物AFP、ALB的变化。采用Western blotting和实时荧光定量PCR检测细胞外基质相关指标金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinase．TIMP）-1在mRNA水平和蛋白水平的变化。结果作用于WB—F344细胞24h后,CTGF组的细胞活性大于转化生长因子-β组（P〈0．05）。5ng／ml CTGF作用于WB—F344细胞24h后,可以明显改变WB—F344细胞表面标记物在蛋白水平的表达。幼稚肝细胞标记物AFP的表达是对照组的0．38倍（P=10．002）,成熟肝细胞标记物ALB和胆管细胞标记物CK-19的表达均增加,分别为对照组的3．5倍和1．58倍（P分别为0．000、0．002）。同时,5ng／ml CTGF可以上调WB—F344细胞TIMP-1在mRNA水平和蛋白水平的表达,分别为对照组的2．47倍和3．36倍（P=0．000、0．002）。结论5ng／ml CTGF有诱导肝脏前体细胞向肝脏实质细胞分化的趋势,并伴有WB—F344细胞外基质相关指标TIMP-1表达的上调。     

肝硬化患者血清转化生长因子β1 水平与Child-pugh分级的关系

为探讨肝硬化患者血清转化生长因子(TGF-β1)水平变化及与Child-Pugh分级的关系。用ELISA法测定了93例肝硬化患者及50例健康人血清TGF-β1水平。结果显示,肝硬化患者血清TGF-β1较对照组显著升高(P<0．01)且由Child A级到Child C级逐渐升高,各组间均有显著性差异(P<0．01)。提示血清TGF-β1是反映肝硬化患者肝功能损害程度的指标之一,可用于判断肝硬化患者肝功能损害程度及评价预后。     

脑出血大鼠脑内转化生长因子β_1表达的研究

目的探讨脑出血大鼠脑内转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白和mRNA表达的规律,从而为脑出血后神经功能的修复提供理论依据。方法将75只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(5只),假手术组(35只),模型组(35只),通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶,以建立大鼠脑出血模型,用免疫组织化学及原位杂交法检测脑出血后大鼠脑内的TGF-β1表达变化。结果TGF-β1在脑出血3 h已明显表达,6 h表达进一步明显增强,但在12h表达下降,而在1天后第2次升高达到高峰,4~7天减少,14天后消失。在脑出血6 h,TGF-β1主要在神经元表达,部分在小胶质细胞,但没有发现在星形胶质细胞表达。TGF-β1在脑出血早期是全脑普遍性表达,以海马CA1和CA3及3~5层的皮质锥体细胞明显,后期则主要是在血肿周围表达。结论脑出血后大鼠脑内TGF-β1蛋白和mRNA表达的增强,这可能是神经功能修复的主要机制之一。     

Expression of transforming growth factor alpha in human hepatocellular carcinoma

ABSTRACT— Transforming growth factor alpha (TGF-α) is a mitogenic polypeptide which acts on the epidermal growth factor receptor (EGFR). The aim of this study was to examine the expression of TGF-α in human hepatocellular carcinoma (HCC) and surrounding cirrhotic tissue, and to compare it with normal liver. Immunoreactive TGF-α was detected using two antibodies raised against its C terminus, a polyclonal antibody 26T and a monoclonal antibody Ab-2. In normal liver immunoreactive TGF-α was localised strongly to bile duct epithelium and weakly in occasional parenchymal cells but was notably absent from perisinusoidal and Kupffer cells. Eight out of twenty-eight (28%) cases of HCC expressed TGF-α as demonstrated by cytoplasmic staining with both antibodies and in four cases additional membrane immunoreactivity was demonstrated using 26T. However, where cirrhotic tissue surrounding TGF-α positive tumours was available for analysis immunoreactive TGF-α was detected in only 1/7 cases. TGF-α synthesis by malignant hepatocytes was supported by the detection of specific RNA by Northern blotting from two cases with TGF-α immunoreactivity. These results implicate bile duct epithelium as an important source of TGF-α in human liver. Furthermore, in HCC the expression of TGF-α in some cases, together with paucity of TGF-α immunoreactivity in surrounding cirrhotic tissue, suggests that TGF-α may play a role in continued cell proliferation in human hepatocarcinogenesis.     

Effects of RNA interference targeting transforming growth factor-beta 1 on immune hepatic fibrosis induced by Concanavalin A in mice

BACKGROUND:Previous studies have shown that transforming growth factor-beta 1(TGF-β1)is the most potent means of stimulating liver fibrogenesis by myofibroblast-like cells derived from hepatic stellate cells. Thus,TGF-β1 could be a target for treating hepatic fibrosis. This study aimed to investigate the inhibitory effects of specific TGF-β1 small interference RNA(siRNA)on immune hepatic fibrosis induced by Concanavalin A(Con A)in mice. METHODS:Three short hairpin RNAs targeting different positions of TGF-β...     

氧化苦参碱抗肝纤维化作用的病理学研究

目的　研究氧化苦参碱对实验性大鼠肝纤维化的治疗作用 ,并探讨其作用机理。方法　 80只Wistar大鼠 ,随机挑选72只给予皮下注射 5 0 %四氯化碳及以 10 %酒精替代饮用水 ,其余 8只作为正常对照组 (N组 ) ,8周后造模组中随机处死 16只 (M组 )证实肝纤维化形成 ,剩下肝纤维化大鼠随机分成二组 ,分别给予氧化苦参碱腹腔注射 (T组 ,10 0mg·kg-1·d-1)和生理盐水腹腔注射 (R组 ,10mg·kg-1·d-1) ,疗程为 9周 ,实验结束时全部大鼠采血后处死 ,分别行HE染色评估肝纤维化程度 (采用纤维化半定量计分系统 ,SSS)、免疫组化法检测肝组织中TGFβ1水平、Masson染色法评估肝组织中胶原纤维百分比。 结果　氧化苦参碱组 (T组 )大鼠肝纤维化程度较自然恢复组 (R组 )明显减轻 ( 7.5 4± 2 .2vs10 .44± 3 .0 ,P <0 .0 5 ) ,两组大鼠肝组织中胶原面积密度差异显著( 10 .4± 3 .0vs 16.8± 3 .5 ,P <0 .0 5 ) ;T组血清转氨酶显著高于R组 (P <0 .0 5 ) ,M组大鼠肝组织TGFβ1的表达较N组明显升高( 12 5 .2± 2 2 .7vs 3 0 .5± 9.5 ,P <0 .0 1) ,氧化苦参碱治疗后肝组织TGFβ1明显减少 (P <0 .0 1)。 结论　氧化苦参碱具有明显的逆转肝纤维化作用 ,其机理可能与其降低TGFβ1的表达有关     

原肌球蛋白1在大鼠肝纤维化模型及肝星状细胞中的动态表达及其意义

目的 观察原肌球蛋白1 (TPMl)在大鼠肝纤维化模型及肝星状细胞(HSC)中的动态表达.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(6只)和模型组(24只).二甲基亚硝胺腹腔注射建立大鼠肝纤维化模型,于第2、4、6、8周(每组各6只)门静脉采血及取肝组织标本; HSC-T6细胞设对照组及刺激组,刺激组以5 ng/ml转化生长因子β 1(TGF β 1)作用48h.苏木素-伊红和Masson染色观察肝组织病理变化,RT-PCR、免疫组织化学和Western blot检测组织与细胞中TPMl,TGF β1及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白的表达,以及TPMl在肝组织中的定位.两样本均数比较采用独立样本t检验;相关性采用Pearson直线相关分析.结果 成功建立肝纤维化模型,TPMl在正常肝组织中低表达于汇管区血管内皮上,在模型组TPMl强表达于增生的肝纤维间隔,TPMl及α-SMA的mRNA及蛋白的表达在肝纤维化过程中均逐渐升高,6周时高于其他各组,8周时下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);TGF β 1先升高,4周时高于其他各组,6周时下降(P＜0.05);相关性分析表明TPMl与o-SMA和TGF β 1的表达均呈正相关(rs=0.688和rs=0.692,P＜0.01); HSC-T6细胞中,TGF β 1刺激组TPM1及α- SMA的mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TPMl参与了肝纤维化的发生和发展过程,有望成为肝纤维化诊断与治疗的新靶点.     

胆管结扎和四氯化碳诱导Wistar大鼠肝纤维化模型的建立及相关指标的对比分析

目的比较胆管结扎(BDL)、四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的生化指标、肝脏病理学及纤维连接蛋白(FN)的表达。方法 90只健康雄性Wistar大鼠,分为CCl4肝纤维化模型组(44只)及其对照组(6只)和BDL肝纤维化模型组(30只)及其对照组(10只)。CCl4肝纤维化模型组是采用50%的CCl4橄榄油溶液对大鼠进行腹腔注射的方法来制备模型,而BDL肝纤维化模型组则采用结扎大鼠胆总管的方法来制备。观察大鼠一般情况,生化方法测血清ALT、AST、TBil、DBil;ELISA法测血清透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)水平。HE和Masson染色观察肝组织的病理学变化,免疫组织化学染色观察肝组织FN表达。计量资料组间比较采用t检验。结果血清生化学结果显示,BDL组大鼠自胆管结扎术后第7天开始,TBil及DBil即上升到较高水平且随后一直保持此水平,CCl4肝纤维化模型组大鼠2周始逐渐升高,至8周达高峰;BDL大鼠纤维化指标HA、LN水平显著高于同期CCl4模型组;CCl4模型组大鼠可见肝细胞弥漫性脂肪变性,汇管区-汇管区或汇管区-中央静脉间纤维间隔形成极为显著,BDL大鼠则表现为肝内胆管显著增生,炎性细胞浸润及纤维间隔形成同时存在;BDL组中FN的表达呈分散无规则型,且纤维组织细小,而CCl4组的FN多集中表达于小叶之间的间隔处,纤维组织粗大。结论 BDL和CCl4均可诱导大鼠肝纤维化,BDL较早引起肝功能及肝纤维化指标升高,可见明显胆管增生,CCl4则以脂肪变性为主;FN在两种模型中表达分布不同。     

RUNX3mRNA在原发性肝癌组织中的表达分析

目前,在已知的大多数肿瘤的发生和发展中存在人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因失活,如肝癌、胃癌、肺癌、喉癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌和子宫颈癌等肿瘤中均发现RUNX3基因5'CpG岛甲基化,这是抑癌基因RUNX3失活的主要机制[1-2].而RUNX3mRNA与原发性肝癌的相关性研究尚少,现通过检测RUNX3mRNA在原发性肝癌及其癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理因素的相关性,以探讨RUNX3基因作为一种可能的肝癌抑制基因与肝癌发生和发展的关系及其意义.     

VEGF在大鼠慢性酒精性肝损伤中的表达

目的:观察大鼠慢性酒精性肝损伤过程中 VEGF的表达,探讨其在慢性酒精性肝损伤发生、发展中的作用．方法:56度的白酒(560 mL／L)平均以7 g／kg的剂量每日早晨灌胃一次制备肝纤维化模型,灌胃4 wk、12 wk及24 wk采用股静脉放血法分别处死大鼠,观察肝脏病理变化并采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达．结果:对照组的VEGF未见表达,饲酒4 wk组表达VEGF mRNA比例最高,达到83．3％(5／6), 与对照组相比有非常显著性差异(P<0．01), 12 wk时下降到18．2％(2／11),且其表达与对照组相比无差异(P>0．05),而至24 wk VEGF表达阳性率上升到57．1％(4／7),与对照组相比有非常显著性差异(P<0．01)．另外,饲酒4 wk组 VEGF表达阳性率与12周相比差异也有非常显著性(P<0．01),而与24 wk相比无统计学差异．试验组大鼠肝细胞出现明显脂肪、空泡变性,坏死及胶原增生等病变．结论:VEGF可能在酒精性肝病中起重要作用,主要与酒精性肝炎及酒精性肝纤维化有关．     

基因修饰胎肝干细胞治疗肝纤维化

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）基因修饰的胎肝干细胞治疗肝纤维化大鼠的效果。方法构建大鼠HGF基因和绿色荧光蛋白基因共同表达的融合载体,转染到胎肝母细胞中。将能够表达HGF的细胞移植到CCl4肝纤维化大鼠体内,将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）修饰的胎肝干细胞作为对照组,检测大鼠肝功能和血清HGF及TGFβ1的浓度,肝组织中荧光蛋白数量和分布,肝组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的沉积情况。结果组织学及血清学检测显示,与对照组相比,经HGF基因修饰的胎肝干细胞能够显著改善肝纤维化指标和大鼠肝功能（P〈0.05）。结论 HGF修饰的胎肝干细胞治疗可能成为肝纤维化潜在的治疗手段。     

日本血吸虫病小鼠肝纤维化肝脏CTGF、TGF-β1的表达及意义

目的 研究结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）与转化生长因子β1（transforming growth factor-betal，TGF-β1）在日本血吸虫病小鼠肝纤维化肝脏中的表达状况及意义。方法 用昆明小鼠感染尾蚴建立日本血吸虫病小鼠肝纤维化模型，随机分为模型组和对照组，感染后6、10、14、18周杀鼠；HE染色观察肝脏病理变化，免疫组化法检测肝内CTGF、TGF-β1蛋白的表达水平。结果 模型组小鼠10周时形成血吸虫病肝纤维化，此时肝内CTGF表达达高峰。且10、14、18周时的表达量均显著高于同期对照组（P〈0．01）；模型组TGF-β1蛋白定量和CT—GF有相同的变化趋势，但18周时与同期对照组比较差异无显著性（P〉0．05）；模型组CTGF和TGF-β1蛋白表达水平具有直线相关性。结论 CTGF与TGF-β1的表达与日木血吸虫病小鼠肝纤维化形成有密切关系，TGF-β1的致纤维化作用可能部分通过CTGF的生物学作用介导，阻断CTGF的传导通路可能是血吸虫病肝纤维化治疗的有效靶点。     

转化生长因子β1/Smads信号转导通路的变化在肝炎肝硬化发生中的作用

转化生长因子β1(TGFβ1)是目前致肝纤维化最重要的细胞因子,通过旁分泌、自分泌调控方式刺激肝星状细胞(HSC)合成大量细胞外基质(ECM),并减少ECM降解,使肝脏ECM大量沉积,形成肝纤维化以致肝硬化。研究发现TGFβ1/Smads信号转导通路在多种疾病的发生和发展中起着非常     

Hypoxia potentiates transforming growth factor-beta expression of hepatocyte during the cirrhotic condition in rat liver.

BACKGROUND/AIMS: Many studies have reported that hypoxia might be associated with angiogenesis and fibrogenesis, and the level of transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) was increased in fibrotic liver and maximal at cirrhosis. Therefore, we examined the expression of TGF-beta1, phosphorylated-Smad2/3 (p-Smad2/3) of the TGF-beta immediate down stream signaling system and hypoxic status during hepatic fibrogenesis. METHODS: Fibrosis of rats was induced by carbon tetrachloride. Collagens were detected with Azan stain. Immunohistochemistry and immunoblotting was used. RESULTS: TGF-beta1 was mainly produced by hypoxic hepatocytes at cirrhosis although myofibroblasts (MFBs) and macrophages producing TGF-beta1 were decreased. Moreover, distribution of p-Smad2/3 in hepatocytes was consistent with those of hypoxic hepatocytes regardless of MFBs. Furthermore, in recovery, most MFBs disappeared, whereas positive reactions of p-Smad2/3 still existed in the hepatocytes of hypoxic areas. Therefore, TGF-beta1 expression in hepatocytes might have been associated with hypoxia. CONCLUSIONS: We put forward the hypothesis that TGF-beta1 is mainly produced by MFBs and macrophages at early and middle stages of fibrotic processes, but it is predominantly released by hypoxic hepatocytes in the last fibrotic stage or cirrhosis.     

氧化苦参碱防治半乳糖胺诱导大鼠肝纤维化的实验研究

目的 观察氧化苫参碱(oxymatrine,OM)预防及治疗大鼠肝纤维化的疗效并探讨其作用机制。方法 采用半乳糖胺诱导的大鼠肝纤维化模型,观察OM(90mg/kg)干预前后血及肝组织生物化学、羟脯氨酸含量、TGF β_1 mRNA表达水平及病理组织学改变。结果 OM干预组肝组织羟脯氨酸含量 (μg/mg)较模型组显著下降(预防观察组为0.50±0.11和0.99±0.14,t=8.366,P＜0.01;治疗观察组为0.44±0.04和0.70±0.06,t=9.839,P＜0.01);与模型组比较,干预组血清ALT、AST亦显著下降(P＜0.01);病理组织学显示干预组较模型组 Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积减少,纤维间隔纤细,数量减少;干预织肝组织匀浆内超氧化物歧化酶活性(NU/mg)较模型组升高(预防观察组为149.81±15.28和95.22±16.33,t=7.309,P＜0.01;治疗观察组为157.68±19.54和119.88±14.94,t=4.348,P＜0.01), 而丙二醛(nmol/mg)低于模型组(预防观察组为2.06±0.17和4.57±0.37,t=17.529,P＜0.01;治疗观察组为1.76±0.24和3.10±0.17,t=12.697,P＜0.01);PT-PCR显示干预组TGF β_1 mRNA表达水平降低(预防观察组为0.21±0.01和0.50±0.01,t-48.665,P＜0.01;治疗观察组为0.18±0.02和0.38±0.01,t=22.464,P＜0.01)。结论 氧化苫参碱对半乳糖胺诱导的肝纤维化有预防及治疗作用,其部分机制为通过