杨梅素诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡机制研究

目的:研究杨梅素(Myricetin)诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的机制.方法:培养人膀胱癌细胞株BIU-87,加入不同浓度杨梅素干扰,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化;并利用MTT及Hoechst 33258染色法检测杨梅素对膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的影响;后用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因survivin及caspase-3转录水平的改变,免疫印迹法检测survivin和caspase-3的表达情况.结果:杨梅素能诱导BIU-87细胞凋亡,并明显抑制survivin的转录和表达,同时对caspase-3有上调作用.结论:杨梅素能诱导膀胱癌细胞BIU-87凋亡,其机制与抑制survivin表达,上调caspase-3表达有关.     

白花蛇舌草通过JAK2/STAT3通路途经诱导膀胱癌T24细胞凋亡

目的：研究白花蛇舌草对膀胱癌T24细胞凋亡的影响及其潜在机制。方法 MTT法检测不同浓度白花蛇舌草对T24增殖的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中JAK2、STAT3、Bax、Caspase-3和Bcl-2的表达情况。结果白花蛇舌草明显抑制膀胱癌T24细胞的增殖同时诱导其凋亡,且作用强度随着浓度的增加而增加。Western blot检测证实白花蛇舌草能够显著抑制细胞中JAK2、STAT3和Bcl-2表达,上调Bax和Caspase-3表达。结论白花蛇舌草能够抑制膀胱癌细胞T24增殖,促进其凋亡,可能与抑制JAK2/STAT3通路有关。     

化疗药物剂量依赖性下调化疗敏感膀胱癌细胞中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白的水平

目的探讨化疗药物诱导膀胱癌细胞凋亡及其对X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（XIAP）表达和caspase-3剪切的影响。方法培养4种膀胱癌细胞系RT4、MGH-U1、EJ及T24,用低剂量阿霉素和丝裂霉素诱导凋亡启动,用细胞增殖分析试剂盒CCK-8分光法测定不同浓度化疗药物对膀胱癌细胞的杀伤力,确定化疗敏感细胞和耐药细胞,流式细胞术检测化疗药物诱导的细胞凋亡变化;用Western印迹检测阿霉素和丝裂霉素对膀胱癌细胞XIAP蛋白水平及caspase-3剪切的影响。结果4种膀胱癌细胞系中XIAP的表达水平差异无统计学意义。随着阿霉素和丝裂霉素的浓度增高,CCK-8检测到化疗药物对膀胱癌细胞的抑制率相应增加,流式细胞术检测到化疗药物诱导的细胞凋亡率相应增加。在化疗敏感的RT4细胞中可见caspase-3的剪切随着化疗药物浓度的增高而加强,而XIAP的蛋白水平却相应下降。这种效应在耐药的T24细胞中却不明显。结论阿霉素和丝裂霉素能剂量依赖性地杀伤膀胱癌细胞,而且这种杀伤力是通过诱导膀胱癌细胞凋亡实现的,XIAP和caspase-3与膀胱癌细胞的化疗耐药有一定相关性。     

蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western-Blot法检测凋亡抑制蛋白survivin,caspeas-3蛋白的表达.结果 随着蟾蜍灵浓度及作用时间的增加,细胞存活率逐渐降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);随着药物浓度增加,survivin蛋白表达逐渐下降,同时活化caspase-3.结论 蟾蜍灵可诱导食管癌ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin蛋白和活化caspase-3有关.     

苦参碱诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察苦参碱抑制人肺腺癌细胞A549的增殖作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Bax及caspase-3蛋白表达水平.结果:苦参碱对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖关系;电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;细胞周期分析显示细胞增殖发生S/G2期阻滞;苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01);而显著升高Bax蛋白表达水平及caspase-3活性.结论:苦参碱可显著抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达水平改变线粒体膜通透性有关.     

千层纸素诱导人慢性粒细胞白血病K562的凋亡作用

探讨千层纸素对人慢性粒细胞白血病细胞K562的凋亡诱导作用及其可能机制。采用MTT法检测细胞存活率;电镜下观察细胞超微结构的改变;DAPI染色观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase 9、survivin及ERK1/2的表达变化情况。结果表明千层纸素呈浓度依赖地抑制K562细胞的增殖作用,诱导K562细胞发生凋亡,上调 K562细胞中cleaved-caspase 9蛋白,下调survivin、pro-caspase 9及p-ERK1/2蛋白的表达水平。千层纸素可诱导K562凋亡,这可能与下调survivin蛋白表达,激活caspase 9蛋白,抑制ERK信号通路有关。     

小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

目的探讨小蘖碱对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响。方法选用人卵巢癌细胞株SKOV-3进行体外培养,以5-100μmol/L小蘖碱分别处理SKOV-3细胞24-72h,MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期;SABC法检测survivin、caspase-3在细胞中的表达。结果小蘖碱能显著抑制SKOV-3细胞体外生长,呈时间剂量依赖性。小蘖碱作用24h随浓度的升高survivin阳性表达逐渐降低,caspase-3阳性表达逐渐升高。流式细胞仪分析证实小蘖碱能使SKOV-3细胞积聚在S期和G2/M期。结论小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3的生长有显著的抑制作用,survivin的表达下降、caspase-3的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

MS-275体外诱导膀胱癌细胞凋亡的机制探讨

目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂MS-275对膀胱癌T24细胞的诱导凋亡作用,并初步探讨其分子机制。方法用MTT法检测MS-275对T24细胞的生长抑制作用,并观察其有效作用浓度,采用荧光显微镜及原位末端标记(TUNEL)法观察和检测MS-275对T24细胞的诱导凋亡作用,采用流式细胞仪(FCM)检测Bcl-2和Bax在细胞内表达的动态变化。结果 MS-275抑制T24细胞的半抑制浓度(IC50)为(5.21±0.61)μmol/L。4.0μmol/L的MS-275处理T24细胞后可观察到典型的凋亡形态学变化,且随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高,同时引起Bcl-2及Bax的表达率分别下调和上调。结论 HDAC抑制剂具有体外诱导膀胱癌细胞凋亡的作用,其作用机制涉及Bcl-2及Bax表达的动态改变。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的相关信号通路等分子机制。方法应用光学显微镜和流式细胞仪检测EGCG作用T24细胞的凋亡诱导作用。采用Western blotting方法检测PI3K／Akt信号通路的改变;同时研究了caspase-3,PARP等蛋白在诱导细胞凋亡中的作用。结果EGCG作用于T24细胞24h后能明显诱导细胞凋亡,呈显著浓度依赖性。EGCG使T24细胞caspase-3和PARP均被激活;T24细胞phospho—Thr308-Akt和phospho—Ser473-Akt的表达逐渐降低,但tAkt未见改变。结论EGCG能诱导T24细胞凋亡,EGCG凋亡诱导作用可能和抑制P13K／Akt信号通路的激活有关。     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

非CO2依赖型细胞培养系统对膀胱癌T-24细胞增殖的影响

目的 探讨非CO₂依赖型细胞培养系统对膀胱癌T-24细胞增殖的影响。方法 对膀胱癌T-24细胞采取非CO₂依赖型细胞培养系统在（37℃ 、大气环境) 培养箱（大气-B组）和（37℃、5%CO₂）培养箱（CO₂-B组）条件下,及CO₂依赖型细胞培养系统在（37℃、大气环境) 培养箱（大气-A组）和（37℃、5%CO₂）培养箱（CO₂-A组）条件下进行培养,检测分析两种体系培养基连续7d pH的比较结果;采用细胞增殖曲线及克隆形成实验检测细胞生长差异情况;采用流式细胞术检测分析两种系统对细胞周期及凋亡率影响的比较结果; RT-PCR、Western blot技术检测分析两种系统下的膀胱癌细胞中survivin、caspase-3基因及蛋白的表达情况。结果 两种培养系统条件下,细胞培养基pH变化趋势一致;两种培养系统下T-24细胞生长增殖未见差异;RT-PCR 法及Western bolt法检测显示,两种培养系统下表达survivin、caspase-3因子及蛋白未见差异。结论 膀胱癌非CO₂依赖型细胞培养系统对细胞增殖、基因表达等方面与膀胱癌CO₂依赖型细胞培养系统无明显区别。     

Survivin反义寡核苷酸对人结肠癌细胞的促凋亡作用

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸对大肠癌细胞的促凋亡作用。方法:用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染LS174T细胞,利用RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;利用Western blot检测Survivin蛋白的表达;检验寡核苷酸作用前后caspase 3活性的变化及细胞凋亡情况。结果:Survivin-ASODN可使大肠癌细胞中survivin mRNA和蛋白的表达下降;caspase-3活性明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:Survivin反义寡核苷酸可以增强caspase-3的活性,有效诱导大肠癌细胞凋亡,反义核酸技术有可能成为临床大肠癌基因治疗的一种新途径。     

瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞Survivin表达的影响

目的研究瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞的抑制作用及生存素(Survivin)表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物处理T24细胞,分别用MTT法检测膀胱癌细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测药物作用后细胞中Survivin蛋白的表达。结果瑞香狼毒水提取物干预细胞后,①膀胱癌T24细胞增殖受到抑制,抑制效应呈剂量依赖性并随时间的延长逐渐升高;②瑞香狼毒水提取物可以促进膀胱癌T24细胞的凋亡;③膀胱癌T24细胞中的Survivin蛋白表达下降。结论瑞香狼毒水提取物可以通过下调Survivin蛋白的表达从而抑制膀胱癌T24细胞增殖,促进其凋亡,并具有浓度和时间依赖性。     

hTERT启动子调控的野生型p53基因对膀胱癌细胞的靶向性抑制作用

目的:探讨人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的野生型p53基因的靶向性表达,观察对人膀胱癌细胞株T24的选择性杀伤效应及细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法,将构建的含hTERT启动子调控表达人野生型p53基因和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,分别转染膀胱癌细胞株T24和正常人胎肺成纤维细胞,应用荧光显微镜、电镜、台盼蓝拒染法及流式细胞仪等方法,观察基因的靶向性表达及对膀胱癌细胞株T24细胞形态学、生长抑制曲线及细胞周期变化的影响。结果:转染hTERT启动子调控的目的基因可在端粒酶阳性的膀胱肿瘤细胞中靶向性表达发出绿色荧光。靶向转染野生型p53基因能抑制膀胱癌细胞生长,72h后细胞生长抑制率分别为48.5%、高于常规培养组3.6%和阴性对照组2.5%,差异有显著性意义(P<0.05)。电镜可见典型的凋亡细胞。细胞周期分析G0和G1期细胞比例明显增高,并出现凋亡峰。结论:构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥靶向性抑制膀胱癌细胞生长作用。     

靶向抑制survivin对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响

目的 探讨反义survivin—脂质体复合物对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响及机制,为胰腺癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法 用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染胰腺癌细胞系PANC—1细胞;通过RT—PCR、Western印迹试验检测survivin表达水平;MTY法测量细胞生长情况;流式细胞术测定caspase—3活性及凋亡率;电镜观察细胞形态学变化;应用激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价脂质体反义复合物在亚细胞水平对survivin蛋白分子的影响。结果 反义survivin脂质体复合物有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,IC50值为300nmoL／L,最大效应浓度为500nmoL／L,此时表达水平下调了80％。类似细胞生长抑制结果为MTY实验所证实。与此同时,caspase—3活性和凋亡率随转染时间延长而逐渐递增,并出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。免疫荧光分析,标记有FITC—绿荧光染色的survivin蛋白分子在未转染的细胞浆中清晰可见,并呈“斑点”状分布;而在转染细胞中几乎没有发现,但是符合细胞凋亡的形态学特征。结论 靶向抑制联系细胞增殖和凋亡的关键分子—survivin在胰腺癌治疗中有良好的应用前景。     

Effect of small interfering RNA targeting survivin gene on biological behaviour of bladder cancer

Background Bladder cancer is the most common type of urinary system tumours. It is frequently associated with genetic mutations that deregulate the cell cycle and render these tumours resistant to apoptosis. Survivin, a newly discovered member inhibitor of apoptosis protein （IAP） family in several human cancers, by inducing cell proliferation and inhibiting apoptosis is frequently activated in bladder cancer. We studied the influence of small interfering RNA （siRNA） targeting survivin on the biological behaviour of bladder cancer cells. Methods A double strand survivin target sequence specific siRNA was designed and synthesized. After transfection of bladder cancer cell line T24 by siRNA/liposome complex with increasing concentrations （50-200 nmol/L）, the transfectant cells were intratumourally injected at different doses （5 μg or 50 μg）. The effects were measured in vitro and in vivo. Results The selected siRNA efficiently down-regulated survivin mRNA expression in a dose and time dependent manner. The maximal effect was achieved at the concentration of 100 nmol/L, at which survivin expression level was down-regulated by 75.91%. The inhibition rate of cell growth was 55.29% （P〈0.01） and the markedly increased apoptotic rate was 45.70% （P〈0.01）. In vivo intratumoural injection of 50 μg siRNA-survivin could notably orevent the growth of bladder cancer （P〈0.01） in xenografted animals. Conclusion The application of siRNA-survivin could markedly inhibit survivin expression in bladder cancer cell line by inducing apoptosis and inhibiting the growth of the tumour. It may become a new gene therapy tool for bladder cancer.     

染色质重构复合体蛋白PBRM1对膀胱癌细胞生物学功能的影响

目的探讨染色质重构复合体蛋白PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24细胞生物学功能的影响。方法针对PBRM1 mRNA序列设计合成siRNA,转染膀胱癌细胞,沉默PBRM1基因后进行如下检测：RT-PCR法检测PBRM1 mRNA表达变化及凋亡、迁移相关指标;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹法检测凋亡蛋白Caspase3表达水平;划痕实验及Matrigel实验检测细胞迁移及侵袭能力变化。结果 PBRM1siRNA能有效抑制膀胱癌细胞中PBRM1的表达。PBRM1基因沉默后,与空白对照组相比,细胞增殖能力显著增强,同时细胞凋亡减少,细胞迁移及侵袭能力明显减弱。凋亡及迁移相关基因mRNA水平及蛋白水平也出现相应变化。结论 PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24生物学功能有重要影响,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡、迁移及侵袭。     

靶向沉默Notch1基因对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

目的探讨Notch1基因沉默对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法用pGenesil质粒构建靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA1,并将其转染到膀胱癌细胞系T24中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测Notch1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况。逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记法（Western Blot）检测Notch1基因的mRNA和蛋白在转染前后表达变化。结果转染psiRNA1质粒后T24细胞的生长受到显著抑制,呈一定的时间依赖性（60?h内）,凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多（未转染组、空载体组、阴性对照组）,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Notch1基因在mRNA和蛋白水平表达相对于对照组明显下调（P＜0.05）。结论沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖,Notch1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用。