白藜芦醇对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及EMT的影响

目的:研究白藜芦醇(RES)对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用不同浓度(50和100 μmol/L)的RES处理Eca-109细胞,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测EMT蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:与对照组比较,RES各浓度(50 μmol/L和100 μmol/L)组均可明显抑制Eca-109细胞侵袭迁移(P<0.01),下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05~P<0.01),增加E-cadherin mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论:RES抑制Eca-109细胞侵袭迁移能力,其机制可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达,调控EMT蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达、抑制上皮间质转化过程.     

AP000892.6通过靶向miR-616-5p影响膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)AP000892.6对膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化进程的影响及相关分子机制。方法 应用GEPIA数据集分析AP000892.6在膀胱癌和癌旁组织中的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测膀胱癌细胞株647V、T24、UMUC3、5637、RT4和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中AP000892.6的表达水平。将AP000892.6过表达质粒或阴性对照质粒转染到T24细胞,实验分为AP000892.6组和NC组,RT-qPCR法验证质粒转染效率。细胞划痕法和Transwell实验分别检测转染T24细胞的迁移和侵袭能力。应用生物信息学方法预测以及双荧光素酶报告基因实验验证AP000892.6的下游靶基因。RT-qPCR法检测AP000892.6下游靶基因的表达。Western blot法检测上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1和间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist的表达。结果 与癌旁组织比较,AP000892.6在膀胱癌组织中表达降低(P<0.01)。与SV-HUC-1细胞比较,AP000892.6在膀胱癌细胞株中表达降低(P<0.05),T24细胞中AP000892.6的相对表达水平最低(P<0.01)。与NC组比较,过表达AP000892.6抑制膀胱癌T24细胞的迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因分析证明miR-616-5p是AP000892.6的靶基因(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6对miR-616-5p表达具有负调控作用(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6组T24细胞中上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1表达上调,间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist表达下调。结论 AP000892.6通过靶向miR-616-5p抑制膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭和上皮间充质转化进程。     

LncRNA SNHG3对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）小核仁RNA宿主基因3（SNHG3）对人宫颈癌细胞系SiHa增殖、迁移及侵袭的影响。方法 利用 GEO 数据库芯片分析 lncRNA SNHG3 在正常宫颈组织和宫颈癌样本中的表达;通过实时定量 PCR 检测LncRNA SNHG3、上皮-间质转化标志物 N-cadherin、Snail、Vimentin 和 E-cadherin 基因表达水平;通过 Western blot 检测 N-cadherin、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平;在SiHa细胞中转染siRNA干扰片段来敲低lncRNA SNHG3,并采用qRT-PCR验证转染效率;通过CCK8实验检测细胞增殖能力,划痕愈合实验检测细胞横向迁移能力,Transwell小室实验检测细胞纵向迁移及侵袭能力。结果 LncRNA SNHG3在宫颈癌组织及细胞系中高表达;敲低lncRNA SNHG3后,明显抑制SiHa细胞的增殖能力（P<0.001）、迁移能力（P<0.01）和侵袭能力（P<0.001）;qRT-PCR和Western blot结果显示敲低lncRNA SNHG3可下调N-cadherin、Snail和Vimentin表达水平（P<0.001）,同时上调E-cadherin表达水平（P<0.001）。结论 LncRNA SNHG3可通过激活EMT通路促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭能力。     

转录因子FOXC1促进胶质瘤细胞系U87的侵袭能力

目的：探讨转录因子FOXC1对人脑胶质瘤细胞系U87侵袭的促进作用。方法：qPCR、Western blot检测胶质瘤细胞系U87、U251及正常星型胶质细胞中FOXC1 mRNA和蛋白表达水平。将FOXC1-siRNA转染至U87细胞中,分别用qPCR、Western blot检测FOXC1-siRNA的转染效率。细胞划痕实验和Transwell实验检测U87细胞转染FOXC1-siRNA后对细胞侵袭能力的影响,利用 Western blot检测U87细胞上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）、标记蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）表达水平。结果：U87细胞下调FOXC1表达后侵袭能力明显减弱,上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）表达水平下降,上皮细胞标记蛋白表达水平E-cadherin表达水平升高、间质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin表达水平降低。结论：转录因子FOXC1通过上皮间质化促进胶质瘤细胞的侵袭。     

姜黄素对肝细胞癌耐药细胞上皮间质转化的影响及分子机制研究

目的探讨姜黄素对肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM上皮-间质转化（EMT）的影响及分子机制。方法取人肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM,以预实验确定的姜黄素合适浓度20μmol/L处理细胞。采用噻唑蓝溴化四唑法、划痕实验、Transwell实验分别检测姜黄素对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,Westernblot法检测姜黄素对EMT标志物及NF-κB/Snail通路相关蛋白表达的影响。结果相较于HepG2/ADM组,HepG2/ADM+姜黄素组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达上调（P＜0.05）,N-cadherin、Vimentin、NF-κBp65、Snail蛋白表达均明显下调（均P＜0.05）。HepG2/ADM细胞过表达Snail后,由姜黄素诱导的E-cadherin表达上调、N-cadherin和Vimentin表达下调均被逆转（均P＜0.05）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显增强（均P＜0.05）。结论姜黄素能够抑制HepG2/ADM细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过NF-κB/Snail通路抑制细胞的EMT过程。     

汉黄芩素抑制IL-6诱导人非小细胞肺癌A549细胞的侵袭转移作用

探讨汉黄芩素对IL-6诱导的人非小细胞肺癌A549细胞侵袭转移的抑制作用及其可能机制。采用MTT法检测汉黄芩素对A549细胞存活影响;细胞侵袭实验检测汉黄芩素的抗侵袭转移作用;免疫荧光检测转移标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白水平表达;Real-time PCR分析汉黄芩素对转移标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及相关转录因子Snail、Twist基因水平的影响;通过转染STAT3质粒,进一步验证汉黄芩素对转移标志蛋白作用机制。实验结果表明汉黄芩素通过调控转移标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白、基因表达水平,抑制IL-6诱导的A549细胞侵袭转移且呈剂量依赖性。汉黄芩素能抑制转移相关转录因子Snail、Twist的表达。由此推测,汉黄芩素可能是通过调控转录因子Snail、Twist的活性进而抑制A549细胞侵袭转移。     

Amotl2促进肝细胞肝癌血管生成拟态及EMT形成

目的:研究Amotl2对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响及其在诱导肝癌上皮间充质转化（EMT）及血管生成中的作用。方法:将Amotl2过表达质粒和干扰质粒分别转染至肝癌细胞系HepG2和Bel7402中,Western blot检测转染前、后HepG2和Bel7402中Amotl2、EMT相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）表达变化情况;划痕、侵袭实验检测Amotl2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响;三维培养检测Amotl2对HCC细胞形成血管样结构的影响。结果:促进Amotl2表达后HepG2表现出EMT样改变,E-cadherin表达下降、Vimentin表达上升、细胞迁移侵袭和三维成管的能力增强。抑制Amotl2表达后Bel7402由间质样表型转变为上皮样表型,E-cadherin表达上升、Vimentin表达下降、细胞迁移侵袭和三维成管的能力减弱。结论:Amotl2可能通过诱导EMT促进原发性肝癌的迁移侵袭能力和血管生成拟态的形成。     

Runx3对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨Runt域转录因子3（Runx3）对人骨肉瘤细胞143B细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法构建Ruxn3的RNA干扰（Ad-siRunx3）和过表达Runx3（Ad-Runx3）的重组腺病毒质粒;MTT和克隆形成实验检测143B细胞的增殖;划痕实验和Transwell小室实验分别检测143B细胞的迁移和侵袭;RT-qPCR和Western blot检测上皮-间质转化（EMT）关键分子E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail的表达;Western blot检测PI3K/AKT和丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路关键分子的表达。结果下调Runx3表达可促进143B细胞的增殖、迁移和侵袭,增强N-cadherin、Vimentin和Snail表达,但抑制E-cadherin表达;过表达Runx3则可抑制143B细胞增殖、迁移和侵袭,抑制N-cadherin、Vimentin和Snail表达,但促进E-cadherin表达;同时,下调Runx3表达可增加AKT、p38和ERK1/2磷酸化水平,而过表达Runx3则能够降低AKT、p38和ERK1/2的磷酸化水平。结论 Runx3能抑制143B细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与Runx3阻止EMT进程、抑制AKT信号以及p38和ERK1/2 MAPKs信号途径有关。     

宫颈癌组织中Twist、Snail、YB-1基因表达对细胞侵袭、上皮间质转化的影响

目的:探讨宫颈癌组织中Twist、Snail、YB-1基因表达对细胞侵袭、上皮间质转化的影响。方法:取138例宫颈癌根治术患者的宫颈癌组织标本、癌旁组织标本,采用荧光定量PCR法检测其中Twist、Snail、YB-1基因,细胞侵袭相关基因,上皮间质转化标志物基因的mRNA表达量,采用Pearson检验分析宫颈癌组织Twist、Snail、YB-1基因的mRNA表达与细胞侵袭、上皮间质转化的相关关系。结果:宫颈癌组织中Twist、Snail、YB-1基因的mRNA表达量高于癌旁组织,侵袭基因STAT3、YAP1、TUG1、FoxM1、Rab11的mRNA表达量高于癌旁组织,上皮间质转化标志物E-cadherin、β-catenin基因的mRNA表达量低于癌旁组织,vimentin基因的mRNA表达量高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson检验发现,宫颈癌组织中Twist、Snail、YB-1基因的mRNA表达量与细胞侵袭、上皮间质转化直接相关。结论:宫颈癌组织中存在Twist、Snail、YB-1基因高表达,且其表达异常直接导致肿瘤细胞的侵袭活性增加、上皮间质转化加剧。     

MiR-223通过上皮间质转化抑制宫颈癌细胞侵袭转移

目的 探讨MiR-223在宫颈癌细胞Hela中是否通过上皮间质转化（EMT）来抑制宫颈癌细胞的侵袭转移。方法 在宫颈癌细胞Hela中过表达MiR-223,利用平板克隆实验观察转染10 d后宫颈癌细胞的克隆情况;进一步利用细胞划痕愈合实验和Transwell实验观察宫颈癌细胞的迁移侵袭能力;利用Western blot实验检测上皮间质标志物蛋白波形蛋白（Vimentin）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）、E-钙粘蛋白（E-cadherin）和转录因子Twist的表达情况。结果 在Hela细胞中过表达MiR-223后,平板克隆实验显示实验组细胞克隆数明显少于对照组,细胞生长受到抑制;划痕实验显示过表达MiR-2224 h和48 h后,实验组迁移距离远远小于对照组,细胞迁移能力受到抑制;Transwell实验结果表明实验组细胞穿膜数量远小于对照组,细胞侵袭能力同样受到抑制。Western blot结果提示过表达MiR-223后实验组中波形蛋白、N-钙粘蛋白、Twist表达较对照组降低,E-钙粘蛋白的表达则较对照组升高。结论 过表达MiR-223通过抑制上皮细胞向间质细胞转化来抑制Hela细胞侵袭迁移能力。     

沉默SLP-2 可抑制人宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力

目的研究沉默SLP-2对人宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用siRNA转染人宫颈腺癌Hela细胞 及宫颈鳞癌Siha细胞作为沉默组,同时设立空白对照组及阴性对照组,转染48 h后,用Western blot检测SLP-2蛋白的表达量, 用划痕实验、Transwell 实验检测沉默SLP-2 对Hela 和Siha 细胞迁移能力的影响,用基质胶Transwell 实验检测沉默SLP-2 对 Hela 和Siha 细胞侵袭能力的影响,用Western blot 检测沉默SLP-2 后Hela 和Siha 细胞上皮间质转化标志分子E-cadherin、β- catenin、vimentin及上皮间质转化上游转录因子Twist蛋白表达量的变化。结果与对照组相比,Western blot结果显示沉默组 SLP-2蛋白的表达量明显下降;划痕实验显示沉默组的划痕面积愈合率明显下降（P<0.01）;Transwell实验及基质胶Transwell实 验均显示沉默组穿过小室膜至下室的细胞数明显减少（P<0.01）;Western blot结果显示沉默组上皮细胞标志分子E-cadherin及 β-catenin表达升高,而间质细胞标志分子vimentin表达下降,表明Hela细胞和Siha细胞的上皮间质转化受到抑制;Western blot 结果显示沉默组Twist蛋白的表达量也明显下调。结论沉默SLP-2可抑制人宫颈癌细胞上皮间质转化（EMT）的发生,使宫颈 癌细胞的迁移及侵袭能力下降,其作用机制可能与下调Twist蛋白的表达有关。     

过表达核糖核酸酶抑制因子对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化的影响

目的：研究过表达核糖核酸抑制因子（RI）对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化（EM T ）的影响。方法将 RI 过表达质粒（pIRES2-EGFP-RI）和阴性对照质粒（pIRES2-EGFP）稳定转染膀胱癌 T24细胞,稳定表达细胞株分别命名为：T24-RI 组、T24 vector 组、T24组。将各组 T24细胞分别接种至 BALB／C 裸鼠左腋皮下,观察移植瘤的生长、微血管密度及肺组织转移灶的变化;进一步分析 RI 、MMP-2、MMP-9、EM T 相关蛋白（E-cadherin 、N-cadherin 、Vimentin 、Snail 、Slug 、Twist 蛋白）在肿瘤组织中的表达水平。结果 T24-RI 组较 T24组与 T24 vector 组,瘤体质量显著降低（P ＜0．01）,抑瘤率分别为26．67％和38．85％;与对照组比较,T24-RI 组瘤组织微血管密度明显减少,肺组织未见明显转移灶,同时 CD31在瘤组织中表达减少;免疫组织化学染色显示：T24-RI 组瘤组织中 RI 、E-cadherin 蛋白的表达明显升高,而 MMP-2、MMP-9、N-cadherin 、Vimentin 、Snail 、Slug 、Twist 蛋白表达明显降低。结论过表达 RI 可能通过调节侵袭转移 EM T 关键蛋白的表达,显著抑制了膀胱癌移植瘤生长、侵袭和转移的潜能。     

CCN5在子宫内膜异位症患者组织的表达及其作用机制

目的 分析CCN5在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中的表达情况,探究其对子宫内膜基质细胞（HESCs）增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 收集并比较卵巢子宫内膜异位症患者组织与正常对照组在位子宫内膜组织中CCN5的表达水平;利用重组腺病毒Ad-CCN5构建过表达CCN5的人子宫内膜基质细胞;采用si-RNA构建敲低CCN5的人子宫内膜基质细胞。利用CCK-8实验检测不同表达水平CCN5对HESCs细胞增殖能力的影响;划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测不同表达水平CCN5对HESCs细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot检测不同处理组 HESCs中上皮-间充质转化（EMT）标记物 E-cadherin、N-cadherin,snail-1和vimentin的表达水平。结果 卵巢子宫内膜异位组织中CCN5的表达水平较正常对照组在位子宫内膜显著降低（P<0.01）;过表达CCN5可以抑制HESCs的增殖、迁徙及侵袭能力;EMT标记物E-cadherin表达升高,N-cadherin、Snail-1 和Vimentin表达降低,EMT受到显著抑制（P<0.01）。而敲低CCN5的表达可以显著增强HESCs的增殖、迁移及侵袭（P<0.01）,降低E-cadherin表达,升高N-cadherin、Snail-1和Vimentin表达,促进HESCs发生EMT转化。结论 CCN5在卵巢子宫内膜异位组织中的表达水平显著降低,可能通过调控HESCs的增殖、迁移与侵袭能力及影响EMT,在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中发挥重要作用。     

沉默YAP1可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力

目的探究沉默Yes 相关蛋白1（YAP1）对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR和 Western blot方法检测YAP1在鼻咽癌细胞系中的表达水平;在鼻咽癌细胞S26和S18中转染3条合成的小干扰RNA：si-NC, si- YAP1#1和si-YAP1#2,以转染阴性对照si-NC的细胞作为对照组,转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的细胞作为实验组,实时荧光定 量PCR和Western blot检测转染后的干扰效率;通过细胞计数、平板克隆形成等方法评估转染si-YAP1#1和si-YAP1#2后的实验 组和转染si-NC的对照组对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;用划痕和Transwell 方法分析各组细胞迁移与侵袭能力的变化; Western blot检测各组细胞中c-myc、上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）等与细 胞增殖和上皮间质转化相关蛋白的表达变化。结果YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达;与阴性对照组相比,转染si-YAP1#1和si- YAP1#2的实验组细胞中YAP1的mRNA及蛋白水平均显著降低（P<0.05）;生长计数、平板克隆、划痕及Transwell等实验结果 均显示转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的实验组细胞的生长和克隆能力、划痕愈合能力及侵袭能力较阴性对照组细胞明显下降 （P<0.01）;且相较阴性对照组,实验组细胞中c-myc、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平降低,E-cadherin的表达量增加。 结论YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达,在鼻咽癌细胞中利用siRNA靶向敲低YAP1的表达后可以抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移 及侵袭能力,提示YAP1可以作为一个潜在的鼻咽癌临床治疗干预靶点。     

Hedgehog信号通路调控胰腺癌细胞上皮间质转化的作用机制

目的 观察特异性阻断hedgehog(Hh)信号通路对胰腺癌Panc-1细胞上皮间质转化(EMT)过程的影响,探讨其分子机制.方法 设计并合成针对Smoothened (SMO)基因特异性的RNA干扰靶点,运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默SMO基因表达以阻断人胰腺癌Panc-1细胞Hh信号通路.应用Matrigel/Transwell法检测阻断Hh信号通路后胰腺癌细胞侵袭能力的变化,应用实时PCR及Western印迹方法检测阻断Hh通路后Panc-1细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Fibronectin等的表达变化;并检测EMT调控因子Snail、Slug等的表达变化.结果 稳定干扰SMO基因表达阻断Hh信号通路后,人胰腺癌Panc-1细胞侵袭能力明显降低,p=0.020;上皮表型标志物E-cadherin表达明显上调,而间质表型Vimentin、Fibronectin、N-cadherin等的表达水平显著下调,P值分别为0.020、0.001、0.031和0.022;与对照组相比,SMO干扰组细胞中转录因子Snail、Slug的表达水平均显著下调,P值分别为0.018和0.016.结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默SMO基因阻断人胰腺癌细胞中Hh通路活性,可显著抑制Panc-1细胞EMT过程,其机制与下调转录因子Snail及Slug表达有关.     

Twist、E-cadherin、N-cadherin在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的 探讨上皮间质转化因子Twist及相关黏附分子E-cadherin、N-cadherin在人宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)和正常宫颈上皮组织中的表达及临床病理意义.方法 利用免疫组织化学方法检测61例宫颈鳞癌标本、22例CIN Ⅰ级标本、44例CINⅡ-Ⅲ级标本及22例正常宫颈标本中Twist、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达及其与宫颈鳞癌临床生物学行为的关系.结果 正常宫颈组织Twist蛋白阳性表达率(0)与CIN Ⅰ级组织(40.90％)、CINⅡ～Ⅲ级组织(68.18％)、宫颈鳞癌组织(70.49％)比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);正常宫颈组织中E-cadherin蛋白的阳性表达率(90.91％)明显高于CINⅡ～Ⅲ级组织(54.55％)和宫颈鳞癌组织(14.75％)(均P ＜0.05);宫颈鳞癌组织N-cadherin蛋白的阳性表达率(90.16％)明显高于正常富颈组织(27.27％)、CIN Ⅰ级组织(50.00％)、CINⅡ～Ⅲ级组织(68.18％)(均P＜0.05).在61例宫颈鳞癌组织中,Twist蛋白与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.339,P＜0.01),而Twist蛋白与N-cadherin蛋白表达呈正相关(r=0.390,P＜0.01).在61例宫颈鳞癌组织中,不同国际妇产科联盟(FIGO)分期的组织间Twist、E-cadherin、N-cadherin蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);有无淋巴血管间隙浸润的组织间比较,差异也均无统计学意义(P＞0.05);Twist蛋白在高分化或中分化宫颈鳞癌组织中的阳性表达率(60.47％)明显低于低分化或未分化组织(94.44％) (P ＜0.05);Twist蛋白在无淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中的阳性表达率(62.22％)明显低于有淋巴结转移的组织(93.75％)(P＜0.05).结论 Twist在宫颈鳞癌中高表达,且与肿瘤分化及淋巴结转移相关;Twist、E-cadherin和N-cadherin的异常表达可能参与了宫颈鳞癌的浸润及转移.     

LKB1调控Peutz-Jeghers综合征错构瘤及肠上皮细胞中的上皮间质转化

目的 探讨LKB1在Peutz-Jeghers综合征(PJS)错构瘤及肠上皮细胞中对上皮间质转化(EMT)调控作用.方法 采用免疫组化法检测20例PJS错构瘤标本及10例正常肠道组织中LKB1、ecadherin、vimentin蛋白的表达.Masson三色染色法分析胶原纤维沉积.选取NCM460人肠上皮细胞株,慢病毒转染后建立LKB1敲低及空载体稳定表达株.以CCK8实验和transwell迁移实验评价LKB1敲低对细胞增殖、迁移的影响.运用WB、qPCR、免疫荧光检测LKB1敲低后对细胞中EMT相关蛋白ecadherin、vimentin、ncadherin、snail、slug表达的影响.结果 与正常肠组织相比,PJS错构瘤中LKB1和ecadherin蛋白表达下降,而vimentin蛋白表达增加.Masson染色提示错构瘤中胶原纤维沉积增多,沉积面积扩大.与空载体组相比,LKB1敲低的NCM460细胞增殖、迁移能力明显增强(P<0.01),细胞中ecadherin表达降低,ncadherin、vimentin、snail、slug表达增高.结论LKB1可能通过调控EMT从而影响PJS错构瘤的形态改变及纤维化进程,提示EMT可能成为PJS治疗的新靶点.