HMGB1对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的影响

目的：观察HMGB1对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响并初步探讨其可能机制。方法：采用不同剂量(0,10,50,100 ng/mL)重组HMGB1(rHMGB1)刺激HepG2细胞24 h,用MTT法检测HepG2细胞增殖,Western印迹和RT PCR法检测cyclin D1,PCNA的表达。结果：不同剂量(10,50,100 ng/mL)rHMGB1组HepG2细胞增殖能力均明显高于对照组（P＜0.05）。HMGB1抗体（20 μg/mL）能中和HMGB1(10ng/mL)对HepG2细胞的促增殖作用（P＜0.05）。Western印迹和RT PCR显示,与对照组比较,HMGB1能明显促进HepG2细胞PCNA,cyclin Dl蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,HMGB1抗体能明显抑制HMGB1上调PCNA,cyclin Dl蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）。结论：HMGB1可能通过上调cyclin Dl和PCNA表达,促进HepG2细胞增殖。HMGB1抗体对肝细胞癌可能有治疗作用。     

二甲双胍对人鼻咽癌C666-1细胞的增殖与凋亡作用

目的：探讨二甲双胍对人鼻咽癌C666-1细胞增殖和调亡的作用,并初步研究其作用机制.方法：体外培养人鼻咽癌C666-1细胞,以剂量5,10,20 mM的二甲双胍干预细胞24 h或48 h.采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Real-time PCR检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达.结果：二甲双胍抑制C666-1细胞增殖,随剂量增加和干预时间延长,细胞增殖的抑制作用增强（P＜0.05）.二甲双胍诱导C666-1细胞早期凋亡,有剂量效应关系,20 mM的二甲双胍干预细胞24 h,细胞早期凋亡率（12.40±1.01）％,高于对照组的（7.20±0.53）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.二甲双胍诱导C666-1细胞Caspase-3表达上调,降低Bcl-2/Bax比值.结论：二甲双胍抑制人鼻咽癌C666-1细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达有关.     

放射后鼻咽癌细胞株C666-1存活亚克隆高表达miR-181a

目的：：初步分析miR-181a与鼻咽癌细胞系C666-1放射敏感的相关性。方法：首先使用大剂量8 Gy的X射线照射C666-1,挑选三个大的存活亚克隆并命名为 C666-1-R1,C666-1-R2和 C666-1-R3,然后应用MTT等技术分析亚克隆及对照母本C666-1细胞系放射敏感性的差异,最后采用实时荧光定量PCR 法,分析三个存活亚克隆及对照C666-1的miR-181 a表达水平。结果：通过MTT比色法检测细胞增殖：6 Gy照射后,三个亚克隆C666-1-R1,C666-1-R2和C666-1-R3的细胞存活率均高于对照细胞C666-1,尤其C666-1-R2在48、72和96 h的存活率增高均有显著性差异(P<0.05),提示C666-1-R2具有放射抗拒性。另一方面,各亚克隆及对照细胞的 miR-181a 的2-△△Ct值如下：C666-1-R1=0.693,C666-1-R2=0.486,C666-1-R3=0.762,C666-1=1。提示放射后存活的三个亚克隆均高表达 miR-181a,尤其放射抗拒亚克隆C666-1-R2的 miR-181a表达更高。结论：miR-181a与鼻咽癌存活亚克隆的放射抗拒性密切相关。miR-181a可能是评估鼻咽癌放射敏感性的一个新分子,miR-181a 与鼻咽癌放射抗拒的相关性值得深入研究。     

外源性透明质酸酶对人乳癌细胞株体外增殖的影响

目的:探讨外源性透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)对人乳癌细胞株增殖的影响.方法:应用MTT法和流式细胞仪观察外源性Hyase对人乳癌细胞株增殖率及细胞周期分布的影响.结果:ZR-75-30细胞株实验组A值(0.674±0.221)明显高于对照组(0.563±0.046),P＜0.05;实验组S期细胞百分率(%)为18.36±0.65,对照组为2.19±0.10;实验组G0/G1期细胞百分率(%)为44.49±4.33,对照组为62.14±26.97,两组比较均有显著性差异(P＜0.05).MDA-MB-435细胞株实验组A值(0.694±0.054)明显高于对照组(0.578±0.072),P＜0.05.MDA-MB-231细胞株实验组A值(0.736±0.059)明显高于对照组(0.637±0.046),P＜0.05.结论:外源性Hyase可能具有促进人乳癌细胞株增殖的作用.     

红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela体外增殖的影响

目的:探讨红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外增殖的影响。方法:采用MTT法测定了不同浓度的红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化。结果:红花注射液浓度越高对Hela细胞抑制作用越好,作用时间越长抑制效果越强,量效关系和时效关系良好;形态学观察到细胞凋亡。结论:红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖有较强的抑制作用。     

蜂胶对人子宫内膜腺癌细胞株体外增殖的影响

目的检测蜂胶对人子宫内膜腺癌细胞株（jEc）细胞体外增殖的影响。方法将细胞接种于96孔板,用不同浓度的商品蜂胶液分别作用24,48,72,96小时后,用MTr法检测细胞增殖的情况。结果蜂胶在浓度为100μl／ml和10μl／nd时对JEC细胞有较强的抑制作用,在浓度为1μl／ml时则随时间的增加其抑制作用增强（其抑制作用具有时间／浓度依赖性）。结论蜂胶在体外能有效地抑制JEC细胞的增殖。     

苦参碱对人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖及凋亡的影响

目的:研究苦参碱(matrine,MAT)对人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖及诱导凋亡的影响.方法:MTT法检测苦参碱对细胞增殖的抑制的量效和时效关系;二脒基苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果:MTT法显示苦参碱有明显的抑制增殖作用,且呈时间依赖性和剂量依赖性;DAPI染色可见给药组出现明显核固缩且呈剂量依赖性;流式细胞仪检测1.0 mg/ml、0.5 mg/ml、0.25 mg/ml浓度的苦参碱作用24 h后PA-1细胞的凋亡率依次下降;有明显的G1期阻滞作用,且具有剂量依赖性.结论:苦参碱能通过诱导凋亡、产生G1期阻滞显著抑制PA-1细胞的增殖,且凋亡率具有剂量依赖性.     

鸦胆子素D 对人胰腺癌细胞株 Panc-1体外增殖的抑制作用

目的 探讨鸦胆子素D对人胰腺癌细胞株Panc-1 体外增殖的影响。方法 人胰腺癌细胞株Panc-1经不同浓度 （0、5、10、20、40、60滋mol/L）鸦胆子素D分别作用24、48、72 h 后,应用CCK-8 法检测鸦胆子素D 对Panc-1细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测Panc-1细胞凋亡情况;Western blot 检测Panc-1 细胞经0、5、10、20、30、60滋mol/L 的鸦胆子素D 处理24h 后以及20滋mol/L的鸦胆子素D处理24、48、72 h后,细胞中Bax 及Bcl-2 的表达。结果鸦胆子素D对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性,60滋mol/L时对Panc-1作用24、48、72 h后细胞存活率分别为54.44%、33.00%、21.63%,凋亡率分别为47.29%、63.80%、72.16%;0、5、10、20、30、60滋mol/L 的鸦胆子素D 作用于Panc-1 细胞72h 后的细胞存活率是100%、71.60%、60.37%、46.78%、39.98%、21.63%,凋亡率分别为0、26.63%、45.62%、56.18%、62.21%、72.16%;随着鸦胆子素D 作用时间的延长或浓度的增加Bax 蛋白的表达升高,Bcl-2蛋白的表达降低。结论鸦胆子素D 可显著抑制人胰腺癌Panc-1 细胞生长,并促进其凋亡,在一定的浓度和时间范围内,其作用呈明显浓度和时间依赖性,其作用机制可能是通过促进Bax 的表达,降低Bcl-2 的表达 实现的。     

脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖与凋亡作用的研究

目的:研究脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖抑制和凋亡作用的影响.方法:本研究以人鼻咽癌HNE-I细胞株为研究对象,以游离阿霉素为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定脂质体阿霉素对HNE-1的细胞毒作用;分别采用倒置显微镜和TUNEL法检测脂质体阿霉素作用于HNE-1细胞后细胞凋亡的形态学变化和细胞凋亡率.结果:脂质体阿霉素对HNE-1细胞的IC50是游离阿霉素的1/3倍;与游离阿霉素组相比较,倒置显微镜观察脂质体阿霉素组,发现该实验组细胞出现细胞凋亡形态学变化;脂质体阿霉素和游离阿霉素分别作用于HNE-1细胞的凋亡指数分别为11.27%±0.33%、43.57%±3.14%.结论:本实验研究显示,与游离阿霉素相比较,脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株具有较好的体外增殖抑制作用,能够诱导HNE-1细胞凋亡.     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖影响

目的 观察沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖的影响.方法 分别应用浓度为3.125、6.250、 12.500、 25.000、 50.000、 100.000及200.000 mg/L的沙利度胺溶液作用于SMMC-7721细胞,同时以等体积的RPMI 1640培养液为空白对照组,MTT法测定各组细胞增殖抑制率.结果 沙利度胺浓度从3.125 mg/L依次增至200.000 mg/L,其对SMMC-7721细胞增殖抑制率从11.70%依次增加至34.21%.25.000 mg/L以上浓度沙利度胺组的吸光度值与空白对照组比较差异有显著性(F=3.093,q=4.02～5.37,P<0.05、0.01).结论 沙利度胺能抑制SMMC-7721细胞的生长,且随着药物浓度的增加,细胞抑制作用逐渐增强.     

过表达DEPDC1对鼻咽癌细胞CNE-1增殖影响的研究

目的：DEPDC1（DEP domain containing 1）是近年来发现的一个肿瘤相关基因,前期研究结果显示其对鼻咽癌发生发展具有重要作用,本研究旨在进一步探讨过表达DEPDC1对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：在鼻咽癌细胞系CNE-1中,分别转染过表达DEPDC1-V1及DEPDC1-V2两种剪接体质粒,瞬时表达48 h后综合利用CCK-8、流式细胞技术及pHH3标记法检测细胞增殖情况。结果：Western blot检测显示在CNE-1细胞瞬时转染DEPDC1-V1和DEPDC1-V2质粒可过表达DEPDC1。CCK-8实验结果表明,过表达DEPDC1-V1及DEPDC1-V2均显著促进CNE-1细胞增殖。流式细胞检测结果表明,与对照组相比过表达DEPDC1-V1或DEPDC1-V2后均导致G2/M期细胞增多。pHH3检测结果显示,过表达DEPDC1-V1或DEPDC1-V2后有丝分裂活跃,细胞周期进程加快。进一步定量RT-PCR检测发现,过表达DEPDC1-V1或DEPDC1-V2导致细胞周期进程关键调节因子FoxM1及其下游靶基因CCNB2、PLK1和MYBL2表达量上调。结论：本研究通过在鼻咽癌CNE-1细胞株中过表达两个剪接体DEPDC1-V1及DEPDC1-V2,证明DEPDC1在鼻咽癌细胞中高表达对促进细胞的增殖具有重要作用。     

血卟啉衍生物光动力对两株人鼻咽癌细胞杀伤实验的对比研究

目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1的生物作用.方法 向体外培养的CNE2和C666-1分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/m)孵育4 h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐比色法测定细胞存活率.结果 HpD-PDT能有效地杀伤体外培养的人鼻咽癌CNE2和C666-1细胞,其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P＜0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml或2.0μg/ml时,其杀伤CNE2、C666-1细胞的作用最明显;HpD-PDT对CNE2和C666-1的半数杀伤度分别为0.7μg/ml、1.2μg/ml,两者存在显著性差异(P＜0.05).相同HpD浓度、激光剂量条件下,C666-1细胞存活率显著高于CNE2(P＜0.05).结论 HpD-PDT对CNE2和C666-1细胞均有杀伤作用,但C666-1细胞对HpD-PDT的敏感性低于CNE2.     

白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用

探讨白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用及机制。采用CCK-8法检测细胞存活率,Hochest 33258染色检测细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果表明白杨素对CNE-2细胞的生长具有较强的抑制作用,并具有明显的量-效关系;白杨素可诱导CNE-2细胞凋亡,使G0/G1期细胞明显增多,S期明显减少,使细胞周期被阻滞于G0/G1期;白杨素可升高CNE-2细胞caspase-3的活性。白杨素对CNE-2细胞生长有明显的抑制作用,其机制可能与白杨素诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

鼻咽癌细胞株CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度测定

目的 测定CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度参数.半修复时间(repair half-time,T1/2).方法 设0s、15S、30s、1h、2h、4h及6h共7个间隔时间,将8Gy照射剂量分为平分为两个4Gy间断照射4株细胞.采用集落形成法得到4株细胞在不同间隔时间两个4Gy照射后的存活分数.拟合细胞存活分数随间隔时间延长的变化曲线,并测算出T1/2.结果 CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的T1/2分别为18、22、29和27s.结论 鼻咽癌细胞的亚致死性损伤修复速度较快.提示调强放疗中被延长的分次照射时间(15～45s)可能导致鼻咽癌细胞的辐射死灭效应降低.     

反义mdr1对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨用反义技术抑制多药耐药基因1(Multidrug resistance gene 1,mdr1基因)对鼻咽癌细胞CNE放射敏感性的影响.方法:设立空白组、脂质体组(仅加入等量的脂质体)和mdr1正义寡核苷酸组作对照,用RT-PCR检测鼻咽癌细胞转染反义mdr1前后mdr1表达水平的变化.用集落形成试验检测各实验组照射后人鼻咽癌CNE细胞株的集落形成率,免疫组织化学法测定甲基鸟嘌呤甲基转移酶(Methylguanine-methyhransferase,MGMT)的表达.结果:mdr1反义寡核苷酸能有效抑制mdr1基因的表达.mdr1反义寡核苷酸 60Coγ射线照射组,其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,MGMT蛋白的表达也显著下调.与各对照组比较有显著差异(P<0.05).结论:mdr1反义寡核苷酸通过抑制mdr1基因降低了人鼻咽癌CNE细胞放射抗性.其辐射增敏作用可能与mdr1反义寡核苷酸下调照射后鼻咽癌细胞MGMT蛋白表达有关.     

抗人IgM抗体对鼻咽癌HNE-1细胞生物学特性的影响

目的 研究抗人免疫球蛋白M(IgM)抗体对鼻咽癌HNE-1细胞增殖、凋亡、细胞周期和成瘤的影响.方法 经抗人IgM抗体处理后,采用细胞增殖抑制实验观察HNE-1细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡;构建裸鼠动物模型,腹腔注射抗人IgM抗体,观察移植瘤的生长,免疫组织化学SP法检测移植瘤中IgM和糖蛋白96(gp96)的蛋白表达.结果 抗人IgM抗体可呈浓度和时间依赖性抑制HNE-1细胞的增殖(P＜0.05);流式细胞术检测表明抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞G1期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比明显增加,细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);TUNEL检测提示抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞凋亡(P＜0.01);移植瘤实验显示抗人IgM抗体可明显抑制移植瘤的体积和质量(P＜0.05);移植瘤免疫组织化学显示裸鼠腹腔注射抗人IgM抗体后,移植瘤内IgM和gp96蛋白的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 抗人IgM抗体可有效抑制HNE-1细胞的增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期,并且能抑制裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制IgM和gp96蛋白表达有关.