DNA甲基转移酶3b对乳腺癌细胞微小RNA表达的影响

目的 通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响.方法 通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲基化水平,免疫荧光染色检测其抑制...     

DNA甲基转移酶3b基因在肝外胆管癌组织中的表达

目的：研究DNA甲基转移酶3b( DNMT3b)在人肝外胆管癌组织中的表达情况,并分析DNMT3b的表达与胆管癌临床病理因素之间的关系,探讨其在胆管癌发生发展过程中的作用。方法：用免疫组织化学法检测DNMT3b在24例人肝外胆管癌组织和20例慢性胆管炎组织中的阳性细胞表达率,将二者进行对比并分析其与胆管癌临床病理之间的...     

DNA甲基转移酶3b对肝癌细胞系中细胞周期素D1基因的表达和启动子甲基化的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在人肝癌细胞系(SMMC7721)中对细胞周期素D1(cylin D1)表达及其启动子甲基化水平的影响,并进一步探讨DNMT3b的作用.方法 用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制DNMT3b在SMMC7721细胞系中的表达(实验组),另设转染对照siRNA的对照组,及未加任何处理因素的正常组.用蛋白质印迹检测转染前后DNMT3b及cylin D1蛋白的表达.用噻唑盐(MTT)法检测其生长增殖的变化,并应用甲基化特异性PCR(MSP)技术分别检测实验、对照两组细胞中cylin D1基因启动子区的甲基化状况.结果 DNMT3b siRNA 转染组SMMC7721的生存率(53.7%)与对照组、正常组相比明显降低(P=0.01).蛋白质印迹结果 显示DNMT3b表达水平明显低于对照组和正常组,cylin D1蛋白的表达也低于对照组和正常组.两组中cylin D1启动子区甲基化状态无差异,均未发生甲基化.结论 DNMT3b可以调节cyclinD1的表达,而不改变基因的甲基化状态,可能发挥了转录调控因子的作用.     

DNA甲基转移酶1基因沉默对HT-29细胞凋亡的影响

目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响.方法:HT-29细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组及DNMT1 siRNA组,后2细胞转染对照siRNA和DNMT1 siRNA,24 h后,通过RT-PCR和Western blot观察3组细胞DNMT1、Caspase-3/9、bcl-2及Bax mRNA和蛋白表达的变化,通过流式细胞术分析HT-29细胞凋亡,并测定Caspase-3/9的活性.结果:DNMT1 siRNA组中DNMT1 mRNA和蛋白的相对表达量为(0.273±0.016)和(1.127±0.019),低于未处理组[分别为(1.729±0.023)和(2.741±0.031)]和对照siRNA组[分别为(1.751±0.018)和(2.673±0.027)](F分别为5822.683和3656.560,P均<0.001).DNMT1 siRNA组细胞凋亡率为(22.65%±1.67%),高于未处理组(7.92%±1.29%)和对照siRNA组(8.13%±1.21%)(F=108.460,P<0.001).DNMT1 siRNA组细胞的Caspase-3/9活性[分别为(2671.83±57.63)和(2187.71±68.35)]高于未处理组[(196.47±16.73)和(511.35±34.90)]和对照siRNA组[(215.29±14.38)和(534.78±41.70)](F分别为4790.975和1089.891,P均<0.001).与未处理组和对照组相比DNMT1 siRNA组Bcl-2 mR-NA和蛋白的表达降低,但Caspase-3/9和Bax mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05).结论:DNMT1的下调能诱导HT-29细胞凋亡,其可能的作用机制与caspase-3/9、bcl-2和bax表达的变化密切相关.     

DNA甲基转移酶3b催化区保守序列shRNA真核表达载体构建

目的构建针对基因DNA甲基转移酶3bmRNA催化区保守序列的shRNA真核表达载体,并对其克隆进行鉴定。方法以DNMT3bmRNA序列为靶基因设计3条shRNA和一条阴性对照HK,应用基因重组技术将其克隆到真核表达载体PGensil-1中,构建真核表达载体P-DNMT3b-shRNA1、P-DNMT3b-shRNA2、P-DNMT3b-shRNA3、P-HK。将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中,接种于LB平板后分别挑取5个单克隆菌落进行扩增,经筛选后对提取质粒进行测序鉴定。结果重组质粒经SalI酶切鉴定得到大小2个基因片段,大片段约为4．55kb,小片段约为440bp,与设计相同;四组重组质粒经测序鉴定显示插入完全正确。结论成功构建了P-DNMT3b-shRNA（1、2、3）及HK真核表达载体,为下一步实验奠定了基础。     

三氧化二砷对鼻咽癌细胞系表达DNA甲基转移酶的抑制作用

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对鼻咽癌细胞系DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）（DNMT1、DNMT3A及DNMT3B）表达水平的影响。方法 应用8μmol/L As2O3与鼻咽癌细胞系C666-1、CNE1、CNE2和鼻咽上皮永生细胞系NP69细胞分别共同孵育48h,基于细胞计数试剂盒8测定鼻咽癌细胞的增殖情况。应用定量反转录聚合酶链反应和蛋白质印迹检测药物处理前后鼻咽癌细胞及NP69细胞中DNMT mRNA及蛋白表达水平的变化。结果 NP69细胞相对鼻咽癌细胞表达DNMT1和DNMT3A水平最低。经As2O3作用后,鼻咽癌细胞活力下降,形态改变明显;各种细胞表达DNMT的水平变化不完全一致,其中C666-1细胞对3种DNMT的表达水平均显著降低;而CNE1和CNE2细胞中DNMT1及DNMT3B 表达下调,CNE1细胞中DNMT3A的表达显著上调。结论 As2O3可抑制鼻咽癌细胞中DNMT的表达,表明其在一定程度上对鼻咽癌细胞具有去甲基化作用,存在治疗鼻咽癌的潜在价值。     

DNA甲基转移酶3在常见消化道肿瘤中的表达研究

消化道肿瘤是引起高发病率和死亡率的恶性肿瘤之一,是由癌基因和肿瘤抑制基因经过复杂过程而异常累积所形成的。越来越多的证据表明,DNA甲基化是不引起DNA序列改变中能够引发肿瘤的关键步骤,而催化调控该过程的甲基转移酶却是开启关键的钥匙。其中DNA甲基转移酶3是消化道肿瘤发生、发展过程中的危险因素之一,尤其在消化道肿瘤的遗传易感性、淋巴结转移及预后中起重要作用。     

反义微小RNA-21对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨微小RNA-21（miRNA-21）反义寡核苷酸（ASOND）对人膀胱癌细胞株T24增殖和凋亡的影响,为膀胱癌的治疗提供理论依据。 方法：将脂质体介导的反义寡核苷酸（AS-miRNA-21）转染T24细胞,设转染无义序列组、对照组和AS-miRNA-21转染组,采用蛋白印迹(Western blotting)检测转染细胞miRNA-21表达水平,噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪（FCM）分别检测转染细胞的增殖和凋亡情况,转染无义序列组、对照组分别与AS-miRNA-21转染组比较。 结果：经过转染AS-miRNA-21的T24细胞miRNA-21表达水平下降,细胞增殖能力受抑。AS-miRNA-21组T24细胞增殖率为53.6%,转染无义序列组T24细胞增殖率为92.5%,对照组为100%;相对应的凋亡率分别为13.8%、1.9%和2.7%。上述3组间T24细胞的增殖率、凋亡率比较差异均有显著性（P<0.01）。 结论：反义miRNA-21对人膀胱癌细胞T24具有抑制增殖和促进凋亡的作用,抑制miRNA-21表达有望成为膀胱癌基因治疗的有效方法。     

肿瘤坏死相关凋亡诱导配体对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖、凋亡的作用

目的:研究重组并纯化的肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:将不同浓度的TRAIL蛋白与培养的前列腺癌细胞(PC-3细胞)和膀胱癌细胞(5637细胞)共孵育24 h后,采用细胞增殖实验及流式细胞术检测肿瘤细胞的增殖及凋亡。结果:PC-3细胞株中,与未处理组比较,TRAIL蛋白浓度在20、40、80、160 ng·ml-1时细胞增殖率均有显著性差异;而在5637细胞株中,与未处理组比较,TRAIL蛋白浓度在5、10、20、40 ng·ml-1时细胞增殖率均有显著性差异。流式细胞实验结果也证实,随TRAIL蛋白浓度的增高,两种肿瘤细胞凋亡率增加。结论:重组并纯化TRAIL蛋白可通过抑制前列腺癌及膀胱癌细胞的增殖,诱导其凋亡而产生抗肿瘤的作用。     

组蛋白赖氨酸甲基转移酶对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶(SETD1B)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响.[方法]对肺癌A549细胞进行SETD1B siRNA转染,实验分为正常组、siNS组和siSETD1B组,均用浓度为0.1μmol/L处理,转染48 h,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖能力,利用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.[结果]与siNS组和正常组比较,siSETD1B组细胞增殖能力显著降低,细胞周期受到阻滞,细胞凋亡率明显升高,相比较差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]沉默SETD1B可抑制肺癌细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡.     

褪黑素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 探讨褪黑素(MLT)、卡铂(CBP)单独及联合应用在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT和CBP的药物协同作用。 方法: 将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、MLT组(1和2 mmol·L^-1)、CBP组(12.5、25.0和50.0mg·L^-1)、联合用药组(不同浓度MLT及CBP联合用药)。应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率及凋亡情况,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组SKOV3细胞中Bcl-2和Bax基因表达水平。 结果: MTT法检测,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于MLT组,且高于 50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2 mmol·L^-1MLT联合50mg·L^-1CBP 组效果最佳,增殖抑制率为(70.7±4.2)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05)。流式细胞术检测,联合用药组SKOV3细胞凋亡率高于MLT组,且高于50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2mmol·L^-1MLT 联合50mg·L^-1CBP组SKOV3细胞凋亡率为(58.9±2.0)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。与同浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞中Bax基因表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2基因表达水平明显降低(P<0.05)。 结论: MLT可增强CBP在体外对卵巢癌SKOV-3细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,通过增强Bax基因表达及下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。     

尼美舒利对三阴性乳腺癌干细胞体外增殖和凋亡的影响

目的体外研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对三阴性乳腺癌(TNBC)干细胞体外增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中分别加入不同浓度的尼美舒利,作用24、48、72 h后,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,电镜观察细胞形态,Western blot法检测Cox/Bax/Bcl-2蛋白表达。结果尼美舒利能显著抑制TNBC干细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;并使G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,引起明显的细胞凋亡。电镜可见典型的细胞凋亡形态学特征:细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量依赖。Western blot分析显示,尼美舒利作用细胞后,随着浓度的增加细胞COX-2和Bcl-2表达水平降低,但Bax表达水平增高。结论尼美舒利体外能够显著抑制TNBC干细胞增殖,诱导其凋亡,COX-2、Bcl-2及Bax等凋亡相关基因可能参与了尼美舒利诱导的TNBC干细胞凋亡过程。     

三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制研究

目的 分析三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法 将膀胱癌T24细胞分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别使用空白培养基、50μg/mL三叶青黄酮、100μg/mL三叶青黄酮干预;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,使用MTT法检测T24细胞的凋亡抑制率;使用Western blot法检...     

IGHG 1 基因对膀胱癌细胞增殖凋亡及迁移的影响

目的 探讨沉默IGHG 1 基因对膀胱癌EJ 细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法 将靶向沉 默IGHG 1 基因的慢病毒载体（LV-IGHG1-RNAi）感染EJ 细胞,构建稳定沉默IGHG 1 基因的EJ 细胞 （shIGHG1-EJ 细胞）作为实验组;将阴性对照序列（NC）慢病毒载体感染EJ 细胞,构建稳定转染NC 序 列的NC-EJ 细胞作为阴性对照组;未转染膀胱癌EJ 细胞作为空白对照组。用实时荧光定量聚合酶链反应 （qRT-PCR）检测细胞IGHG1 mRNA 的相对表达量,Western blot 检测细胞IgG、Caspase-3 和Caspase-3 剪 切片段蛋白的表达,CCK-8 法检测细胞的增殖,流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡,细胞划痕实验检测细 胞的迁移。结果 shIGHG1-EJ 细胞转染率为（76.667±0.042）%,NC-EJ 细胞转染率为（75.333±0.055）%。 qRT-PCR、Western blot 检测结果显示,与空白对照组相比,shIGHG1-EJ 细胞IGHG1 mRNA 和IgG γ 蛋 白表达量降低（P <0.05）,shIGHG1-EJ 细胞IGHG 1 基因被沉默。CCK-8 法结果显示,与空白对照组相比, shIGHG1-EJ 细胞增殖降低（P <0.05）;FCM 和Western blot 检测结果显示,与空白对照组相比,shIGHG1-EJ 细胞凋亡率增加（P <0.05）,且在17 kD 处出现Caspase-3 剪切片段;细胞划痕实验结果显示,shIGHG1-EJ 细胞迁移能力仅为EJ 细胞的36%（P <0.05）;同时NC-EJ 细胞在增殖、凋亡及迁移方面与EJ 细胞比较,差 异无统计学意义（P >0.05）。结论 EJ 细胞经慢病毒载体沉默IGHG 1 基因后,细胞增殖和迁移水平降低,细 胞凋亡率增加。     

组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂联合抗癌药物对膀胱癌细胞功能影响的研究

目的:探究组蛋白甲基化酶EZH2特异性抑制剂UNC1999与针对DNA 的化疗药物丝裂霉素C对膀胱癌T24 细胞的抑制效应。方法:组蛋白甲基化酶EZH2特异性抑制剂UNC1999 和化疗药物丝裂霉素C单独使用或者联和使用处理T24细胞,Q-PCR法检测EZH2基因的表达水平,用Western blot法检测EZH2以及下游H3K27me3蛋白的表达水平,MTT法测定T24 细胞的增殖,划痕实验检测细胞的迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:UNC1999与丝裂霉素C单独使用以及联合用药都能引起EZH2表达水平的下调,同时引起T24 细胞增殖能力降低, 迁移能力下降,凋亡水平上调,两者联合使用效果更加明显。结论:UNC1999以及MMC均可引起膀胱癌细胞EZH2表达水平的下调,同时联合使用效果最大, 可明显降低细胞的增殖侵袭能力,上调凋亡水平,为膀胱癌的化疗治疗、用药方法以及后续的机制研究提供了参考。