模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗（IMRT）对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响。 方法 CNE-2分为急速照射（ART）组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min。另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同。照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平。 结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加。模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义（P均＞0.05）;Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义（P均<0.05）,且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组。 结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高。     

G0/G1期异时相Cyclin B1的表达对细胞凋亡的影响

目的 研究G0/G1期异时相细胞周期素B1(Cyclin B1)的大量表达对细胞凋亡的影响.方法 首先构建了四环素可诱导表达Cyclin B1的单克隆细胞株,其次,筛选出能最大程度阻滞细胞于G0/G1期的胸腺嘧啶核苷(Thymidine)浓度,最后,在阻滞的时间内加入四环素诱导Cyclin B1表达,并用免疫印迹和流式细胞仪检测证实后,用膜联蛋白/碘化丙啶(Annexin Ⅴ/PI)双染法和API法检测细胞凋亡.结果 终浓度为5 mmol/L的胸腺嘧啶核苷能阻滞单克隆细胞株在G0/G1期,并至少维持48 h;在细胞同步化期间加四环素诱导后,Cyclin B1表达增加,并且G0/G1期特异性细胞凋亡增加.结论 G0/G1期异时相Cyclin B1的表达能诱导细胞凋亡.     

60Coγ射线对CNE-2细胞周期素B1和增殖细胞核抗原表达的影响

目的研究60Coγ射线分割照射对CNE-2周期素B1(cyclin B1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达和细胞周期分布的影响.方法采用PI单染,用流式细胞术检测细胞周期;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法测定cyclin B1和PCNA mRNA的表达水平.结果 4.0、6.0、8.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞不同时间可发生G1、S和G2期细胞比例增多.4.0、6.0、8.0 Gy照射第1天PCNA表达水平较对照组下降(P＜0.05),第3、5天PCNA表达水平较对照组无明显变化(P＞0.05).照射后cyclin B1表达水平较对照组下降(P＜0.05),但各照射组间cyclin B1表达水平无差别(P＞0.05).结论 60Coγ射线分割照射CNE-2细胞可诱发G1、S、G2期阻滞和抑制PCNA和cyclin B1的表达,但其抑制效应无剂量依赖性.     

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨Cyclin D1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义.方法用免疫组化SP法分别检测Cyclin D1和Cyclin B1在58例鼻咽癌组织标本中的表达.结果Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);Cyclin D1和Cyclin B1 阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P＜0.05);鼻咽癌组织中Cyclin D1和Cyclin B1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关.结论Cyclin D1和Cyclin B1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义.     

利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白

目的 利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1 (Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白.方法 加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1.将未诱导和用四环素诱导48 h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(mass spectrometry,MASS)行蛋白鉴定.结果 用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8 isoform 1).结论 除Cyclin B1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用.     

靶向Cyclin D1基因RNA干扰对肝癌细胞增殖和Mdm2等基因表达影响的研究

目的 探讨Cyclin D1表达下调对Mdm2等基因表达及人肝癌细胞增殖的影响.方法 用脂质体将Cyclin D1-siRNA转染人肝癌细胞株Hep3B细胞.实验分为空白对照组、阴性对照siRNA组、Cyclin D1-siRNA组.采用RT-PCR和Western blot检测Cyclin D1、Mdm2、Mdm4、P53和P21表达,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞活力,TUNEL检测细胞凋亡.结果 与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,Cyclin D1-siRNA组P53和P21表达上调(P＜0.05),Cyclin D1、Mdm2和Mdm4表达下调(P＜0.01);3组细胞周期G1、S及G2期均无明显差异(P＞0.05);Cyclin D1-siRNA组较其他两组细胞活力明显减弱(P＜0.01),细胞凋亡明显增强(P＜0.01).结论 Cyclin D1表达下调能抑制Mdm2和Mdm4的表达,并能上调P53和P21的表达;Cyclin D1表达下调能抑制肝癌细胞的增殖并促进其凋亡.     

不同照射模式对人鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2放射敏感性的影响研究

目的:探索不同照射模式对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)放射敏感性的影响。方法:运用克隆形成实验(courtenay assay),检测不同照射模式下CNE-2细胞的存活分数(SF),拟合细胞存活曲线。并运用四氮唑蓝法(MTT)进一步验证克隆形成实验的结果。结果:分别给予CNE-2细胞0、1、2、4、6、8 Gy的照射后,CNE-2细胞的SF值随照射剂量增加逐渐下降,并且在相同的剂量点,模拟调强照射(IMRT)组的SF均高于常规照射组;根据线性二次方程拟合CNE-2细胞存活曲线,α常规>αIMRT,β常规>βIMRT,N常规相似文献   

大鼠脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性和相关基因表达

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性分布以及相关基因表达之间的内在关系。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,利用流式细胞分选和原位末端标记及RT-PCR技术,检测正常组和缺血后大鼠脑组织中的神经元凋亡的细胞周期特征,及其Cyclin D1和Cyclin B1基因的表达规律。结果:神经元凋亡可以发生在细胞周期的各个时相,细胞凋亡多发生在G0/G1期,而且神经元也可在S期甚至到达G2期发生凋亡。正常脑组织中神经元表达Cyclin D1,缺血后表达增加;Cyclin B1在正常脑组织的神经元中不表达,缺血后呈现弱表达。结论:脑缺血后神经元可以重新进入细胞周期,其细胞凋亡是多点启动的,可发生在细胞周期的各个时相。Cyclin D1和Cyclin B1的异常激活可能参与了缺血后神经元凋亡的细胞周期调控过程。     

人脑胶质瘤Cyclin D1蛋白表达的研究

目的 :观察不同级别脑胶质瘤细胞周期素 D1( Cyclin D1)蛋白表达情况。方法 :采用免疫组化技术结合高温高压抗原修复法观察肿瘤细胞 Cyclin D1阳性表达率。结果 :胶质瘤 Cyclin D1阳性率明显高于正常对照组 ,并有随肿瘤恶性程度增加而升高的趋势 ,但 、 级肿瘤间差异不显著( P>0 .0 5)。结论 :脑胶质瘤存在 Cyclin D1蛋白过表达现象 ,推测与维持肿瘤增殖活性有关。     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.     

舌鳞癌组织中Cyclin D1的表达与临床病理相关性

目的: 探讨细胞周期素D1(Cyclin D1)在舌癌中的表达及临床病理相关性. 方法: 采用免疫组化ABC法检测42例舌鳞状细胞癌、19例良性肿瘤石蜡包埋标本的Cyclin D1表达. 结果: Cyclin D1在舌癌细胞核中呈阳性表达,阳性表达率55%,与组织学分级及淋巴结转移呈明显正相关(r=0.388, P<0.05). 生存分析资料显示Cyclin D1( )、(-)两组5 a相对复发危险度(RRR) u=1.959(P>0.05),Kaplan-Meier生存曲线示两组5 a累积无复发生存期(RFS)无显著差异(P>0.05). 结论: Cyclin D1在舌癌中异常表达,其表达可能与肿瘤分化及发展相关,Cyclin D1的表达与预后无关.     

Cyclin G1在小鼠卵巢的表达及其与卵泡发育的关系

目的观察细胞周期素G1（Cyclin G1）在小鼠卵巢中各级卵泡的表达及其与卵泡发育的关系。方法性成熟前小鼠用孕马血清促性腺激素（PMSG）刺激卵泡生长,用绒毛膜促性腺激素（hCG）刺激卵泡排卵及向黄体转化。于给药后不同时间取出卵巢,用免疫组化方法检测不同发育阶段卵泡Cyclin G1蛋白的表达和分布;用细胞免疫荧光方法检测不同成熟阶段的卵细胞中Cyclin G1蛋白表达。结果免疫组化染色结果显示,颗粒细胞中Cyclin G1的表达水平随卵泡发育成熟而逐渐增强,且一直定位在胞核;Cyclin G1在各个时期卵泡的卵母细胞中均有表达。该表达的定位与卵泡生长发育的不同阶段有关。随着卵泡的发育,Cyclin G1在卵母细胞的表达由胞核转至胞浆。至排卵前卵泡颗粒细胞,Cyclin G1表达水平减弱,当颗粒细胞分化为黄体细胞后表达水平进一步减弱。闭锁卵泡中Cyclin G1的表达水平很弱。细胞免疫荧光染色结果显示,处于生发泡时期（GV）卵母细胞仅有较弱的Cyclin G1表达,当卵母细胞生发泡破裂（GVBD）后,该表达增强;与处于第二次减数分裂中期（MⅡ）的卵母细胞相比,受精卵的Cyclin G1表达明显增强。结论Cyclin G1在小鼠卵泡发育及卵母细胞成熟过程中的表达具有时空特异性,可能作为细胞周期的正调节因子参与了卵泡生长发育和卵母细胞成熟过程的调控。     

COX-2、Cyclin D1和p-ERK1/2在食管鳞状细胞癌组织中的表达

目的 检测环氧化酶-2(COX-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2在食管鳞状细胞癌(ESCC)、食管上皮内瘤变及正常黏膜组织中的表达,探讨其在ESCC发生、发展过程中的作用及其临床病理意义.方法 采用免疫组化法检测90例ESCC、21例食管上皮内瘤变及69例正...     

非小细胞肺癌细胞周期素D1(CyclinD1)与细胞周期素E(CyclinE)表达特点的研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）细胞周期素D1（CyclinD1）及细胞周期素E（CyclinE）的表达特点。方法采用免疫组织化学S-P法,对40例NSCLC患者切除的癌组织石蜡切片进CyclinD1与CyclinE表达检测。结果 40例NCSLC患者中有19例表达CyclinD1,21例表达了CyclinE;CyclinD1的表达与原发肿瘤大小、分化程度有关,CyclinE表达与淋巴结转移状态相关。结论非小细胞肺癌CyclinD1与CyclinE的表达高于正常肺组织,过表达与NSCLC的发生有关,CyclinD1过表达可能有助于早期诊断。CyclinE的过表达可能提示淋巴结转移。     

Effects of Cyclin D1 Antisense Oligodeoxyneucleotides on the Growth and Expression of G_1 Phase Regulators in Gastric Carcinoma Cells

CyclinDisinvolvedintheregulationofG1phrasecellcycle ,andithasthreesubtypes (D1,D2 ,D3) .CyclinD1islocatedin 11q13,withitscDNAbeing 4 .3kb .Itisidentifiedastheproto oncogengandisfoundtobeoverexpressedinbreast,esophageal,andhepaticcarcinoma .ItwasreportedthatthepositiverateforCyclinD1ingastriccarcino mawas 2 3.7% - 47% [1,2 ] .CyclinD1mRNAoverexpressionwasfoundin 2 2 %ofgastriccancertissues,andwascorrelatedwithinvasionoftu mors[3] .WetransfectedgastriccarcinomacellswithCyclinD1antisenseo…     

Cyclin D1、Cyclin E在胃癌发生发展中的表达及其相关性

目的研究胃癌组织和癌旁中Cyclin D1、Cyclin E的表达情况,探讨它们在胃癌发生发展中的作用及其相关性。方法应用免疫组化SP法检测62例胃癌标本及22例癌旁中Cyclin D1、Cyclin E的表达情况。结果①胃癌组织Cyclin D1蛋白及Cyclin E蛋白阳性表达率高于癌旁组织,其比较差异均有统计学意义(P<0.01)。②随着胃癌浸润深度的增加、分化程度的降低、淋巴结转移的出现Cyclin D1、Cyclin E阳性表达率升高(P<0.05)。③在胃癌组织中,CyclinD1、Cyclin E的表达呈正相关(r=0.615,P<0.01),均呈升高趋势。结论 Cyclin D1、Cyclin E均参与胃癌的发生和发展,二者可成为判断胃癌恶性程度有价值的指标,也可成为预后评估的指标。     

抑癌基因PTEN与Cyclin D1／CDK4在口腔鳞癌中的表达及其相关性分析

目的通过检测口腔鳞癌及癌前病变中抑癌基因VrEN与Cyclin D1／CDK4的表达,分析其相关性,初步探讨PTEN在口腔鳞癌中的意义。方法通过免疫组化sP法检测60例口腔鳞癌、15例单纯增生、25例异常增生中PTEN、Cyclin D1／CDK4的表达,以10例正常口腔黏膜为对照。结果在口腔鳞癌中PTEN阴性、弱阳性表达的占21．8％,显著低于正常组、单纯增生组及异常增生组（P〈0．01）;Cyclin D1及CDK4在OSCC中均以阳性表达及强阳性表达为主,分别占53．3％和100％,显著高于正常组、单纯增生组及异常增生组（P〈0．01）。PTEN与Cyclin D1、CDK4间呈显著的负相关关系,Cyclin D1与CDK4问呈显著的正相关关系。结论研究结果提示PTEN在口腔鳞癌的发生发展过程中起着一定的作用;在口腔鳞癌中PTEN可能是通过下调Cyclin D1／CDK4,从而抑制细胞的生长。     

宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中Cyclin D1的表达与HPV感染相关性

目的 探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)与HPV感染之间的相关性,了解Cyclin D1作为预测宫颈上皮内瘤变(CIN)顸后的指标之一.方法 选取深圳医院2003年1月-2008年6月病理确诊为CIN和宫颈鳞癌的患者176例(其中CIN Ⅰ 56例、CIN Ⅱ51例、CINⅢ39例、宫颈鳞癌30例),选取宫颈正...