利用重组分支杆菌噬菌体快速筛选耐利福平结核分支杆菌

目的：采用基因工程技术构建的可表达荧光素酶的结核分支杆菌噬菌体进行结核分支杆菌利福平药敏试验研究,建立一种特异、灵敏、快速的利福平药敏试验方法。方法采用生物发光方法分别检测重组分支杆菌噬菌体对不同细菌在不同浓度利福平培养其中的发光水平,并与罗氏培养基进行药敏药比较。结果在不同细菌中,噬菌体均特异地对分支杆菌有发光反应,分支杆菌的养基进行药敏试验比较。结果在不同细菌中,噬菌体均特异对对分支杆菌有发光     

两种不同方法测定分支杆菌药敏试验的比较

分枝杆菌药敏试验通常是在固体罗氏培养基中按要求加入各种药物 ,根据细菌在培养基上的生长情况来判断药敏试验的结果。采用 BACTEC MGIT 96 0测定仪检测分枝杆菌药敏试验是目前比较先进的方法 ,其主要是采用连续检测接种标本的培养管所显示的荧光强度来判断分枝杆菌生长的情况。本实验对 80份住院初、复治结核病患者的痰标本 ,进行分离培养出的分枝杆菌 ,做上述两种方法的药敏试验 ,观察两种方法对 4种常用结核药物的符合率 ,现将结果报告如下。材料与方法1.标本来源均为我院 2 0 0 1年 5月至今分枝杆菌培养阳性的菌种。2 .试剂　　 M…     

结核分支杆菌H37Rv株菌体抗原单克隆抗体制备,特性？…

目的 利用单克隆抗体技术分析分支杆菌多肽抗原的共性和个性,建立纯化单克隆抗体的最佳方法。方法 按常规方法制备单克隆抗体。分泌单克隆抗体阳性杂交细胞株的筛选采用ＥＬＩＳＡ法,确认采用免疫印迹法。２４种分支杆菌菌株均生长于改良罗氏培养基上,Ｈ３７Ｒｖ株分别生长于改良罗氏培养基和苏通液体培养基上。单克隆抗体的纯化采用硫酸铵沉淀法、辛酸沉淀法和离子交换法。结果 经筛选获得１４株单克隆抗体杂交细胞瘤。其中,     

气相色谱鉴定分支杆菌对比实验

采用毛细管柱色相色谱（ＧＣ）检测分支杆菌细胞脂肪酸（ＦＡ）的方法，通过制备２６种参考菌株ＧＣ图谱（原冻干菌株及其移种改良罗氏培养基生长３￣４周菌株）对临床分离的５４株非结核分支杆菌以ＧＣ法与传统生物学鉴定法进行对比，两者符合率达９４％；观察了结核分支杆菌和牛分支杆菌临床分离株ＧＣ图谱变化与耐药性的关系。认为ＧＣ法鉴定临床分离分支杆菌目前采取同时观察细菌生长速度、产色情况以及在对硝基苯甲酸（ＰＮＢ）     

一种新型干燥培养基用于分支杆菌分离培养的研究

本文报道的分支杆菌干燥培养基是一种固体合成琼脂培养基,具有操作简便、价格低廉、检测快速和易于标准化质量控制等特点。试验11株标准菌株均生长良好,用于临床3052例标本培养,阳性率与经典罗氏培养基相当,生长速度快干罗氏。前处理用2％NaOH消化,6周内报告结果。     

酸化离子水配制吡嗪酰胺药敏培养基

目的：探讨满足吡嗪酰胺活性需要的同时，研制使结核菌生长良好的PZA药敏培养基。方法：以改良罗氏培养基为基础，加大镁离子浓度，去掉马铃薯淀粉，用PH2．34，氧化还原电位为1174mv的酸化离子水配制PZA药敏培养基，按《结核病诊断细菌学检验规程》，测试了120株结核分杆菌对PZA的敏感性。结果：门诊分离的60株分支杆菌，PZA耐药率为13．3％，住院患者和深圳市慢性病医院分离15株完全耐药的分支杆菌，在此培养基上对PZA耐药。结论：此培养基配制简单，可与其他药敏试验同步进行，易于推广应用。     

利用发光自显影技术快速筛选结核杆菌的利福平耐药性

目的　利用发光自显影技术建立一种快速、简便的结核分支杆菌利福平耐药性筛选方法。方法 利用重组的分支杆菌噬菌体可在活菌内增殖的原理,来检测结核杆菌在含利福平液体培养基中的生长状况;采用发光自显影方法检测发光强度并确定活菌数,对43份结核杆菌样本进行快速检测,并与L-J培养基检测结果进行对比。结果 发光自显影方法与L-J培养法相比,阳性率和真阴性率分别为95.7%、90%,最佳检测的细菌浓度为10⁷～10⁸CFU/ml,最佳药敏试验的利福平浓度为1mg/ml,利福平与结核分支杆菌孵育48小时后即可进行发光自显影分析。结论 生物发光方法可用于快速筛选结核分支杆菌的利福平耐药性,是一种简单、快速、灵敏、实用的利福平药敏筛选方法。     

利用发光自显影技术快速筛选结核杆菌的利福平耐药性

目的 利用发光自显影技术建立一种快速、简便的结核分支杆菌利福平耐药性筛选方法。方法 利用重组的分支杆菌噬菌体可在活菌内增殖的原理，来检测结核杆菌在含利福平液体培养基中的生长状况；采用发光自显影方法检测发光强度并确定活菌数，对43份结核杆菌样本进行快速检测，并与L－J培养基检测结果进行对比。结果 发光自显影方法与L－J培养法相比，阳性率和真阴性率分别为95．7％、90％，最佳检测的细菌浓度为10^7-10^8CFU/ml，最佳药敏试验的利福平浓度为1mg/ml，利福平与结核分支杆菌孵育48小时后即可进行发光自显影分析。结论 生物发光方法可用于快速筛选结核分支杆菌的利福平耐药性，是一种简单、快速、灵敏、实用的利福平药敏筛选方法。     

用分支杆菌生长指征管从临床标本分离分支杆菌与用BACTEC 460结核菌系统和罗氏培养基的对比评价

背景:使用新型简便和快速的诊断方法对当今结核病控制是十分必要的。目的:分支杆菌生长指征管(MGIT~(TM))在分支杆菌的分离和检出时间上与BACTEC 460结核菌系统和罗氏培养基的评价与对比。设计:对276名病人各种不同部位的377份标本进行分支杆菌的检验。标本应用4％氢氧化钠乙酰半胱氨酸法进行前处理后,接种在MGIT~(TM)培养基、BACETC和和罗氏培养基进行对比研究。萋尼氏染色作为参考。结果:MGIT~(TM)法具有95.4％的敏感性,100％的特异性,100％的阳性预计值和89.3％的阴性预计值。MGIT~(TM)与罗氏培养基和BACTEC的临床符合率分别为0.87和0.96,MGIT~(TM)结核菌检出时间是11日(7-31日),鸟型分支杆菌和其他分支杆菌检出时间分别为3日和8日。结论:分支杆菌生长指征管从临床标本中检出分杆菌看来是快速、简便和高度精确的。     

变色液体培养基快速培养分支杆菌的临床应用

快速分离临床标本中分支杆菌一直是结核病学科领域中迫切需要解决的课题。结核分支杆菌分裂周期长,生长速度慢,在改良罗氏培养基上一般需要2～8周才能看到可分辨的菌落,难于满足临床需要,我们应用变色液体培养基对临床痰标本进行培养可快速检出生长的分支杆菌,现报告如下。     

Bactec960等三种分支杆菌分离培养方法的临床应用评价

目的:评价一种新型快速自动化检测分支杆菌系统.方法:应用分支杆菌标准菌株及62例临床标本同时接种Bactec960MGIT培养基、Bactec4607H12B培养基和酸罗氏培养基,观察其培养结果、阳性出现的时间以及污染情况.     

Tween80培养基对分支杆菌临床分离培养的实验研究

本文应用Ｔｗｅｅｎ８０培养基和改良罗氏培养基，对临床３９０份标本作分离培养结核分支杆菌比较。结果表明在结核菌生长速度，生长量，阳性率等方面，Ｔｗｅｅｎ８０培养基均优于改良罗氏培养基，对提高涂阴标本培阳率尤为显著（Ｐ＜０．０１），并有利于部分劣势生长的分支干菌发育。     

Tween80培养基对分支杆菌临床分离培养的实验研究

本文应用Ｔｗｅｅｎ８０培养基和改良罗氏培养基，对临床３９０份标本作分离培养结核分支杆菌比较。结果表明在结核菌生长速度、生长量、阳性率等方面，Ｔｗｅｅｎ８０培养基均优于改良罗氏培养基，对提高涂阴标本培阳率尤为显著（Ｐ＜Ｏ．０１），并有利于部分劣势生长的分支干菌发育。     

四种前处理对分支杆菌生长活力观察

本文报道对抗酸分支杆菌标准菌株17株,临床分离菌株10株,分别作酸、碱、中和及胰酶-新洁尔灭等四种前处理后,接种于改良罗氏或酸性罗氏培养基,经37℃、8周观察细菌生长活力受影响的程度。结果显示,对大部分致病性分支杆菌的生长活力无明显影响,而对大部分非致病性分支杆菌的生长活力有明显影响。     

结核分支杆菌H37Rv株菌体抗原单克隆抗体制备、特性分析及纯化

目的　利用单克隆抗体技术分析分支杆菌多肽抗原的共性和个性 ,建立纯化单克隆抗体的最佳方法。方法　按常规方法制备单克隆抗体。分泌单克隆抗体阳性杂交细胞株的筛选采用ELISA法 ,确认采用免疫印迹法。 2 4种分支杆菌菌株均生长于改良罗氏培养基上 ,H3 7Rv株分别生长于改良罗氏培养基和苏通液体培养基上。单克隆抗体的纯化采用硫酸铵沉淀法、辛酸沉淀法和离子交换法。结果　经筛选获得 14株单克隆抗体杂交细胞瘤。其中 ,C2 、7C12 单克隆抗体所抗的 76 0 0 0、16 0 0 0抗原成份为分泌抗原 ,76 0 0 0抗原存在于 2 4种分支杆菌菌体中 ,为共同抗原。 16 0 0 0抗原仅存在于H3 7Rv ,H3 7Ra,牛分支杆菌 ,BCG株中。单克隆抗体免疫印迹结果显示 ,分支杆菌H3 7Rv株在不同培养条件下 ,其 40 0 0 0 / 380 0 0多肽抗原表达不同。单克隆抗体纯化以硫酸铵沉淀法回收率最高 ,离子交换法获得的单抗纯度最高 ,辛酸沉淀法可以有效地去除白蛋白 ,并具有简单、省时等优点。单克隆抗体的相对亲和力均在 10 -4 ～ 10 -7之间。结论　C2 、7C12 单克隆抗体均抗结核分支杆菌H3 7Rv株的分泌抗原成份。 40 0 0 0 / 380 0 0多肽抗原为结核分支杆菌H3 7Rv株固体培养菌体特有。单抗纯化结果显示离子交换层析法适用于科研分析 ,而辛酸     

258例初始结核病人的耐药性分析

目的:了解我市结核病人的初始耐药情况.方法:对来我院就诊的门诊和住院的初治(未用药或用药史小于1月)结核病人,进行分支杆菌培养,阳性者做药敏试验,药敏试验采用绝对浓度间接法.     

结核分支杆菌植物激素培养基的研究

本文报道了一种促进结核分支杆菌快速生长的植物激素培养基并与改良罗氏培养基比较结果:试验菌H_(37)R_a在此培养基上,菌落初生长时间为3.3天(10~(-2)mg接种量)和9.3天(10~(-5)mg接种量),改良罗氏培养基分别为7.6天和13.6天。H_(37)R_a菌在上述两种培养基上的增代时间分别为13.1小时和16.1小时。经临床618例结核病病人痰培养比较,激素培养基出现阳性结果时间平均为10.6天,改良罗氏培养基平均为22.6天,两种培养基有极显著差异。     

二种结核分枝杆菌药物敏感试验方法的评估

结核分枝杆菌药物敏感试验通常采用L-J常规法中的绝对浓度法,即在固体改良罗氏培养基中加入各种抗结核药物,药物分低浓度和高浓度两种浓度,根据细菌在培养基上的生长情况判断药物敏感试验的结果。目前,许多单位采用BACTEC法,即在12B培养基中加入各种抗结核药物,根据结核分枝杆菌的生长指数 (GI值)判断药物敏感试验的结果,此法与比例法有所相同。本院实验室对300例住院初、复治病人的痰标本分离培养后的结核分枝杆菌,进行了上述二种方法的药物敏感试验,观察二种方法对抗结核药物耐药性的符合率及耐药性的检出率。     

应用反向斑点杂交法检测耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变

目的　探讨快速检测rpoB基因突变的敏感方法 ,以期建立适合我国国情的结核分支杆菌耐药株的快速检测手段。方法　根据结核分支杆菌野生株序列 ,自行设计覆盖rpoB基因核心突变区的系列寡核苷酸探针并将其固定在尼龙膜上 ,然后应用生物素标记的特异性引物扩增包含核心突变区的rpoB基因片段 ,与固定在膜上的寡核苷酸探针杂交 ,对突变位点进行快速检测 ,并与药敏试验及DNA测序结果进行比较。结果　应用反向斑点杂交法检测 36株耐药株和 2 2株敏感株rpoB基因的突变位点 ,并据此判断其对利福平的药敏特性 ,结果敏感性为 88.9% ,特异性为 86 .4 % ,药敏结果符合率为 87.9% ,与测序结果的符合率为 89.7%。结论　反向斑点杂交法可以快速、敏感地检测rpoB基因突变 ,进而早期判断结核分支杆菌对利福平的药敏特性。     

88例力克肺疾耐药情况分析

力克肺疾 (简称 DIP)是以特殊方法将异烟肼与对氨基水杨酸分子化合而成 ,为一种抗结核新药在临床上广泛应用。我院自 1998年 8月至今对 3 84例患者痰分枝杆菌培养菌株进行药敏试验 ,显示有 88例对力克肺疾耐药。现就力克肺疾及 INH和PAS耐药情况作一分析。1　临床资料1.1　方法及判断耐药标准 :3 84例患者痰培养为 :3 64例结核分枝杆菌、2 0例非结核枝杆菌生长 ,采用罗氏绝对浓度间接法进行药敏试验 ,药敏接种浓度为 10 0 mg/ml。判断耐药标准 :DIP是新药 ,国家尚无标准 ,暂以 1ug作为耐药标准 ,1ug以下为敏感 ,1ug以上为耐药。 INH和…