低切应力对动脉粥样硬化形成及血管平滑肌细胞α-肌动蛋白和c-Myc蛋白表达的影响

目的为探讨低切应力对颈总动脉粥样硬化形成及其血管平滑肌细胞增殖的影响，建立了低切应力颈总动脉粥样硬化模型；并观察了血管平滑肌细胞的α-肌动蛋白和c-Myc蛋白表达的变化。方法手术结扎家兔左颈外动脉，术后高脂饲料喂养。组织学和免疫组织化学方法观察粥样斑块的形成和α-肌动蛋白及c-Myc蛋白表达的变化。结果在低切应力颈总动脉粥样硬化模型中，颈总动脉较早出现明显粥样斑块，管壁增厚，管腔内径变小；颈总动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的α-actin含量减少、c-Myc表达增高。结论低切应力促进了动脉粥样硬化斑块的形成，促使粥样硬化动脉VSMC增殖能力增强。     

高压力对体外培养动脉中膜平滑肌细胞凋亡及其相关蛋白的影响

目的观察血管平滑肌细胞在单纯高压力作用下凋亡及其相关蛋白Bcl-2和Bax的变化，探讨力学因素在血管重建中的作用。方法应用血管体外应力培养系统，分别在压力100mmHg和160mmHg条件下培养猪颈总动脉1、4和7d，新鲜血管为对照。应用TUNEL法、透射电镜等观察血管平滑肌细胞的凋亡；用免疫组织化学方法检测血管平滑肌细胞内Bcl-2和Bax的表达。结果高压力作用下，血管平滑肌细胞凋亡第1d较多，而后逐渐减少；Bcl-2蛋白表达持续增强；Bax蛋白第1d较多，而后逐渐减少。结论高压力可以影响血管平滑肌细胞的凋亡，凋亡相关蛋白Bcl-2持续增加，Bax先增加后减少，揭示高压力可能通过调节Bcl-2和Bax来调控血管平滑肌细胞的凋亡。     

低切应力对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究低切应力对颈总动脉粥样硬化形成及其血管平滑肌细胞凋亡的影响. 方法应用低切应力颈总动脉粥样硬化模型,采用免疫组织化学方法观察大白兔血管平滑肌细胞的Bcl-2及Bax蛋白表达的变化.结果颈总动脉血管平滑肌细胞（VSMC）的Bcl-2表达减少、Bax表达增高.结论在低切应力作用下动脉粥样硬化的形成过程中,低切应力与高脂协同作用,可使促进凋亡的因素增强,抑制凋亡的因素减弱,从而调控VSMC的凋亡.     

高压力对血管平滑肌细胞的形态、α—肌动蛋白和增殖细胞核抗原表达的影响——一种新的颈动脉在体受力模型研究

为了研究机械应力在动脉重建中的作用和机制。本文建立了以压力改变为启动因子导致动脉重建的大鼠颈总动脉在体受力模型，并观察了高压力对血管平滑肌细胞（VSMCs）形态、α－肌动蛋白（α-actin）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。以高压力（160mmgHg）和正常压力（80mmHg）灌流大鼠颈总动脉6h、组织学和免疫组织化学方法观察VSMCs的形态、α-actin和PCNA表达的变化。结果表明，大鼠颈总动脉在体受力模型在压力，脉压差和频率方面有较好的可控制性及稳定性；高压力使VSMCs核常染色质增加，α-actin染色较正常压力组浅谈，表明α-actin含量减少；PCNA表达阳性。大鼠颈总动脉在体受力模型的成功建立，为研究机械应力对动脉重建的作用提供了一种新的手段，高压力可诱导VSMCs向合成型转换，细胞趋于增殖。     

侧支血管整合素αvβ3的表达及细胞外基质对其表达的调节

目的:研究侧支血管生成过程中整合素αvβ3的表达及细胞外基质对其表达的调节。方法:结扎大鼠股动脉,应用免疫荧光组织化学技术检测侧支血管整合素αvβ3的表达;并在体外实验中检测不同细胞外基质成分对整合素αVβ3表达的影响。结果:侧支血管整合素αvβ3表达明显增强,为正常血管的3.47倍;种植在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)上的血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMC)整合素αvβ3的表达最高,层粘连蛋白(laminin,LN)上次之,三维Matrigel基膜成分胶里最低,差异具有显著性(P<0.001)。结论:相对于正常血管,侧支血管生整合素αvβ3的表达显著上调;不同细胞外基质成分对血管平滑肌细胞中整合素αvβ3表达的影响不同。     

颈总动脉损伤大鼠成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达与辛伐他汀的抑制效应**

背景：辛伐他汀可通过抑制血管平滑肌细胞增殖发挥抗血管狭窄作用,但其作用机制尚不完全清楚。 目的：观察辛伐他汀对血管损伤后狭窄时成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白表达的影响。 方法：建立SD大鼠颈总动脉损伤模型,随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量辛伐他汀组,后2组分别于术前3 d灌胃辛伐他汀5,10 mg/(kg•d)直至术后14 d。 结果与结论：大鼠颈总动脉损伤后：①苏木精-伊红染色显示,血管中膜血管平滑肌增殖显著,排列紊乱,管腔严重狭窄;应用辛伐他汀后血管内膜相对光滑,中膜血管平滑肌细胞排列趋于规整,管腔狭窄程度有不同程度减轻。②Western blot检测显示,颈总动脉成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达明显升高(P < 0.05),低剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达无明显变化,应用高剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达明显下降(P < 0.05)。表明辛伐他汀可能通过抑制成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白的表达抑制血管平滑肌细胞增殖,减轻血管损伤后狭窄。 关键词：辛伐他汀;颈总动脉损伤;狭窄;成纤维细胞生长因子受体1;p21rasS doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.031     

eNOS基因体外转染对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖规律的影响

目的将内皮型一氧化氮合酶(endothilialnitircoxidesynthase,eNOS)基因,通过基因工程技术转染至体外培养的大鼠颈总动脉球囊损伤后的血管平滑肌细胞中,观察其对血管平滑肌细胞增殖规律的影响。方法三月龄雄性Wastar大鼠20只,分为正常对照组、空白对照组、pcDNA3.1(-)转染组和pcDNA3.1-eNOS转染组,每组各5只。除正常对照组外15只Wastar大鼠,施行经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)。术后一月,处死所有20只大鼠,取出左侧颈总动脉,以组织块贴壁法培养损伤后血管平滑肌细胞,采用脂质体载体Fugene6介导真核表达载体pcDNA3.1-eNOS和空载体pcDNA3.1(-)分别转染eNOS转染组和pcDNA3.l(-)转染组的平滑肌细胞,以RT-PCR法、原位杂交法和免疫荧光法检测eNOS基因的表达;以MTT法检测细胞增殖程度。结果在转染pcDNA3.l-eNOS基因的损伤后血管平滑肌细胞中可以检测出eNOSmRNA和蛋白的表达,且其细胞增殖程度显著低于未转染eNOS基因者(P<0.05)。结论eNOS基因体外转染可以明显抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞的增殖活性。     

高压力对血管平滑肌细胞的形态、α-肌动蛋白和增殖细胞核抗原表达的影响--一种新的颈总动脉在体受力模型研究

为了研究机械应力在动脉重建中的作用和机制 ,本文建立了以压力改变为启动因素导致动脉重建的大鼠颈总动脉在体受力模型 ,并观察了高压力对血管平滑肌细胞 ( VSMCs)形态、α-肌动蛋白 ( α- actin)和增殖细胞核抗原 ( PCNA)表达的影响。以高压力 ( 160 mm Hg)和正常压力 ( 80 m m Hg)灌流大鼠颈总动脉 6h,组织学和免疫组织化学方法观察 VSMCs的形态、α- actin和 PCNA表达的变化。结果表明 ,大鼠颈总动脉在体受力模型在压力、脉压差和频率方面有较好的可控制性及稳定性 ;高压力使 VSMCs核常染色质增加 ,α- actin染色较正常压力组浅淡 ,表明 α- actin含量减少 ;PCNA表达阳性。大鼠颈总动脉在体受力模型的成功建立 ,为研究机械应力对动脉重建的作用提供了一种新的手段。高压力可诱导 VSMCs向合成型转换 ,细胞趋于增殖     

切应力条件下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞整合素β1和F-actin的变化

目的 探讨与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞力学信号转导的机制，研究切应力对联合培养的内皮细胞表面整合素和F-actin的影响。方法 应用免疫荧光双重标记、激光共聚焦扫描显微镜和计算机图象分析等技术，观察了在2Pa层流切应力的作用下，与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞表面整合素β1的含量及细胞骨架F-actin的变化，时相点分别取lh、6h、12h和24h。同时，以静态条件下联合培养的内皮细胞为对照组。结果 静态条件下联合培养的内皮细胞表面整合素β1含量少，F-actin含量亦少；在2Pa层流切应力的作用下，随着时间延长，整合素β1表达逐渐增多，并且有沿F-actin分布的趋势，在12h达到峰值，后又下降；F-actin含量持续增加直至24h。结论 结果提示整合素β1作为重要的粘附分子，与细胞骨架F-actin的相互协作，在联合培养的内皮细胞的力学信号转导中起重要作用。     

大鼠后肢侧支动脉生成过程中整合素α5β1和纤维连接蛋白的表达

目的:探讨侧支动脉生成过程中平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMC)移动增殖的机制。方法:结扎大鼠股动脉,应用免疫荧光组织化学技术检测侧支血管中整合素α5β1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和层粘连蛋白(laminin,LN)的表达。并在体外实验中检测了不同的细胞外基质对SMC表达整合素α5β1的影响。结果:侧支血管整合素α5β1和FN的表达分别是对照侧的1.9倍和2倍;而LN的表达是对照侧的1／3。种植在FN上的SMC高表达整合素α5β1;种植在LN上的表达较低;而种植在三维Matrigel基膜成分胶里的SMC几乎不表达整合素α5β1。结论:在侧支血管发育过程中,整合素α5β1、FN和LN的表达变化,有助于侧支血管生长发育过程中SMC的迁移和增殖。     

动脉粥样硬化大鼠血管损伤后局部组织学结构的变化

目的建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型，了解血管成形术后再狭窄的发生规律及病理机制。方法在大鼠动脉粥样硬化病变的基础上，使用2F球囊导管损伤大鼠左侧颈总动脉，观察术后不同时期内膜、中膜增生的动态改变；对血管壁增殖的细胞进行鉴定；观察血管壁平滑肌细胞表型标志物SMα—actin表达的变化。结果损伤后7天薪生内膜开始形成，至3月时内膜增厚达最大，管腔明显狭窄，损伤动脉壁可见细胞大量增殖，大部分为平滑肌细胞。损伤早期血管壁表达SMα—actin减少，至损伤后期逐渐恢复至原有水平。结论应用球囊导管可以成功建立大鼠血管损伤动物模型，损伤后新生内膜增生导致管腔狭窄，平滑肌细胞的表型改变、迁移及增殖是内膜过度增生的病理基础。     

内源性硫化氢抑制高肺血流大鼠肺动脉弹力蛋白的表达

目的探讨内源性硫化氢(H2S)对高肺血流所致肺血管重构大鼠肺动脉弹力蛋白的调节作用。方法将雄性SD大鼠随机分为4组:分流组、分流 炔丙基甘氨酸(PPG)组、假手术组和假手术 PPG组,每组8只。分流组及分流 PPG组大鼠经腹主动脉-下腔静脉穿刺建立高肺血流动物模型。4周后,测定大鼠肺动脉平均压(mPAP),显微镜下观察肺血管结构变化;用免疫组化方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)、弹力蛋白、转化生长因子-β(TGF-β)和结缔组织生长因子(CTGF)在肺动脉平滑肌细胞的表达。结果分流 PPG组mPAP较分流组和假手术组明显升高(P<0.05);在分流组,小型肺动脉中肌型动脉和部分肌型动脉所占百分比明显高于假手术组(均P<0.05),非肌型动脉所占百分比明显低于假手术组(P<0.01);在分流 PPG组,小型肺动脉中肌型动脉所占百分比明显高于分流组(P<0.01),非肌型动脉所占百分比明显低于分流组(P<0.01)。分流组肺中,小型肺动脉平滑肌细胞α-SM-actin、弹力蛋白、TGF-β和CTGF含量明显高于假手术组(均P<0.01),分流 PPG组上述指标明显高于分流组(均P<0.01)。结论内源性硫化氢可能通过抑制高肺血流大鼠肺动脉弹力蛋白的表达,调节其肺血管结构重构。     

脑缺血再灌流对大鼠海马FOS蛋白的诱导及电针对其的影响

目的　探讨脑缺血再灌流后电针对大鼠海马FOS蛋白表达的影响。方法　采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌流损伤模型 ,电针“百会”、“风池”、“大钟”及“足三里”穴 ,频率 2～ 2 0Hz,强度以肌肉轻微抖动为准 ,持续 30min ,4h后观察海马FOS蛋白的表达。结果　电针能明显加强脑缺血再灌流后海马各区FOS蛋白的表达。结论　缺血再灌流可诱导海马FOS蛋白的显著表达 ;电针信息对缺血后海马神经元的功能可能会有影响。     

脑缺血再灌流后海马区胶质纤维酸性蛋白的动态表达及意义

本研究目的在于 :观察脑缺血再灌流后海马区胶质纤维酸性蛋白的分布及动态表达 ,探讨其与缺血性神经元的联系。钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型 ,应用免疫荧光法染色。结果显示 :脑缺血再灌流后胶质纤维酸性蛋白的阳性反应主要分布于海马本部的始层、放射层、分子层及齿状回门区。再灌流 3 d,胶质纤维酸性蛋白反应增强 ;7～ 15 d,胶质纤维酸性蛋白反应达高峰 ;脑缺血再灌流 40 d和对照组相比胶质纤维酸性蛋白阳性反应仍维持较高水平。再灌流 3 0～ 40 d,CA1区锥体层胶质纤维酸性蛋白阳性细胞明显增强。本研究结果表明 :脑缺血再灌流后海马区星形胶质细胞活化及胶质纤维酸性蛋白表达增强长期保持在较高水平 ,星形胶质细胞的活化、增生可作为神经元受损可靠而敏感的指标     

绿色荧光蛋白-去整合素融合蛋白的表达及其结合功能的研究

目的：构建绿色荧光蛋白（CFP）-去整合素（disintegrin）融合基因，表达并分析该重组蛋白的生物学活性。方法：利用HF-PCR扩增Ⅱ型蛇毒出血性金属蛋白酶agacutin基因的去整合素区，并与绿色荧光蛋白基因进行拼接；将GFP-去整合素融合基因克隆入表达载体pQE-30，IPTG诱导重组蛋白表达；流式细胞术（FCM）与荧光显微镜分析重组蛋白与细胞的结合能力。结果：GFP-去整合素融合蛋白的表达载体在大肠杆菌M15中得到有效表达，菌体呈绿色。表达的蛋白量占菌体总蛋白的38％左右，免疫印迹证实分子量约为39kD；FCM分析显示该重组蛋白可与表达整合素的乳腺癌细胞MDA-MB-231和内皮细胞EA．hy926特异结合，在荧光显微镜下可见与重组蛋白结合的细胞发出绿色荧光。结论：GFP-去整合素融合蛋白可与表达整合素的细胞结合，并保留了各自的生物学活性，可用作肿瘤与血管生成等研究的新的分子标记物。     

颈总动脉的细胞间粘附分子表达和单核细胞粘附的免疫组化观察

细胞粘附分子与动脉硬化和缺血再灌流损伤的等疾病有关。文内采用冷冻切片和免疫组化方法，观察比较了自发性高血压大鼠，具有中风倾向的自发性高血压大鼠和正常血压大鼠颈总动脉内皮的细胞间粘附分子表达及单核细胞与内皮细胞的粘附和聚集。     

层粘连蛋白、纤维粘连蛋白和整合素β3在着床前小鼠早胚发育中的表达

目的 :探讨层粘连蛋白 (Laminin ,LN)、纤维粘连蛋白 (Fibronectin ,FN)和整合素 β3 (Integrinβ3)在着床前早胚发育中的生物学作用。方法 :获取着床前不同发育时期的小鼠早胚 ,用免疫组织化学方法 ,分别检测LN、FN和整合素 β3在早胚发育中的表达状况。结果 :LN、FN和整合素 β3广泛分布于 2细胞期至胚泡期胚的细胞表面。结论 :LN、FN和整合素 β3在小鼠早胚发育的调节中发挥重要作用     

早期动脉瘤模型大鼠形成过程中血管壁基质结构蛋白的表达

背景：基质蛋白是构成血管壁的必不可少的重要成分,为血管壁的完整性和血管壁细胞发挥生理功能提供了必要的框架,并参与对细胞和平滑肌的调控。 目的：构建早期动脉瘤模型大鼠评价基质结构蛋白在形成过程中的表达差异性。 方法：将28只健康雄性SD大鼠随机分为2组：对照组(n=8)和模型组(n=20)。模型组大鼠以结扎左侧颈总动脉和右侧肾肾动脉致高血压方法建立脑动脉瘤模型;对照组大鼠仅暴露左侧颈动脉分叉和双侧颈动脉。模型组大鼠分别于造模后15,30 d处死,取大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分组织进行免疫组化染色,分析纤维连接蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达。 结果与结论：与对照组相比,造模后30 d时模型组大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分中纤维连接蛋白表达水平差异无显著性意义(P > 0.05),而Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减少(P < 0.05)。提示大鼠早期脑动脉瘤形成过程中的结构蛋白表达存在差异性并发生动态变化,血管壁基质结构蛋白降解是动脉瘤形成主要机制之一。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

载脂蛋白（a）对血管平滑肌细胞增殖及其信号通路的影响

目的： 探讨载脂蛋白（a）［apo（a）］对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法：原代培养血管平滑肌细胞并给予传代以进行实验，并采用α-actin抗体进行免疫组化细胞鉴定；分别给予apo（a）、apo（a）+整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609及单独LM609干预细胞，采用细胞计数和MTT实验观察细胞增殖情况，采用Western blotting分析相关信号蛋白的变化。结果：所用实验细胞经鉴定均为血管平滑肌细胞；apo（a）能促进血管平滑肌细胞增殖，但这一作用能被整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609所对抗，单独的LM609干预对细胞生长并无影响；Western blotting显示apo（a）能促进黏附斑激酶（FAK）磷酸化，并使总的转化生长因子β1（TGF-β1）及其磷酸化形式均表达减少，而LM609能对抗apo（a）的这些作用。结论：Apo（a）促进血管平滑肌细胞增殖的作用是通过整合素αⅤβ3介导的， 以致FAK活化，进而TGF-β1表达及磷酸化均减少。     

L-NAME诱导妊娠高血压大鼠动脉重建的特征

目的探讨妊娠高血压大鼠动脉重建的特征。方法采用亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-nitro-arginine methylester,L-NAME)诱导,构建妊娠高血压大鼠模型,以正常孕鼠为对照,用无创鼠尾血压测量仪测量血压以确认模型构建成功。测量血液黏度、左侧颈总动脉平均血流量,检测胸主动脉和颈总动脉的管壁厚度、管腔内径、张开角,计算并比较颈总动脉平均切应力的变化。Western blotting检测胸主动脉血管成分胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ,ColⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ,ColⅢ)表达,分析动脉血管重建程度。结果妊娠高血压模型大鼠血黏度增加,平均血流量降低;颈总动脉和胸主动脉壁厚内径比明显增大;颈总动脉张开角减小,胸主动脉张开角增大;颈总动脉平均切应力降低(28.52±3.08)%;ColⅠ表达下降,ColⅢ表达增加,ColⅠ、Ⅲ比例显著减小。结论妊娠高血压大鼠平均切应力下降,胸主动脉和颈总动脉发生血管重建。研究结果可以为妊娠高血压发病机制的深入研究提供基础实验数据支撑。