实验性脑缺血原癌基因表达与神经元凋亡/坏死关系的研究

目的 研究局灶脑缺血／再灌注Wistar大鼠原癌基因c-fos、c-jun表达在缺血性脑损害中可能的作用机制。方法 采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血／再灌注模型，于缺血1.5h再灌注4h、24h、72h观察c-fos、c-jun表达及神经元坏死、调亡的变化规律。结果 再灌注4h c-fos、 c-jun及神经元调亡明显升高（P＜0.01），c-fos和c-jun阳性蛋白表达在4h达高峰（P＜0.01），随后在再灌注各时相点无显著性差异（P＞0.05）。结论 c-fos和c-jun异常表达与神经元坏死、凋亡密切相关。     

醋酸锌对谷氨酸诱导的小鼠脑片即早基因过度表达的抑制作用

目的：探讨谷氨酸对脑组织即早基因表达的影响以及醋酸锌对谷氨酸诱导c-fos和c-jun过度表达的拮抗作用。方法：体外小鼠海马脑片培养；在培养基中加入200μmol/L的谷氨酸（或同时加入谷氨酸和醋酸锌），作用0.5,1,2,3h，然后进行RT-PCR实验，检测c-fos和c-jun的表达变化。结果：200μmol/L谷氨酸处理的脑片中，1-2h期间c-fos的表达升高，当谷氨酸与100μmol/L醋酸锌共同处理脑片时，1-3h期间c-fos表达基本恢复正常；200μmol/L谷氨酸作用下，脑片c-jun表达水平从0.5h起即明显升高，谷氨酸与醋酸锌共同作用时，可见c-jun基因在各检测时段表达基本接近正常。结论：谷氨酸可引起c-fos及c-jun的过度表达，锌离子可拮抗谷氨酸诱导的c-fos和c-jun过度表达作用，使二基因表达恢复正常。     

5-氟脲嘧啶和赖诺普利诱导合成型平滑肌凋亡及c-fos、c-myc、p53基因表达的研究

目的：探讨5-氟脲嘧啶（5-Fu)、赖诺普利诱导培养的合成型平滑肌细胞凋亡的作用及相关基因的表达。方法：以5-Fu以及赖诺普利分别作用于培养的合成型平滑肌,以流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡发生率,以原位杂交法检测c-myc,c-fos和p53基因的mRNA表达。结果：5-Fu可诱导培养细胞出现明显的凋亡（40μmol/L组的凋亡诱导率达71.24%）而赖诺普利可明显地抑制细胞凋亡发生,12.5μmol/L的剂量即可使细胞凋亡从15.75%下降至0.03%以下,原位杂交实验显示,5-Fu组p53表达增强,而c-fos表达抑制;赖诺普利组p53表达抑制,而c-fos呈强阳性表达。结论：5-Fu可强烈地诱导培养的合成型平滑肌细胞凋亡,而赖诺普利抑制培养细胞的凋亡,5-Fu诱导凋亡的作用是p53基因调控相关的。     

紫杉醇对血管平滑肌细胞原癌基因转录和表达的影响

目的观察紫杉醇（paclitaxel）对血管平滑肌细胞原癌基因c-jun、c-fos转录和表达的影响及其量效、时效关系。方法提取大鼠主动脉原代平滑肌细胞，将第4-9代细胞用于实验。分别运用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术检测血管紧张素及不同浓度（O．1、1．0和10．0tanol／L）紫杉醇对平滑肌细胞c-iun、c-fos mRNA转录及其蛋白质产物合成的影响。结果高、中、低剂量紫杉醇对血管紧张素诱导原癌基因的转录和表达没有明显作用。结论血管紧张素通过促进c-fos、c-jun的转录和表达引起血管平滑肌细胞的增殖。紫杉醇抗血管平滑肌细胞增殖作用并非通过抑制原癌基因c-fos、c-jun转录和表达来实现。     

L—精氨酸对肾性高血压心肌肥厚大鼠左心室肌原癌基因c—fos mRNA表达的影响

目的：探讨L－精氨酸对肾性高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响。方法：采用原位杂交方法检测原癌基因c-fos mRNA的表达。结果：经过8周后,L－Arg使高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA表达显著减少（P＜0．05）。结论：L－Arg能使高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA的表达量减少。     

不同心脏负荷及心室内压变化对大鼠早期心肌原癌基因表达的影响

目的:检测容量(VOL)和压力超负荷(POL)早期大鼠左心室内压变化诱导左心室心肌原癌基因c-fos、c-jun、c-myc、egr-l mRNA表达时间变化和差异.方法:测定假手术大鼠、及心脏超负荷后不同时间点左心室收缩压(LVSP)和内压谷值(LVDP)变化,用狭缝杂交检测各时间点左室心肌c-fos、c-jun、c-myc、egr-l mRNA表达,用密度仪定量分析.结果:与假手术组比较,不同心脏负荷后早期LVSP均下降(P＜0.05),48 h VOL组最低,POL组恢复至对照组水平;负荷后LVDP逐渐增高,POL后6 h,VOL12 h最高(P.＜0.05),后者48 h与假手术组相近(P＞0.05).POL诱导原癌基因表达峰值早于VOL,48 h c-myc、c-jun出现第2次表达增加.VOL后1 h检测到c-fos、c-jun、egr-l、c-myc弱表达,48 h c-fos无表达,c-jun表达减弱,c-myc和egr-l仍有较高表达.结论:VOL、POL后左室内压增加诱导不同的心肌c-fos、c-jun、c-myc、egr-l表达增加的时间顺序,与LVDP增高无关,c-fos、c-jun、c-myc表达与LVSP增高有关,提示左心室主动收缩产生的室内压为诱导原癌基因表达的主要因素;心脏超负荷后心肌原癌基因可持续表达,不同负荷原癌基因表达的时间过程差异可能对发生不同类型心肌肥厚有重要影响.     

肥厚性瘢痕组织中VEGF、ICAM-1、c-fos表达的变化

目的 检测与血管内皮细胞激活及增生相关的血管内皮生长因子（VEGF）、细胞间粘附分子－1（ICAM－1），以及c-fos原癌基因在肥厚性瘢痕组织中的表达。方法 采用免疫组化SP方法，比较VEGF、ICAM－1、c-fos在肥厚性瘢痕、正常瘢痕、正常皮肤组织中的表达。结果 VEGF、ICAM－1、c-fos在肥厚性瘢痕中表达皆增强。VEGF、c-fos主要表达在表皮、真皮血管、皮肤附属器；ICAM－1主要表达在真皮浅层血管、浸润的炎细胞、成纤维细胞。结论 肥厚性瘢痕组织中血管内皮细胞处于一种激活状态，肥厚性瘢痕组织内皮细胞和成纤维增殖异常。     

严重烧伤大鼠心肌[Ca2+]i浓度变化及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系

目的：了解大鼠严重烧伤后心肌细胞胞内游离钙离子浓度[Ca^2 ]i动态变化特征及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系。方法：复制Wistar大鼠30％体表面积（TBSA）Ⅲ度烧伤模型，随机分为烧伤组，补液组，维拉帕米治疗组和对照组。烧伤后不同时相点处死动物。Fura-2/AM测定大鼠心肌细胞胞内游离钙离子浓度，原位杂交技术检测心肌c-fos、c-myc mRNA的表达。结果：心肌细胞胞内游离钙离子逍度单烧组和补液组明显升高（IP＜0．01），维拉帕米治疗组轻度升高（P＞0．05），在0．5h,72h两个时相点，三个实验组心肌细胞[Ca^2 ]i明显低于对照组（P＜0．01）。除了维拉帕米治疗组c-fos、c-myc表达与钙离子浓度无相关性（r＝0．74，P＞0．05），其它各实验组c-fos、c-myc的表达与心肌细胞钙离子浓度成正相关性。结论：烧伤导致心肌细胞钙超载，补液不能阻止[Ca^2 ]i升高，而烧伤后大鼠心肌细胞原癌c-fos、c-myc的表达与胞内游离钙离子浓主有密切关，钙离子可能参与烧伤后心肌细胞原癌基因表达的调节。     

去甲肾上腺素诱导左心室c—fos、c—myc基因表达

目的从器官水平上探讨去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠心肌原癌基因表达及受体机制.方法以10-6M NE对大鼠离体心脏灌流1h,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,测定不同实验条件下左心室c-fos和c-myc表达水平.结果10 6M NE灌流心脏后c-fos和c-myc表达均显著增强;用5×10-6M的哌唑嗪预先灌流可完全阻断NE诱导的c-fos和c-myc表达增强的效应,而以10-6M的心得安预先灌流则无此作用.结论NE经α1-受体介导,可诱导心肌c-fos和c-myc表达增强.     

孕激素对MG-63细胞株孕激素受体和c-fos、c-jun的影响

目的观察18-甲左炔诺孕酮对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖、孕激素受体和c-fos、c-jun表达的影响。方法用不同浓度18-甲左炔诺孕酮干预MG-63细胞株,以不含左炔诺孕酮的MEM培养液作对照,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR测定孕激素受体(PR)、c-fos、c-jun mRNA表达,Western Blot和免疫组化法测定PR、c-fos、c-jun蛋白质的表达。结果与对照组比较,10-10mol/L、10-8mol/L和10-6mol/L左炔诺孕酮分别增加MG-63细胞增殖达7.72%、24.36%和36.54%(P<0.01或P<0.05)。干预24h后,MG-63细胞中PRA、PRB mRNA和蛋白质表达无明显变化(P>0.05)。干预2h后,左炔诺孕酮增加MG-63细胞中c-fos、c-jun mRNA和蛋白质表达(P<0.01或P<0.05),呈剂量依赖性。结论孕激素可能通过增加c-fos、c-jun的表达来促进MG-63细胞增殖。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

Effects of cadmium on hepatocellular DNA damage, proto-oncogene expression and apoptosis in rats

Objective To study the effects of cadmium on hepatocellular DNA damage,expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun as well as apoptosis in rats. Methods Cadmium chloride at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg was given to rats by i.p. and there were 5 male SD rats in each group. Hepatocellular DNA damage was measured by single cell gel electrophoresis(or comet assay),while expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun in rat hepatocytes were measured by Northern dot hybridization. C-Myc,c-Fos,and c-Jun were detected with immuno-histochemical method. Hepatocellular apoptosis was determined by TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labelling) and flow cytometry. Results At the doses of 5,10,and 20 μmol/kg,cadmium chloride induced DNA damage in rat hepatocytes and the rates of comet cells were 50.20%,88.40%,and 93.80%,respectively. Results also showed an obvious dose-response relationship between the rates of comet cells and the dose of cadmium chloride(r =0.9172,P<0.01). Cadmium chloride at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg induced expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun. The positive brown-yellow signal for c-myc,c-fos,and c-jun was mainly located in the cytoplasm of hepatocytes with immunohistochemical method. TUNEL-positive cells were detected in cadmium-treated rat livers. Apoptotic rates(%) of cadmium-treated liver cells at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg were(17.24 ±2.98),(20.58±1.35),and(24.06±1.77) respectively,being significantly higher than those in the control. The results also displayed an obvious dose-response relationship between apoptotic rates and the dose of cadmium chloride(r=0.8619,P<0.05). Conclusion Cadmium at 5-20 μmol/kg can induce hepatocellular DNA damage,expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun as well as apoptosis in rats.     

氯化镉诱导大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡的作用机制

目的：研究不同浓度氯化镉（CdCl₂）引起大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡及机制。方法：将培养的大鼠心肌细胞H9c2分为阴性对照组和镉处理组,阴性对照组为DMEM培养液,镉处理组分别暴露于 5﹑10﹑30﹑50和80 μmol•L^-1 CdCl₂ 作用6、12和24 h,采用MTT法检测细胞存活率;Annexin Ⅴ-FITC/ propidium iodide (PI)流式细胞技术(FCM)、丫啶橙（AO）/ 溴化乙啶（EB）双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果：镉处理组细胞存活率随着剂量的加大及时间延长明显下降,与阴性对照比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）;CdCl₂可引起H9c2细胞凋亡,各剂量组凋亡率明显高于阴性对照组（P<0.001）,各剂量组之间凋亡率差异无显著性（P>0.05）;AO/EB 染色镜下可见H9c2细胞呈典型早期凋亡形态学改变。结论：H9c2 细胞对CdCl₂的作用较敏感,低剂量﹑短时间作用即可引起细胞凋亡,但 H9c2 细胞对CdCl₂有一定耐受性。     

Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达在肝细胞癌发生中的作用

利用SP免疫组织化学技术检测 5 5例肝细胞癌 (HCC)及其癌旁组织中p Stat3(Tyr70 5 ) ,c fos和c jun蛋白的表达。结果显示 :HCC中p Stat3,c fos和c jun蛋白阳性率和阳性强度均高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ,且p Stat3与c fos和c jun蛋白表达强度均呈明显正相关 ,而在癌旁组织中p Stat3仅与c jun蛋白表达相关 ,提示Stat3蛋白的磷酸化可能是HCC发生的早期事件 ,并通过激活c jun和c fos基因使肝细胞恶性转化 ;癌旁肝组织中 ,p Stat3,c jun或c fos呈阳性表达的肝细胞可能是一种具有恶性潜能的癌前细胞群。     

Ｓtat3磷酸化与c—fos和c—jun蛋白表达在肝细胞癌发生中的作用

Expression of phosphorylated Stat3 (p-Stat3), c-fos and c-jun proteins was detected by immunohistochemical technique in 55 hepatocellular carcinomas (HCC) and their surrounding liver tissues. The results showed that the positive rates and signal intensity of p-Stat3, c-fos and c-jun protein in HCCs were significantly higher than those in pericarcinomatous tissues. The expressive intensity of c-fos and c-jun proteins was positively related to p-Stat3 expression in HCCs, whereas the positive correlation of expressive intensity was only observed between c-jun protein and p-Stat3 in pericarcinomatous tissues. The data suggest that the phosphorylation of Stat3 may be an early event in hepatocarcinogenesis; the overexpression of p-Stat3 protein, which activates c-fos and c-jun genes, may contribute to malignant transformation of hepatocytes; hepatocytes which expressed p-Stat3, c-fos or c-jun proteins may be potentially malignant pre-cancer cells in pericarcinomatous liver tissues.     

Malignant transformation and abnormal expression of eukaryotic initiation factor in bronchial epithelial cells induced by cadmium chloride

Objective To analyze the relationship between malignant transformation and abnormal expression of eukaryotic initiation factor 3 （eIF3 p36） in human bronchial epithelial （16HBE） cells induced by cadmium chloride （CdCl2）. Methods 16HBE cells were treated several times with different concentrations of CdCl2. Tumorigenic potential of transformed cells was identified by assays for anchorage-independent growth in soft agar and for tumorigenicity in nude mice after the 35th passage. Total RNA was isolated from 16HBE cells induced by CdC12, including non-transformed, Cd-transformed, and Cd-tumorigenic cell lines. Special primers for eIF3 p36 were designed and the expression of eIF3 mRNA in different cell lines was detected with fluorescent quantitative-polymerase chain reaction technique （FQ-PCR）. Results The 35th passage of 16HBE cells transformed by CdCl2 exhibited overlapping growth. Compared with the non-transformed cells, colonies of transformed cell lines in soft agar showed statistically significant increases and dose-dependent effects （P〈0.01）. All Cd-induced transformed cell lines formed rumors in nude mice within 2 weeks of inoculation, but none of the mice injected with non-transformed cells showed tumors even after 3 weeks. All tumors were pathologically identified as poorly differentiated squamous cell carcinoma. The eIF3 p36 genes in different stages of 16HBE cells transformed by CdCl2 were elevated as compared with the non-transformed control （P〈0.01）, and the eIF3 expression increased with the degree of cell malignancy. Conclusion CdCl2 is capable of inducing morphological transformation in 16HBE cells and transformed cells are potentially tumorigenic. Over-expression of eIF3 p36 is positively correlated with malignant transformation of 16HBE cells induced by CdCl2 and may be one of the molecular mechanisms potentially responsible for carcinogenesis due to Cd.     

视网膜缺血再灌注后c-fos、c-jun蛋白表达

目的:观察大鼠视网膜缺血再灌注(RIR)后,凋亡即刻基因cfos、cjun在视网膜各层细胞中的表达变化,进一步明确凋亡即刻基因和RIR损伤发生机制的关系。方法:采用视网膜中央动脉结扎方法诱导大鼠视网膜缺血60min,解除结扎,建立RIR模型。缺血60min,再灌注0,1,3,6,12,24h作视网膜石蜡切片,cfos,cjun免疫组化观察。结果:正常对照组和缺血组未见cfos、cjun表达,RIR后,视网膜神经节细层(ganglioncelllayer,GCL)和内核层(innernuclearlayer,INL)1h开始少量表达(P<0.05),3h达到高峰(P<0.05),6h开始下降(P<0.05),24h几乎趋于正常组表达(P>0.05)。而外核层(outernuclearlayer,ONL)几乎无阳性表达。结论:cfos、cjun参与RIR损伤发生,RIR中视网膜节细胞层和内核层细胞存在凋亡征象,尤以3h组最为显著。     

缺氧适应与缺血低氧对c-fos和c-jun表达的影响

目的：探讨缺氧适应对缺血低氧脑c-fos，c-jun基图表达的影响。方法：昆明纯种雄性小白鼠36只随机分组：（1）对照组；（2）缺血低氧组（IH）；（3）缺氧适应与缺血低氧组（HA—IH）。采用免疫组化技术检测c-fos，c-jun基因表达。结果：IH组C—fos和c-jun阳性细胞在30min均呈低密度分布，c—fos在1h表达高峰，12h基本消失，而c-jun基因的表达高峰在3h；与IH组比较，HA—IH组c—fos阳性细胞数减少，c-jun表达增加。结论：缺血低氧可诱发中枢神经系统c-fos、c-jun基因表达，且有时间依赖性；缺氧适应可抑制缺血低氧脑c-fos基因的表达，增强c-jun基因的表达。     

氯化锌和N-乙酰半胱氨酸对镉诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响研究

目的研究氯化锌(ZnCl2)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对氯化镉(CdCl2)致人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响。方法体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721分别以0、20、40、80、160和320μmol/L的CdCl2处理3、6、12、24、48h,ZnCl2预处理和NAC预处理组在CdCl2处理前分别以100μmol/L的ZnCl2和5mmol/L的NAC预处理24h,应用MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞仪Annexin V-PI双标法检测细胞凋亡百分率。结果随着镉处理浓度的增高和时间的延长,SMMC-7721细胞存活率逐渐降低;SMMC-7721细胞凋亡率随着CdCl2浓度的增加而逐渐增加,40μmol/L及以上镉处理组与对照组相比,凋亡率显著增加,P<0.01;与相同剂量的单纯Cd处理组相比,Zn预处理组细胞凋亡率差异无统计学意义,P>0.05,与40、80μmol/L镉处理组相比,相同剂量的NAC预处理组细胞凋亡百分率显著下降,P<0.05,其余镉处理剂量的NAC预处理组细胞凋亡百分率差异无统计学意义,P>0.05。结论一定剂量的ZnCl2预处理不能显著降低镉诱导的SMMC-7721细胞凋亡,而NAC预处理可在一定程度上显著降低镉诱导的肝癌细胞凋亡百分率。