肾上腺髓质素单克隆抗体制备和在人体器官组织中的表达

目的　自制特异性肾上腺髓质素 (AM)单克隆抗体 ,观察AM在人正常组织中的表达。方法　以AM为抗原免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞株融合 ,建立阳性杂交瘤细胞克隆 ,制备AM单克隆抗体 ;以此为第一抗体 ,采用ABC免疫组化法检测其在人体心、肾、肝、肺和脾组织的表达。结果　AM在上述器官中的分布较广泛 ,表达于这些组织中的血管平滑肌细胞和内皮细胞 ,以及心肌细胞、肾小球上皮细胞和内皮细胞 ,肾小管和集合管上皮细胞 ,肝胆管上皮细胞 ,肺支气管及其黏液腺上皮细胞、平滑肌细胞和肺泡Ⅱ型上皮细胞胞质。结论　AM在人器官组织中分布广泛 ,提示其生物学作用可能是多方面的。     

黄芪对UUO模型大鼠肾脏肝细胞生长因子表达的影响

目的 动态观察黄苠(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拈抗作用和肝细胞生长因子(HGF)表达的影响.方法 SD大鼠随机分为假手术组(SOR组)、UUO组和UUO+AM治疗组(AM组).在造模后3、7、14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、HGF表达.实时荧光定量RT-PCR检测大鼠.HGF mRNA和α-SMA mRNA表达量.Western blot检测大鼠HGF及其受体C-met蛋白表达量.结果 与SOR组相比,各时间点UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾小管损伤及肾间质纤维化程度(P<0.05).随着梗阻时间的延长,UUO大鼠肾组织α-SMA表达逐渐增加;HGF及其受体C-met呈现先升高后下降的表达规律,在UUO术后第7 d达高峰,此后大幅回落;与UUO组各对应时间点比较,AM治疗后可使肾组织中的HGF及其受体C-met表达显著增高,α-SMA表达明显降低(P<0.05).结论 AM可能通过诱导HGF及其受体C-met的表达,负性调控肾小管上皮细胞转分化,减轻肾间质纤维化.     

瞬时受体电位通道与组织纤维化

瞬时受体电位（TRP）通道是一类由多个成员构成的非选择性离子通道大家族,可分为TRPC、TRPV、TRPM、TRPA、TRPP和TRPML等6个亚家族。TRP通道在不同类型的组织器官中均有表达,包括呼吸道、肺、肾、心、肠道、胃和肝组织等。TRP通道能感应多种刺激,如压力、氧化应激、脂质环境、肥厚性信号和炎症产物等,并通过信息整合,经由Ca2+通道,对细胞的生理功能产生广泛的影响,如细胞收缩、细胞增殖、细胞分化和细胞死亡等。研究表明,TRP通道参与了支气管上皮细胞、心肌细胞、肾组织细胞和肝星形细胞（HSC）等多种细胞的病理学变化,与气道囊性纤维化、心肌纤维化、肾组织纤维化和肝组织纤维化有着密切的联系。本文着重对TRP通道参与多种组织纤维化的相关研究进行综述。     

丁酸钠抑制人喉癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的 研究丁酸钠对人喉癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法 将人喉癌细胞株Hep-2细胞接种于12只裸鼠皮下,建立喉癌移植瘤模型.分为实验组和对照组,每组6只,分别给予丁酸钠和磷酸盐缓冲液(PBS)治疗4周.治疗过程中定期测量肿瘤大小及裸鼠体质量,于治疗结束时取肿瘤组织切片进行HE染色、电镜观察、TUNEL标记及免疫组化S-P法检测Ki-67、survivin蛋白表达情况,取心、肝、肺、脾、肾等组织切片进行药物毒性评估.结果 治疗组肿瘤体积明显小于对照组,肿瘤组织内坏死面积增大,细胞凋亡率显著增高,Ki-67核抗原、survivin蛋白表达水平降低.治疗过程中裸鼠生长良好,无明显毒性反应.治疗结束时,心、肝、肺、脾、肾组织切片光镜下检查未见异常.结论 丁酸钠对人喉癌裸鼠皮下移植瘤有明显的生长抑制作用,其机制可能与抑制survivin表达而诱导细胞凋亡及抑制Ki-67表达有关.治疗剂量的丁酸钠对裸鼠心、肝、肺、脾、肾等组织无毒性.     

Adrenomedullin的多种作用

Adrenomedullin(AM)是大鼠血小板内cAMP活性增加的指标,是1993年从人嗜铬细胞瘤组织提取液中发现的新生理活性肽。人AM由52个氨基酸组成,有一个二硫键,C端的Tyr被酰胺化。AM与降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide:CGRP)的氨基酸序列有部分相同性,如从降压作用等相同点看,这两种物质应该属于同一大类。AM可在肾上腺以外的肺、肾、心、血管等许多组织合成,现已证明AM有多种作用。 AM是被作为有增加大鼠血小板内cAMP活性作用的肽发现的,AM的典型作用是给各种动物静脉投用后,有较强的长时     

溶血磷脂酸受体1与器官纤维化关系的研究进展

器官纤维化是一种病理过程,通常与各种刺激引起的慢性炎症有关,其特征是细胞外基质大量沉积。纤维化通常发生在肺、肾、肝等器官,导致正常组织结构和功能的丧失。近年来,关于溶血磷脂酸受体（LPAR）1在肾、肺、肝等器官纤维化发生、发展中的作用日益受到关注。溶血磷脂酸通过LPAR1介导上皮细胞凋亡、内皮细胞屏障功能丧失以及成纤维细胞迁移等过程,从而促进器官纤维化,提示LPAR1可能成为器官纤维化的新治疗靶点。本文对LPAR1与器官纤维化关系的研究进展作一综述。     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏的保护作用

目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化实验大鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为缬沙坦组、鳖甲煎丸组与模型组,并设假手术组。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)在蛋白及基因水平的表达,并测定其在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中肾上腺髓质素组织蛋白含量、蛋白表达以及mRNA的基因表达较假手术组明显降低,鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量及表达均高于模型组(P<0.05?,但两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够明显上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达,对肾脏起到保护作用。     

肾上腺髓质素在呼吸系统相关性疾病中的研究进展

【摘要】 血浆肾上腺髓质素（ADM）是一种具有多种生物学活性的内源性肽，以自分泌、旁分泌和内分泌的方式发挥功能和作用，包括舒张血管、降低血压、扩张支气管平滑肌细胞、改善微循环、稳定血管内皮功能、调节肺动脉压、调节炎症及免疫功能、参与多种激素的分泌和调节等作用，因最初在肾上腺嗜铬细胞瘤组织中发现而得名。后来发现其在多种器官、组织均有表达，包括心、脑、肾、肿瘤组织等，尤其在内皮细胞、血管平滑肌细胞等表达含量较高，在人体肺组织中也广泛存在。目前许多研究已发现肾上腺髓质素可能参与某些肺部疾病的病理生理过程，包括社区获得性肺炎、支气管哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、肺动脉高压、肺部肿瘤等疾病。本文就肾上腺髓质素在呼吸系统相关性疾病方面的研究进展作一综述。     

Bcl-xl在梗阻性肾组织中表达及其意义

目的探讨细胞凋亡抑制因子bcl-xl在梗阻性肾病的发病机制中作用。方法应用免疫组化方法检测bcl-xl在43例梗阻性肾组织和10例正常肾组织中表达,应用原位细胞凋亡检测方法检测梗阻性肾组织中细胞凋亡指数,并分析bcl-xl表达与梗阻肾纤维化和肾萎缩之间关系。结果bcl-xl主要分布于肾小管。梗阻肾组织中bcl-xl表达显著低于正常肾组织(P<0.05)。梗阻肾组织中bcl-xl表达与细胞凋亡指数和肾萎缩之间密切相关(P<0.05),但与肾纤维化之间相关无显著性(P>0.05)。结论bcl-xl异常低表达导致细胞凋亡增加、参与梗阻性肾病的分子发病过程,尤其在梗阻肾萎缩过程中起着重要作用。     

肾上腺髓质素对内皮型一氧化氮合酶在肾肿瘤细胞中表达的影响

目的 观察肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）对肾肿瘤细胞中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）表达的影响.方法 将肾肿瘤细胞分为对照组、ADM作用组、肾上腺髓质素受体shRNA （adrenomedullin receptor shRNA,ADMR shRNA）作用组,每组又设置24、48、72h 3个时间梯度.细胞培养完成后提取细胞总蛋白,Western-Blot检测各组细胞总蛋白中eNOS的表达,观察ADM对其影响.结果 ADM作用组各时间梯度eNOS的表达均高于同时段对照组和ADMR shRNA作用组（P＜0.05）.结论 ADM通过其特异性受体诱导肾肿瘤细胞中eNOS表达升高.     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质病理损害的作用

目的观察黄芪（AM）对单侧输尿管梗阻（UUO）所致大鼠肾小管间质病理损害的影响，初步探讨黄芪拮抗纤维化的作用机制。方法48只SD大鼠随机分为假手术（Sham）、UUO组和UUO＋黄芪治疗组（AM）、UUO＋氯沙坦治疗组（ARB）。在造模后7、14天处死动物，观察HE染色、Masson染色和PAS染色肾脏病理改变，并对肾小管间质损害进行半定量评定分析。结果与假手术组相比，UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重，肾小管损伤程度、肾间质相对面积和肾小管萎缩程度评分均明显增高，黄芪干预后各时间点上述指标明显改善，与ARB作用相似。结论黄芪能有效抑制肾小管间质病理损害，减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化。     

肾小球上皮细胞分泌肾上腺髓质素抑制系膜细胞增殖

目的 探讨肾上腺髓质素（AM）及其受体CRLR在培养的大鼠肾小球上皮细胞（GEC）和系膜细胞（MsC)的表达,以及AM对MsC生长的影响。方法 采用RT－PCR法分别制备AM及CRLR探针,Northern blot法检测其在GEC和MsC的表达,[^3H]胸腺嘧啶掺入法测定MsC增殖情况。结果 AM仅表达于GEC,不表达于MsC,而其受体CRLR的表达则相反。含有A,的GEC培养上清可抑制MsC生长,而CRLR阻断剂CGRP8－37可部分消除此抑制作用。结论 GEC可通过合成和分泌AM抑制MsC增殖,提示AM作为一种重要的旁分泌因子,以保持肾小球微环境稳定,并参与肾小球的炎症过程。     

尿激酶联合黄芪对环孢素A大鼠慢性肾纤维化组织中核因子-κB表达的影响及意义

目的探讨尿激酶（uPA）联合黄芪（AM）对环孢素A（CsA）大鼠慢性肾纤维化组织中核因子-κB（NF-κB）表达的影响及意义。方法采用1：7服灌胃CsA（25mg&#183;kg^-1&#183;d^-1）制备大鼠慢性肾纤维化模型,将大鼠随机分为5组：对照组、模型组、uPA组、AM组及联合治疗组,4周末取标本。HE染色观察肾脏组织结构变化;采用试剂盒测定肾组织羟脯氨酸的含量;应用免疫荧光观察P-p65的表达及定位;采用Western印迹法检测大鼠肾组织P—065、p65、IκBα和IκBβ的蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组肾小管损伤程度加重,羟脯氨酸含量增加,肾组织中NF-κB活化显著增强,p65由细胞质转移至细胞核,P-p65表达显著上调,IκBα降解明显增加（P均〈0．05）。与模型组相比,各治疗组肾小管损伤程度减轻,羟脯氨酸含量减少,P-p65表达被显著抑制,IκBα降解减少（P均〈0．05）,且联合组的治疗效果更显著。IκBβ的蛋白表达水平各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NF-κB信号通路介导了肾脏纤维化的发生发展,uPA与AM能减轻肾脏纤维化,这可能与其能抑制NF-κB通路激活有关。     

川芎嗪对实验性肺纤维化肺泡巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响

目的探讨川芎嗪防治大鼠肺纤维化的机制。方法将48只SD大鼠一次性气管内注入博莱霉素A5(BLMA5)制备肺纤维化模型,随机分为模型对照组及实验组各24只,在实验的d3、d7、d14、d28分批处死后进行支气管肺泡灌洗并收集灌洗液(BALF);另取8只为空白对照组,于实验的d28一次性处死计数细胞总数及分类计数,采用ELISA法测定肺泡巨噬细胞(AM)培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)水平。结果模型对照组各期BALF细胞计数及AM培养上清液TNFα含量较空白对照组明显增高(P<0.05,P<0.01),实验组较模型对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论抑制TNFα释放可能是川芎嗪防治大鼠肺纤维化的机制之一。     

虫草制剂抗肾纤维化作用研究进展

综述虫草制剂抗肾纤维化作用研究进展。冬虫夏草及其有效提取物在抗肾纤维化研究方面取得了一定成果,主要表现在抑制肾小管间质纤维化、抑制肾小球硬化、减轻炎症细胞浸润、抑制免疫复合物沉积等多方面,体现了中医药抗肾纤维化的优势。     

STAT1对实验性肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控作用

目的探讨肺泡巨噬细胞(AM)内转录活化蛋白1(STAT1)活化在大鼠肺纤维化中的作用.方法取50只健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素组(BLM)和生理盐水组(NS),每组各25只.用Western-blot法测定AM内STAT1活化的动态变化,同时用免疫组化方法测定AM的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达.结果 NS组大鼠的AM内有少许STAT1活化,气管内灌注博莱霉素1 d后AM内STAT1活化就开始显著增高,第7 d达高峰,以后逐渐下降,第28 d仍高于NS组(P＜0.05);NS组的AM中有少许细胞ICAM-1表达呈阳性,气管内灌注博莱霉素1 d后AM的ICAM-1表达阳性细胞数就显著增高,第7 d达高峰,以后逐渐下降,第28 d仍高于NS组(P＜0.05);AM内STAT1活化程度与AM的ICAM-1表达呈正相关(r=0.913,P＜0.01),而后者又与肺组织炎症积分呈正相关(r=0.947,P＜0.01).结论实验性肺纤维化大鼠AM内存在STAT1的异常活化,异常活化的STAT1参与肺泡炎和肺纤维化的形成.     

用RT—PCR方法动态分析博莱霉素致肺纤维化大鼠TGF—β1的基因表达

目的：探讨转化生长因子β1（TGF－β1）在肺纤维化中的作用。方法：采用博莱霉素（BLM）致肺纤维化大鼠模型,分离纯化肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage,AM）,用RT－PCR及图像分析方法,对不同时期AM以及肺组织释放的TGF－β1进行动态观察。结果：BLM组AM和肺组织中TGF－β1 mRNA第3天即明显增加（P＜0.05和P＞0.05）,第7天达到高峰（P＜0.01）,第14－28天逐渐下降,便仍高于对照组（P＞0.05）。结论：TGF－β1 mRNA在正常大鼠及肺纤维化大鼠中均有表达,后者表达明显高于前者,肺纤维化大鼠肺内TGF－β1 mRNA可能主要来源于AM。     

高迁移率族蛋白1在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用。方法脂多糖（LPS）注射复制大鼠急性肺损伤模型，在LPS致伤后不同时相点（有或无正丁酸钠SB干预时）获取肺组织及肺泡巨噬细胞（AM）。RT—PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达，应用鸡红细胞吞噬实验检测AM的吞噬功能，并对二者做平行比较。结果与对照组比较，LPS致伤后6、12、24h时相点AM吞噬率及吞噬指数明显降低；SB干预组AM吞噬功能于24h时相点出现较明显下降。与LPS组比较，6～12h时相点AM吞噬功能无明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；LPS致伤后6～24h肺组织HMGB1 mRNA表达明显增高。正丁酸钠（SB）处理组动物肺组织于伤后6～12h肺组织HMGB1 mRNA表达均显著抑制，与LPS组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；相关性分析显示，肺泡巨噬细胞吞噬率及吞噬指数与肺组织HMGB1表达水平呈显著负相关。结论HMGB1高表达可能参与AM吞噬功能改变；AM吞噬功能减低可能是HMGB1参与急性肺损伤发生、发展的机制之一。     

1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-(1H)吡啶酮对鼠肾成纤维细胞的影响

目的：探讨1- (3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮对鼠肾纤维化的治疗作用。 方法：采用MTT法和ELISA法分别检测1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮和pirfenidone对鼠肾成纤维细胞（BHK-21）增殖和分泌纤维结合蛋白（Fn）表达的影响。 结果：1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮作用于鼠肾成纤维细胞48 h后能明显抑制细胞增殖及分泌Fn,1 000 μg/ml的1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮作用于BHK-21后24 h即可明显抑制BHK-21细胞增殖。 结论：1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮可明显抑制鼠肾成纤维细胞增殖,在肾间质纤维化防治药物研制方面显示出良好的前景。     

黄芪对糖尿病大鼠早期肾肥大和蛋白尿的影响

以链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠糖尿病模型，观察黄芪单用及与开搏通合用防治早期糖尿病肾病的疗效。结果表明，黄芪能明显降低糖尿病大鼠的血糖、糖化血红蛋白，抑制肾脏肥大，减少尿微量白蛋白排出，黄芪与开搏通合用与黄芪的上述作用相似，其中抑制肾脏肥大作用更明显。提示，黄芪对实验性糖尿病性肾病具有防治作用。