siRNA干扰β-catenin基因表达情况与喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的关系

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰β-链蛋白(β-catenin)基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法前瞻性选取喉癌Hep-2细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组和干扰组,其中干扰组转染靶向β-catenin的siRNA,阴性对照组转染空白siRNA。采用荧光定量PCR和Western-blot检测β-catenin mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transell法观察细胞侵袭能力。结果干扰组β-catenin mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.304±0.015)和(0.234±0.065),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组培养48 h和72 h吸光值分别为(0.721±0.250)和(0.942±0.321),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组细胞凋亡率为(19.10±1.24)%,明显高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组穿膜细胞数为(22.41±3.25)个,明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05)。结论干扰β-catenin基因,可抑制喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

SALL4基因表达与急性髓细胞白血病细胞系KG1a耐药相关性研究

目的探讨SALL4基因与急性髓细胞白血病耐药的相关性。方法通过RNA干扰技术将表达SALL4干扰序列的质粒载体转染至急性髓细胞白血病细胞系KG1A中,建立抑制SALL4基因的表达体系。在此条件下,通过MTS细胞增殖检测法检测SALL4基因抑制前后对阿霉素和柔红霉素的耐药情况。结果实时荧光定量PCR结果显示,SALL4的干扰效率良好。在此干扰体系下,不同浓度化疗药物阿霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)作用时,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(62.80±1.64)%、(26.80±2.68)%、(18.00±2.00)%]显著低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(85.40±4.03)%、(56.80±5.06)%、(26.50±4.50)%],差异有统计学意义(t=-22.6、-30.4、-8.6,均P0.05)。不同浓度化疗药物柔红霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)的作用下,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(42.00±1.87)%、(28.00±1.22)%、(21.60±2.51)%]也显著低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(61.00±1.87)%、(40.20±2.68)%、(27.00±1.22)%],差异有统计学意义(t=-18.8、-12.2、-5.4,均P0.05)。结论 SALL4基因的表达是急性髓细胞白血病产生耐药的正性调节因素。     

miR-21在前列腺癌中的表达及抑制其表达对前列腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨抑制前列腺癌细胞中miR-21基因表达对癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 RTPCR检测前列腺癌及癌旁组织中miR-21基因的mRNA表达;空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)和miR-21 inhibitor组转染人前列腺癌PC-3细胞,48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-21基因的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果前列腺癌组织中miR-21的mRNA表达显著高于癌旁组织(P0.01);转染miR-21 inhibitor后miR-21的表达显著降低;NC组细胞存活率、细胞凋亡率及ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与对照组,差异无统计学意义(P0.05),miR-21 inhibitor组细胞存活率及ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。结论抑制前列腺癌细胞中miR-21基因的表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

2,5二羟基苯乙酮通过Wnt/β-catenin信号通路诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的观察2,5二羟基苯乙酮(DHAP)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,并探索其相关作用机制。方法体外培养RPMI8226细胞,分别加入浓度为100μM、200μM、400μM DHAP,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)处理。48 h后收集各组细胞,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。实时荧光PCR检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、Survivin、C-myc以及C-cyclin D1 mRNA表达。Western blotting检测β-catenin、Survivin、Cmyc以及C-cyclin D1蛋白表达。结果 48 h后对照组细胞凋亡率为(0.02±0.01)%,100μM、200μM、400μM DHAP组细胞凋亡率为(7.34±2.56)%、(12.18±3.07)%、(15.76±2.77)%,并呈剂量依赖趋势(P0.05);实时荧光PCR结果显示,DHAP组β-catenin,Survivin、C-myc以及C-cyclin D1 mRNA表达显著低于对照组,并呈剂量依赖趋势(P0.05);Western blot显示,DHAP组β-catenin、Survivin、C-myc以及C-cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,并呈剂量依赖趋势(P0.05)。结论 2,5二羟基苯乙酮呈剂量依赖性诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

siRNA靶向抑制CXCR4基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭的影响及机制研究

目的探讨抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法回顾性收集鼻咽癌42例临床资料及相应的癌旁组织。RT-PCR和Western bloting分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达;人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白组(细胞未做任何处理)、NC-siRNA组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4-siRNA组(细胞中转染CXCR4的靶向siRNA序列)。转染48 h后Western bloting检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果鼻咽癌中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);转染CXCR4-siRNA组后CXCR4的蛋白表达显著降低;NC-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P0.05);CXCR4-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组(P0.01)。结论抑制鼻咽癌细胞CXCR4基因表达可显著降低癌细胞的增殖与侵袭能力,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1 siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21.00%（t＝3.05,P＜0.05）, DKK1蛋白表达降低39.35%（t＝40.97,P＜0.01）。侵袭实验中DKK1 RNAi组的细胞均数140.8±4.733,高于空白对照组的细胞均数123.7±6.700,癌细胞的侵袭能力增强13.82%。迁移实验中DKK1 RNAi组细胞均数（152.0±3.528）高于空白对照组（130.6±4.061）,癌细胞的迁移能力增强16.39%。DKK1 siRNA处理后,细胞中活性β-catenin、MMP14荧光增强,提示表达水平上升。结论 DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt/β-catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。     

Six1基因对As_2O_3诱导的口腔鳞癌细胞凋亡和ROS水平的影响研究

目的探讨Six1 siRNA或三氧化二砷(As_2O_3)对口腔鳞癌细胞活力、凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法实验分为空白对照组(无需处理)、Six1-siRNA组(细胞转染Six1的特异性siRNA)、As_2O_3组(终浓度为5μmol/L As_2O_3处理细胞)和Six1-siRNA+As_2O_3组(Six1-siRNA及As_2O_3共同处理细胞) 4个组,siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。人口腔鳞癌CAL-27细胞处理48 h,Western blotting检测Six1及Wnt/β-catenin信号相关的β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达。CCK8及流式细胞术分别检测细胞活力、凋亡率及ROS含量。结果 Six1siRNA的转染可明显降低CAL-27细胞Six1的蛋白表达,与空白对照组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。与空白对照组比较,Six1-siRNA组和As_2O_3组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,ROS含量明显升高,β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达明显降低(P 0. 05),而联合使用的细胞活力及β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达均显著低于Six1-siRNA组和As_2O_3组,凋亡率及ROS含量高于Six1-siRNA组和As_2O_3组(P 0. 05)。结论 Six1-siRNA可增加As_2O_3对口腔鳞癌细胞凋亡的诱导,机制与增加细胞ROS水平及下调Wnt/β-catenin信号有关。     

LGR5对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制研究

目的探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制。方法采用前瞻性研究,以宫颈癌细胞Hela为研究对象,构建过表达和敲低LGR5的细胞株,RT-PCR和Western blot检测LGR5表达。将转染pc DNA3.1-LGR5的Hela细胞作为LGR5组,以转染pc DNA3.1空载体的细胞记为pc DNA3.1组;将转染LGR5 siRNA细胞作为si LGR5组,以转染阴性对照siRNA细胞记为NC组。Western blot分别检测各组细胞中上皮间质标记物钙黏附蛋白E(E-cadherin)、钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及Wnt/β-cadherin通路蛋白β链蛋白(β-catenin)和下游蛋白c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)表达变化。Transwell实验检测各组细胞迁移侵袭能力变化。结果 Hela细胞中成功过表达和敲低了LGR5;与pc DNA3.1组相比,Hela细胞转染pc DNA3.1-LGR5后细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著降低(P0.05),间质标记物vimentin、N-cadherin表达显著增加(P0.05)。与NC组相比,Hela细胞转染si LGR5后细胞中E-cadherin表达明显增加(P0.05),vimentin、Ncadherin表达明显下降(P0.05)。与pc DNA3.1组相比,Hela细胞过表达LGR5后细胞迁移侵袭能力、Wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin及其下游基因c-Myc、Cyclin D1表达均显著增加(P0.05);而Hela细胞沉默LGR5后较NC组细胞迁移侵袭能力、Hela细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达均明显降低(P0.05)。结论过表达LGR5能够促进宫颈癌细胞Hela上皮间质转化和侵袭迁移,而干扰LGR5则抑制了细胞上皮间质转化和迁移侵袭,其中机制可能与LGR5调控Wnt/β-catenin信号转导有关。     

分泌性白细胞蛋白酶抑制剂对结肠癌细胞侵袭的影响及机制

目的探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(secretory leukocyte protease inhibitor, SLPI)对结肠癌细胞侵袭能力的影响及可能分子机制。方法取对数生长期人结肠癌SW480细胞,随机分为SLPI过表达组(转染SLPI过表达质粒pCMV6-SLPI)、空白组(转染空载质粒)、抑制剂组(转染pCMV6-SLPI及特异性Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001);转染后培养24 h,采用流式细胞术检测3组SLPI阳性细胞率,采用Transwell小室法检测3组细胞侵袭能力,Western bolt法检测β-catenin、T细胞因子-4(T cell factor-4, TCF-4)蛋白相对表达量,ELISA法检测基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7, MMP-7)水平。结果转染后培养24 h,SLPI过表达组、抑制剂组SLPI阳性细胞率[(94.98±1.71)%、(93.88±2.43)%]均高于空白组[(25.70±2.39)%](P0.05),SLPI过表达组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);SLPI过表达组侵袭细胞数[(133.75±14.85)个]高于空白组[(107.75±7.54)个]、抑制剂组[(46.13±6.81)个](P0.05),空白组高于抑制剂组(P0.05);转染后培养24 h,SLPI过表达组β-catenin相对表达量(0.90±0.22)、TCF-4相对表达量(0.81±0.25)及MMP-7[(1 716.29±459.82)ng/L]水平均高于空白组[0.51±0.06、0.50±0.04、(1 386.07±542.53)ng/L]、抑制剂组[0.25±0.02、0.18±0.02、(174.96±55.57)ng/L](P0.05),且空白组高于抑制剂组(P0.05)。结论 SLPI通过活化Wnt/β-catenin通路促进MMP-7表达,增强结肠癌细胞侵袭能力。     

靶向沉默c-FLIPs基因表达对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响及机制

目的探讨抑制c-FLIPs基因表达对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR及Western blot分别检测膀胱癌组织及细胞中c-FLIPs基因的表达;si-c-FLIPs转染人膀胱癌T24细胞,同时转染正常对照组(normal)和阴性对照组(si-control),48 h后Western blot检测c-FLIPs、Cleaved caspase 8、β-链蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达;细胞计数试剂盒-8(CCK8)实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果膀胱癌组织及细胞中c-FLIPs基因的表达均显著高于癌旁组织(P0.01)。T24细胞中c-FLIPs基因的表达最高,选择作为研究对象;转染si-c-FLIPs后FLIPs的表达显著降低;si-c-FLIPs组细胞存活率及β-catenin和Cyclin D1蛋白表达显著低于normal组,细胞凋亡率及Cleaved caspase 8蛋白表达显著高于normal组(P0.01)。结论抑制膀胱癌中c-FLIPs基因表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞的凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

泼尼松联合CTX对IgA肾病患者疗效及肾功能指标的影响

目的探讨泼尼松联合环磷酰胺(CTX)治疗原发性免疫球蛋白A(IgA)肾病患者的疗效及对肾功能指标的影响。方法选取本院2013年6月至2015年6月收治的86例IgA肾病患者为研究对象,根据随机数字表将患者分为观察组及对照组各43例。对照组给予泼尼松治疗,观察组在对照组基础上应用CTX治疗,两组均持续治疗12周,对比分析两组患者治疗疗效、肾功能指标的变化。结果观察组总有效率为97.67%,对照组总有效率为79.07%,差异有统计学意义(P0.05)。观察组治疗后尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr),24h尿蛋白分别为(4.33±1.24)mmol/L、(85.36±5.85)mol/L、(1.89±0.24)g低于对照组[(6.32±2.02)mmol/L、(158.25±8.36)mol/L、(4.22±0.32)g],差异均有统计学意义(P0.05),而内生肌酐清除率(Ccr)(85.98±14.02)高于对照组(68.23±12.02),差异有统计学意义(P0.05)。观察组治疗后肾血管指数、肾小球指数、肾小管-间质指数积分及新月体指数分别为(2.12±0.96)分、(2.12±0.88)分、(2.02±0.85)分及0.22±0.08,均低于对照组[(3.02±0.85)分、(3.85±1.22)分、(3.12±0.96)分及0.48±0.10)],差异有统计学意义(P0.05)。两组患者不良反应率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论泼尼松联合CTX可提高IgA肾病患者临床治疗效果,改善患者肾功能,且不良反应率低,安全有效,值得临床推广应用。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对海水浸泡人肺上皮A549细胞水通道蛋白5的影响

目的 探讨水通道蛋白5(AQP5)在海水浸泡致细胞损伤中的变化,同时了解丹参酮Ⅱ A可能的作用机制.方法 体外传代培养肺腺癌细胞株A549细胞,接种于培养皿中,按不同海水含量分为空白对照组及15%、25%、50%、75%、100%海水组;以25%海水浸泡不同时间分为空白对照组及海水1、4、8 h组;按给予不同剂量丹参酮ⅡA干预分为空白对照组、25%海水组及25、50、75、100μg/ml丹参酮ⅡA干预4 h组.用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测AQP5蛋白表达;用免疫组化法检测AQP5阳性表达.结果 Western blotting结果显示,25%与50%海水组8 h时A549细胞AQP5蛋白表达均较空白对照组明显增高(1.053±0.231、1.116±0.316比0.101±0.081,均P＜0.05);海水1 h组AQP5表达较空白对照组稍有增加(0.306±0.125比0.288±0.098,P＞0.05),4 h组(1.423±0.377)明显增加(P＜0.01),8 h组AQP5表达(1.507±0.461)较4 h组略有增加,但差异无统计学意义;25μg/ml与50 μg/ml丹参酮Ⅱ A组4 h时AQP5蛋白表达较25%海水组明显减少(0.580±0.186、0.499±0.172比1.013±0.287,均P＜0.05).免疫组化显示,25%海水4 h组AQP5阳性表达较空白对照组明显增多(7.21±0.78比0.41±0.07,P＜0.01),染色变深;25μg/ml丹参酮ⅡA干预4 h组AQP5阳性表达(3.02±0.23)较25%海水4 h组明显减少(P＜0.05).结论 丹参酮Ⅱ A在25μg/ml浓度时毒副作用最小,对海水浸泡A549细胞的保护作用最佳,其机制可能与抑制AQP5的过度表达有关.

Abstract：

Objective To explore the effects of tanshinone Ⅱ A on the activity of aquaporin-5 (AQP5)in human alveolar epithelial cells (A549) after seawater exposure and its possible mechanism. Methods Routinely cultured A549 cells were divided into different groups according to different content of seawater:blank control group, 15%, 25%, 50%, 75%, 100% seawater groups; they were divided into different groups according to the duration of exposure to 25 % seawater : blank control group, 1, 4, 8 hours groups ;they were also divided into different groups according to concentration of tanshinone ⅡA and exposed to seawater for 4 hours: blank control group, 25% seawater group, 25, 50, 75, 100 μg/ml tanshinone ⅡA intervention groups. The expressions of AQP5 were respectively assayed by Western blotting and immunohistochemistry. Results The results of Western blotting showed that the expressions of AQP5 were remarkably higher at 8 hours of exposure to seawater in 25% and 50% seawater groups than those in blank control group (1. 053±0. 231, 1. 116±0. 316 vs. 0. 101±0. 081, both P＜0. 05); the expression of AQP5 in 1-hour group showed a slight increase compared with blank control group (0. 306±0. 125 vs. 0. 288±0. 098,P＞0. 05), that in 4-hour group was increased significantly (1. 423±0. 377, P＜0. 01), and in 8-hour group (1. 507± 0. 461 ) it was slightly higher than that in 4-hour group without statistical significance. The AQP5 expression was significantly lower in tanshinone ⅡA 25 μg/ml and 50μg/ml intervention groups than that in 25% seawater group (0. 580 ± 0. 186, 0. 499 ± 0. 172 vs. 1.013 ± 0. 287, both P ＜ 0. 05). Immunohistochemistry showed that the expression of AQP5 was markedly up-regulated after A549 cells were stimulated with 25% seawater for 4 hours as compared with blank control group (7.21±0. 78 vs. 0. 41 ±0.07, P＜0.01), but intervention of tanshinone ⅡA significantly inhibited the up-regulation of AQP5 expression (3.02±0.23) induced by 25% seawater (P＜0.05). Conclusion The experimental results showed that tanshinone ⅡA is innocuous to A549 at a dosage of 25 μg/ml, and it can decrease the overexpression of AQP5 induced by seawater.     

右美托咪定预处理对肝癌切除手术患者的肝缺血再灌注损伤的价值

目的探讨右美托咪定(Dex)预处理对于肝癌切除手术患者的肝缺血再灌注损伤的影响。方法前瞻性选取辽宁省朝阳市第二医院拟实施半肝切除手术治疗的95例原发性肝细胞癌患者作为研究对象,采用随机数字表法分为预处理组48例和常规组47例,预处理组手术前给予Dex 0.7μg/kg,10 min内输注完毕,后以0.4μg/(kg·h)维持至手术结束,常规组给予等量的0.9%氯化钠溶液。比较2组患者的手术时间、术中出血量、输血率、肝血流阻断时间及手术并发症。比较2组患者手术前、手术后24 h的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(STB)、结合胆红素(CB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 2组患者的手术时间、术中出血量、输血率、肝血流阻断时间比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。术前,预处理组和常规组患者的血清ALT、AST、GGT、STB、CB检测值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,预处理组患者的ALT、AST、GGT、STB、CB分别为(330.2±104.0) U/L、(367.1±110.8) U/L、(31.75±7.25) U/L、(65.20±11.35)μmol/L、(37.67±6.29)μmol/L,均低于常规组[(418.6±120.7) U/L、(440.8±127.6) U/L、(38.00±9.52) U/L、(74.18±13.37)μmol/L、(42.52±8.06)μmol/L],差异均有统计学意义(P <0.05)。术前,预处理组和常规组患者的血清MDA、SOD、TNF-α、CRP、HMGB1、IL-6检测值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,预处理组患者的血清MDA、TNF-α、CRP、HMGB1、IL-6分别为(4.36±1.33)μmol/L、(5.20±1.64)μg/L、(34.75±6.83) mg/L、(258.4±41.7)μg/L、(31.28±9.50)μg/L,均低于常规组[(5.11±1.57)μmol/L、(7.00±2.17)μg/L、(43.80±8.53) mg/L、(295.0±46.4)μg/L、(48.64±11.57)μg/L],预处理组的血清SOD[(126.9±25.0) U/L]高于常规组[(113.1±19.6) U/L],差异均有统计学意义(P <0.05)。预处理组患者的手术并发症发生率(12.50%)与常规组(21.28%)比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论原发性肝细胞癌患者实施半肝切除手术时,术前Dex预处理能显著减轻肝缺血再灌注损伤,保护肝脏功能。     

miR-802对叉头框转录因子M1抑制A549/DDP细胞顺铂耐药性的靶向调控作用

目的探讨miR-802抑制非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性及其对叉头框转录因子M1(forkhead box protein M1, FoxM1)的靶向调控作用。方法 A549、A549/DDP细胞采用反转录PCR法检测miR-802相对表达量。将A549/DDP细胞分为空白转染组和miR-802过表达组(过表达组),分别转染miR-NC和miR-802类似物(miR-802 mimics),转染24、48、72、96 h后,采用反转录PCR法检测2组细胞miR-802相对表达量,并采用CCK-8法检测2组细胞增殖率;转染48 h后,CCK-8法检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性,采用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率和细胞周期,采用Western blot法检测转染后A549/DDP细胞内FoxM1蛋白相对表达量。结果 A549/DDP细胞miR-802相对表达量(0.21±0.03)低于A549细胞(0.85±0.12)(P<0.05);转染24、48、72、96 h,过表达组细胞miR-802相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于空白转染组(P<0.05);转染48、72、96 h,空白转染组细胞增殖率依次增高(P<0.05),且均高于过表达组(P<0.05);转染48 h,过表达组细胞半数抑制浓度[(35.28±2.17)mg/L]和细胞早期凋亡率[(17.2±1.1)%]均高于空白转染组[(14.22±1.28)mg/L、(9.0±0.8)%](P<0.05),S期和G2/M期细胞比率[(21.30±0.20)%、(8.35±0.33)%]及细胞内FoxM1蛋白相对表达量(0.21±0.04)均低于空白转染组[(27.54±0.52)%、(14.67±0.70)%、0.44±0.06](P<0.05)。结论 miR-802可能通过抑制FoxM1表达而降低非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性。     

四川地区部分健康人群血清甲状腺激素参考区间的调查

目的初步调查四川地区部分健康人群血清总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(F4)、促甲状腺激素(TSH)的参考区间。方法按照美国国家临床生化学院检验医学应用准则中关于甲状腺疾病诊断与监测的实验室支持中的筛选要求,在四川地区筛选体格检查和相关实验室检查均正常的表面健康人群716例,其中男421例,女295例,年龄18~65岁。采集受检者空腹血清,使用美国雅培i2000全自动化学发光分析仪进行TT3、TT4、FT3、FT4、TSH的检测,比较不同性别、不同年龄间上述各种甲状腺激素水平。结果男性组TT3、TT4、FT3、FT4、TSH水平分别为(1.92±0.28)nmol/L、(87.65±15.89)nmol/L、(5.21±0.58)pmol/L、(13.73±1.70)pmoL/L、(2.49±1.45)mU/L,女性组分别为(1.87±0.38)nmol/L、(92.36±16.38)nmol/L、(5.07±1.12)pmol/L、(13.97±2.10)pmol/L、(3.02±2.05)mU/L,T4、TSH性别间差异有统计学意义(t_1=3.42、t_2=2.72,均P0.05);相关分析结果表明,T3、F3与年龄呈负相关(r_1=-0.12、r_2=-0.24,均P0.05)。TT3、TT4、FT3、FT4、TSH参考区间分别为(1.26~2.54)nmol/L、(50.38~119.63)nmol/L、(3.73~6.63)pmol/L、(10.41~17.33)pmol/L、(0.38~5.34)mU/L。结论四川地区人群血清甲状腺激素水平与进口试剂盒给定的参考区间有差异,建立四川地区甲状腺激素参考区间具有重要意义。     

腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿腹股沟疝的临床效果对比分析

目的探讨腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿腹股沟疝的效果差异。方法回顾性选取2018年1月至2020年1月重庆市南川区人民医院收治的接受腹腔镜疝修补术治疗的54例腹股沟疝患儿作为腔镜组,同期采用传统开腹手术治疗的35例腹股沟疝患儿作为传统组。比较2组患儿的手术时间、手术出血量、切口大小、术后下地时间、住院时间、术后2、4、12、24、48 h的疼痛视觉模拟疼痛评分法(VAS)评分、术前和术后24 h炎性应激指标[血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和手术并发症发生情况。结果腔镜组患儿的手术时间、手术出血量、切口大小、术后下地时间、住院时间分别为(18.5±3.2) min、(7.5±2.6) mL、(0.6±0.2) cm、(13.6±3.6)h、(3.7±1.0) d,均显著低于对照组[(23.7±4.6) min、(28.5±8.5) mL、(5.1±1.0) cm、(19.6±6.2) h、(5.6±1.7) d],差异均有统计学意义(P <0.05)。术后2~48 h,腔镜组患儿的VAS评分分别为(2.10±0.61)、(2.67±0.81)、(2.50±0.69)、(1.77±0.56)、(1.46±0.48)分,均低于同一时间点的对照组患儿[(2.78±0.84)、(3.28±0.95)、(3.40±0.86)、(3.11±0.74)、(2.50±0.67)分],差异均有统计学意义(P <0.05);术前,腔镜组与传统组患儿的血清CRP、IL-6、TNF-α水平比较,差异无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,腔镜组患儿的CRP、IL-6、TNF-α水平分别为(5.58±1.80) mg/L、(66.74±15.28) ng/mL、(28.67±8.78) ng/mL,均显著低于对照组[(10.30±3.17) mg/L、(87.50±18.40) ng/mL、(40.25±12.00) ng/mL],差异均有统计学意义(P <0.05)。术后腔镜组患儿的手术并发症率(1.85%)低于对照组(14.29%),差异有统计学意义(P <0.05)。结论与传统开腹手术相比,腹腔镜疝修补术治疗小儿腹股沟疝具有手术效果可靠、手术创伤小、术后恢复快、术后疼痛程度降低、并发症少的优势。     

进展期食管癌患者接受紫杉醇联合顺铂新辅助化疗后的肿瘤标志物及癌基因评价

目的 研究紫杉醇联合顺铂新辅助化疗对进展期食管癌患者肿瘤标志物分泌及癌基因表达的影响.方法 前瞻性选择2017年3月至2020年1月期间重庆市巴南区人民医院收治的50例进展期食管癌患者,随机数字表法分为紫杉醇联合顺铂新辅助化疗+根治性手术的观察组、直接接受根治性手术的对照组,每组各25例.确诊时及手术前,测定2组患者血...     

WIF-1对人骨肉瘤MG-63细胞中β-catenin表达的作用研究

目的： WIF-1是Wnt信号通路中最常见抑制因子之一,本实验研究WIF-1对人骨肉瘤MG-63细胞Wnt信号通路中β-catenin表达量的影响。方法细胞培养人骨肉瘤MG-63细胞,0 ng/ml浓度的WIF-1作为空白对照组,分别以0、48、60、80、120 ng/ml浓度的WIF-1刺激MG-63细胞,分别用FQ-PCR及Western blot法从基因水平、蛋白水平测定细胞中β-catenin的表达量;细胞培养人骨肉瘤MG-63细胞,用WIF-1刺激细胞,分别在第0、12、24、48、72、96 h对各组细胞进行计数,观察空白组及WIF-1刺激组细胞数目的变化情况。结果不同浓度（0、48、60、80、120 ng/ml）WIF-1刺激下,FQ-PCR法显示β-catenin mRNA的相对表达总量2-ΔΔCT分别为1、0.55±0.30、0.44±0.24、0.35±0.15、0.24±0.21。与空白组相比较,WIF-1刺激下β-catenin mRNA表达量均降低（P＜0.05）。随着WIF-1浓度的增加,β-catenin mRNA表达量下降,但组间的抑制作用无明显差别（P＞0.05）;Western blot法显示β-catenin/β-actin蛋白相对表达量分别为1.40±0.11、0.86±0.10、0.51±0.11、0.45±0.06、0.18±0.03;与空白组相比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白组及WIF-1刺激组细胞数目有差异,空白组细胞增殖情况优于WIF-1刺激组。结论 WIF-1可降低人骨肉瘤MG-63细胞Wnt信号通路中β-catenin表达量,并抑制人骨瘤MG-63细胞的增殖。     

流式细胞微球捕获技术检测肾移植受者外周血细胞因子的应用

目的 应用流式细胞微球捕获技术检测肾移植受者外周血细胞因子,分析其在巴利昔单抗应用前后、肾移植手术前后以及移植物排斥反应发生时的含量变化及临床意义.方法 72例肾移植受者根据术后移植物功能状况分为2组:肾功能稳定组53例,急性排斥反应组19例.根据巴利昔单抗使用与否分为2组:巴利昔单抗使用组32例,巴利昔单抗未使用组40例.采集72例肾移植受者术前、术后、急性排斥反应发生时和30名健康供者的外周血,应用流式细胞微球捕获技术分析IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-5、IL-4、IL-2共6种细胞因子含量.对肾移植供者与受者组、肾移植受者术后功能稳定组与急性排斥反应组、术后4周巴利昔单抗使用组与未使用组、巴利昔单抗使用前后细胞因子含量进行比较.结果 术前肾移植受者组外周血TNF-α、IL-10、IL-5、IL-4、IL-2分别为(1.65±0.10)、(2.55±0.19)、(1.88±0.14)、(1.85±0.12)、(2.12±0.09)ng/L,低于健康供者组的(3.04±0.17)、(3.33±0.26)、(4.03±0.25)、(2.73±0.16)、(4.03±0.26)ng/L,差异有统计学意义(t值分别为6.890、2.375、7.851、3.955、7.153,P值分别为<0.01、<0.05、<0.01、<0.01、<0.01);术前肾移植受者组IFN-γ含量为(2.50 ±0.18)ng/L,健康供者组为(3.00±0.24)ng/L,差异无统计学意义(t=1.625,P>0.05).肾功能稳定组IFN-γ、IL-10分别为(2.71±0.11)、(3.91±0.52)ng/L,低于急性排斥反应组的(3.30±0.36)、(12.01±5.35)ng/L,差异有统计学意义(t值分别为5.061、11.465,P值分别为<0.01、<0.05).使用巴利昔单抗的肾移植受者,在巴利昔单抗使用后IFN-γ、TNF-α和IL-10分别为(2.78±0.17)、(1.58±0.07)、(2.77±0.24)ng/L,与使用前的(2.90±0.21)、(1.67±0.12)、(2.45±0.16)ng/L比较,差异有统计学意义(t值分别为5.605、6.011、4.126,P值分别为<0.01、<0.01、<0.05).术后4周巴利昔单抗使用组IFN-γ、IL-10、IL-4分别为(2.90±0.31)、(9.08±0.16)、(2.73±0.11)ng/L,与未使用组的(3.28±0.11)、(4.17±0.21)、(2.11±0.20)ng/L比较,差异有统计学意义(t值分别为4.268、4.263、3.762,P值分别为<0.01、<0.01、<0.05).结论 流式细胞微球捕获技术使用微量标本可同时检测6种细胞因子.联合检测肾移植受者外周血中的细胞因子能够为临床诊疗提供更有意义的指导依据.     

泼尼松联合标准四联抗结疗法在结核性胸膜炎治疗中的应用价值

目的探讨泼尼松联合标准四联抗结疗法在结核性胸膜炎治疗中的应用价值。方法回顾性选取2010年8月至2017年8月陕西省结核病防治院结核内科收治的结核性胸膜炎患者986例,依据治疗方法分为试验组和对照组,每组各493例。试验组患者给予泼尼松治疗+标准四联抗结疗法治疗,对照组患者给予标准四联抗结疗法治疗,然后统计分析两组患者的临床疗效、胸水吸收时间、临床症状缓解时间、胸膜厚度、住院时间、胸膜肥厚粘连、并发症发生情况。结果在治疗的总有效率方面,试验组为92. 9%(458/493),对照组为82. 2%(405/493),前者显著高于后者,差异具有统计意义(P <0. 05)。试验组患者的胸水吸收时间、临床症状缓解时间、胸膜厚度、住院时间分别为(20. 3±4. 5) d、(9. 3±1. 8) d、(2. 2±0. 3) mm、(22. 5±4. 2) d,对照组患者的胸水吸收时间、临床症状缓解时间、胸膜厚度、住院时间分别为(27. 5±5. 3) d、(13. 6±2. 0) d、(2. 5±0. 4) mm、(30. 3±4. 4) d。试验组患者的胸水吸收时间显著短于对照组,临床症状缓解时间显著短于对照组,胸膜厚度显著小于对照组,住院时间显著短于对照组,差异均具有统计学意义(P <0. 05)。在胸膜肥厚粘连发生率方面,试验组为7. 1%(35/493),对照组为24. 9%(123/493),前者显著低于后者,差异具有统计学意义(P <0. 05);在并发症发生率方面,试验组为15. 0%(74/493),对照组为2. 4%(12/493),前者显著高于后者,差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论泼尼松联合标准四联抗结疗法在结核性胸膜炎治疗中的应用价值较单独标准四联抗结疗法高,更能有效提升患者治疗的总有效率,缩短患者的胸水吸收时间、临床症状缓解时间、住院时间,减小患者的胸膜厚度,降低患者的胸膜肥厚粘连发生率及并发症发生率,值得推广。