骨髓增生异常综合征骨髓造血细胞分化异常及相关机制探析

探讨骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes,MDS）骨髓造血细胞分化异常的原因及其相关机制。方法选取2010年1月～2012年12月新余市人民医院诊断的MDS患者34例,将所有患者分为低危组（n=11）和高危组（n=23）,并另选病例对照组（n=12）和正常对照组（n=15）,分别对他们进行相关指标测定。结果高危组CD-11b/CD＋11b比值明显高于其它3组,CD-16/CD＋16比值高于正常对照组和病例对照组,MFI（CD13）明显高于正常对照组,而MFI（SSC）明显低于病例对照组和正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论在临床的诊断中加强对骨髓造血细胞分化异常的诊断,有助于提高MDS患者诊断的可靠性。     

骨髓增生异常综合征患者Fas抗原的表达及临床意义

目的:探讨Fas(CD95)在骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制中的作用及临床意义。方法:用酶联免疫夹心法检测25例MDS患者血浆可溶性Fas(sFas),用流式细胞术检测骨髓(BM)CD34+细胞、CD34-细胞、外周血单个核细胞(PBMNCs)Fas抗原的表达。结果:MDS难治性贫血伴有原始细胞增多(RAEB)/转变中的RAEB(RAEB-t)组患者骨髓CD34+细胞百分率显著高于对照组及难治性贫血(RA)组(均为P<0.01);RA组及RAEB/RAEB-t组骨髓CD34+细胞Fas表达显著高于对照组(分别为P<0.01,P<0.05),其中RA组高于RAEB/RAEB-t组,有统计学意义(P<0.05);RA组患者骨髓CD34-细胞Fas表达高于对照组及RAEB/RAEB-t组患者(均为P<0.05)。两患者组血浆sFas显著低于正常对照(均为P<0.01),sFas水平与患者血红蛋白(Hb)浓度呈正相关(r=0.67,P<0.01)。结论:MDS患者骨髓、外周血细胞Fas抗原广泛表达,Fas表达异常与MDS的发生、发展密切相关。     

骨髓增生异常综合征CD7抗原的表达

目的 ＣＤ７的测定在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）的诊断及预后判断中的意义。方法 应用单克隆抗体采用间接免疫荧光法对３０例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）进行ＣＤ７的检测。结果 ＭＤＳ患者ＣＤ７抗原表达增高,而且随ＭＤＳ恶化,即由ＲＡ／ＲＡＳ向ＲＡＥＢ／ＲＡＥＢ－Ｔ转化,ＣＤ７抗原表达增高,易于转化为白血病。结论 ＭＤＳ患者ＭＮＣ表面ＣＤ７的检测有助于ＭＤＳ的诊断,也可协助预后判断。     

骨髓增生异常综合征患者Fas和FasL蛋白的表达及对造血祖细胞的影响

目的　探讨骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓细胞Fas(CD95 )及其配体 (FasL)的蛋白表达和作用。方法　采用免疫组化方法检测患者和正常对照组骨髓细胞Fas和FasL的表达。体外培养观察Fas免疫球蛋白(Fas Ig)及TNFα抗体对患者造血祖细胞集落形成的影响 ,酶联免疫吸附试验测定培养细胞的胞质DNA片段以观察凋亡情况。结果　①MDS患者 77% (2 0 / 2 6例 )表达Fas蛋白 ,81% (2 1/ 2 6例 )表达FasL蛋白 ,正常对照组无表达。②Fas、FasL表达与FAB分型有关 :Fas蛋白表达 ,难治性贫血 (RA)显著高于RA伴有原始细胞过多(RAEB)者、转变中的RAEB(RAEB t)和继发于MDS的急性髓细胞白血病 (postMDS AML) (RA >RAEB >RAEB -t >postMDS -AML) ,但RA患者的FasL表达最低。③体外培养发现 ,加入Fas Ig或TNFα抗体以阻断其途径 ,MDS患者粒细胞 巨噬细胞集落生成单位 (CFU GM)和红细胞集落生成单位 (CFU E)的集落形成显著增加 ,培养细胞的胞质DNA片段显著下降。结论　MDS骨髓细胞Fas和FasL的表达异常 ,并具功能活性。Fas、FasL可能是MDS凋亡机制之一     

骨髓增生异常综合征致血型抗原减弱一例

白血病引起血型抗原减弱已有较多报道。但骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ ＲＡＥＢ)引起血型抗原减弱报道较少。最近我们发现 1例 ,现报告如下。患者 ,男 ,44岁 ,汉族。临床诊断ＭＤＳ ＲＡＥＢ ,入院时检查血型为Ｏ型 ,并输注Ｏ型浓缩红细胞 4单位 ,无不良反应。否认有输血史。 4天后由于病情需要准备再输血 80 0ｍｌ,交叉配血时发现正反定型不一致 ,遂进行如下血清学检查。正反定型结果见表 1。表 1　患者ＡＢＯ血型检查结果红细胞正定型抗Ａ抗Ｂ抗Ａ、Ｂ抗Ｈ血清反定型Ａ细胞Ｂ细胞Ｏ细胞自身细胞ｍｆ -ｍｆ - - -　注 :ｍｆ为混合外观…     

骨髓增生异常综合征患者的骨髓微血管密度检测意义

目的：观察骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓微血管密度（MVD），分析微血管密度与MDS分型及治疗的关系。方法：MDS低危组25例，高危组21例及正常对照组20例，采用免疫组化法标记骨髓组织中血管内皮细胞。在光学显微镜下计数骨髓微血管数，取平均值为MVD。结果：治疗前低危组MVD为（18．26±2．62）／HP，高危组MVD为（25．75±3．27）／HP，对照组MVD为（8．10±2．93）／HP；低危组和高危组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．001）；低危组与高危组比较差异亦有统计学意义（P〈0．001）；低危组及高危组治疗后分别有36％和81％的患者MVD降低，两者对治疗的反应有明显差异。结论：骨髓增生异常综合征患者骨髓血管新生明显，MVD与MDS分型及疗效有密切相关。     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡的研究

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞凋亡改变,以探讨MDS疾病本质。方法采用TUNEL法检测42例MDS、11例巨幼细胞贫血(MegA)、8例阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、6例Evans综合征患者和10例正常健康对照组的新鲜骨髓单个核细胞(BMMNC)的凋亡情况。结果23例(54.8%)MDS患者BMMNC呈现凋亡过度,而MegA、PNH、Evans综合征患者与对照组比较无显著差异;且MDS患者凋亡累及粒、红、巨三系各阶段造血细胞,随病情进展,凋亡程度逐渐下降。结论MDS患者存在骨髓细胞过度凋亡,凋亡过度可能为导致MDS无效造血的机制之一,病情进展可能与异常克隆逃逸凋亡有关,抗凋亡治疗为早期MDS治疗提供了新思路。     

Expression and function of c-kit receptor in bone marrow mononuclear cells of patients with myelodysplastic syndromes

目的　了解骨髓增生异常综合征 (MDS)骨髓单个核细胞c kit受体的表达与功能。方法　采用免疫荧光方法测定c kit受体蛋白 (CD117)的表达 ;逆转录 聚合酶链反应方法测定c kitmRNA的表达 ;细胞培养检测c kit受体的功能。结果　CD117表达率正常人为 3 0 4 %± 1 4 9% ,MDS患者为 8 58%± 5 2 8% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;RA患者为 5 12 %± 2 13% ) ,RAEB RAEB t患者为 10 0 1%± 5 0 7% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;MDS继发白血病患者为 32 4 3%± 18 16 %。MDS患者c kit基因mRNA表达与CD117表达相一致。正常骨髓单个核细胞体外半固体培养 ,在加入造血干细胞因子、白细胞介素 3、红细胞生成素 (SCF IL 3 Epo)后形成的粒 巨噬细胞集落 (CFU GM)较仅加入IL 3 Epo显著增多 (P <0 0 5) ,红系爆式集落 (BFU E)数量极显著增多 ,且BFU E体积显著增大(P <0 0 1)。MDS患者在上述相同条件下CFU GM数量无明显变化 (P >0 0 5) ,与正常对照比较 ,CFU GM和BFU E数量均显著减少 (P <0 0 5)。结论　MDS患者骨髓单个核细胞CD117表达明显高于正常对照 ,且与病情进展相关 ;c kitmRNA表达与CD117表达相一致 ;MDS患者骨髓单个核细胞体外培养时 ,SCF协同IL 3、Epo促进造血干 祖细胞增殖分化能力较正常对照明     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面造血因子受体的表达

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面干细胞因子受体(SCF-R)、红细胞生成素受体(EpoR)、粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及血小板生成素受体(TpoR)的表达情况及其意义.方法 采用流式细胞术检测2008年7月至2010年3月天津医科大学总医院新诊断的45例MDS患者(17例低危患者、28例高危患者)及30名对照组原代骨髓CD34+CD38+及CD34+CD38-细胞亚群及其表面SCF-R、EpoR、G-CSFR及TpoR的表达率.结果 高危组CD34+细胞比例[0.53%(0.10%～1.68%)]明显高于对照组[0.13%(0.08%～0.32%),P＜0.01],其他2组间比较差异无统计学意义.低危组和高危组CD34+CD38+细胞比例(86.3%±8.5%、82.6%±11.1%)显著低于对照组(92.3%±3.4%,均P＜0.05),而CD34+CD38-细胞比例(13.7%±8.5%、17.4%±11.0%)显著高于对照组(7.7%±3.4%,均P＜0.05).对照组骨髓CD34+CD38+细胞亚群EpoR表达率(18.7%±18.3%)显著低于CD34+CD38-细胞亚群(63.6%±20.0%,P＜0.01),两亚群之间SCF-R、G-CSFR及TpoR表达率差异无统计学意义.在CD34+CD38+细胞亚群中,3组间SCF-R和TpoR表达率差异无统计学意义,而低危组和高危组EpoR的表达率[9.0%(1.4%～12.7%)、5.2%(1.1%～14.1%)]明显低于对照组[9.6%(5.1%～30.1%),均P＜0.05],G-CSFR的表达率(29.8%±19.1%、28.7%±21.1%)明显低于对照组(44.4%±23.4%,均P＜0.05);在CD34+CD38-细胞亚群中,3组间SCF-R和G-CSFR表达率差异无统计学意义,低危组和高危组EpoR的表达率(42.2%±21.9%、25.7%±15.6%)明显低于对照组(63.6%±20.0%,均P＜0.01),TpoR的表达率(5.4%±4.7%、4.1%±4.0%)明显低于对照组(10.1%±8.3%,均P＜0.05).MDS患者骨髓CD34+CD38+和CD34+CD38-细胞亚群表面受体表达率低的患者其外周血血红蛋白水平、中性粒细胞及血小板计数减低的发生率明显高于受体表达率不低的患者(均P＜0.05).结论 MDS患者的原代骨髓CD34+细胞亚群分化异常,膜表面部分造血细胞因子受体表达减低,这可能与MDS患者血细胞减少有关,有望用于辅助诊断MDS.

Abstract：

Objective To detect the abnormalities of differentiation and expression of membrane hemopoietic cytokine receptors on CD34 + bone marrow cells in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). Methods Forty-five newly diagnosed MDS cases from July 2008 to March 2010 in our hospitaland 30 normal controls were enrolled. There were 17 low-risk and 28 high-risk patients. The CD34 + CD38 +and CD34 + CD38- bone marrow cells and the expressions of stem cell factor receptor (SCF-R),erythropoietin receptor (EpoR), granulocyte colony-stimulating factor receptors (G-CSFR) and thrombopoietin receptor (TpoR) on those cells were measured by flow cytometry. Results The mean percentage of CD34+ in karyocyte of MDS cases in high-risk patients [0. 53% (0. 10% - 1.68% )] was significantly higher than that of control group [0. 13% ( 0. 08% - 0. 32% ), P ＜ 0. 01] . The mean percentages of CD34 + CD38 + cells were significantly lower in low and high-risk groups (86. 3% ± 8.5% and 82. 6% ± 11.1% ) than those in control group (92. 3% ± 3.4% ). And the percentage of CD34+ CD38-cells was significantly higher in either low-risk or high-risk group ( 13.7% ±8. 5% and 17.4% ± 11.0% )than that in control group (7.7% ± 3.4%, both P ＜ 0. 05 ). In control group, the mean percentage of antigen expression of EpoR was significantly lower in CD34 + CD38 + cells than that in CD34 + CD38 - cells ( 18.7% ± 18. 3% vs 63. 6% ±20. 0%, P ＜0. 01 ). The expressions of SCF-R, G-CSFR and TpoR were not significantly different between two cell populations. The expressions of EpoR on CD34 + CD38 + cells of low and high-risk MDS groups [9.0% ( 1.4% - 12. 7% ), 5. 2% ( 1.1% - 14. 1% )] were significantly lower than those of control group [9. 6% (5.1% - 30. 1% ), both P ＜ 0. 05]. The expressions of G-CSFR on CD34+CD38+ cells of low and high-risk MDS groups (29.8% ± 19. 1%, 28.7% ± 21.1%) were significantly lower than those of control group (44.4% ± 23.4%, both P ＜ 0. 05 ). The quantities of EpoR on CD34 + CD38 - cells of low and high-risk MDS groups ( 42. 2% ± 21.9%, 25.7% ± 15. 6% ) were significantly lower than those of control group ( 63. 6% ± 20. 0%, both P ＜ 0. 01 ). The expressions of TpoR on CD34+ CD38- cells of low and high-risk MDS groups (5.4% ± 4.7%, 4.1% ± 4.0%) were significantly lower than those of control group ( 10. 1% ± 8. 3%, both P ＜ 0. 05 ). The incidence of cytopenia with low expression rates of hemopoietic cytokine receptors on CD34 + cells was higher than that of MDS with high expression rates. Conclusion The abnormalities of differentiation and membrane hemopoietic cytokine receptors expression of CD34 + bone marrow cells in MDS are associated with MDS cytopenia and may be useful for the diagnosis of MDS.     

骨髓增生异常综合征40例的临床分析

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者的临床特点,以利于临床诊断和治疗。方法对2001年1月~2011年10月在我院住院的MDS患者40例的临床资料进行回顾性分析。对本组资料中收集的难治性贫血(RA)20例、环形铁粒细胞性难治性贫血(RAS)2例、难治性贫血伴有原始细胞增多(RAEB)12例、难治性贫血伴原始细胞增多转变型(RAEB-T)6例分别进行化疗治疗,观察其治疗效果及各亚型的转归情况,以及外周血常规变化。结果 40例MDS患者中,基本缓解12例,明显进步10例,进步7例,无效11例。其中,11例转化为急性白血病(AL),占27.5%,从诊断MDS之日起转化为AL的平均时间为23.4个月。RA型血红蛋白[(69.3±23.4)g/L vs(52.6±20.1)g/L)]、白细胞数[(3.5±1.3)×109/L vs(2.2±0.5)×109/L]治疗后较治疗前明显升高(P<0.01);治疗前RAS[(4.7±2.1)×109/L]、RAEB[(5.4±2.6)×109/L]、RAEB-T[(14.2±7.0)×109/L]的白细胞数明显高于RA[(2.2±0.5)×109/L](P<0.01),但治疗后差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MDS的治疗效果及转归与其亚型有关,对MDS进行治疗应根据各亚型患者的年龄、转归情况、骨髓病态造血程度等进行综合分析,采用个体化治疗的原则,以提高患者的治疗效果。     

骨髓增生异常综合征骨髓巨核细胞的观察

目的通过对骨髓增生异常综合征（MDS）各型中骨髓病态巨核细胞的观察,探讨其在MDS诊断和分型中的作用。方法对67例MDS患者骨髓片中的巨核细胞进行分类,比较及分析。结果高危亚型组和中危亚型组各类病态巨核细胞检出率均明显高于低危亚型组（P〈0.05）。结论髓象中各种病态巨核细胞检出率大小与MDS病态造血程度呈正相关性,对MDS的诊断和分型有重要意义。     

AA、MDS和AML患者CD4~+T细胞亚群的变化及其临床意义

目的探讨CD4+T细胞亚群(Th1、Th2、Th17及Treg细胞)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)患者免疫发病机制中的作用,为临床治疗提供实验依据。方法采用流式细胞术检测AA组25例,MDS组48例[其中难治性贫血(MDS-RA)22例,难治性贫血伴原始细胞增多(MDS-RAEB)26例],AML组12例和正常对照组8例的外周血单个核细胞Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例并对比分析,评价各组的细胞免疫状态。结果与正常对照组相比,AA组Th1、Th17细胞及Th1/Th2升高,而Th2和Treg细胞比例减低(P<0.05);MDS组Th1、Th2细胞、Th1/Th2与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),而Th17和Treg细胞比例升高(P<0.05);MDS-RA组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2均升高(P<0.05),Th2细胞比例减低(P<0.05),而Treg细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);MDS-RAEB组和AML组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2减低(P<0.05),Th2和Treg细胞比例升高(P<0.05)。结论 AA、MDS不同阶段与AML患者的细胞免疫状态不同,在AA和MDS早期阶段,免疫因素介导的凋亡过度是骨髓衰竭的主要原因;而在MDS晚期和AML阶段,异常克隆细胞的大量积聚可能是其主要原因。     

骨髓细胞多向分化潜能的初步研究

目的：探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法：将C57－TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠，重建受体鼠骨髓，然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-cre基因的分布及表达情况。结果：PCR和免疫组化分析结果均显示，供体细胞的两个标志sry及Mx-cre在受体鼠的肝脏，肾脏，皮肤，脾脏等多个器官中都有表达。结论：骨髓细胞不仅可以重建受致死剂量照射受体鼠的造血系统，而且具有分化为肝脏，肾脏，皮肤，脾脏等组织细胞类型的多向潜能性。     

淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:探讨淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪鉴定表面标志。取第3代细胞加入10-6mol/L淫羊藿苷培养基,对照组仅加入等量普通培养基进行培养。通过镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞表面标志,碱性磷酸酶试剂盒测定诱导细胞碱性磷酸酶活性,组织化学染色观察钙化结节形成能力。结果:体外培养的细胞表达CD29、CD44、CD105、CD166。淫羊藿苷诱导组细胞碱性磷酸酶呈阳性反应并有钙化结节形成,而对照组未见钙化结节形成。结论:淫羊藿苷能够诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,可视为一种良好的骨诱导活性因子。     

人骨髓间充质干细胞体外定向分化为心肌细胞的实验研究

目的：建立人骨髓间充质干细胞（MSCs）体外定向分化为心肌细胞的实验模型。方法：取6个月水囊引产胎儿股骨骨髓,Percoll分离液分离,取单个核细胞层在人MSCs专用MSCGM培养基中体外培养。将第3代生长状态良好的MSCs用10μmol／L 5-氮胞苷孵育诱导24h,继续向心肌细胞诱导分化。结果：用Percoll分离液（1．073g／ml）分离得到的单个核细胞48～72h呈纺锤形、梭形、多角形的多型性改变;经5-氮胞苷孵育24h,细胞逐渐向梭形心肌细胞样形态转变,胞浆中可见棕黄色颗粒。结论：MSCs在体外经5-氮胞苷孵育24h,可被定向诱导分化为心肌形态的细胞。     

小儿骨髓增生异常综合症(MDS)13例临床分析

目的：探讨小儿骨髓增生异常综合症(MDS)的实验室检查特征及临床特点。方法：对13例诊断为MDS患儿的外周血、骨髓像及临床表现进行回顾性分析：结果：13例患儿11例为男性，2例女性。临床以发热、贫血、肝脾肿大为主要表现。13例患儿均为中重度贫血，外周血见有核红细胞，白细胞表现为增高、正常或减低。4例患儿外周血见幼稚细胞，血小板可正常或减低，网织红细胞多数偏高。骨髓均增生活跃，有红系或粒系病态造血，以巨幼样改变为主；诊断为RA10例，RAEB2例，RAEB-t1例。结论：小儿MDS诊断仍主要靠骨髓检查，骨髓至少一系出现病态造血，巨幼样改变较易见，并除外其他引起病态造血的疾病，需注意和再障相鉴别：