白色念珠菌体外人工诱导耐药模型的建立

目的：研究白色念珠菌耐药性产生的过程,建立白色念珠菌的体外耐药模型。方法：采用最低抑菌浓度（MIC）倍倍增加方法对白色念珠菌标准菌株和临床分离敏感菌株进行氟康唑和氟康唑加阿苯达唑（2 mg·L^-1）2种不同诱导途径的体外耐药性 诱导,得到的耐药子代在无药酵母抽提物蛋白胨葡萄糖（YEPD）液体培养基中进行传代培养,观察MIC的变化情况。结果：经2种不同途径进行耐药性诱导,受试菌株均获得耐药性,但其耐药程度不同;耐药 子代经过42 d的无药传代后MIC值无明显变化。 结论：通过体外人工诱导获得了白色念珠菌氟康唑耐药模型,并且该获得性耐药稳定性较好;阿苯达唑可促进耐药性的产生。     

香莲外洗液对白念珠菌阴道分离耐药株的实验研究

[目的]探讨香莲外洗液诱导白念珠菌阴道分离耐药株恢复对氟康唑的敏感性.[方法]香莲外洗液作用于白念珠菌阴道分离耐药株,采用肉汤微量稀释法测定氟康唑对原代及每代菌株的最低抑菌浓度(MIC)值,从而判断白念珠菌阴道分离耐药株恢复对氟康唑敏感所需的代数.[结果]经香莲外洗液作用后,临床耐药菌株A1～A10分别于第8、5、6、7、10、5、7、8、6、7代恢复对氟康唑敏感,而无香莲作用的耐药试验菌株白念珠菌A1～A10则分别在第19、14、15、12、17、12、17、19、14、17代恢复对氟康唑敏感.[结论]香莲外洗液能较快诱导临床耐药白念珠菌恢复对氟康唑的敏感性.     

白念珠菌分泌性蛋白酶活力与其对氟康唑耐药性之间关系的研究

目的研究白念珠菌分泌性蛋白酶（Sap）活力与其对氟康唑耐药性之间的关系。方法将对氟康唑敏感的白念珠菌培养在含氟康唑浓度逐渐增加的液体培养基中，体外诱导为氟康唑耐药株；运用牛血清白蛋白培养基（BSA）的方法测定了对氟康唑敏感的白念珠菌和对氟康唑耐药的白念珠菌的分泌性蛋白酶活力。结果40株对氟康唑敏感的白念珠菌均在体外被成功的诱导成为对氟康唑耐药的耐药株。耐药株的分泌性蛋白酶活力明显强于敏感株（P〈0．001）。结论白念珠菌Sap活力的增加与其对氟康唑耐药性增加是一致的。     

白念珠菌CDR1基因上游调控序列与氟康唑耐药的关系初探

目的探讨白念珠菌耐药基因CDR1基因上游调控序列对氟康唑耐药的影响。方法分别抽提氟康唑耐药／敏感配对菌株DNA,通过特异性合成CDR1基因上游调控序列引物,分析该序列在氟康唑耐药／敏感配对菌株中是否存在基因突变。结果白念珠菌氟康唑耐药／敏感配对菌株中的CDR1基因上游调控序列未出现任何碱基突变和缺失。结论白念珠菌氟康唑耐药与CDR1基因上游调控序列是否突变无关。     

ABC转运蛋白与临床白念珠菌耐药

目的:研究临床氟康唑耐药白念珠菌中CDR1和CDR2基因的表达情况与耐药性产生的关系,探寻临床白念珠菌耐药的分子机制.方法:微量液基稀释法测定氟康唑对白念珠菌临床分离株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);实时定量PCR(RQ-PCR)方法检测主动外排泵基因CDR1和CDR2的表达水平;用罗丹明6G(Rhodamine 6G)外转运实验检测罗丹明6G在CDR1、CDR2高表达的白念珠菌中的外排情况.结果:氟康唑耐药组菌株CDR1和CDR2高表达发生率显著高于敏感组菌株;而在加入葡萄糖提供能量后,CDR1和CDR2蛋白发生高表达的耐药菌株罗丹明6G外排能力显著增加.部分耐药菌株中未见CDR1和CDR2的高表达.结论:白念珠菌临床分离株对氟康唑的耐药性与ABC转运蛋白过度表达相关;ABC转运蛋白的高表达可以使药物外排能力增加,从而导致耐药性产生.同时可能有其他机制参与临床白念珠菌耐药性的生成.     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

 【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌,其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠菌。选择1个随机引物(引物1251),采用任意引物PCR方法基因分型,将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4.0软件转化为数值图表,利用SPSS11.5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71.7%,而其中7株的耐药菌相似系数高达86.7%,远高于58株菌的平均相似系数(47.3%)。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。【结论】基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带,但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌。其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠茵。选择1个随机引物（引物1251），采用任意引物PCR方法基因分型。将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4．0软件转化为数值图表，利用SPSS11．5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定，多态性丰富，可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71．7％，而其中7株的耐药菌相似系数高达86．7％，远高于58株菌的平均相似系数（47.3铆。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。[结论]基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带。但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

肾移植术后患者白念珠菌分离株的唑类药物敏感性观测

目的 了解肾移植术后患者分离的白念珠菌对唑类药物的敏感性。方法 参照美国国家临床实验标准委员会(NCCLS)公布的M27-A方案微量稀释法，对我院近年的19株肾移植术后患者的白念珠菌临床分离株进行氟康唑和伊曲康唑药物的敏感性观测。结果 19株临床分离株中，发现氟康唑耐药株7株，敏感株8株，剂量依赖的敏感菌株4株；伊曲康唑耐药株9株，敏感株8株，余2株为剂量依赖的敏感菌株。结论 目前肾移植患者人群白念珠菌分离株存在严重的唑类药物耐药，而且氟康唑和伊曲康唑之间也存在交叉耐药。     

氟康唑与5-氟胞嘧啶体外联合抗白念珠菌临床分离株的研究

目的评价白念珠菌临床分离株对氟康唑和5-氟胞嘧啶联合用药的敏感性及判断两药物之间相互作用的方式。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）M27-A推荐的棋盘微量稀释法,检测了30株白念株菌临床分离株对氟康唑、5-氟胞嘧啶及两药联合的体外药物敏感性,同时对两药的作用方式进行判定。结果联合用药时显著减少了每一药物MIC值的几何均数,在40％受试菌表现为协同作用方式,在53．3％的受试菌株表现为相加作用方式,在6．7％受试菌株表现为无关作用方式,未观察到拮抗作用出现。结论氟康唑和5-氟胞嘧啶联合比单一药物体外抗白念珠菌的活性高。     

白念珠菌对氟康唑耐药性的研究

目的:探讨白念珠菌对氟康唑耐药性的产生是否有适应性突变的因素.方法:选择对氟康唑敏感的白念珠菌野生Y0109株,将其在含8 μg/ml氟康唑的沙堡固体培养基上进行漂移试验诱导培养,计数其生长出的菌落并根据Cairns的理论进行曲线拟合.结果和结论:拟合出的曲线基本符合Poisson曲线分布特点,根据Cairns的适应性突变理论及判定方法,初步证实白念珠菌对氟康唑耐药主要是因药物本身的后天诱导作用,使该敏感白念珠菌发生了适应性突变而成为耐药菌株.     

阴道白念珠菌毒力因子表达水平及与耐药的相关性

目的 了解复发性念珠菌性阴道炎（RVVC）患者与阴道白念珠菌定植者的阴道白念珠菌的生物膜、水解酶和菌丝壁蛋白1(HWP1)基因等毒力因子的体外表达水平及其耐药性,初步探究白念珠菌致病性和耐药性与毒力因子之间的关系,为进一步探明白念珠菌引起的RVVC的致病和耐药机制提供资料。方法 前瞻性收集分离来源于成年女性RVVC患者和阴道白念珠菌定植者的100株阴道白念珠菌,采用酵母样真菌药物敏感性试剂盒检测对5种常用抗真菌药物的敏感性,采用结晶紫染色法检测其生物膜形成能力,采用牛血清白蛋白平板、卵黄琼脂平板和三丁酸甘油脂平板检测阴道白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶（SAP）、磷脂酶（PL）和脂肪酶（Lip）的活性,采用实时荧光PCR检测HWP1基因的表达。结果 5种常用抗真菌药物中至少1种耐药的白念珠菌RVVC患者来源有13株,阴道定植者来源有10株;RVVC患者来源菌株的生物膜、3种分泌型水解酶和HWP1基因体外表达水平均高于阴道定植者来源菌株（均P<0.05）,两组在生物膜形成强弱、3种水解酶表达高低等定性角度,差异均有统计学意义（均P<0.05）;耐药性菌株生物膜表达水平高于非耐药性...     

外阴阴道念珠菌病白念珠菌基因型和抗真菌药物敏感性研究

目的 探讨外阴阴道念珠菌病(VVC)白念珠菌基因多样性与抗真菌药物敏感性的关系.方法 采用最近开展的CAI微卫星法聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术鉴定VVC患者白念珠菌的基因型,采用E-test法对检出的念珠菌进行体外药敏试验.结果 从VVC患者分离出89株白念珠菌,鉴定出26种基因型.白念珠菌对两性霉素B、氟胞嘧啶、酮康唑和氟康唑敏感.主要基因型(A、B、C、D)占69.7%(62/89),白念珠菌B基因型菌株及非B基因型菌株对伊曲康唑(ITR)的耐药率分别为66.7%(14/21)和4.4%(3/68),差异有统计学意义(P<0.05).结论 PCP-SSCP技术有利于研究白念珠菌对抗真菌药物的耐药机制.白念珠菌B基因型菌株对ITR有更高的耐药性.     

耐药白念珠菌主动外排泵蛋白的功能与基因表达

目的:研究耐药白念珠菌主动外排泵蛋白的功能及其基因表达情况.方法:微量稀释法测定4种抗真菌药物对20株白念珠菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);检测罗丹明分别在对氟康唑敏感和耐药的白念珠菌中的外排情况,筛选出罗丹明6G外排明显增加的耐药菌株;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测主动外排泵基因CDRI和CDR2的表达水平.结果:在加入葡萄糖提供能量后,有些对氟康唑耐药的菌株外排罗丹明6G增加,而在这些菌株中,主动外排泵基因CDR1和CDR2的表达水平均显著高于敏感株.结论:白念珠菌对氟康唑的耐药性与主动外排泵基因过度表达相关;测定白念珠菌中罗丹明6G的外排情况,是筛选主动外排泵基因过度表达的耐药菌株的一种有效方法.     

微量稀释法检测四种药物对白念珠菌的敏感性分析

[目的]探讨特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑、制霉菌素体外抗口腔念珠菌的敏感性.[方法]采用NCCLS公布的M-27A方案微量液体稀释法分别测定特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑、制霉菌素对38株临床分离的口腔念珠菌的体外敏感性.[结果]38株白念珠菌对氟康唑耐药4株,敏感34株;对伊曲康唑耐药5株,敏感33株;对特比奈芬耐药15株,敏感23株;制霉菌素均敏感.[结论]4种药物中氟康唑的敏感性相对较高,但仍有耐药现象,且氟康唑与伊曲康唑存在交叉耐药.     

130例深部真菌感染患者血液中病原菌分布及耐药性情况分析

摘要：目的了解深部真菌感染患者血液中病原菌的分布及耐药性情况。方法对2007年1月至2012年10月在本院诊治的130例深部真菌感染患者的血液实验室检查资料进行回顾性分析。结果分离白念珠菌41株（31．54％）、热带念珠菌29株（22．31％）、近平滑念珠菌26株（20．00％）、马尔尼菲青霉14株（10．77％）、光滑念珠菌13株（10．00％）,新生隐球菌4株（3．08％）,烟曲霉、镰刀菌和季也蒙念珠菌各1株（0．77％）。人组分析患者多存在血液病、恶性肿瘤、肺部感染等基础性疾病。耐药性分析显示,除有1株菌株对氟康唑耐药外,未发现对两性霉素B、伏立康唑和伊曲康唑耐药的菌株。结论 白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌为主要的感染病原菌,分离菌株未发现严重的耐药现象。重症监护病房、儿科、外科及血液科应该重视患者深部真菌感染并及时给予检查治疗。     

我院近5年深部真菌感染与耐药现状调查

目的了解近5年来真菌感染及其耐药情况。方法收集5年来临床分离的真菌219株，对常见菌株进行5种抗真菌药物的体外敏感试验。结果临床真菌感染部位以呼吸道感染居多，为146株，其次来自泌尿道37株，肠道27株，口咽部6株，血液2株，脑脊液1株。菌种分布以白色念珠菌最多，占54．8％；其次为热带念珠菌，占15．5％，光滑念珠菌，占11．0％；其他真菌分离率均〈10．0％。对5种常用抗真菌药进行耐药分析显示氟胞嘧啶、两性霉素B对念珠菌相对3种唑类药物分别具有较低的耐药率（P〈0．01）。克柔念珠菌对氟康唑和酮康唑的耐药菌株均占到30％以上，是耐药性较强的念珠菌。结论深部真菌感染及耐药性呈逐年上升趋势，唑类抗真菌药物已呈明显耐药，采用有效防治措施刻不容缓。     

热带念珠菌靶位酶基因变异与氟康唑耐药的关系

目的探讨热带念珠菌靶位酶(ERG11)基因的改变与氟康唑耐药的相关性。方法根据热带念珠菌ERG11基因序列设计引物,以标准株为对照,对临床分离的耐药株、剂量依赖株(S-DD)和敏感株进行靶位酶ERG11基因PCR扩增,测序之后比对分析标准株,耐药株、剂量依赖株和敏感株的序列差异,分析靶位酶基因改变与氟康唑耐药的相关性。结果热带假丝酵母氟康唑敏感株与敏感标准株序列一致;而S-DD株中出现T783C和G1362A沉默突变;耐药株中出现碱基序列T225C、C461T、G1362A等3种突变点,并导致丝氨酸(S)154苯丙氨酸(F)氨基酸突变。结论热带念珠菌靶位酶ERG11基因氨基酸序列的突变与氟康唑耐药有一定的相关性。     

临床标本的酵母样真菌分布及药敏分析

目的:探讨各种临床标本的酵母样真菌分布及常用抗真菌药氟康唑(大扶康)的耐药性.方法:收集2003年1月至2003年12月份临床标本怀疑真菌感染患者的标本分离菌株334株,用纸片扩散法测定其耐药性.结果:各种标本真菌感染以白色念珠菌和热带念珠菌为主,氟康唑(大扶康)对白色念珠菌的耐药率为1.3％,对热带念珠菌的耐药率为8.8％,对光滑念珠菌的耐药率为40％,对克柔念珠菌的耐药率为25％.结论:真菌感染已成为临床标本中的常见感染,而且耐药率也在逐渐增高,尤其是光滑念珠菌和克柔念珠菌,对氟康唑(大扶康)的耐药率分别为40％和25％.应引起临床和医院管理者的高度重视.     

敏感和耐药白念珠菌磷脂酶活力与其毒力关系的研究

目的：探讨白念珠菌氟康唑耐药和敏感菌株磷脂酶活力与菌株毒力之间的关系。方法：根据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）制订的M27-A方案筛选临床分离的白念珠菌氟康唑耐药（MIC＞64μg/ml）及敏感菌株（MIC＜8μg/ml）各15株。用蛋黄平板法培养氟康唑耐药及敏感菌株,测量其产生沉淀圈的大小,计算菌落直径与沉淀圈直径的比值(PZ值),比较两组间磷脂酶活力的不同。从敏感和耐药菌株中分别选取磷脂酶活力不同的菌株,通过尾静脉注射感染小鼠,以小鼠平均存活时间比较耐药和敏感菌株毒力的不同。结果：15株耐药菌中12株产生特异沉淀圈,PZ值为0.786±0.055;敏感菌株中8株无特异沉淀圈,PZ值为0.913±0.078。耐药组和敏感组小鼠平均存活天数分别为(10.22±2.44)d和(12.83±1.51)d。耐药和敏感菌株磷脂酶活力差异有统计学意义（P＜0.01）;两组小鼠平均存活期差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：耐药菌株磷脂酶活力及毒力高于敏感菌株,白念珠菌分泌的细胞外磷脂酶活力及菌株致病性与白念珠菌耐药发生有一定关系。     

贵州地区149株临床白念珠菌对抗真菌药物的敏感性

目的：探讨贵州地区临床不同来源白念珠菌的25S rDNA基因分型与抗真菌药物敏感性的关系.方法：采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）制定的M27-A3方案中的酵母菌微量稀释法,检测贵州地区149株临床白念珠菌对常见抗真菌药物的敏感性.结果：149株白念珠菌均对两性霉素B敏感,对5-氟胞嘧啶、氟康唑的敏感率分别为96.64％和93.96％,而对伊曲康唑的敏感率较低为46.31％;外阴阴道念珠菌病（VVC）来源菌株对伊曲康唑敏感性低于深部组织感染菌株;各25S rDNA基因型别的白念珠菌对4种抗真菌药物的敏感性差异无统计学意义.结论：贵州地区白念菌株对伊曲康唑的敏感性较低,这些不敏感菌株多数来源于外阴阴道念珠菌病,贵州地区白念珠菌25S rDNA基因型别在4种抗真菌药中的耐药率无差别.