肾小管损伤时内皮素1、肿瘤坏死因子α的表达及其对离体肾间质成纤维细胞的影响

目的　研究内皮素１（ＥＴ１）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦα） 在肾小管上皮细胞的表达、肾小管的损伤及它们对肾间质成纤维细胞的影响。方法　应用肾小管上皮细胞及肾间质成纤维细胞的体外培养;建立肾小管损伤动物模型;应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 、免疫组化ＳＰ法染色、放射免疫测定（ＲＩＡ） 及双重免疫组织化学染色技术,并测定３ＨＴＤＲ 掺入率。结果　肾小管上皮细胞既有ＥＴ１ｍＲＮＡ和ＴＮＦαｍＲＮＡ 的表达（ＲＴＰＣＲ的扩增片段分别为５４６ ｂｐ 和４１５ ｂｐ） ,还有ＥＴ１ 及ＴＮＦα的蛋白合成及分泌;细胞培养上清中ＥＴ１ 和ＴＮＦα含量分别为１．４２ ｐｇ／ｍｌ 和０ ．５８ ｎｇ／ｍｌ;且肾小管损伤及再生过程中,ＥＴ１ 及ＴＮＦα表达增加。对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞分别加入ＥＴ１ 、ＴＮＦα,３ＨＴＤＲ掺入率较对照组明显增高（ Ｐ＜ ０．０５）;并证明肾间质成纤维细胞有ＥＴ受体（ＥＴＲ） ｍＲＮＡ及ＴＮＦ受体（ＴＮＦＲ１） ｍＲＮＡ的表达（ＲＴＰＣＲ 扩增片段分别为５４４ ｂｐ 和３４７ ｂｐ）。结论　损伤及再生的肾小管上皮细胞较正常时合成和分泌更多的ＥＴ１ 和ＴＮＦα,ＥＴ１ 及ＴＮＦα分别     

水通道蛋白在急性实验染毒大鼠肾脏的表达及意义

目的观察水通道蛋白(AQPs)在正己烷急性染毒SD大鼠肾脏中的变化,结合观察损伤相关细胞因子TNF-α与EGFR的表达特征,初步探讨AQPs在实验染毒大鼠肾脏中的表达及其对自身修复的意义。方法建立SD大鼠正己烷急性染毒模型,取各组SD大鼠的肾脏,用4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,切片厚度5μm,供HE染色和免疫组化。用免疫组化S-P法,检测AQPs(AQP1、AQP2和AQP4)以及损伤相关细胞因子TNF-α和EGFR在各组SD大鼠肾脏中的表达。结果①各组SD大鼠肾脏微细结构均达到受损要求。②免疫组化检测:AQP1反应位于肾脏近端小管上皮,尤其在顶质膜上呈明显增强;AQP2在集合管上皮表达也呈增强态势;AQP4在集合管基侧膜上却表达逐渐减弱。EGFR在肾脏集合管和远端小管上皮的表达,呈增强态势;TNF-α在集合管和远端小管表达也增强。结论正己烷染毒致SD大鼠肾脏结构明显受损,肾脏中AQPs的免疫组化表达也有明显的改变;正己烷中毒致肾脏中AQPs改变,对肾的尿液浓缩功能造成影响,甚至导致肾功能衰竭;肾脏损伤后,AQPs通过与相关活性因子TNF-α和EGFR等的协调作用,参与自身的修复与再生过程。     

水通道蛋白家族成员AQP2的研究进展

AQP2(又称collecting duct aquaporin,AQP-CD)是1993年被克隆确认的水通道蛋白(aquaporin,AQP)家族中的一种,位于肾集合管主细胞管腔侧和靠近管腔侧的囊泡内,是加压素(vasopressin)依赖性水通道.调节方式分为短期调节和长期调节两种,其调控机制的异常与先天性尿崩症、继发性尿崩症、中枢性尿崩症以及其它一些容易发生细胞外液增加的疾病有关.     

腰痹舒干预腰椎间盘退变模型兔髓核组织水通道蛋白1、水通道蛋白3的表达

BACKGROUND: The aging and lesions of the intervertebral disc are closely related to the lack of nutritional blood supply to the disc. Aquaporin plays an important role in the nutritional supply to the intervertebral discs, but the specific mechanism has not been fully defined.     

水通道蛋白5在大鼠大脑组织中的分布及表达

目的:观察水通道蛋白5(AQP5)在大鼠脑组织中的分布和表达,为研究脑组织中水分子的运输和平衡机制提供形态学基础。方法:运用免疫组织化学和免疫荧光技术,观察正常成年Wistar大鼠脑组织中AQP5的分布;运用免疫印迹观察AQP5的表达,并与AQP4在脑组织的分布和表达进行比较。结果:AQP5分布于大脑皮质的软脑膜、脉络丛、血管周围、海马锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层、视上核、视交叉上核内和大脑纵裂两侧皮质深部,与AQP4分布范围相似;除此以外,AQP5还独自分布于大脑皮质下神经细胞。免疫印迹显示AQP5表达明显弱于AQP4。结论:AQP5在大鼠脑组织中分布广泛,可能协同AQP4在脑组织水运输平衡,脑脊液产生与回流及渗透压的调节过程中,发挥重要作用。     

镇眩汤对大鼠梅尼埃模型水通道蛋白1表达的影响

目的探讨中药复方镇眩汤治疗梅尼埃病的机制。方法采用阻塞前庭导水管的传统方法造模,分为镇眩高、中、低剂量组,西药组、模型组和假手术组,观察大鼠用药前后听觉诱发电位听觉阈值的变化及大鼠内耳水通蛋白1表达的影响。结果模型组与假手术组用药前听阈值分别为（54.21±7.91）和（40.03±6.75）dBL,差异有统学意义（P〈0.05）;用药后镇眩汤高剂量组听阈值为（41.27±6.58）dBL,模型组为（56.31±7.64）dBL,两组比较差异统计学意义（P〈0.05）。与模型组比较,西药组、镇眩汤高剂量组、中剂量组、假手术组水通道蛋白1表达差异均统计学意义（P〈0.05）;与假手术组比较,低、中剂量组水通道蛋白1差异有统计学意义（P〈0.05）,而高剂量组与药组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论镇眩汤对大鼠内耳水通道蛋白1的调节作用可能是治疗梅尼埃病的制之一。     

水通道蛋白-2、4在小鼠肾发育过程中的表达

目的观察水通道蛋白-2（AQP-2）和水通道蛋白-4（AQP-4）在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达。结果AQP-2在胚龄17d的胎鼠可以明确检测到,其表达部位为集合管主细胞的管腔膜和胞浆内。体视学测量发现,从胚龄17d开始表达到生后1d的小鼠其管腔膜的面密度值逐渐增加,此后面密度值基本上没有变化。AQP-4在胚龄14d的胎鼠可见到微弱的表达,随着胚龄的增长其表达逐渐增加,到生后1d达到最大水平,以后随着13龄的增加表达量无明显变化,并且在每一个时期的表达量都远远小于AQP-2的表达量。AQP-4的表达部位为集合管的侧基底细胞膜。结论推测AQP-2对小鼠出生后肾脏水平衡的调节作用比较重要,而AQP-4对出生前水平衡的调节作用比较重要。     

SIRT1对早期脑缺血大鼠水通道蛋白4表达的影响

目的:检测水通道蛋白4(AQP4)及沉默信息调节因子1(SIRT1)在脑缺血大鼠脑组织中的表达变化,探究SIRT1对AQP4的调节作用,明确二者在脑缺血及脑水肿发生发展中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分成假手术组(sham组)和脑缺血模型组(MCAO组),其中MCAO组又分为6 h、12 h、24 h和48 h 4个时点组别。采用线栓法阻塞大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型,于相应时点进行神经症状评分,Morris水迷宫检测大鼠学习认知功能,TTC染色观察脑梗死体积,干湿重法检测脑含水量的变化,HE染色观察大脑皮层周围组织神经细胞形态学变化,Western blot检测AQP4、SIRT1和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况。结果:与sham组相比较,随着再灌注时间增加,MCAO组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、脑组织通透性和脑组织含水量均持续增加,而大鼠学习认知功能则降低显著,HE染色显示脑缺血大脑皮层周围组织神经元细胞形态不规则,数目减少;Western blot实验结果显示AQP4表达水平呈增高趋势,SIRT1表达降低,MMP-9表达增高,MCAO-48 h组与sham组比较差异最明显(P0.01)。结论:脑缺血后,伴随脑组织损伤的加剧,SIRT1和MMP-9信号通路的表达激活影响了AQP4的表达活化,共同参与了脑水肿的形成。     

血管内皮抑素联合放疗对肺癌小鼠中乏氧诱导因子-1α、水通道蛋白-1及血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨血管内皮抑素和放射治疗(简称放疗,RT)两种治疗方法在Lewis肺癌中可能存在的某种协同机制.方法 通过对C57B[/6小鼠接种Lewis肺癌细胞,将接种成功后的32只肺癌小鼠随机分为4组,分别给予相应的抗血管生成药物[血管内皮抑素(endostar,ES)]和RT干预后将其分为ES组、RT组及联合RT组(E...     

水通道蛋白4在大鼠脑垂体中的表达

目的：研究水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA在脑垂体中的表达,探讨其在脑垂体激素分泌过程中的作用。方法：应用免疫组织化学和原位杂交技术,观察成年Wistar大鼠脑垂体中AQP4及其mRNA的正常分布。结果：AQP4及其mRNA在成年大鼠神经垂体的垂体细胞上表达呈阳性,分布在毛细血管窦周围的垂体细胞表达尤为强烈。腺垂体的所有细胞均有AQP4的表达,胞质中AQP4 mRNA表达呈阳性。中间叶所有细胞AQP4及其mRNA的表达呈弱阳性,其中滤泡星形细胞表达较内分泌细胞强烈。结论：AQP4广泛分布于脑垂体的各种组织细胞表面,可能在垂体激素的正常分泌过程中起重要的调节作用。     

实验性大鼠肺气肿模型的建立

目的:建立可行并可靠的大鼠肺气肿模型,为药物的筛选提供有效的方法。方法:20只SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组各10只。模型组采用LPS致敏加烟熏诱导复制实验性肺气肿模型,30 d后观察各组大鼠的血气与肺组织的病理学变化情况。结果:血气分析发现模型组和对照组有显著性差异(P0.05);模型组病理结果显示出明显的肺气肿特征,经图像分析发现对照组平均肺泡面积明显低于模型组(P0.05)。结论:采用LPS加上烟熏诱导可以在较短时间内诱发大鼠肺气肿模型。     

早期生长反应基因-１在急性胰腺炎大鼠肝组织的表达

目的： 观察早期生长反应基因-１(Egr-1)在大鼠不同程度急性胰腺炎（AP）及AP发病后不同时间在肝组织的表达，并研究EGR-1与AP肝脏损害的关系。方法: 先将24只雄性Wistar大鼠随机均分为4组，即A、B、C、D 4组，分别于胆总管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液，3 h后处死动物，留取血清、肝脏及胰腺组织。另将30只雄性Wistar大鼠随机均分为５组，即E、F、G、H、I组，5%牛磺胆酸钠溶液（0.75 mL/kg）胆管内逆行注射，分别于注射后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h处死动物同上留取标本。检测血清AST、LDH、TNF-α、IL-1β水平，对胰腺组织病理评分，并对肝组织进行EGR-1免疫组化染色。结果: (1)通过注射不同浓度牛磺胆酸钠溶液，成功地复制出不同严重程度的AP动物模型，A、B、C、D 4组动物胰腺病理评分、炎性细胞因子水平、AST及LDH水平均随着牛磺胆酸钠浓度的升高而逐渐上升；(2)肝组织EGR-1免疫组化染色显示，在不同程度AP组，EGR-1表达量随AP病情加重而逐渐增加，并与反映AP病情各指标如肝实质酶、炎性细胞因子浓度、胰腺病理评分均呈显著正相关，且表达部位也有所不同。EGR-1在AP发病后不同时间肝组织的表达，具有极明显的细胞种类与部位的差异。在观察时间内，以发病后3 h表达量最高。结论: EGR-1可能与AP时伴发的肝脏损害严重程度有关，其机制可能与其介导的炎性细胞因子生成有关。     

水通道蛋白4和8在人不同病理级别星形细胞瘤组织中的表达

目的: 观察水通道蛋白(AQP)4和AQP8在人不同病理级别星形细胞瘤组织中的表达变化,进一步阐明星形细胞瘤的发病机制。方法: 收集人各个病理级别星形细胞瘤标本55例。以肿瘤周围相对正常脑组织作为对照,采用石蜡切片HE染色行病理诊断和分级,Western blotting、RT-PCR以及免疫组织化学方法观察瘤组织中AQP4和AQP8的表达情况。结果: AQP4和AQP8主要分布在不同病理级别星形细胞瘤组织中瘤细胞的胞膜和胞浆内;和对照组比较,AQP4及其mRNA在低级别(Ⅰ~Ⅱ级)肿瘤组织中的表达降低,但在高级别(Ⅲ~Ⅳ级)星形细胞瘤组织中表达又上调;而AQP8及其mRNA在低级别肿瘤组织的表达增强,在高级别肿瘤组织中表达进一步增强;AQP4和AQP8分别在低级别之间、高级别之间比较,均没有显著差异(P>0.05)。结论: AQP4与AQP8在肿瘤组织中的表达是有差异的,两者在人星形细胞瘤组织中的表达变化与肿瘤恶性程度有关。     

经皮三叉神经电刺激减轻戊四氮诱导的大鼠癫痫发作并抑制海马内IL-1β和TNF-α的表达

 目的:探讨经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮（PTZ）诱发的急性癫痫大鼠的行为学及海马致痫细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:动物随机分为对照组、致痫组（PTZ组）和经皮三叉神经电刺激组,分别给予7 d、14 d和28 d的假刺激和三叉神经电刺激预处理后,腹腔注射PTZ 建立急性癫痫动物模型,观察给药后大鼠癫痫行为学表现,并分别用免疫组织化学方法及ELISA方法对海马IL-1β、TNF-α进行检测。结果:经皮三叉神经电刺激可以明显减轻大鼠的痫性发作级别,减少癫痫发作持续的时间（P<0.05）, 且海马细胞因子IL-1β及TNF-α的表达明显少于PTZ组（P<0.05或P<0.01）。结论:经皮三叉神经电刺激预处理在PTZ 急性点燃癫痫大鼠模型中不仅具有抗惊厥作用, 还可以减少海马致痫细胞因子IL-1β及TNF-α的表达,可能为癫痫的防治带来新的策略。       

冠脉成形术缺血性刺激前后血清IL-6、TNF-α水平的变化

目的:冠脉成形术(PTCA)引起的炎症反应始于术后早期。白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)是主要的炎性细胞因子。本实验拟通过对比有或没有侧支循环病人PTCA前后IL-6、TNF-α水平的变化,探讨PTCA引起早期炎性反应的机制。方法:参照Leaman冠脉积分系统,对PTCA球囊阻断引起的缺血强度进行量化。计算正常对照组与冠心病组PTCA手术前后的IL-6、TNF-α水平变化,并进行相关性分析。结果:缺血性剌激前IL-6和TNF-α分别为(9.592±1.847)ng/L和(26.959±1.967)ng/L。在剌激后4h分别为(27.423±1.882)ng/L和(78.542±1.573)ng/L,呈显著差异。结论:IL-6、TNF-α是反映PTCA术后早期炎性反应的敏感指标。缺血积分可作为反映PTCA术中缺血/再灌注损伤程度的量化指标。侧支循环可减轻PTCA术后早期炎症反应。     

AQP1和HGF在胎儿窘迫患者胎盘中的表达及意义

目的探讨急性胎儿窘迫患者胎盘中AQP1及HGF的变化水平及其意义。方法采用免疫组化方法检测急性胎儿窘迫组及正常产妇胎盘中AQP1、HGF的蛋白水平。结果 (1)急性胎儿窘迫组AQP1表达比对照组明显升高,差异有统计学意义(t=16.94,P<0.001)。与对照组比较,急性胎儿窘迫组HGF降低,差异有统计学意义(t=33.51,P<0.001)。(2)胎盘组织中AQP1与HGF蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.375,P<0.01)。结论胎盘中AQP1升高及HGF降低,可引起胎盘缺血缺氧,从而参与胎儿窘迫的病理生理过程。     

女性经前期复发性阿弗他溃疡患者血清IL-6、IL-8、TNF-α和sICAM-1的含量变化及其意义

目的:研究女性经前期复发性阿弗他溃疡(经前期RAU)患者血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)的变化状况, 并探讨经前期RAU的发病机制。方法:用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测女性经前期RAU患者外周血中IL-6、IL-8、TNF-α、sICAM-1的水平, 与正常对照组和无经前发作规律的女性RAU对照组相比。结果:经前期RAU患者的血清IL-6、IL-8、TNF-α水平不仅显著高于正常对照组(P＜0.01), 而且高于女性RAU对照组(P＜0.01)。而sICAM-1无明显变化。女性RAU患者血清中TNF-α亦高于正常对照组(P＜0.05)。结论:经前期RAU患者体内存在IL-6、IL-8、TNF-α介导的免疫功能异常, 可能对RAU局部损害起作用。     

不同剂量TNF-α对Nrf2转录调节活性的影响

目的:研究不同剂量肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肺微血管内皮细胞NF-E2相关因子2(Nrf2)转录调节活性的影响。方法:肺组织块贴壁法培养大鼠肺微血管内皮细胞,Ⅷ因子相关抗原间接免疫荧光鉴定所培养的细胞。采用含有0μg/L、2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L和40μg/LTNF-α的无血清培养基处理肺微血管内皮细胞4h后,以免疫细胞化学技术观察细胞内Nrf2的亚定位及含量的变化;提取细胞核蛋白和总RNA,以变动迁移率分析技术检测Nrf2转录调节活性的变化以及采用RT-PCR技术检测细胞Nrf2 mRNA表达水平的变化。结果:采用2.5、5.0、10.0μg/LTNF-α处理细胞,核内Nrf2水平和Nrf2转录调节活性随浓度的增加而呈现上升趋势;而采用20.0μg/L、40.0μg/LTNF-α处理细胞,核内Nrf2水平及其转录调节活性有所下降;不同剂量TNF-α对细胞Nrf2基因转录水平没有明显影响。结论:不同剂量TNF-α对肺微血管内皮细胞Nrf2转录调节活性产生不同影响:中、低剂量TNF-α增强Nrf2转录调节活性,而大剂量TNF-α引起Nrf2转录调节活性下降。     

氨基胍对大鼠局灶性脑缺血损伤后TNF-α、IL-1β及细胞凋亡的作用

目的： 观察氨基胍（AG）对局灶性脑缺血损伤后炎症因子和神经细胞凋亡的作用，探讨AG保护脑缺血损伤组织的作用机制。方法： 健康雄性SD大鼠30只，体重250-280 g，随机分为3组：假手术组（SH组）、缺血组（IS组）、AG治疗组（AG组），每组10只。IS、AG组采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血损伤模型。AG组每次腹腔注射AG 100 mg/kg,每日2次，连续3 d。IS组给予等量的生理盐水。将大鼠断头取脑，采用免疫组化法检测脑组织中TNF-α表达变化，放免法检测IL-1β水平变化，流式细胞仪测定脑组织神经元凋亡率、Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达及Bcl-2蛋白与Bax蛋白比值（Bcl-2/Bax）。结果： IS组脑缺血灶范围内TNF-α表达明显强于SH组，IL-1β水平显著高于SH组，神经凋亡率及Bax蛋白表达高于SH组，Bcl-2/Bax低于SH组；AG组脑缺血灶范围内TNF-α表达明显低于IS组，IL-1β水平显著低于IS组，神经凋亡率低于IS组，Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax高于IS组，Bax蛋白表达低于IS组 。结论： AG通过抑制TNF-α和IL-1β的升高，增加Bcl-2蛋白表达，降低Bax蛋白表达，调节Bcl-2/Bax平衡，对脑缺血大鼠脑神经元产生一定程度的保护作用。