整合酶抑制剂常用检测方法原理及其在研究中的应用

整合酶是HIV（human immunodeficiency virus，人免疫缺陷病毒）基因组在复制过程中所必需的3个关键酶之一。而且，人的正常细胞中并不存在整合酶的功能类似物。近年来整合酶已经成为抗HIV药物研发的一个重要且热门的靶点。     

基于CCR5受体的中药化合物抑制剂的虚拟筛选及活性评价

目的:以C-C趋化因子受体5(C-C chemokine receptor type 5,CCR5)为靶点,利用计算机辅助药物设计技术中的虚拟筛选技术、体外抗病毒活性实验、细胞毒性测试以及分子动力学实验筛选出低毒性、高抗艾滋病病毒(HIV)活性的中药化合物抑制剂,并探究其内在结合机制.方法:接受者操作特征曲线(rece...     

病毒酶在药物实验中的应用

以病毒基因编码的酶的发现有可能开辟抗病毒药物的新方向。通常的两种途径为:抗病毒化合物直接作用于病毒复制关键酶,从而抑制新病毒颗粒的生成,这类化合物必需不影响正常细胞酶的功能;另一途径为抗病毒化合物被病毒酶转化成活性抑制剂,它可选择性地阻滞病毒功能或同时阻滞细胞功能。因激活过程     

我国中药来源的抗HIV天然化合物研究进展

由于迄今仍无艾滋病 (acquired immunodeficiency syndrome, AIDS) 疫苗问世, 抗人类免疫缺陷病毒 (human immunodeficiency virus, HIV) 药物仍然是艾滋病治疗的主要手段。传统中药和药用植物来源的天然化合物具有结构多样性、毒性较低、来源广泛等特点, 因而在防治艾滋病方面有着独特的优势和巨大的潜力。研究者已经对天然化合物抗HIV作用进行了大量研究, 并取得了可喜的成绩, 发现了一些生物碱、香豆素、木脂素、黄酮类、萜类、鞣质类、多糖类、蛋白质和多肽类等天然化合物具有抗HIV的活性。然而, 多数研究都是在体外试验完成的, 大多数天然化合物体外抗HIV活性偏低, 而且抗HIV的靶点仍不十分清楚。本文结合笔者实验室研究工作, 重点介绍近年来我国传统中药来源的抗HIV活性较强的天然化合物研究进展。     

人免疫缺陷病毒—1整合酶及其抑制剂的研究进展

整合酶（integrase)对于人免疫缺陷病毒（HIV）－1逆转录病毒的复制来说是必不可少的，因而成为抗艾滋病（AIDS）药物设计的一个理性的靶点。最近文献报道了大量具有抗整合酶活性的化合物，当前最大的挑战就是如何将这些作用于整合酶靶点的先导化合物转变成为临床上有效的抗AIDS药物。     

抗艾滋病新药--度鲁特韦（dolutegravir）

度鲁特韦(dolutegravir)是一种人类免疫缺陷病毒类型1(HIV-1)整合酶链转移抑制药(INSTI),与其他抗逆转录病毒药联用治疗HIV-1感染。临床前研究结果显示其毒性小,没有基因毒性和致癌毒性,在大于临床剂量27倍时没有出现明显的生育毒性和致畸毒性。临床研究显示DTG对初次治疗的HIV感染者、当前疗法治疗失败但未使用整合酶抑制药治疗的患者的治疗效果均优于对照药;对抗病毒治疗失败、且对雷特格韦( raltegravir )和(或)埃替格韦( elvitegravir)耐药的成人患者也显示出良好的疗效。体内外试验研究均显示较强的抗HIV-1病毒活性,安全性及耐受性良好,现将其药效学、安全性、药动学及临床研究等作一综述,为临床应用提供参考。     

036 对HIV-1整合酶有抑制作用的DNA四倍体结构[英]／Heath V／／Drug Discov Today.

HIV病毒DNA在HIV-1整合酶催化下整合进入宿主的基因组，这对病毒的生命周期是必要的。HIV-1整合酶的这种作用使之成为一个好的抗HIV药物的作用靶点。富含G的寡核苷酸可以抑制HIV-1整合酶，但其结构还不清楚。研究人员发现了有效的HIV-1抑制剂93del在溶液中的结构，研究表明它形成了一个稳定的四倍体DNA结构。     

以病毒RNA核转运为靶点的抗HIV-1药物筛选模型的建立及应用

目前, 临床使用的抗AIDS一线药物主要是HIV逆转录酶抑制剂和蛋白质酶抑制剂。但是, 由于这类药物价格昂贵、严重的副作用、毒性、耐药性等问题日益严重, 发展新作用机制的抗HIV-1药物已成当务之急。因此, 本课题以HIV-1病毒RNA核转运关键蛋白Rev为靶点, 建立了新型抗HIV药物筛选模型, 以期寻找具有新作用机制的抗病毒药物。在筛选模型中, 选择了由HIV-1病毒偏爱性密码子所编码的GFP (GFP_HIV) 作为报告基因, 用于快速简便地分析样品对Rev依赖的RNA核转运的影响。选取抑制剂来普霉素B作为模型的阳性对照对本模型进行了初步评价, 计算出Z' 因子为0.822 0。上述结果初步证明了该模型可用于新型抗HIV药物的筛选。对3 000个化合物进行初筛, 阳性率为9.3%, 复筛阳性率为7.3%。通过抗病毒活性的测定实验以及对阳性化合物进行免疫印迹检测, 最后发现IMB7C7这个化合物以病毒RNA核转运为靶点, 是具有较好效果的特异性抑制剂。     

简讯

美国马萨诸塞综合医院的Hirsch、美国国立变态反应与传染病研究所的Moss等已鉴别出一种逆转录酶[RT(HIV利用该酶复制)]特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。在10例HIV感染病人中,有8例可找到这种CD3~+/CD8~+类杀伤细胞。有意义的是,仅在无AIDS症状的病毒携带者中这种杀伤细胞才具有抵抗感染细胞产生RT的强活性。这些结果表明,抗RT杀伤细胞可能具有抗病毒的保护作用,研究人员发现编码RT的病毒pol基因在不同的HIV株(包括HIV-2)中是高度保守的。他们相信在pol     

抗艾滋病药物研究的新靶点

目前,临床使用的抗艾滋病药物主要是逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。由于这些药物的毒性和耐药性等问题日益严重,寻找抗艾滋病药物的新靶点已经成为当务之急。在细胞水平上对HIV病毒自身生活周期的研究发现了一些新的药物靶点,其中包括病毒自身生活周期所需的蛋白,宿主细胞内源性抗病毒因子及其他抗HIV-1感染的潜在靶标。本文对近年来研究中出现的新的抗艾滋病药物靶点作一综述。     

去羟肌苷可致非肝硬化门静脉高压症

去羟肌苷（didanosine）为双脱氧腺苷（DDA）的脱氨基产物,为嘌呤核苷类似物。体外能抑制人类免疫缺陷病毒（HIV）在T细胞和单核细胞中的复制;体内可经细胞酶转化生成有抗病毒活性的代谢物5’-三磷酸双脱氧腺苷（ddATP）,后者能抑制HIV—I逆转录酶活性,并通过与天然底物5’-三磷酸脱氧腺苷（dATP）竞争而整合进病毒DNA,终止病毒DNA链的延伸,     

抗HIV海洋天然活性成分及其作用机制研究概况

介绍从植物源中寻找抑制艾滋病病毒海洋天然活性成分的研究进展。目前已在海洋藻类植物中发现了不少具有抗艾滋病病毒的活性物质；在我国的中草药植物资源中，也有相当一部分具有抗病毒、抗机会性感染和提高机体免疫功能等方面的作用。这些活性成分具有抑制HIV的活性，包括抑制逆转录酶，干扰病毒进入细胞等作用。应加强从植物源中寻找新的抗HIV活性成分或先导化合物的研究。     

抗HIV新药raltegravir*

整合酶(integrase)是HIV病毒复制的必需酶,因而成为抗HIV药物设计的一个合理靶点。目前尚无整合酶抑制剂类药物上市,raltegravir是第一个进入Ⅲ期临床的此类药物。与上市的抗HIV药物相比,具有更高或相近的抗逆转录病毒的活性,无交叉耐药性,毒副作用小,有可能成为第一个上市的整合酶抑制剂。现对其作用机制、临床前研究、药动学、临床应用及安全性等做一综述。     

HIV-1融合的天然屏障

Flight MH∥NatRev Drug Discov.-2007,6(6).-436尽管人们已经了解到在血液循环中具有抗HIV活性的分子,但分离纯化和鉴定的困难使其很难被完全认识。Kirchhoff等系统筛选了由100万个小肽组成的血液过滤物衍生肽化合物库,寻找抑制HIV-1复制的天然抑制剂,并报道了一个全新的病毒复制抑制肽分子(VIRIP),其对HIV-1病毒家族具广谱活性。VIRIP具有20个氨基酸,能强烈抑制HIV-1在人外周血单核细胞(PBMC)中的感染和转运。化学合成的VIRIP能广泛作用于HIV家族系列,对一些抗逆转录酶病毒药物有抵抗性的毒株也有活性,且没有细胞毒性。…     

EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性及其作用机制研究

 目的：研究EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性,并探讨其作用靶点。方法：采用HPLC分析pH对于EGCG乙酸酯稳定性的影响以及EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物;采用酶联免疫测定法、细胞-细胞融合方法以及假病毒实验检测EGCG乙酸酯抑制HIV与靶细胞融合的活性;应用分子对接软件研究EGCG与gp41的结合位点。结果：EGCG通过其苯环结构和羟基分别与gp41 NHR区域的疏水残基和正电荷残基结合从而抑制病毒的进入。用乙酰基保护EGCG活性酚羟基形成EGCG乙酸酯,稳定性明显增强。EGCG乙酸酯在酶联免疫反应中无活性,但在细胞实验中能有效抑制HIV介导的细胞融合及HIV假病毒感染,其半数抑制浓度IC50分别为（4.93±0.57）和（1.45±0.32） μg?mL-1。EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物被证明为EGCG。结论：EGCG乙酸酯在细胞中能转化为母体药物,从而具有HIV融合抑制活性,且靶向作用于HIV gp41。该前药有望研发为稳定、高效的抗HIV药物,用于HIV的治疗。     

抗艾滋病药Dolutegravir

将自身基因整合到宿主细胞染色质中,是包括人类免疫缺陷病毒(HIV)在内的逆转录病毒复制过程中的一个关键步骤,由病毒整合酶介导.因此,整合酶可作为阻断HIV复制的合适靶标,由美国Shionogi-ViiV Healthcare公司开发的dolutegravir(代号:S/GSK-1349572)即为一种口服有效的整合酶抑制剂,其抗HIV活性显著.临床研究显示,对整合酶抑制剂raltegravir产生耐药性的HIV感染者可对本品应答.目前,本品正处于Ⅲ期临床研究阶段.     

腔肠素抗流感病毒研究

目的 对海洋来源的化合物腔肠素进行体外抗流感病毒活性研究。方法 细胞病变效应(CPE)抑制实验评价腔肠素对不同流感病毒株的抗病毒作用。CPE实验检测腔肠素细胞毒性和抗病毒作用方式并结合血凝抑制实验、神经氨酸酶(NA)活性实验及微基因组实验初步探究腔肠素的作用靶点。结果 腔肠素体外对不同流感病毒株均有良好抗病毒作用,其中对PR8的抑制作用最强,IC₅₀为5.0μmol·L^-1且细胞毒较小,CC₅₀为144.1μmol·L^-1。通过不同作用方式以及不同作用时间的实验显示,腔肠素预先处理流感病毒以及在病毒感染后加入均有良好抗病毒作用,并且在病毒吸附后0～3 h的抑制效果较好。用腔肠素预处理病毒后可以呈剂量依赖性地抑制血凝素(HA)的活力。故腔肠素可能是通过与病毒HA相互作用来阻断流感病毒的进入,其作用位点可能为HA蛋白HA2链的72、74位谷氨酸。结论 腔肠素具有良好的体外抗甲型流感病毒效果,为海洋来源的小分子化合物的开发与改造提供了借鉴,为寻找新型抗流感病毒药物提供新思路。     

HIV蛋白酶抑制剂与细胞凋亡

HIV感染人体后造成大量CD4 + T淋巴细胞的凋亡 ,从而破坏免疫系统 ,使机体无法抵抗病毒的入侵 ,导致免疫缺陷。目前的药物靶点都针对病毒本身 ,无法清除体内储存病毒的感染细胞 ,而HIV蛋白酶抑制剂治疗HIV/AIDS患者后可以减少HIV感染引起的细胞凋亡 ,帮助机体恢复免疫功能 ,并且这种作用与其抑制病毒的作用是相独立的 ,这提示了可以通过免疫重建的策略来治疗AIDS。本文综述了HIV蛋白酶抑制剂的研究和发展概况 ,其作用特点以及对细胞凋亡的影响。明确HIV蛋白酶抑制剂与细胞凋亡的关系 ,可以启发新的思路从细胞着手 ,通过恢复机体的免疫能力来对抗病毒 ,从根本上治疗AIDS。     

苦瓜提取液体外抗柯萨奇病毒的实验研究

目的:探讨苦瓜提取液体外抗柯萨奇病毒(CVB3)的作用及抗病毒作用的机制,从而为柯萨奇病毒感染的治疗提供新的手段。方法:根据病毒复制周期,设计2个药物抗病毒作用靶点,观察苦瓜提取液在不同靶点对柯萨奇病毒的作用。在H ep-2单层细胞上,通过观察细胞病变效应(CPE)、四甲基偶氮唑蓝(M TT)法检测细胞活性、病毒抑制率测定,以确定苦瓜提取液体外抗病毒活性。结果:苦瓜提取液对H ep-2细胞的半数毒性浓度(TC50)为1004.8μg.mL-1;苦瓜提取液抑制病毒组对柯萨奇病毒的抑制率随药物浓度的增加而增加,其半数抑制浓度(IC50)为35.4μg.mL-1,T I为7.82。苦瓜提取液直接灭活病毒组,各浓度组均出现典型CVB3所致的细胞病变,与病毒对照孔无显著区别。结论:苦瓜提取液可通过抑制病毒增殖发挥抗柯萨奇病毒作用。     

Raltegravir获美FDA快速审批地位

默克公司日前宣布,美国FDA抗病毒药物顾问委员会支持抗HIV新药Raltegravir(商品名为Isentress)进入快速审批通道上市,用于治疗对其他抗HIV药物无效的艾滋病患者。Raltegravir的作用靶点是HIV-1整合酶,它是唯一以抑制整合酶为作用机制的抗HIV药物。Raltegravir的III期临床试验结果显示,一天两次使用Raltegravir和鸡尾酒疗法的病人中,未能检测到HIV的病人为60%;仅接受鸡尾酒疗法的病人中,未能检测到HIV的占35%。由于目前尚无其它抗HIV药物可以对整合酶产生抑止作用,如果这个新药如期上市,必将开启整合酶抑止剂新纪元。Raltegrav…