低剂量131Ⅰ标记的抗癌胚抗原抗体C50联合化疗诱导裸鼠结直肠癌移植瘤细胞凋亡

目的从诱导细胞凋亡的角度,探讨低剂量131Ⅰ标记的抗癌胚抗原(CEA)单抗C50(131Ⅰ-C50)对结直肠癌移植瘤的治疗作用及联合5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的效果.方法建立表达CEA的人LoVo结直肠癌荷瘤裸鼠模型.接种第9天,分别采用5-FU、75μ131I-C50及5-FU联合131IC50尾静脉注射治疗裸鼠移植瘤.接种第15天,肿瘤组织进行HE染色和末端脱氧核糖核酸转移酶介导的荧光素-dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)凋亡细胞染色,计算肿瘤细胞凋亡指数.结果光学显微镜下各组裸鼠移植瘤组织未见细胞溶解、坏死表现.TUNEL法染色示空白对照组、化疗组、放射免疫治疗(RAIT)组及RAIT+化疗组的凋亡指数分别为(0.29±0.08)%,(18.68±2.69)%,(40.88±4.54)%和(62.33±8.00)%,各组两两之间凋亡指数差异均有显著性(P值均＜0.001).结论低剂量RAIT可通过诱导肿瘤细胞凋亡达到治疗结直肠癌的目的,RAIT联合5-FU化疗可明显增强诱导肿瘤细胞凋亡的效果.     

低剂量~(131)I标记的抗癌胚抗原抗体C50联合化疗诱导裸鼠结直肠癌移植瘤细胞凋亡

目的　从诱导细胞凋亡的角度 ,探讨低剂量13 1I标记的抗癌胚抗原 (CEA)单抗C5 0 (13 1I C5 0 )对结直肠癌移植瘤的治疗作用及联合 5 氟尿嘧啶 (5 FU)化疗的效果。方法　建立表达CEA的人LoVo结直肠癌荷瘤裸鼠模型。接种第 9天 ,分别采用 5 FU、75 μCi13 1I C5 0及 5 FU联合13 1I C5 0尾静脉注射治疗裸鼠移植瘤。接种第 15天 ,肿瘤组织进行HE染色和末端脱氧核糖核酸转移酶介导的荧光素 dUTP缺口末端标记法 (TUNEL法 )凋亡细胞染色 ,计算肿瘤细胞凋亡指数。结果　光学显微镜下各组裸鼠移植瘤组织未见细胞溶解、坏死表现。TUNEL法染色示空白对照组、化疗组、放射免疫治疗(RAIT)组及RAIT +化疗组的凋亡指数分别为 (0 .2 9± 0 .0 8) % ,(18.6 8± 2 .6 9) % ,(4 0 .88± 4.5 4) %和(6 2 .33± 8.0 0 ) % ,各组两两之间凋亡指数差异均有显著性 (P值均 <0 .0 0 1)。结论　低剂量RAIT可通过诱导肿瘤细胞凋亡达到治疗结直肠癌的目的 ,RAIT联合 5 FU化疗可明显增强诱导肿瘤细胞凋亡的效果     

扶正抑瘤汤对肝癌Hu-7细胞诱导凋亡及自噬的作用

目的探讨扶正抑瘤汤对裸鼠移植瘤肝癌Hu-7细胞的诱导凋亡及自噬的调控作用。方法 50只裸鼠分为五组,即模型组,扶正抑瘤汤高(按人小鼠等效剂量换算为0.3 g生药/25 g小鼠)、中(高剂量组稀释1倍)、低剂量组(中剂量组稀释1倍),5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,每组10只,建立人肝癌细胞Hu-7移植瘤裸鼠模型,待肿瘤体积长到约100 mm3时开始用药,扶正抑瘤汤灌胃给药(1次/d),5-Fu组(2次/d)和模型组采用腹腔注射(1次/d),给药3 w,于停药第2天各组处死裸鼠,剥离肿瘤称重,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;留取肿瘤组织,TUNEL染色检测扶正抑瘤汤对移植瘤细胞凋亡的作用;透射电镜(TEM)检测自噬体形成情况,Western印迹检测自噬相关蛋白(Beclin-1、Bnip3及LC3)表达变化。结果与模型组比较,5-Fu组与扶正抑瘤汤组均能诱导细胞凋亡,减缓瘤体生长速度,抑制肿瘤生长率以高剂量药物组效果最佳,与5-Fu组比较有统计学差异(P0.05)。TUNEL染色发现,与模型组比较,扶正抑瘤汤组和5-Fu组染色后荧光显微镜下均可见着色凋亡细胞,且随着药物组浓度变化,呈剂量相关性,其中高剂量组诱导细胞凋亡作用最显著。电镜结果显示:扶正抑瘤汤高剂量组和5-Fu组均可见到大量自噬小体,自噬小体数量与药物浓度呈剂量相关性,其中高剂量组药物自噬小体数量较中、低剂量组多,模型组亦发现少量自噬小体;Western印迹检测结果显示:与模型组比较,扶正抑瘤汤各剂量组和5-Fu组均可使自噬相关蛋白Beclin-1、Bnip3及LC3表达上调,且与药物浓度有剂量相关性,其中高剂量药物组较中、小剂量组更优。结论扶正抑瘤汤对裸鼠肝癌转移瘤Hu-7具有抑制肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡的作用,并且可激活肝癌细胞Beclin-1、Bnip3及LC3蛋白的表达,从而诱导肿瘤细胞发生自噬,其中以高剂量组效果最佳。     

survivin ASODN对人胰腺癌PANC细胞移植瘤生长的影响及机制探讨

目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤生长及瘤组织中survivin、PTEN、CEACAM-1表达的影响,并探讨其作用机制。方法构建28只人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、正义寡核苷酸(SODN)组、ASODN组、脂质体组,各7只,分别于瘤周及瘤体注射50μL的PBS、SODN、ASODN、脂质体+无血清DMEM。注射结束后2 d,切取瘤体,测算肿瘤生长抑制率和生长指数,免疫组化法检测瘤组织中的survivin、PTEN、CEACAM-1蛋白,TUNEL染色镜下观察细胞凋亡情况,半定量RT-PCR检测瘤组织中的survivin mRNA、PTEN mRNA、CEACAM-1 mRNA。结果与其他三组相比,ASODN组肿瘤生长抑制率高、生长指数低、细胞凋亡指数高(P均<0.05),其瘤组织中survivin和CEACAM-1表达下降、PTEN表达上升(P均<0.05)。结论 survivin ASODN可有效抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin和CEACAM-1的表达、促进PTEN的表达有关。     

三氧化二砷在MDA—MB-435s裸鼠模型中的抑瘤作用及机制

建立人乳腺癌移植瘤裸鼠模型,随机分为生理盐水(NS)组、顺铂(DDP)组、低剂量三氧化二砷(As2O3)组和高剂量As2O3组.用药4周后,观察裸鼠一般状况的变化、用药前后肿瘤生长情况、裸鼠体质量变化及免疫组化检测其可能的机制.发现As2O3组肿瘤大小和瘤重均较NS组明显缩小,给药后裸鼠未见明显不良反应,且As2O3能诱导癌细胞凋亡,调控相关基因表达.认为As2O3对裸鼠乳腺癌移植瘤有显著的抗肿瘤作用,诱导肿瘤细胞凋亡可能是As2O3的抗肿瘤机制之一.     

大蒜素对皮下移植肝癌细胞生长抑制和诱导凋亡的实验研究

目的　评价大蒜素在实验裸小鼠体内抗肝癌的有效性,为临床应用大蒜素对肝癌进行介入治疗提供理论依据。　方法　建立人肝癌细胞BEL 7402裸小鼠皮下移植瘤模型,模拟介入治疗用药方法,对6组移植瘤模型分别注射生理盐水吐温溶液,1、2、5 mg/ml大蒜素,0 .2 mg/ml阿霉素,1 mg/ml大蒜素+0 .2 mg/ml阿霉素,每次注射 0. 1 ml,隔日 1 次,连续 7 次,测量肿瘤体积变化,计算各组抑瘤率,对移植瘤组织作HE染色观察,电镜观察形态改变, TUNEL法检测组织凋亡率,RT PCR技术分析处理前后BEL 7402细胞FasL mRNA表达。　结果　移植瘤生长符合指数曲线规律,各组抑瘤率分别为: 62 .8%、72 .8%、94 .5%、76. 0%和 87 .0%;各组凋亡指数分别为(2. 2±1 .1)%、(17 .2±2. 8)%、(19 .4±2 .1)%、(28. 3±3.0)%、(22. 4±2 .5)%和(37 .6±3 .9)%;大蒜素或阿霉素组FasL mRNA表达均增加,大蒜素+阿霉素组表达上调尤其明显;大蒜素或(和)阿霉素治疗后,移植瘤组织内坏死细胞增加,出现典型凋亡形态细胞。　结论　大蒜素可以有效抑制人肝癌细胞裸小鼠移植瘤生长,且呈剂量效应关系;大蒜素可通过上调FasL mRNA的表达诱导人肝癌细胞凋亡。     

健脾中药诱导人胃癌细胞裸小鼠移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究健脾类中药复方四君子汤及以四君子汤等健脾药物为基础结合清热解毒、软坚散结中药组成的复方SRRS对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤的抑瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡的关系.方法采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型.实验动物共30只,造模后随机分为3组,每组10只:SRRS方剂组,予240 g/L SRRS煎剂0.5mL/d灌胃;四君子汤组,予160 g/L四君子汤煎剂0.5 mL/d灌胃;对照组,予生理盐水0.5 mL/d灌胃,共40 d.应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)、电镜,结合流式细胞仪分析技术,观察SRRS方剂及四君子汤的抑瘤作用与肿瘤细胞凋亡率及形态学改变.结果四君子汤、SRRS方剂对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤抑瘤率分别为34%,47%,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)分别为:16%±3%,13%±3%,与对照组AI:3%±1%比较,显著提高(四君子组P＜0.01;SRRS方剂组P＜0.05,均为t检验);流式细胞分析示四君子汤组凋亡率:11%±6%,SRRS方剂组:12%±6%,均较对照组:7%±1%提高(t检验,P＜0.05);但四君子汤和SRRS方剂组之间的凋亡率TUNEL法和流式细胞分析均无差异.电镜下二中药治疗组见较多凋亡细胞和凋亡小体;对照组凋亡细胞和凋亡小体极少.结论中药四君子汤、SRRS方剂在体内的抑瘤作用与诱导胃癌细胞凋亡有关,其诱导细胞凋亡作用可能主要与健脾药物有泄?诱导肿瘤细胞凋亡可能是健脾药物抗癌作用的机制之一.     

氧化砷对人结肠癌裸鼠腹腔种植的抑制作用

目的 :研究氧化砷 (As2 O3)对结肠癌裸鼠腹腔转移的影响及其作用机制。方法 :建立BALB/C nu/nu裸鼠SW 480结肠癌腹水型移植瘤模型 ,腹腔内注射As2 O3,观察As2 O3对荷瘤鼠的抗癌作用。结果 :5 氟脲嘧啶 (5 FU)、低剂量As2 O3和高剂量As2 O3均可明显延长腹水型荷瘤鼠的生存时间 ,其延命率分别为 40 .1± 7.83 %、47.2 2± 8.69%和 92 .1 0± 1 4 .2 % ,高剂量As2 O3延命率明显高于 5 FU ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 1 )。治疗组腹水CEA水平明显低于阴性对照组。在普通光学显微镜下观察腹水标本 ,部分结肠癌细胞发生了较典型的细胞凋亡形态学改变。腹水细胞流式细胞仪检测可见凋亡峰。低剂量As2 O3凋亡率为 8.36± 2 .1 4 % ,高剂量As2 O3凋亡率为 1 5 .3± 3 .82 % ,均明显高于生理盐水组的 2 .40± 1 .1 8% (P <0 .0 1 )。结论 :As2 O3对结肠癌荷瘤鼠具有延长生命的作用 ,其作用机制主要是诱导结肠癌细胞凋亡。     

藤梨根提取物抗肺癌作用的体内实验研究

目的研究藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长抑制及凋亡诱导作用,探讨其可能机制。方法用肺癌A549细胞建立肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、治疗组（高剂量组、低剂量组）。根据瘤体积变化绘制移植瘤生长曲线,根据终末瘤质量比较计算抑制率,移植瘤细胞凋亡指数检测采用TUNEL法,移植瘤细胞Bcl-2、Bax蛋白、Ki-67抗原表达检测采用免疫组化SP法,RT-PCR检测移植瘤Bcl-2、Bax mRNA表达。结果各治疗组经藤梨根乙酸乙酯提取物治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤质量及瘤体积明显低于对照组（P均〈0.01）,高、低剂量组的瘤质量抑制率分别为69.00%和45.09%。治疗组移植瘤细胞透射电镜下均可见不同阶段典型的凋亡细胞形态学变化。各治疗组移植瘤组织凋亡指数明显高于对照组,而增殖指数明显减低,Bcl-2 mR-NA及蛋白表达较对照组亦明显减少,Bax蛋白及mRNA表达较对照组明显增加,高剂量组尤其明显（P均〈0.01）。结论藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与抑制移植瘤细胞的增殖活性和诱导癌细胞凋亡有关,而降低Bcl-2基因表达、上调Bax基因表达可能是其诱导细胞凋亡机制之一。     

Endostatin转基因双歧杆菌口服剂对胃癌生长影响的实验研究

目的探讨Endostatin转基因双歧杆菌口服冻干粉剂(ETB-2)对裸鼠人胃癌模型的抑瘤效应,并探讨其抑瘤机制.方法人胃癌细胞株MKN-45接种于BALB/L裸鼠建立动物模型;裸鼠随机分为6组,每组6只,采取灌胃给药.接种后根据肿瘤体积绘制肿瘤生长曲线;给药满4周后处死动物并计算抑瘤率.用免疫组化方法检测微血管密度(MVD)和增殖细胞核抗原(PCNA);用DNA原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡.结果对照组抑瘤率为0,MVD为5.83+0.83,细胞凋亡率为1.3%±0.1%;氟铁龙组抑瘤率为41.1%,MVD为5.70±0.67,细胞凋亡率为2.7%+0.2%.ETB-2高剂量次日给药组抑瘤率为47.5%,MVD为3.90±0.67,细胞凋亡率为13.9%±0.7%,2周给药组抑瘤率为43.2%,MVD为4.28±0.49,细胞凋亡率为13.9%+0.6%;低剂量次日给药组抑瘤率为36.0%,MVD为4.58±0.31,细胞凋亡率为7.7%±1.1%.结论ETB-2可显著抑制胃癌生长,其机制可能是抑制肿瘤内微血管形成,使肿瘤细胞增殖下降,诱导肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤细胞坏死,其作用具有量效关系.     

SN50联合5-氟尿嘧啶通过调节NF-κB信号通路抑制人胃癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的探讨NF-κB通路抑制剂SN50联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响及机制。方法建立荧光素酶标记的人胃癌细胞株SGC7901,常规传代培养,采用对数生长期细胞建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。14 d后随机分为4组:对照组、5-FU干预组、SN50干预组、5-FU+SN50干预组。每组8只动物,共给药4周。观察并记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,游标卡尺测量瘤体长短径,于停药次日处死裸鼠,称取瘤重,计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率、绘制肿瘤生长曲线。通过体内可见光成像技术分别于第1、7、14、21、28天对裸鼠进行活体成像,记录移植瘤光子数,绘制皮下移植瘤光子数曲线图。免疫组化方法检测移植瘤中NF-κBp65表达情况。结果与其他三组相比,5-FU+SN50干预组肿瘤体积、抑瘤率及光子数差异均有统计学意义(P0.05);与对照组及SN50干预组比较,5-FU干预组肿瘤体积和光子数明显减少(P0.05),抑瘤率明显增加(P0.05);SN50干预组与对照组相比,肿瘤体积、抑瘤率及光子数差异无统计学意义(P0.05)。NF-κBp65阳性率依次为对照组47.4%、5-FU组57.1%、SN50组11.8%、5-FU+SN50组25.0%。结论 5-FU单药及5-FU+SN50均能抑制裸鼠胃癌皮下移植瘤的生长,而联合应用效果更明显;SN50可通过抑制NF-κB信号转导通路的活化,显著增强5-FU对裸鼠胃癌皮下移植瘤的抑制作用。     

术前区域性动脉化疗对胃癌细胞凋亡的影响

目的观察术前选择性动脉化疗对胃癌细胞凋亡的影响,探讨术前化疗抑制胃癌细胞生长作用的机制.方法运用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸原位末端标记法对68例胃癌患者术前化疗和42例未化疗的胃癌手术病理切片及68例转移性淋巴结病理切片进行细胞凋亡检测,并比较术前化疗与未化疗病理组织学改变程度.结果①术前化疗组肿瘤细胞凋亡指数比未化疗组明显增高,两组细胞凋亡指数分别为(12.5±4.33)和(7.1±3.43)‰(P<0.001).②术前化疗组肿瘤细胞凋亡指数与肿瘤分化程度有关,分化型胃癌细胞凋亡指数明显高于未分化型(P<0.001).③术前化疗组淋巴结转移细胞凋亡指数明显高于未化疗组,凋亡指数分别为(7.9±3.41)和(3.6±2.93)‰(P<0.01).④术前化疗组病理组织学改变程度明显高于未化疗组(P<0.05).结论术前选择性动脉化疗对胃癌细胞生长有明显抑制作用,主要是通过诱导细胞凋亡而实现.     

胃肠安对人胃癌细胞SGC-7901原位移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

背景:以健脾类中药为基础的复方胃肠安可抑制人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,提高进展期胃癌的3年生存率。目的:通过观察胃肠安对人胃癌细胞裸小鼠原位移植瘤生长和凋亡的影响,探讨其抑制肿瘤的作用机制。方法:以高效液相色谱(HPLC)法监测复方胃肠安制剂的稳定性;采用胃小囊法,予45只雄性BALB/c-nu/nu裸小鼠接种人胃癌细胞SGC-7901移植瘤模型,造模第28天,选出扪及胃部肿块直径为3mm左右的裸小鼠共43只,随机分为胃肠安组(14只)、5-氟尿嘧啶(5-FU)组(14只)和对照组(15只);采用免疫组化SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;采用缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果:胃肠安组原位瘤抑制率为40.8%,肝转移率(7.7%)和总转移率(30.8%)显著低于对照组(50.0%和71.4%)(P<0.05);胃肠安组原位移植瘤PCNA阳性率和总阳性率(51.0%±11.4%和60.4%±13.3%)显著低于对照组(61.6%±11.6%和74.4%±7.9%)(P=0.0287和P=0.0029);胃肠安组细胞凋亡指数(17.3%±8.9%)显著高于对照组(7.8%±3.0%)(P=0.0010)。结论:复方胃肠安可抑制人胃癌细胞裸小鼠原位移植瘤的生长和转移,并可抑制人胃癌细胞原位移植瘤的细胞增殖和诱导凋亡。     

树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫诱导移植瘤细胞凋亡并抑制其增殖

目的研究树突状细胞(DC)体外诱导的细胞免疫能否抑制裸鼠移植瘤生长及其机制.方法联合应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)直接从肝癌患者外周血中培养出DC,以源于人肝癌细胞系HepG2肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激DC,DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),建立裸鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤模型.以CTL治疗裸鼠HepG2移植瘤并观察治疗效果,检测移植瘤标本肿瘤细胞凋亡情况.结果DC诱导的CTL通过诱导肿瘤细胞凋亡并抑制其增殖而抑制移植瘤生长.结论经肿瘤抗原激发的DC有可能在肿瘤的治疗中发挥重要作用.     

阿司匹林抑制肝癌生长的实验研究

目的探讨阿司匹林对人肝癌生长的影响及是否能诱导其凋亡. 方法用3H-TdR掺入、形态学观察、DNA末端原位标记法(Tunel)和流式细胞术等方法研究阿司匹林对人肝癌细胞株SMMC-7721生长及诱导凋亡的作用;建立人肝癌裸鼠原位移植瘤模型,观察阿司匹林对肝癌移植瘤生长的影响. 结果阿司匹林能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长,当其浓度在1×10-1～1×10-7mol/L时,肝癌细胞3H-TdR掺入与浓度增加呈显著负相关(r＝-0.918,P＜0.01).经1×10-3mol/L阿司匹林作用后可见较多肝癌细胞呈典型的细胞凋亡形态学变化,凋亡指数为(8.90±1.32)%,对照组为 (0.50±0.35)%,两组比较,差异有显著性,流式细胞术也检测到其G1期前有一典型的亚二倍体凋亡峰,凋亡率为 12.79%.阿司匹林能显著抑制人肝癌裸鼠原位移植瘤生长,抑瘤率为71.62%,实验中裸鼠存活率为100%,未见消化道出血、溃疡等不良反应. 结论阿司匹林能显著抑制人肝癌生长并能诱导其凋亡.     

三羟基异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的研究

目的探讨三羟基异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。方法建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型并测定移植瘤的生长曲线;25只Balb/c裸鼠接种胃癌原代细胞悬液生成移植瘤后均分为五组,不同剂量的三羟基异黄酮(0.5、1.0和1.5mg/kg)、生理盐水和DMSO进行瘤旁注射,透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织凋亡情况,免疫组化法和RT-PCR法检测肿瘤组织凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。结果三羟基异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用;透射电镜发现三羟基异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生凋亡;TUNEL染色法发现三羟基异黄酮注射组瘤细胞的凋亡指数(28.7%±1.1%、33.4%±1.4%和37.1%±1.0%)明显高于生理盐水和DMSO对照组(P<0.05),而两个对照组(11.8%±0.4%和11.7%±0.4%)之间差异无统计学意义。免疫组化法发现三羟基异黄酮注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率(11.8%±0.9%、5.7%±0.8%和4.0%±0.8%)明显低于两个对照组(P<0.05),而两个对照组(19.5%±0.6%和17.6%±1.4%)之间差异无统计学意义;而Bax蛋白阳性细胞率(20.0%±1.2%、24.7%±0.9%和29.3%±1.6%)明显高于两个对照组(P<0.05),而两个对照组(10.3%±0.4%和10.9%±0.9%)间差异无统计学意义;RT-PCR法发现三羟基异黄酮注射组的bcl-2mRNA条带强度随剂量增大而递减,并明显低于对照组(P<0.05);而baxmRNA条带强度递增,并明显低于对照组(P<0.05),而两对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论三羟基异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用,通过下调bcl-2和上调bax的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡,是其抗胃癌作用的机制之一。     

3种选择性环氧合酶-2抑制剂对肝细胞癌生长的影响

背景肝细胞癌(HCC)中有环氧合酶(COX)-2表达,非甾体抗炎药阿司匹林可能通过抑制COX-2的表达而抑制HCC生长.目的比较3种选择性COX-2抑制剂美洛昔康、赛来昔布和罗非昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721 生长的影响,观察高选择性COX-2抑制剂罗非昔布对裸鼠HCC原位移植瘤生长的影响.方法采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入检测SMMC-7721细胞的DNA合成情况;采用免疫细胞化学染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;采用DNA原位末端标记(TUNEL)染色检测细胞凋亡.给予HCC原位移植瘤裸鼠罗非昔布每日30 mg/kg 8周,测量肿瘤体积和重量.结果美洛昔康、赛来昔布和罗非昔布均能显著抑制SMMC-7721细胞的3H-TdR掺入,其抑制作用呈剂量依赖性,50%抑制浓度(IC50)分别为8.55×10-8mol/L、1.22×10-8mol/L和6.27×10-9 mol/L.3种选择性OX-2抑制剂(1×10-5 mol/L)作用24 h均可明显降低SMMC-772I细胞的PCNA表达,使细胞凋亡指数较对照组显著增高(14.6%±2.8%、21.6%±3.6%和27.1%±3.5%对1.0%±0.7%,P＜0.01),COX-2抑制剂的选择性越高,凋亡指数也越高(P＜0.01).罗非昔布组裸鼠的HCC原位移植瘤显著小于对照组,体积抑瘤率和重量抑瘤率分别为73.2%和78.1%.结论3种选择性COX-2抑制剂均能在体外有效抑制SMMC-7721细胞的生长,选择性越高,抑制作用越强.罗非昔布在体内能抑制HCC的生长,可能成为治疗HCC的有效药物.     

氯喹增强LOVO细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的作用

目的研究结肠癌细胞LOVO在氯喹(CQ)作用下对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性变化及机制。方法用MTT法分别检测CQ和5-FU作用24 h和48 h对LOVO细胞的增殖抑制作用。实验分为4组:空白对照组、CQ组、5-FU组和联合作用组。CQ、5-FU及两者联合作用于LOVO细胞后,通过细胞划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭的变化,采用流式细胞术和TUNEL方法检测细胞凋亡,采用Western blot检测细胞自噬及凋亡相关蛋白的表达情况。结果在不同浓度CQ、5-FU作用下LOVO细胞增殖受到抑制,且呈现剂量依赖性,48 h时CQ和5-FU的IC50分别为11.8μg/ml和2.5μmol/L。与空白对照组相比,CQ、5-FU作用后细胞迁移率和细胞侵袭能力显著降低,且两药联用组的抑制效应更显著。流式细胞术检测显示,CQ组、5-FU组细胞凋亡率分别为(17.85±1.04)%、(17.36±0.96)%,显著高于空白对照组(4.11±0.23)%,两药联用组凋亡率为(25.03±2.27)%,两药联用组与CQ、5-FU单用组相比,细胞凋亡率更高,差异均有统计学意义(P<0.01)。TUNEL检测显示,CQ组、5-FU组细胞凋亡指数显著高于空白对照组,两药联用组与CQ、5-FU单用组相比细胞核凋亡指数更高。Western blot检测显示CQ和5-FU处理后导致P53、Bax、caspase3、caspase9和P62蛋白表达水平显著升高,而Bcl-2、LC3和Beclin-1蛋白表达水平则显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 CQ能抑制结直肠癌细胞LOVO的增殖、迁移、侵袭和自噬,促进其凋亡,并能增强细胞对化疗药物5-FU的敏感性。     

血管内皮抑素转基因双歧杆菌抑瘤作用的实验研究

目的研究血管内皮抑素转基因双歧杆菌口服冻干粉剂(ETB-2)对裸鼠人胃癌模型和小鼠肝癌模型的抑瘤作用,并探讨有关的抑瘤机制.方法人胃癌细胞株MKN-45和小鼠HAC肝癌细胞株分别接种于BALB/L裸鼠和昆明种小鼠前肢腋下皮下建立胃癌和肝癌动物模型.分别设阴性对照(PBS)和双歧杆菌组(SQ),阳性对照胃癌组采用氟铁龙(5-FU),肝癌组采用环磷酰胺(CTX),ETB-2组分设接种24h给药组(ETB-2A)和见瘤给药组(ETB-2B),灌胃给药,每日每只0.5mL.动物处死后,剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率.剥离瘤体切片HE染色和EnvisionSystem免疫组化方法染色,分别计数微血管密度(MVD)、PCNA指数和VEGF阳性率(肝癌组),并采用Tunel方法检测细胞凋亡(胃癌组).结果ETB-2的抑瘤作用胃癌组ETB-2A的抑瘤率为47.5%,ETB-2B为43.20%,SQ为0.03%,5-FU组为41.1%;肝癌组ETB-2A的抑瘤率为51.06%,ETB-2B为39.10%,SQ为14.90%,CTX组为83.79%.MVD胃癌组ETB-2A为3.90±0.67(P<0.05),ETB-2B为4.58±0.31(P<0.05),SQ为5.80±0.67,5-FU为5.70±0.67,PBS为5.83±0.83;肝癌组ETB-2A为8.10±2.03(P<0.05),ETB-2B为12.02±1.54(P<0.05),SQ为13.75±3.36,CTX为11.49±2.82,PBS为16.80±5.22.胃癌组凋亡率(%)ETB-2A为13.92±0.65(P<0.05),ETB-2B为13.89±0.57(P<0.05),SQ为5.13±1.35,5-FU为2.67±0.23(P<0.05),PBS为1.29±0.06.肝癌组VEGF阳性率(%)ETB-2A为4.20±1.51(P<0.05),ETB-2B为4.50±2.82(P<0.05),SQ为10.88±6.24(P>0.05),CTX为5.40±3.88(P<0.05),PBS为11.53±4.25.结论①ETB-2对实验型胃癌和肝癌均有良好的抑瘤作用,其作用点主要为血管内皮抑素抑制肿瘤血管形成.②双歧杆菌对血管内皮抑素有协同抑瘤作用,又是其良好的转基因载体.     

携带人Endostatin基因的腺病毒治疗胰腺癌移植瘤

目的 观察携带人Endostatin基因的重组腺病毒载体Ad-hEnd对裸鼠胰腺癌移植瘤的治疗作用.方法 将胰腺癌细胞株SW1990细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤模型,随机分为Ad-hEnd组、报告基因LacZ重组腺病毒组(Ad-LacZ组)和对照组,每组8只.重组腺病毒200 μl瘤内注射,隔日1次,共4次.观察移植瘤的生长情况,免疫组化染色检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD),原位缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡.结果 移植瘤成瘤率100%.治疗后4周,Ad-hEnd组、Ad-LacZ组和对照组移植瘤体积分别为(921.9±279.7)mm3、(2804.4±553.5)mm3和(3040.6±487.6)mm3;瘤重分别为(1.19±0.18)g、(2.38±0.42)g和(2.41±0.47)g;VEGF表达阳性率分别为(36.3±7.1)%、(81.2±6.6)%和(79.4±6.2)%;MVD分别为12±4、27±5和25±6;细胞凋亡率分别为(31.2±5.4)%、(9.4±4.9)%和(8.5±3.7)%.与Ad-LacZ组和对照组比较,Ad-hEnd组以上各项指标均有显著性差异(P＜0.01);Ad-LacZ组和对照组之间的差异无统计学意义.结论 重组腺病毒介导的hEndostatin基因可抑制胰腺癌的生长和血管生成,促进肿瘤细胞凋亡,可用于胰腺癌抗血管生成的基因治疗.