干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制

目的 探讨干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)基因表达促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制.方法 用携带U6启动子的LRIG1特异性短发夹RNA (shRNA)序列的质粒载体pGenesil2-LRIG1-shRNA (siRNA)及含非特异shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negative shRNA(neg)转染U251细胞株,通过G418筛选,鉴定得到稳定转染细胞株.采用侵袭实验验证干扰LRIG1对U251侵袭性的影响,通过明胶酶谱实验检测基质金属蛋白激酶(MMP)-2、MMP-9的活性,Western blot法检测表皮生长因子(EGFR)及其下游丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B( P13K/AKT)信号通路蛋白的表达差异.结果 含U6启动子LRIG1 shRNA序列的质粒转染干扰组LRIG1 mRNA降低至对照组(35.3％～39.2％,P＜0.05).干扰LRIG1表达组U251细胞侵袭数[(159±15)～ (188±9)/视野],较空白对照组细胞侵袭数[(28±9)/视野]明显增多(P＜0.05);干扰LRIG1激活EGFR通路传导;干扰LRIG1后干扰组MMP-2较对照组活性增加(1.66±0.11～1.96±0.12,P＜0.01),MMP-9干扰组较对照组活性增加(4.82±0.27～4.47±0.29).结论 LRIG1表达下调后MMP-2、MMP-9活性增强,从而促进U251细胞的侵袭性,可能通过激活EGFR信号通路引起.     

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1与胶质瘤细胞株化疗敏感性之间的关系

目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋向样蛋白1(LRIG1)与胶质瘤细胞化疗敏感性的相关性.方法 替莫唑胺诱导构建多药耐药细胞株U251/TR,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测该细胞株的多药耐药性,逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测LRIG1在U251和U251/TR中的表达变化.转染LRIG1质粒体进入多药耐药细胞株,检测其对化疗药物敏感性变化.结果 成功构建多药耐药细胞株U251/TR,替莫唑胺、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱对U251的抑制率分别为:(19.30±0.04)％、(39.90±0.13)％、(28.10±0.09)％、(66.20±0.02)％、(26.30±0.11)％,而对U251/TR的抑制率分别为:(3.20±0.03)％、(15.30±0.09)％、(4.10±0.03)％、(45.60±0.10)％、(10.80±0.04)％,两者差异有统计学意义(P＜0.05).其LRIG1的表达明显降低,将LRIG1质粒体转入耐药细胞株后,TMZ、VP16、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素对空白组(耐药细胞株)的抑制率为(2.60±0.02)％、(3.30±0.02)％、(9.50±0.06)％、(2.20±0.05)％、(2.90±0.03)％,而对转染组的抑制率为(19.10±0.34)％、(38.20±0.53)％、(29.10±0.25)％、(15.20±0.55)％、(17.40±0.41)％,耐药性被逆转,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LRIG1与肿瘤的化疗敏感性相关,LRIG1可能与肿瘤的多药耐药有关.     

微小RNA-497负调控Wnt3a基因靶点抑制胶质瘤细胞增殖

目的:探讨微小RNA(miR)-497在胶质瘤细胞中表达及调控Wnt3a基因靶点抑制胶质瘤细胞增殖的影响。方法:病毒载体质粒pLVTHM、元件质粒PsPAXZ和pMDZ.G 3个质粒共同组成慢病毒包装系统。重组质粒pGL3-WNT3a-wt 3’端非编码区(3’UTR)/pGL3-WNT3a-mut 3’UTR与miR...     

miR-133a靶向MMP-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制研究

目的 研究微小RNA(microRNA,miR)-133a靶向基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制.方法 培养正常成骨细胞株hFOB1.19及骨肉瘤细胞株MG63、U20S、SAOS2,采用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain...     

微小RNA-34对小儿恶性胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:观察微小RNA(miR)-34对小儿恶性胶质瘤细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:选取2017年6月到2019年6月我院收治的49例恶性胶质瘤组织和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织miR-34表达水平。用过表达对照和miR-34慢病毒感染U251神经胶质瘤细胞,建立对照...     

血清微小RNA-26a、微小RNA-21、微小RNA-192在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨血清微小RNA(miR)-26a、miR-21、miR-192在胃癌中的表达及相关性分析。方法选取2021年1月至2021年12月诊治的102例胃癌患者作为研究对象, 并设立其为观察组, 按照1∶2配对原则选取51例健康体检者设立为对照组。对比不同组别患者血清miR-26a、miR-21、miR-192, 并分析其在不同病理特征胃癌患者中的表达。采用Logistic回归模型构建miR-26a、miR-21、miR-192联合诊断胃癌模型, 采用ROC曲线模型分析miR-26a、miR-21、miR-192及三项联合诊断胃癌的曲线下面积(AUC)值、敏感度、特异度。结果观察组的miR-26a、miR-21、miR-192(20.43±5.96、36.74±12.47、0.15±0.04)均高于对照组(15.23±3.63、23.45±5.25、0.22±0.08, t=5.718、7.286、6.396, P<0.01)。不同TNM分期、肿瘤浸润深度的miR-26a、miR-21、miR-192比较(17.52±4.93、33.82±10.64、0.17±0.03比26.7...     

IgA肾病患者尿液外泌体中微小RNA-146a、微小RNA-210表达及与病理分级的相关性研究

目的 探索IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）患者尿液外泌体中微小RNA(miRNA,miR)-146a、miR-210表达及其与IgAN病理分级的相关性。方法 选取2018年1月至2022年1月在雅安市人民医院经肾穿刺后病理组织学活检确诊的IgAN患者113例作为研究对象,并选取同期健康体检人群100人作为健康对照组。将研究对象的肾脏病理标本按照Lee氏分级分为轻（Ⅰ-Ⅱ级）、中（Ⅲ级）、重（Ⅳ-Ⅴ）3组,实时荧光定量PCR比较实验组及健康对照组两组间尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平;比较不同病理分级IgAN患者尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平;Spearman秩相关系数分析IgAN患者24 h尿蛋白、血肌酐、尿液外泌体miR-146a及miR-210表达水平之间的相关性;采用受试者工作特征曲线评估尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达对IgAN的诊断价值。结果 IgAN患者尿液外泌体中miR-146a[(3.27±1.59)比（5.13±0.34）]、miR-210[(1.25±0.71)比（2.33±0.45）]...     

黄芩苷对胶质瘤细胞增殖及侵袭的影响及其机制

目的:探讨黄芩苷对U-251胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及可能机制。方法:人星形细胞瘤细胞(U-251胶质瘤细胞)购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。采用0、10、20、50、100和200 mg/L等浓度黄芩苷处理U-251胶质瘤细胞筛选出半数抑制浓度(IC 50)。将U-251胶质瘤细胞分为对照组(...     

微小RNA-17通过抑制波形蛋白表达影响上皮-间充质转化对前列腺癌细胞侵袭能力的影响及其机制

目的:观察前列腺癌(PC)细胞中微小RNA(miR)-17对波形蛋白(Vimentin)表达的影响,及与上皮-间充质转化(EMT)及细胞侵袭间的关系。方法:收集河北省中医院泌尿外科2019年1月至2020年12月间20例前列腺癌组织及其癌旁组织标本;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测miR-17的表达水平...     

探讨PIAS3表达水平对胶质瘤TJ905细胞侵袭作用的影响

目的 探讨PIAS3表达对人脑胶质瘤TJ905细胞侵袭力的影响及其可能的机制.方法 构建PIAS3过表达载体及合成PIAS3 siRNA,转染TJ905细胞,上调或下调TJ905细胞中PIAS3表达水平,Transwell试验检测TJ905细胞的侵袭力,Western blot验证PIAS3表达及基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达.结果 体外转染质粒和寡聚核苷酸效率分别为85.3%±3.1%和95.1%±2.9%.体外转染PIAS3过表达质粒能有效提高TJ905细胞中PIAS3蛋白的表达,明显抑制TJ905细胞侵袭力(P<0.05),细胞穿过率由对照组87.9%±9.3%降为37.3%±7.9%,同时上调TIMP3和下调MMP-2、MMP-9蛋白的表达(P<0.05);转染PIAS3 siRNA能有效抑制TJ905细胞中PIAS3蛋白的表达,增强TJ905细胞侵袭力(P<0.05),细胞穿过率由对照组83.9%±7.1%增加到93.2%±3.1%,同时下调TIMP3和上调MMP-2、MMP-9蛋白的表达(P<0.05).结论 PIAS3表达水平与胶质瘤TJ905细胞的侵袭特性密切相关.

Abstract：

Objectives To investigate the function and possible mechanisms of PIAS3 expression on the invasion of TJ905 cells. Methods PIAS3 overexpression vectors were constructed and PIAS3 siRNA were chemically synthesized, which were separately transfected into TJ905 cells for upregulation or downregulation of PIAS3 expression levels in TJ905 cells. After that, the invasive effects of TJ905 cells were measured by Transwell assay, and the expression of PIAS3, tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP)3, matrix metalloprotease (MMP)-2, and MMP-9 were identified by Western blot. Results In vitro transfection efficiency of plasmids and oligonucleotides were separately 85.3% ± 3. 1% and 95. 1% ± 2. 9%. PIAS3 overexpression plasmid transfection in vitro could effectively improve the expression of PIAS3 protein in TJ905 cells and inhibit the invasion of TJ905 cells (P < 0. 05), and cell penetration ratio reduced from 87.9% ±9.3% to 37.3% ±7.9% compared with control group, while it upregulated TIMP3 and downregulated MMP-2, MMP-9 protein expression (P<0.05); PIAS3 siRNA transfection could inhibit the PIAS3 protein expression of TJ905 cells and promote the invasion of TJ905 cells (P < 0. 05) , and cell penetration ratio increased from 83. 9% ±7. 1% to 93. 2% ±3. 1% compared with control group, while it downregulated TIMP3 and upregulated MMP-2, MMP-9 protein expression (P < 0.05). Conclusion PIAS3 expression is closely related to the invasion properties of glioma TJ905 cells.     

LRIG1对人脑胶质瘤放疗敏感性的作用及其机制

目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1( LRIG1)对人脑胶质瘤细胞株U251放疗敏感性的影响及其机制.方法 应用脂质体介导的基因转染技术将PEGFP-N1、PEGFP-LRIG1 质粒分别转染人人脑胶质瘤U251细胞,G418( 1000 mg/L)筛选,建立稳定细胞株,采用克隆形成实验测定N1-U251及LRIG1-U251两组细胞的放射敏感性,Western blot法测定两组细胞中LRIG1及RAD51蛋白的表达差异,彗星分析法测定两组细胞双链DNA断裂的修复.结果 成功建立高表达LRIG1的U251稳定细胞株,LRIG1-U251组(0.352±0.011)较N1-U251组(0.071±0.003) LRIG1基因表达明显上调(P＜0.01).LRIG1基因表达上调后U251细胞的放射敏感性增加,放射增敏比为1.448.上调LRIG1基因明显抑制了RAD51基因的表达(P＜0.01)及照射后的高表达(P＜0.01).彗星分析表明LRIG1基因的过表达将照射8h后U251细胞的Olive彗尾力矩由21.14±3.42增加至32.81±5.61 (P ＜0.05).结论 LRIG1可以增加人脑胶质瘤U251细胞的放射敏感性.机制可能是通过降低RAD51蛋白表达,进而抑制双链DNA损伤的修复.     

反义微RNA25抑制人脑胶质瘤细胞生长的研究

目的 观察抑制微RNA( miRNA,miR)-25表达对人胶质瘤细胞生长与凋亡的影响.方法 脂质体转染miRNA抑制物,逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)检测抑制效果;流式细胞术检测分析细胞周期分布及凋亡变化、噻唑蓝(MTT)试验和软琼脂克隆形成实验评价细胞生长能力,Transwell实验检测细胞侵袭力.结果 miR-25抑制物可抑制miR-25的表达,使得S期细胞比例减少(下降6％ ～ 10％),生长速度减慢(P＜0.05),凋亡增加10％(P＜0.05),非锚定依赖性生长的克隆形成能力减弱(P＜0.05),穿过Matrigel的细胞数无明显变化.结论 抑制miR-25可以抑制胶质瘤细胞的生长,促进凋亡,但对细胞侵袭能力无明显影响.     

微小RNA-19b对急性坏死性胰腺炎腺泡细胞坏死的作用

目的 观察微小RNA-19b(miRNA,miR-19b)在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)中的表达变化及其对腺泡细胞坏死的作用.方法 建立ANP模型:接种AR42J细胞1×105个/孔于24孔板,24 h后加入200 μm/L牛磺石胆酸-3-硫酸酯二钠盐(TLC-S),1h后检测淀粉酶和miR-19b表达量.病毒转染及分组:转染腺病毒介导miR-19b模拟物(mimic)为mimic组,转染miRNA反义寡核苷酸链(AMO)为AMO组,转染空病毒组及未转染病毒的空白组,转染48 h后荧光检测转染效率,诱导ANP,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-19b的表达量,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色法检测AR42J细胞坏死率.结果 TLC-S处理后AR42J细胞较未处理细胞淀粉酶水平[(1 084.5±64.9)U/L比(290.3 ±6.8)U/L]明显升高(P＜0.05),miR-19b表达量升高(2.51±0.14)倍,建立模型成功;mimic组miR-19b表达量较空病毒组升高(5.94±0.95)倍,AR42J细胞坏死率明显升高[(50.3±1.5)％比(39.6±2.3)％,P ＜0.05];AMO组miR-19b表达量降低(0.38±0.15)倍,AR42J细胞坏死率明显降低[(23.1±3.3)％比(39.6±2.3)％,P＜0.05];空病毒组比空白组miR-19b表达量、细胞坏死率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-19b表达量在ANP中升高,上调其表达,腺泡细胞坏死率增加,下调其表达,腺泡细胞坏死率降低.     

胶质瘤细胞和血管内皮细胞的相互作用对侵袭的影响及其与纤维连接蛋白的关系

目的　探讨胶质瘤细胞和血管内皮细胞的相互作用对胶质瘤细胞侵袭力的影响及其这种影响与纤维连接蛋白 (FN)表达的关系。方法　在体外利用Transwell共培养系统对人脐静脉内皮细胞和C6胶质瘤细胞进行共培养 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫细胞化学方法检测经和C6细胞共培养下血管内皮细胞上FN的基因转录及蛋白的表达情况 ;采用体外快速侵袭力测定法检测C6细胞侵袭力在不同状态的血管内皮细胞作用下的变化及FN抗体对这种变化的影响。结果　人脐静脉内皮细胞经和C6细胞共培养后出现FN的基因转录及蛋白的表达 ;在血管内皮细胞 共培养上清液组 ,C6细胞侵袭Matrigel膜最明显 ,其次是以单纯共培养上清液为诱导剂组 ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,而在 0 .1%BSA RPMI 164 0 血管内皮细胞组 ,孵育 2 4h仍未发现C6细胞侵袭Matrigel膜。而在FN抗体封闭下孵育 2 4h时只有血管内皮细胞 共培养上清液组的C6细胞出现侵袭 ,但侵袭的细胞数较未封闭的少 (P <0 .0 5 )。结论　胶质瘤细胞和血管内皮细胞相互作用可促进瘤细胞侵袭 ,这种影响与相互作用后内皮细胞表达FN有关。     

塞来昔布抑制脑胶质瘤细胞运动侵袭的影响

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对13251胶质瘤细胞运动侵袭能力的影响.方法 采用脑胶质瘤细胞的体外趋化运动模型和体外侵袭模型,分12、24 h的不同时间进行了Celecoxib抑制胶质瘤细胞运动侵袭的生物特性研究.结果 趋化运动实验中Celecoxib处理后12 h组、24 h组细胞较对照组细胞的趋化运动能力明显下降,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞趋化运动抑制率为52.57%、73.91%,两者差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭实验中Celecoxib处理12、24 h后侵袭至滤膜下表面的细胞数均低于对照组的细胞数,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞组织侵袭抑制率为55.90%、85.16%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Celecoxib能在模拟体内运动侵袭试验中有效抑制U251胶质瘤细胞的运动侵袭能力.     

SLC22A18基因表达对胶质瘤细胞生物学特性的影响

目的 观察SLC22A18基因表达对人胶质瘤U251细胞生物学特性的影响.方法 U251细胞分别转染pcDNA3.SLC22A18和pcDNA3表达质粒后,筛选3个表达不同水平SLC22A18的U251克隆和2个不表达SLC22A18的U251克隆,研究SLC22A18蛋白表达水平对U251细胞黏附、迁移及聚集能力的影响.结果 与不表达SLC22A18的U251细胞比较,表达SLC22A18的U251细胞在附着后1 h和4 h时的细胞黏附能力均显著增强,分别平均增强65.7%和26.5%(P＜0.01),而其细胞过河实验显示过河时间平均延长67.8%(P＜0.05),并且细胞迁移能力平均下降71.5%(P＜0.01).同时,SLC22A18表达诱导显著的同源细胞聚集,聚集指数平均下降53.2%(P＜0.01).结论 SLC22A18蛋白表达显著抑制人胶质瘤U251细胞的恶性生物学特性.

Abstract：

Objective To study the effect of SLC22A18 gene expression on the biological behaviors of human glioma U251 cells. Methods Three U251 clones with different expression levels of SLC22A18 and two U251 clones without SLC22A18 expression after transfecting U251 cells with pcDNA3. SLC22A18 and pcDNA3 using lipofectin were chosen to study the effects of SLC22A18 gene expression on cell adhesion,motility and aggregation. Results Compared to the non-SLC22A18-expressing U251 cells, SLC22A18-expresing U251 cells indicated enhanced cell adhesion, and average 65. 7% and 26. 5% increases in cell adhesion at 1st and 4th h of the culture were observed (P ＜0. 01) , but the crossing-river time of SLC22A18-expresing U251 cells was averagely prolonged by 67. 8% (P ＜0. 05) , and their motility was decreased by 71.5% ( P ＜ 0. 01 ). At the same time, SLC22A18-expressing U251 cells demonstrated significantly homophilic aggregation, and aggregation index was decreased by 53. 2% compared to the non-SLC22A18-expressing U251 cells (P＜0. 01). Conclusion SLC22A18 gene expression significantly suppresses the malignant biological behaviors of U251 glioma cells.     

藤梨根对人脑胶质瘤U251细胞的影响及其机制

目的 探讨藤梨根对人脑胶质瘤U251细胞的作用及其机制.方法 常规培养人脑胶质瘤细胞株U251,分别加入不同浓度(50、100、200 mg/L)藤梨根作用48 h后细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测U251的细胞活性;取50 mg/L藤梨根作用48 h后的细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测信号转导和转录活化因子3(STAT3) mRNA的表达,Western blot检测STAT3蛋白的表达.结果 藤梨根作用48 h后U251细胞凋亡率明显增加,不同浓度的凋亡率分别为50 mg/L:(26.51士1.30)％、100 mg/L:(55.92 ±2.40)％、200mg/L:(63.69±2.70)％;50 mg/L藤梨根处理后的U251细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达水平均下调,检测其中相关蛋白表达结果显示,藤梨根处理组中磷酸化STAT3(p-STAT3)和B淋巴细胞瘤/白血病-2(bcl-2)的表达下调,而bcl-2相关X蛋白(bax)的表达上调.结论 藤梨根可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖,其机制可能与藤梨根调控STAT3信号通路有关.