运用PCR方法检测解脲脲原体生物群在临床实际应用的探讨

目的探讨用聚合酶链反应（PCR）检测解脲脲原体（Uu）生物群,在临床实际运用的可行性与必要性。方法采用微量肉汤稀释法测定uu体外抗菌药物敏感性,并以多条带抗原（MB—Ag）基因为靶位,设计分群引物,对uu菌株进行生物分群检测。结果124株uu临床菌株中,男性parvo生物群占36-84％（14／38）,T960生物群占63．16％（24／38）,未检测到两群混合的情况;女性parvo生物群占74．41％（64／86）,T960生物群占23．26％（20／86）,两群都检测到的占1．62％（2／86）。Uu两大生物群对四环素、多西环素、洛美沙星的耐药率无显著性差异（P值分别为0．1558、1．0000、0．3801）,但对红霉素,阿齐霉素耐药率存在显著性差异（P值分别为0．0008和〈0．0001）。结论建议临床工作中运用PCR方法检测Uu生物群,便于指导临床治疗。     

广州地区解脲脲原体对7种药物体外敏感性研究

目的测定7种抗菌药物对50株解脲脲原体体外抗菌作用效果。方法采用液体倍比稀释法测相应抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。结果红霉素、交沙霉素、阿奇霉素的MIC50分别为0.50、0.25、0.50mg/L,MIC90分别为4.00、4.00、4.00mg/L;加替沙星、左氧氟沙星、司帕沙星的MIC50分别为0.25、4.00、0.50mg/L,MIC90分别为2.00、64.00、2.00mg/L;四环素的MIC50为0.50mg/L,MIC90为32.00mg/L。结论大环内酯类药物中交沙霉素敏感性最高,喹诺酮类药物加替沙星、司帕沙星对解脲脲原体有较高敏感性,四环素的敏感性较低。     

解脲脲原体与慢性前列腺炎的相关性研究

本文对６０例非细菌性的慢性前列腺炎患者的前列腺液用ＰＣＲ和培养法同时进行解脲脲原体的检测,结果显示：ＰＣＲ技术的阳性率为１５．０％,培养法的阳性率仅为６．７％;２０例正常人对照组均为阴性。两组差异显著（Ｐ＜０．０１）。该结果还表明,ＰＣＲ技术检测前列腺液中解脲脲原体的方法简单、特异,可替代培养技术,并可作为解脲脲原体病原学检查和疗效考核的监测手段。     

解脲脲原体及其生物群类别与盆腔炎相关性的研究

目的 研究解脲脲原体及其生物群类别与盆腔炎的相关性。方法 应用聚合酶链反应方法，对解脲脲原体标准株的14个血清型进行检测和分群，并对照检测了100例盆腔炎患者的宫颈分泌物。结果 解脲脲原体parvo生物群的扩增片段长度为403bp，T960生物群的扩增片段长度为448bp；盆腔炎患者中，解脲脲原体的检出率为34％，其中parvo生物群占9％，T960生物群占26％，二者混合感染率为1％；对照组中解脲脲原体的检出率为13％，其中parvo生物群占10％，T960生物群占3％。结论 解脲脲原体是盆腔炎的重要致病因素，其T960生物群与盆腔炎的致病性非常明显相关。     

解脲脲原体分群及分型的研究进展

解脲脲原体在疾病中的致病作用仍有争议,现已假设仅有某个或某些血清型与疾病有关联。因此,研究解脲脲原体感染的流行病学和致病性需要一种快速、准确、稳定、可操作的标准化分群或分型方法。现就近几年来此方面的研究进展作一综述。     

解脲脲原体生物群分布与耐药性差异研究

目的 了解本地区泌尿生殖道感染人群中解脲脲原体感染的生物群分布特点及其耐药情况。方法 采用液体选择培养基对泌尿道分泌物标本进行培养、鉴定及药敏;选取解脲脲原体阳性标本进行PCR分群和分型;分析各生物群型别及其耐药性差异。结果 985例检测标本中,单独解脲脲原体阳性395例,总阳性率为40.10%,其中女性368例,男性27例,其阳性率分别为42.45%、22.88%,女性阳性率高于男性,其差异有显著统计学意义(χ²=16.550,P<0.01)。395例单独解脲脲原体阳性标本作PCR分群分型显示,单独生物一群阳性278例,阳性率为70.89%;单独生物二群阳性80例,阳性率为20.25%。单独生物一群中以单一血清6型(121例,43.21%)、3/14型(96例,35.53%)感染为主。单独生物二群均为混合血清型感染,基因亚型1(血清型2、5、8、9)和亚型3(血清型7、11)混合感染(49例,61.25%);基因亚型2(血清型4、10、12、13)和亚型3(血清型7、11)混合感染共检出(31例,38.75%)。结合药敏结果发现,解脲脲原体对喹诺酮类药物耐药率较高,对四环素类药物较敏感,且多重耐药现象严重。生物一群对司帕沙星的耐药性高于生物二群,二者差异有统计学意义(χ²=5.701,P=0.017<0.05),且生物一群对米诺环素、多西环素、阿奇霉素的耐药性远高于生物二群,其差异有显著统计学意义(χ²=10.811,χ²=19.103,χ²=7.541,P均<0.01)。进一步结合分型结果发现,生物一群中单一血清型S6耐药率最高的抗菌药为氧氟沙星(76.86%),S1型耐药率最高的抗菌药为罗红霉素(95.74%),S3/14型耐药率最高的抗菌药为罗红霉素和阿奇霉素(均为86.46%)。结论 泌尿生殖道感染人群中解脲脲原体阳性率较高,女性高于男性,以生物一群单一血清型感染为主;本地区耐药形势严峻,生物一群耐药性高于生物二群;生物一群中各血清型的耐药性存在不同程度的差异。结合解脲脲原体生物分群分型结果可辅助合理选用抗菌药物,以避免滥用致耐药株产生。     

培养时间及培养基pH对大环内酯类抗解脲脲原体MIC的影响

目的研究不同培养时间及培养基pH值，对红霉素、阿奇霉素及交沙霉素在体外抗解脲脲原体（Uu）最低抑菌浓度（MIC）的影响。方法用微量液体倍比稀释法，测定了35株临床Uu标本在pH值为6．0、6．5及7．0的培养基中，分别培养24、36、48及60小时时的MIC，并计算MIc90。研究培养时间时以24小时为基础，而研究不同pH则以6．0为基础。结果培养60小时的MIC与48小时相同。pH值由6．0升高到7．0，在不同的培养时间内，红霉素、阿奇霉素及交沙霉素的MIC可以分别降低1～16、2～32及2～32倍，其中MIC90降低的倍数分别为4～8、4～8、2～4倍，各组MIC的降低均有显著性差异（P〈0．005）。当培养时间由24小时延长到48小时，在不同pH值的培养基中，三种抗生素的MIC分别可以增加1～32、1～8及1～16倍，其中MIC90分别升高4～8、2～4、2～4倍，各组MIC的升高有显著性差异（P〈0．005）。结论体外实验中，当pH在6．0～7．0之间，培养时间在48小时内，红霉素、阿奇霉素及交沙霉素的MIC随培养基pH升高而显著降低，随培养时间延长而显著增加。培养时间超过48小时，MIC不再改变。     

解脲脲原体小鼠宫内感染的实验研究

目的　建立解脲脲原体（Ｕｕ）小鼠宫内感染的动物模型。方法　分别将４、１ 和９ 型Ｕｕ（２×１０４ ｃｆｕ／ｍ ｌ）接种于妊娠第１２．５、１３．５、１４．５ 天孕鼠阴道内（３４ 只）,以最后一次攻击后的４８ｈ 内分娩为早产。以腹腔内接种４型Ｕｕ（６ 只）和阴道内注入灭菌盐水（９ 只）为对照组。结果　经阴道内接种Ｕｕ４型的４３．７％ （７／１６）孕鼠在４８ｈ 内早产,显著高于１ 型Ｕｕ（８．３％ ,１／１２,Ｐ＜ ０．０５）和９型Ｕｕ（０％ ,０／６,Ｐ＜ ０．０５）以及对照组（０％ ,０／１５,Ｐ＜ ０．０１）;接种４、１ 和９型Ｕｕ 后,早产和不早产孕鼠子宫角Ｕｕ 的检出率分别为９７％ 、４６％ 和２５％ ;接种４ 型Ｕｕ 后,早产幼鼠的心、肺Ｕｕ 检出率为４６％ （２５／５４）,而注射灭菌盐水、１和９ 型Ｕｕ 的非早产幼鼠中Ｕｕ 的检出率均为０％ （０／４５,０／５５,０／４５,Ｐ＜ ０．０１）。三种血清型Ｕｕ 感染后早产或不早产幼鼠脑组织中Ｕｕ 的检测均为０％ （０／５９）。结论　小鼠Ｕｕ４ 型和１型阴道内接种可导致部分孕鼠宫内感染动物模型的建立将有助于对人类Ｕｕ 早产发病机制的进一步研究。     

167株男性解脲脲原体耐药性分析

目的监测山西省大同市第四人民医院检验科皮肤性病门诊男性患者尿道分泌物中分离的解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum,Uu）对常见抗菌药物的耐药性和耐药变迁,为泌尿生殖道解脲脲原体感染者提供参考依据,更好地指导临床合理用药。方法对2010年1月～2012年12月皮肤性病门诊男性患者尿道分泌物中分离的167株解脲脲原体的红霉素、左氧氟沙星、洛美沙星、氧氟沙星、克拉霉素、罗红霉素、阿奇霉素、交沙霉素、司帕沙星、美满霉素、强力霉素、甲砜霉素12种抗菌药物耐药检测结果进行分析。结果 167株解脲脲原体耐药率为94.60%,其中耐3种药最高（22.20%）,耐9种药、耐11种药和耐12种药最低（均为1.20%）,耐药率由高到低依次是红霉素81.40%、左氧氟沙星55.10%、洛美沙星46.10%、氧氟沙星44.30%、克拉霉素34.10%、罗红霉素31.70%、阿奇霉素30.50%、交沙霉素28.10%、司帕沙星27.50%、美满霉素16.80%、强力霉素16.80%、甲砜霉素15.60%,除美满霉素外,解脲脲原体对上述抗生素耐药率,均有逐年升高趋势。结论解脲脲原体的耐药率较高,并有逐年升高的趋势,临床医生应根据药敏试验结果合理应用抗生素,对降低耐药率,有效控制疾病具有重要的意义。     

8种支原体液体培养试剂盒的质量评价

目的临床评估8种支原体(Uu)液体培养试剂盒(Kit)的质量。方法 6家性病实验室的技术人员,在同一条件下,分别用8种试剂平行双盲检测100份临床样本。以A7固体培养结果为标准,分析各试剂的敏感性、特异性、总功效率。结果 8种Kit检测Uu的敏感性从73.2%～100%不等,其中Kit6、7、8的敏感性低于85%,显著低于固体培养法(P<0.01)。Uu检测的特异性显示:5种Kit达95.4%～100%,而Kit2、4、8为77.3%～86.4%,显著低于固体培养法(P<0.05)。人型支原体(Mh)检测的敏感性较高(80.4%～97.8%),只有Kit9的敏感性(80.4%)显著低于固体培养法(P<0.01),漏检率为19.6%。Mh检测的特异性均达96.3%以上。10份抑菌效果实验显示:所有试剂均能100%抑制杂菌生长。结论部分国产试剂已等同或接近国外试剂,但试剂的性能指标存在差异,临床检测应用时应注意。     

244例解脲和人型支原体浓度及药敏分析

目的 调查非淋菌性尿道炎、宫颈炎患者解脲和人型支原体浓度及对临床常用10种抗菌素耐药情况。方法 采取男性尿道、女性宫颈拭子进行支原体培养、浓度测定和药敏试验。结果 244例支原体阳性样本中,浓度≥104ccu/ml者占91.8％,对支原体敏感的药物依次为交沙霉素、强力霉素、阿奇霉素、左旋氧氟沙星等。结论 耐药率较高的药物依次为氧氟沙星、红霉素、乙酰螺旋霉素、四环素。支原体对左旋氧氟沙星耐药性有增强趋势。     

性高危人群感染解脲脲原体和人型支原体分析

目的　探讨泌尿生殖道支原体在性高危人群中的感染状况。方法　采用培养法对 4 6 8例按摩妇女、95例性乱者、2 12例性病伴侣进行解脲脲原体 (Uu)和人型支原体 (Mh)的检测。结果　按摩妇女、性乱者、性病伴侣泌尿生殖道支原体感染率分别为 6 6 .7%、35 .8%、39.2 % ,与健康人群 (13.5 % )比较 ,差异均有非常显著的统计学意义 (χ2 =174 .5 6、2 0 .91、37.98,P均 <0 .0 0 5 )。按摩妇女支原体感染率与性乱者、性病伴侣比较 ,差异有非常显著的统计学意义 (χ2 =31 78、4 5 .37,P均 <0 .0 0 5 ) ,性乱者与性病伴侣比较 ,差异无显著的统计学意义 (χ2 =0 .31,P>0 .0 5 )。Uu感染率 (2 1.0 % )与Mh(8.0 % )比较 ,前者非常明显地高于后者 (χ2 =33.16 7,P <0 .0 0 5 )。女性支原体感染率 (6 3.0 % )非常明显地高于男性 (2 4 .5 % ) (χ2 =74 .5 5 ,P <0 .0 0 5 )。男性Uu感染率 (9.0 % )与女性(2 0 .0 % )比较 ,女性非常明显地高于男性 (χ2 =10 .19,P <0 .0 0 5 )。Uu和Mh混合感染率 (2 9.6 % )非常明显地高于Uu(17.8% )或Mh(8.0 % )的感染率 (χ2 =2 9.5 6、117.99,P均 <0 .0 0 5 )。结论　Uu、Mh在按摩妇女、性乱者、性病伴侣中流行广、感染率高 ,在性病的防治和监测工作中应加以重视。     

解脲支原体3血清型和14血清型多带抗原B细胞表位预测

目的 预测解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu3和14血清型多带抗原(multiple banded antigen, MBA)的优势B细胞表位和Th表位。方法 利用GOR4和HNN方法预测Uu3和Uu14血清型MBA的二级结构,结合其跨膜区域、亲水性、极性、柔韧性、表面可能性和抗原性等方面特征,预测其优势B细胞表位;同时筛选MHC-Ⅱ类限制性Th表位。合成4个富含B/Th细胞多表位肽,免疫小鼠评价其免疫原性。结果 Uu3血清型和14血清型MBA的B、Th表位具有高度同源性,其共同的富含B/Th细胞抗原表位位于N端31-51、55-75、97-115和154-168肽段。MBA aa31～51 ( F1)、MBA aa 55～75( F2)、MBA aa 97～115( F3) 及MBA aa 154～168 ( F4) 4个多表位肽具有良好的免疫原性,其诱导产生的特异性抗体明显高于PBS对照组(P<0.01)。结论 多参数预测Uu MBA B细胞优势表位可为MBA单克隆抗体的制备和Uu表位疫苗设计等研究提供理论依据。     

青岛地区解脲脲原体和人型支原体在健康成年女性泌尿道中的携带情况

目的了解解脲脲原体（Uu）及人型支原体（Mh）在健康成年女性泌尿道中的定植情况,并揭示携带情况下Uu的分群分型状况。方法留取清洁前段尿,离心取尿沉渣。首先采用支原体液体培养基进行初步筛查,再对培养阳性者进行聚合酶链反应（PCR）进一步确证,并对Uu阳性标本进行分群分型。结果 800份标本中共检出Uu 146例（18.25%）,Mh 21例（2.63%）。青年组Uu阳性率为24.40%（61/250）,中年组为21.60%（54/250）,老年组为10.33%（31/300）。3组均以生物一群为主。青年组和中年组以6型为主,老年组以1型为主。青年组、中年组、老年组Mh检出率分别为3.20%（8/250）、4.00%（10/250）、1.00%（3/300）。结论 Uu尤其是生物一群可能为健康成年女性泌尿道中的正常定植的菌群,1型和6型为青岛地区健康成年女性优势血清型。Mh在健康成年女性中携带率较低。     

解脲脲原体对人精子形态结构及膜功能完整性的影响

目的 探讨解脲脲原体(Uu)对人精子形态、超微结构和膜功能完整性的影响.方法 Uv临床标本和标准菌株分别与精子按照25:1比例混合,通过改良巴氏染色、透射电镜、低渗肿胀试验观察精子形态、超微结构及膜功能完整性的改变.结果 精子出现头部、颈中段和尾部的缺陷;透射电镜观察可见Uu吸附于精子表面、精子顶体、膜结构、线粒体、中心粒、外周致密纤维等超微结构改变;感染组精子头部膜功能完整性、尾部膜功能完整性均低于正常对照组.结论 Uu感染可改变精子形态、超微结构,降低精子膜功能完整性.     

反相高效液相色谱法同时测定食品中的几种重要金属元素

目的 验证用反相高效液相色谱法同时测定食品中的几种金属元素的效果。方法 用2-2-噻唑偶氮,5-二乙氨基酚为柱前衍生试剂,甲醇（内含0.30%磷酸酸）和pH4.6磷酸-磷酸钠缓冲溶液梯度洗脱为流动相,Waters Nova-Pak-18液相色谱柱为固定相。紫外二极管矩阵检测器检测,反相高效液相色谱法分离测定食品中铁、钴、镍、铜、锌和锰。结果 根据信噪S/N=4.0各种金属离子的检测限分别为：铁4.0μg/L,钴5.0/Lμg,镍4.8 μg/L ,铜3.0μg/L,锌4.8μg/L,锰6.0μg/L,本方法相对标准偏差在2.0%～3.8%之间,标准回收率在95%～108%。结论 本方法可用于食品中痕量铁、钴、镍、铜、锌、锰的测定,结果令人满意。     

HIV感染者和AIDS患者结核分枝杆菌液体培养效果研究

目的 探讨液体培养在我国HIV感染者与AIDS患者结核病早期诊断中应用的可行性,为Mtb与HIV双重感染的防治提供参考。 方法 实验组选取安徽、河南、新疆、广西、云南5个省、自治区中开展中国全球基金结核病项目Mtb与HIV双重感染防治工作的10个地市（实际纳入8个地市）,在新发现和既往可随访的15 199例HIV感染者与AIDS患者中选取符合条件的2162例进行液体培养,记录相关结果信息,并与同期收集的同地区全部15 199例和全国67 186例HIV感染者与AIDS患者（对照组）通过常规结核病检查方法获得的结核病诊断率进行比较。 结果 实验组样本阳性率14.2%(306/2162),明显高于同地区同期总体结核病诊断率5.2%（793/15 199）,差异有统计学意义（χ²=254.9,P<0.0001）;实验组阳性率（14.2%）与同地区总体结核病诊断率（5.2%,793/15 199）也都分别高于全国同期HIV感染者与AIDS患者的结核病诊断率（2.3%,1525/67 186）,差异均有统计学意义（χ²=1150.7、393.8,P值均<0.0001）。 结论 液体培养与结核病症状筛查、痰涂片和X线胸片检查等常规结核病检查方法相比,可以显著提高HIV感染者与AIDS患者的结核病检出率,对于HIV感染者与AIDS患者的结核病早期诊断有着重要意义,适合在我国进行推广。     

A liquid culture method for the in vitro growth of hemopoietic progenitor cells from normal human adult peripheral blood allowing for analysis by multiparameter flow-cytometry.

A liquid culture method has been developed allowing for the in vitro growth of peripheral blood-derived hemopoietic progenitor cells of myeloid, erythroid, monocytic and megakaryocytic lineages. Adherent cell- and CD21-positive cell-depleted PBMC from normal subjects have been cultured in the presence of rhEPO, rhGM-CSF or rhIl-3. Culturing cells in liquid cultures and in plasma clots, a similar dose-response was observed for granulocytic cells/liquid culture and granulocytic colonies/plasma clot with rhGM-CSF, and also for erythroid cells/liquid culture and erythroid colonies/plasma clot with rhEPO. Comparing serum- liquid cultures to serum+ liquid cultures, the ratio of CD13+ cells to CD15+ cells was higher in serum- cultures, indicating a maturation arrest of myecloid cells with serum deprivation. Using dual-colour flow-cytometry, cell-cycle analysis of CD13+ cells, comparing the effects of rhGM-CSF to those of rhIl-3, have been performed. The liquid culture method promises to be a useful tool for the study of in vitro differentiation and proliferation of hemopoietic progenitor cells.     

An efficient method for the culture of Helicobacter pylori from gastric biopsies with two-section petri dishes

Purpose. Helicobacter pylori is the principal cause of chronic gastritis and is strongly associated with peptic ulcer disease and gastric cancer, as well as with gastric lymphoma (mucosa-associated lymphoid tissue [MALT] type). H. pylori could be recovered by many kinds of media, however, it could not be detected efficiently. This study was trying to ameliorate the isolation and detection rate with selective and non-selective media. Methods. First, type strain (ATCC 43504) was cultured with twelve different kinds of sheep blood agar based on brain heart infusion medium for five days. Then five better non-selective media and five selective media were chosen for the biopsy, which were incubated at 37°C in a microaerophilic incubator for five days. Endoscopic biopsies were collected from 623 patients at Kaohsiung Medical University Hospital. Results. It was found that non-selective media, which contain 5% modified chocolate agar (the ratio of fresh and heated sheep blood is 2) with 1% Isovitalex, had the best detection rate (91.1 ± 0.6)%. Furthermore, 5% modified chocolate agar with 1% Isovitalex and 1% antibiotics would increase the detection rate to (97.1 ± 0.3)%. Conclusions. According to Ansorg's method, the best detection rate (98.4 ± 0.7)% could be obtained with two-section petri dishes which had 5% modified chocolate agar with antibiotics and the other without antibiotics. Received: June 5, 2000 / Accepted: November 10, 2000