PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂在淋巴瘤中的研究进展*

磷脂酰肌醇-3 激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI 3K）- 蛋白激酶B（protein kinaseB ,PKB ,又称AKT ）- 雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of  rapamycin,mTOR）信号通路与细胞的生长、增殖、分化、凋亡、代谢等密切相关,在多种实体肿瘤中已发现该信号通路的异常。近年来,以抑制该通路特定位点的靶向治疗已成为抗肿瘤的研究热点。许多该位点新型抑制剂也已进入淋巴瘤的临床试验中,本文就该通路在淋巴瘤中的活化状态及各个分子靶点抑制剂的研究进展做一综述。     

PI3K抑制剂林普利塞对弥漫大B细胞淋巴瘤的体外抗肿瘤效应

目的探讨PI3K抑制剂林普利塞(Linperlisib,YY-20394)对弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)的体外抗肿瘤效应及其作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度YY-20394对SU-DHL-4细胞(GCB亚型)和U2932细胞(ABC亚型)增殖能力的影响,并计算出24 h时药物的IC₂₅、IC₅₀、IC₇₅。采用流式细胞术检测不同浓度(IC₂₅、IC₅₀、IC₇₅)YY-20394对SU-DHL-4细胞和U2932细胞凋亡的影响。采用高通量RNA测序技术(RNA-Seq)检测药物作用前后各组细胞基因表达的变化,对差异表达基因进行KEGG富集分析和GO功能注释分析,并且对各组细胞基因表达数据进行GSEA富集分析。结果在YY-20394作用下,SU-DHL-4细胞增殖抑制率和细胞凋亡率增加(P<0.05),但U2932细胞增殖及凋亡能力未发生明显改变(P>0.05)。KEGG富...     

PI3K抑制剂与非小细胞性肺癌

磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路是人体中的重要信号通路,通过逐级磷酸化下游蛋白发挥作用.非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中存在该信号通路的异常活化.活化的信号通路可以改变NSCLC细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学特性从而影响其对治疗药物的反应及预后.针对该通路抑制剂的研究很多,部分抑制剂已进入临床研究阶段.PI3K抑制剂包括广谱PI3K抑制剂、亚型特异性的PI3K抑制剂和PI3 K/mTOR双重抑制剂.PI3K抑制剂单药有效率较低,但与化疗药物或其他靶向药物联用取得了不错的临床效果,目前往往将P IK3 CA突变以及抑癌基因PTEN的缺失作为预测疗效的指标,但准确性欠佳,进一步筛选疗效预测指标是目前面临的重要问题.     

白花蛇舌草通过PI3K/Akt信号通路抑制人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞增殖

目的:探讨白花蛇舌草对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将人非霍奇金淋巴瘤细胞Raji分为对照组、白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组,采用CCK-8法检测各组Raji细胞培养12 h、24 h、48 h、72 h时细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Western blot检测培养48 h时各组细胞CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平。结果:白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组Raji细胞增殖抑制率随着处理时间延长而增加,在相同时间点时,白花蛇舌草+LY294002组Raji细胞增殖抑制率均高于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）;细胞周期检测结果显示:与对照组相比,白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组G0/G1期细胞比例增多、S期细胞比例降低（P＜0.05）,而白花蛇舌草组、LY294002组G0/G1期、S期细胞比较差异无统计学意义（P＞0.05）,白花蛇舌草+LY294002组G0/G1期、S期细胞均低于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）;Western blot检测结果显示:白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平均低于对照组（P＜0.05）,白花蛇舌草+LY294002组CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平均低于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）,白花蛇舌草组、LY294002组各种蛋白水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:白花蛇舌草对Raji细胞增殖有抑制作用,可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

PI3K抑制剂在乳腺癌治疗中的应用现状

PI3K/Akt/mTOR信号通路是细胞内的重要信号通路,在调节肿瘤细胞的增殖、分化、转移过程中发挥重要作用.该信号通路的激活与多种肿瘤的发生和发展有密切关系.随着近些年对分子生物学的深入研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路的异常激活在乳腺癌中最为常见,也使得该通路成为乳腺癌新的治疗靶点,现已研发出多种作用于P...     

PI3K/Akt抑制剂LY294002对大肠癌细胞化疗增敏作用的探讨

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对大肠癌细胞(HCT-8)化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于大肠癌细胞系HCT-8,MTT法检测单独使用5-Fu、奥沙利铂及联合PI3K抑制剂LY294002,对体外培养的大肠癌细胞系HCT-8增殖的抑制作用,流式细胞术检测HCT-8的凋亡率.结果 联合LY294002作用后,5-Fu、奥沙利铂对大肠癌细胞系HCT-8增殖的抑制作用明显增强(P<0.05),且能提高其凋亡率(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物5-Fu、奥沙利铂体外对HCT-8细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,可明显提高大肠癌的化疗效果.     

PI3K和MEK抑制剂抑制选择性激活的巨噬细胞促乳腺癌细胞浸润迁移的研究

目的 探讨选择性激活的巨噬细胞(M2)促进乳腺癌浸润迁移的分子机制,为治疗乳腺癌提供新的分子靶点.方法 用密度梯度离心法,从健康成人外周血中分离单个核细胞,体外诱导选择性激活巨噬细胞(M2).用Western blot的方法检测M2对乳腺癌信号分子的激活;用浸润迁移实验和划痕实验检测PI3K和ERK抑制剂对M2促乳腺癌迁移的抑制作用.结果 模拟乳腺癌微环境,把M2与乳腺癌MDA MB 231细胞共培养,证明PI3K抑制剂LY294002和MEK抑制剂U0126作用于乳腺癌细胞,可以在6、12h抑制M2对乳腺癌PI3K/ERK的激活;两种抑制剂可以抑制M2促进乳腺癌浸润迁移的作用.结论 PI3K和MEK抑制剂可以抑制M2促进乳腺癌浸润迁移,PI3K/ERK可以成为抑制M2作用的新靶点.     

BMI-1通过激活PI3K/Akt信号通路促进裸鼠体内淋巴瘤生长的机制研究

目的:探讨原癌基因BMI-1对裸鼠体内淋巴瘤生长的影响及潜在分子机制。方法:培养鼠源淋巴瘤细胞FOX-NY,并对细胞进行BMI-1沉默和过表达处理,以及联合PI3K/Akt抑制剂处理。CCK-8法检测各组细胞增殖情况。通过腋窝下接种鼠源淋巴瘤细胞FOX-NY、沉默BMI-1的FOX-NY(BMI-1--FOX-NY)、过表达BMI-1的FOX-NY(BMI-1+-FOX-NY)建立裸鼠淋巴瘤动物模型。裸鼠分为:对照组、质粒空载组、BMI-1--FOX-NY组、BMI-1+-FOX-NY组。对裸鼠体重、肿瘤体积和质量等指标进行检测。采用PCR技术测定裸鼠体内BMI-1 mRNA表达。采用苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理学情况。采用免疫组化染色和蛋白印迹检测裸鼠瘤体BMI-1、p-PI3K、p-Akt蛋白表达。结果:和空载组相比,BMI-1-组细胞增殖能力显著降低,BMI-1+组细胞增殖能力显著升高。和BMI-1+组细胞相比,BMI-1+-Miltefosine组细胞增殖能力显著降低。与空载组比较,BMI-1--FOX-NY组裸鼠体重显著降低(P＜0.001)、肿瘤体积显著减小(P＜0.001)、肿瘤组织病理学显著改善,瘤体BMI-1 mRNA水平显著降低(P＜0.001)、瘤体BMI-1、p-PI3K、p-Akt蛋白水平显著降低(P＜0.001)。反之,BMI-1+-FOX-NY组裸鼠体重显著增加(P＜0.01)、肿瘤体积显著增加(P＜0.01,P＜0.001)、肿瘤组织病理学显著恶化,瘤体BMI-1 mRNA水平显著升高(P＜0.001)、瘤体BMI-1、p-PI3K、p-Akt蛋白水平显著升高(P＜0.01,P＜0.001)。结论:BMI-1在淋巴瘤组织中表达显著升高,BMI-1可以促进DLBCL的生长并激活PI3K/Akt信号通路。     

胃癌细胞SGC7901凋亡的PI3K/Akt通路介导作用及雷帕霉素的作用机制分析

目的：分析雷帕霉素对胃癌细胞中PI3K/Akt蛋白表达的影响作用,以为临床治疗提供参考。方法将生长状态良好的胃癌细胞SGC7901随机分为4组：对照组,雷帕霉素低剂量组、中剂量、高剂量组（n=8）。采用DAPI染色法分析各组细胞的凋亡情况;采用免疫印迹法和Real-time PCR检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达。结果雷帕霉素低、中、高剂量组均可抑制细胞的增殖,差异具有统计学意义（P﹤0.05）;雷帕霉素下调了胃癌细胞中PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达,且与对照组比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论雷帕霉素主要通过抑制PI3K、AKT及mTOR的过表达发挥肿瘤抑制作用。     

PI3K—Akt信号通路与胃癌的研究进展

细胞内信号传导通路PI3K—Akt与胃癌的发生、生长及化疗耐药关系密切。本文概述了PI3K—Akt的分类结构、PI3K—Akt信号转导通路的调节、与胃癌细胞凋亡及血管生成的关系及化疗耐药和放疗的机制。     

Growth-inhibitory effects of curcumin on Raji cells and its mechanisms

Objective： To study the growth-inhibitory effects of curcumin on B-NHL cell line Raji cells in vitro and its molecular mechanisms. Methods： The growth inhibition rates of Raji cells, after being treated with 6.25μmol/L - 50μmol/L curcumin for 12 h - 48 h, were examined by MTT assay. The apoptosis rate was detected by flow cytometry （FCM）, the protein expression levels of bcl-2 and p53 in Raji cells were examined by SP immunohistochemistry. The expression of p53 in Raji cell were checked by RT-PCR. Results： After being treated by various concentrations of curcumin, the growth of Raji cells was inhibited significantly. The rates of apoptosis were 11.8% -79.7% （P〈0.01）, the down regulation of p53 expression was observed within 24 h after the treatment of curcumin by RT-PCR. The expression of bcl-2 and p53 was decreased, which depended on the action time. Conclusion： Curcumin could significantly inhibit the growth of Raji cells. The induction of apoptosis by down-regulating the expression of bcl-2 and p53 was probably one of its molecular mechanisms.     

苦参碱对淋巴瘤Raji细胞的增殖及survivin蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱对淋巴瘤Raji细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法：MTT比色法测定细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色及电镜观察细胞形态及结构变化;免疫细胞化学染色法观察survivin蛋白表达的改变。结果：一定浓度苦参碱作用Raji细胞后,细胞增殖受到明显抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性;荧光显微镜下可见核浓缩,聚集,碎裂等典型的凋亡特征;电镜下可见到凋亡小体形成;免疫细胞化学染色法显示随着苦参碱作用浓度增加,survivin蛋白表达降低。结论：苦参碱在一定浓度范围内可以明显抑制恶性淋巴瘤Raji细胞增殖,并下调抗凋亡基因survivin的表达。     

毛萼乙素抑制非霍奇金淋巴瘤细胞增殖作用及其机制探讨

目的 毛萼乙素(EriocalyxinB,EriB)是一种从唇形科植物疏花毛萼香茶菜中提取的二萜类化合物,具有很强的抗肿瘤细胞活性.本研究探讨EriB对非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)细胞增殖抑制及凋亡诱导、周期阻滞作用及机制.方法 采用MTT法检测5个浓度(0、0.2、0.4、0.6、0.8和1μmol/L) EriB处理72 h淋巴瘤细胞株的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化;蛋白质印迹法分析不同信号通路蛋白的表达.结果 0、0.2、0.4、0.6、0.8和1μmol/L浓度的EriB对淋巴瘤细胞均有增殖抑制作用,且抑制作用随着浓度增加而增强,半数生长抑制浓度在0.2～1.0μmol/L.流式细胞术检测显示,0.4μmol/L EriB作用Namalwa细胞24 h后G0/G1期细胞百分率为(44.71±4.10)％,对照组为(33.79±1.86)％,差异有统计学意义,Z=17.78,P=0.041;FCM结果显示,分析0.4μmol/L EriB作用Namalwa细胞6、12和24 h凋亡率分别为(4.21±1.06)％、(20.34±4.71)％和(29.91±5.39)％,显著高于对照组的(3.04±0.96)％,差异有统计学意义,H=8.56,P＜0.001.蛋白质印迹法分析显示,EriB处理后的Namalwa细胞蛋白p21、p27、p-Caspase-3、p-Caspase-8和p-Caspase-9表达上调,磷酸化NF-κB和其激活子IκB激酶表达下调.结论 EriB可能通过下调NF-κB信号通路诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制淋巴瘤细胞增殖.     

木香烃内酯对人胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制

目的：探讨木香烃内酯（costunolide,Cos）对人肝内胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法：以不同质量浓度（0、2、4、6、8、12、16、20 μg/ml）Cos 作用RBE细胞,通过CCK-8 法、流式细胞术分别检测Cos 对细胞增殖能力和周期分布的影响,Annexin V-FITC/PI 双染法、Transwell 小室实验分别检测Cos 对细胞凋亡和迁移侵袭的影响,qRT-PCR检测与侵袭相关因子MMP2、MMP9 mRNA的表达,Western blotting 检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果：Cos 能够显著抑制RBE细胞的增殖活性（P<0.05 或P<0.01),阻滞细胞周期于S、G2/M期,同时诱导RBE细胞的凋亡(P<0.01)、且呈质量浓度依赖性,Transwell及qRT-PCR 结果显示Cos 能够显著抑制RBE 细胞的侵袭能力、降低侵袭相关转录因子MMP2 和MMP9 mRNA的表达,Western blotting 结果显示Cos 明显抑制p-AKT、Bcl-2、MMP2 及MMP9 的表达,但促进Bax 的表达。结论：Cos 通过抑制PI3K/AKT信号通路降低胆管癌RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

Down-regulation of the PI3K/Akt signaling pathway and induction of apoptosis in CA46 Burkitt lymphoma cells by baicalin

Background

Baicalin, a flavone present in Scutellaria baicalensis Georgi, inhibits the growth of human leukemia and myeloma cells through induction of apoptosis.

Methods

The present study was undertaken to ascertain whether cultured Burkitt lymphoma cells undergo apoptosis when treated with baicalin. Growth rates were measured using MTT and colony formation assays, and induction of apoptosis was quantified using Annexin V and DNA fragmentation assays. Mechanisms underlying observed growth suppression were examined using Western blotting.

Results

Treatment of CA46 Burkitt lymphoma cells with baicalin for 48 h markedly decreased the rate of cell proliferation; an IC₅₀ value of 10 μM was obtained. Colony formation was almost fully suppressed at 10 μM baicalin. CA46 cells underwent apoptosis in response to baicalin treatment as evidenced by an increase in the percentage of cells stainable with Annexin V, by increased DNA fragmentation, and by activation of the intrinsic (mitochondrial) pathway for cell death as characterized by increased expression of the cleaved forms of caspase-9, caspase-3, and poly (ADP-ribose) polymerase. Additionally, baicalin was found to down-regulate anti-apoptotic and up-regulate apoptotic components of the phosphatidylinositide-3-kinase (PI3K)/serine/threonine kinase (Akt) signaling pathway.

Conclusions

The concentrations at which baicalin altered expression of components of the PI3K/Akt pathway in CA46 cells were comparable to those that suppressed growth and induced apoptosis, supporting the hypothesis that the observed growth-inhibitory and apoptosis-inducing actions of baicalin in these cells are mediated by down-regulation of this pathway.     

牙髓干细胞外泌体对口腔鳞状细胞癌CAL-27增殖、迁移的影响及其机制的研究

目的 研究人牙髓干细胞来源的外泌体(human dental pulp stem cell-derived exosome,hDPSCs-exo)对口腔鳞状细胞癌细胞(CAL-27)增殖和迁移的影响。方法 收集来哈尔滨医科大学附属第一医院治疗的16~28岁患者因阻生或正畸拔除的牙髓组织,通过超速离心法提取hDPSCs-exo,不同浓度hDPSCs-exo处理CAL-27细胞,通过MTT实验、Transwell实验和划痕实验检测CAL-27细胞增殖和迁移能力的变化;Western blot研究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果 MTT实验结果显示,仅80 μg/mL hDPSCs-exo组在第5d对CAL-27细胞的增殖有抑制作用(P＜0.05),其余各浓度组均没有显著影响;Transwell和划痕实验结果显示20、60、80 μg/mL组可以显著地促进CAL-27细胞的迁移(P＜0.05);Western blot结果显示经hDPSCs-exo处理后,CAL-27细胞中PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、P-Akt的表达水平明显上调(P＜0.05)。结论 hDPSCs-exo高浓度时抑制CAL-27细胞的增殖,适宜浓度能显著促进CAL-27细胞的迁移能力,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及其可能的作用机制.方法 采用qRT-PCR检测人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、SK-HEP-1、Huh7及正常肝细胞株QSG7701 中miR-106b mRNA 的表达.用miR-106b siRNA转染HepG2细胞(miR-106b下调组),并设空...     

Molecular effects of the phosphatidylinositol-3-kinase inhibitor NVP-BKM120 on T and B-cell acute lymphoblastic leukaemia

BackgroundConstitutive activation of the PI3K pathway in T cell acute lymphoblastic leukaemia (T-ALL) has been reported and in a mouse model, PI3K activation, together with MYC, cooperates in Burkitt lymphoma (BL) pathogenesis. We investigated the effects of NVP-BKM120, a potent pan-class I PI3K inhibitor, in lymphoblastic leukaemia cell lines.MethodsEffects of NVP-BKM120 on cell viability, clonogenicity, apoptosis, cell cycle, cell signalling and autophagy were assessed in vitro on T-ALL (Jurkat and MOLT-4) and BL (Daudi and NAMALWA) cell lines.ResultsNVP-BKM120 treatment decreased cell viability and clonogenic growth in all tested cells. Moreover, the drug arrested cell cycling in association with a decrease in Cyclin B1 protein levels, and increased apoptosis. Immunoblotting analysis of cells treated with the drug revealed decreased phosphorylation, in a dose-dependent manner, of AKT, mTOR, P70S6K and 4EBP1, with stable total protein levels. Additionally, we observed a dose-dependent decrease in BAD phosphorylation, in association with augmented BAX:BCL2 ratio. Quantification of autophagy showed a dose-dependent increase in acidic vesicular organelles in all cells tested.ConclusionIn summary, our present study establishes that NVP-BKM120 presents an effective antitumour activity against T-ALL and BL cell lines.     

大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:用不同质量浓度的大荨麻提取物(0、1、2、4、8、16、32、64 mg/ml)处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-23124 h,MTT法检测细胞增殖活力,选择中位抑制浓度附近的浓度(5和10 mg/ml)作为给药浓度...