电针预处理抑制癫痫持续状态诱发的海马区神经元凋亡研究

目的:观察电针预处理对癫痫持续状态(status epilepticus,SE)诱发的海马区神经元凋亡的影响。方法:20只SD大鼠被随意分为4组:对照组、癫痫组、电针组、电针对照组,电针组和电针对照组给予电针预处理3周后,按经典方法建立锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型,用TUNEL法及免疫荧光法观察海马区神经元的凋亡。结果:(1)与对照组比较,癫痫组和电针对照组海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性的神经元明显增多(P<0.01,n=5);(2)与癫痫组和电针对照组相比,电针预处理减少了海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性神经元的数量(P<0.05,n=5)。结论:电针百会及大椎穴预处理,可以减低SE诱发的海马区神经元的凋亡。     

匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡的动态观察

目的 探讨癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后海马细胞凋亡的发生及其与caspase-3表达的关系.方法 采用匹罗卡品诱发大鼠SE模型,用TUNEL染色和免疫组化技术检测海马神经元凋亡和caspase-3表达的动态变化.结果正常对照组大鼠海马未见TUNEL阳性细胞;SE后6 h,开始出现少量TUNEL阳性细胞;SE后72 h,达到高峰;SE后7 d,TUNEL阳性细胞开始减少.正常对照组大鼠海马可见少量caspase-3阳性表达;SE后6 h,大鼠海马caspase-3阳性表达增多,主要集中于CA1和CA3区;SE后48 h,caspase-3表达达到高峰;SE后72 h～7 d,caspase-3阳性染色细胞数开始减少;但仍显著多于对照组,差异有极显著意义(P＜0.01).结果 显示caspase-3表达分布与TUNEL染色基本一致,caspase-3表达高峰早于TUNEL所示凋亡细胞出现的高峰.结论 神经元凋亡参与了SE后海马神经元迟发性死亡过程并与caspase-3的激活有密切的关系.     

托吡酯对红藻氨酸致癫痫状态大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 观察托吡酯(topiramate,TPM)对红藻氨酸(kainic acid,KA)致癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 取大鼠120只,随机分为TPM组、KA组及生理盐水(NS)对照组,每组再分为四个小组,分别用于SE后3 、12 、24 和48 h四个时点.每小组10只大鼠.TPM组用TPM预处理.采用KA诱导大鼠SE.进行行为学评估、HE染色及TUNEL染色,并用免疫组化方法检测海马caspase-3的表达变化.结果 TPM组大鼠的癫痫发作迟于KA组.HE及TUNEL染色显示,TPM组大鼠海马的病理损伤轻于KA组.免疫组化结果显示,TPM组caspase-3的表达明显低于KA组.结论 TPM对KA诱导的SE发作具有抑制作用,并能显著降低海马caspase-3的表达,从而减轻癫痫所致的海马神经元损伤.     

电针预处理抑制癫痫持续状态诱发的海马区神经元凋亡研究

目的：观察电针预处理对癫痫持续状态（status epilepticus,SE）诱发的海马区神经元凋亡的影响。方法：20只SD大鼠被随意分为4组：对照组、癫痫组、电针组、电针对照组,电针组和电针对照组给予电针预处理3周后,按经典方法建立锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型,用TUNEL法及免疫荧光法观察海马区神经元的凋亡。结果：（1）与对照组比较,癫痫组和电针对照组海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性的神经元明显增多（P〈0.01,n=5）;（2）与癫痫组和电针对照组相比,电针预处理减少了海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性神经元的数量（P〈0.05,n=5）。结论：电针百会及大椎穴预处理,可以减低SE诱发的海马区神经元的凋亡。     

线粒体分裂蛋白抑制剂对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂(mitochondrial division inhibitor,Mdivi-1)对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响及机制。方法:121只雄性SD大鼠随机分成4组,分别为对照(CON)组、PILO组、PILO+DMSO组和PILO+Mdivi-1组。观察各组大鼠行为学改变,并分别采用尼氏染色法及TUNEL法检测神经元损伤及凋亡,Western blot法检测动力相关蛋白1(dynamin-releted protein 1,Drp1)和半胱天冬酶3(caspase-3)表达水平。结果:Mdivi-1组较PILO组致痫成功率降低(P>0.05),海马神经元损伤显著减轻(P<0.05)。Mdivi-1明显降低癫痫持续状态(status epilepticus,SE)引起的海马神经元凋亡和caspase-3激活(P<0.05)。结论:Mdivi-1对癫痫大鼠海马神经元凋亡有明显的抑制作用,其机制可能是抑制caspase-3激活。     

舒肝解郁胶囊对抑郁模型大鼠海马神经元凋亡及脑组织caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究舒肝解郁胶囊对抑郁模型大鼠海马神经元凋亡及脑组织caspase-3蛋白表达的影响,探讨其治疗抑郁症的作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、舒肝解郁组和氟西汀组四组;采用慢性轻度不可预见性应激(CUMS)结合孤养建立抑郁大鼠模型,并用旷场、糖水消耗和强迫游泳试验评价大鼠的行为学改变,观察海马CA3区神经元的形态结构及凋亡,应用蛋白印记分析检测脑组织caspase-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,舒肝解郁组大鼠自发活动显著增加;糖水消耗量、糖水偏爱率显著升高;强迫游泳不动时间显著缩短;大鼠海马CA3区细胞结构破坏显著改善,凋亡细胞数及脑组织caspase-3蛋白表达显著减少(P<0.05或0.01);氟西汀组与舒肝解郁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:舒肝解郁胶囊能显著改善抑郁模型大鼠的抑郁症状,促进抑郁大鼠海马CA3区神经细胞损伤的修复和/或新生;减少大鼠脑组织caspase-3蛋白表达,阻止脑神经细胞的凋亡;疗效与氟西汀相当。     

红藻氨酸致痫大鼠海马区神经元凋亡的动态变化

目的探讨红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠癫痫状态海马神经元的形态学变化、凋亡情况及抗痫药物的神经保护作用.方法90只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平(CBZ)组,后两组再按癫痫发作后1 h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组.KA注射后,观察大鼠癫痫发作后的行为学变化;采用HE染色法观察大鼠癫痫状态海马CA1、CA3区神经元形态学改变;采用原位细胞凋亡检测法观察癫痫状态海马CA1、CA3区神经元凋亡情况.结果KA注射后,大鼠出现严重的惊厥;在癫痫发作后12h,海马CA1区、CA3区开始出现凋亡细胞[CA1区:KA组(6.53±1.36)个,CBZ组(5.85±1.68)个;CA3区:KA组(9.58±1.63)个,CBZ组(7.36±1.27)个],48h凋亡细胞达到峰值(P＜0.01)[CA1区:KA组(42.263±3.28)个,CBZ组(35.39±2.36)个;CA3区:KA组(57.64±12.76)个,CBZ组(38.37±13.65)个].经CBZ干预后凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论癫痫发作后的迟发性神经元死亡很可能是由凋亡引起的,CBZ可抑制癫痫状态海马神经元凋亡.     

二氮嗪抑制癫痫大鼠海马神经元凋亡的研究

目的 观察线粒体ATP敏感性钾离子通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DZ)对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元线粒体凋亡通路相关凋亡因子的影响,探讨DZ对癫痫大鼠神经保护作用的机制.方法 采用腹腔注射的方法,建立氯化锂-匹鲁卡品( PILO)诱导的大鼠癫痫持续状态(SE)模型.在检测大鼠海马凋亡相关蛋白水平变化时分为对照组,SE后24h、72 h、5d组;在检测DZ对海马神经元保护作用时分为对照组、PILO致痫72 h组(PILO组)、DZ预处理组(PILO+ DZ组)、DZ +5-羟基癸酸(5-HD)预处理组(PILO+ DZ+ 5-HD组).SE后分别在相应时间点灌注取脑,采用TUNEL法检测细胞的凋亡;采用Western blot法检测大鼠海马Bcl-2、Bax、活性半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3( Caspase-3)蛋白的水平及细胞色素C(cytC)由线粒体到胞浆的释放.结果 与正常对照组比较,SE组大鼠在SE后备相应时间点TUNEL染色阳性细胞明显增加(P＜0.05),海马Bcl-2蛋白、线粒体中的细胞色素C(mito-cytC)的表达显著降低(P＜0.05),海马Bax、活性Caspase-3蛋白及胞浆中的细胞色素C(cyto-cytC)的表达明显增高(P＜0.05).与PILO组及PILO+ DZ+ 5-HD组比较,PILO+ DZ组降低的海马Bcl-2蛋白水平显著升高(P＜0.05),而升高的海马Bax、活性Caspase-3蛋白的水平明显降低(P＜0.05),cytC由线粒体到胞浆的释放减少(P＜0.05),TUNEL染色阳性细胞明显减少(P＜0.05).DZ的保护作用能被5-HD阻断.结论 DZ可通过上调Bcl-2/Bax水平,减少cytC的释放,抑制Caspase-3的激活,从而通过线粒体凋亡通路抑制氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠SE后海马神经元的凋亡,对癫痫发作所致的脑损伤具有神经保护作用,为癫痫的神经保护治疗提供新的治疗靶点.     

利拉鲁肽对匹罗卡品致痫大鼠海马各区神经元凋亡的影响

目的探讨利拉鲁肽对大鼠癫痫持续状态后海马各区神经元凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠(n=54)随机分为空白对照组(n=6)、匹罗卡品模型组(SE组,n=24)、利拉鲁肽干预组(Liraglutide组,n=24);并根据发作终止后的时间点(12 h,1 d,3 d,7 d)将SE组和Liraglutide组各分为4个亚组(n=6)。采用免疫组化技术检测海马CA3和DG区BCL2和BAX蛋白的表达。结果与SE组相比,Liraglutide组在SE后12 h、1 d、3 d时CA3区BCL2表达水平升高(P0.05),而在SE后7 d时BCL2水平与SE组无差异(P0.05);在DG区,Liraglutide组在SE后1 d BCL2表达升高(P0.05),在SE后3 d时表达无差异(P0.05)。Liraglutide组相较SE组,在SE后12 h,DG区BAX表达开始明显降低(P0.01);在SE后1 d,CA3区BAX表达降低(P0.01);且在SE后3 d,Liraglutide组DG区和CA3区BAX表达都高于空白对照组(P0.05)。结论利拉鲁肽通过抑制癫痫持续状态后海马CA3区和DG区神经元凋亡发挥神经保护作用。     

颞叶癫痫大鼠海马Akt蛋白表达变化的研究

目的动态观察颞叶癫痫大鼠神经元磷酸化Akt(phospho-Akt)蛋白的表达变化,探讨其在癫痫发生发展中的作用。方法清洁级SD雄性成年大鼠36只,随机分为正常对照组、诱发大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus,SE)后3h、6h、12h、24h、3d组。用氯化锂LiCl和匹罗卡品(PILO)制备癫痫动物模型,应用免疫组织化学染色技术检测致痫后各时间点磷酸化Akt蛋白表达情况。结果免疫组织化学法显示正常组与假手术组大鼠海马CA1、CA3区可见少量磷酸化Akt阳性细胞,两组间差异无统计学意义(P>0.05);模型组可见CA1、CA3区Akt阳性细胞增加(P<0.01),6h达到高峰,3d回到对照组水平。结论上调磷酸化Akt蛋白表达有利于减少海马神经元凋亡,可能是保护神经损伤的机制之一。     

钙蛋白酶抑制剂减少大鼠局灶性脑缺血再灌注模型海马CA1区神经元凋亡

目的:研究钙蛋白酶抑制剂calpeptin干预治疗对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型海马CA1区神经元凋亡的影响及其可能机制。方法:选择健康成年雄性SD大鼠128只作为研究动物,采用随机数字表法将其分为MACO组、calpeptin组、DMSO组及sham组,制作大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血2 h后分别再灌注6、12、24 h及48 h后进行神经功能学评分,免疫组化检测海马CA1区神经元caspase-3的表达,TUNEL法检测原位细胞凋亡,观察海马CA1区神经元凋亡。结果:DMSO组的各项检测指标与MACO组比较差异无统计学意义(P>0.05);calpeptin组的神经功能评分及caspase-3表达均低于同时间点MCAO组及DMSO组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);再灌注12、24、48 h后,calpeptin组神经元凋亡情况优于同时间点MCAO组及DMSO组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:calpeptin可减少大鼠局灶性脑缺血再灌注模型海马CA1区的神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抑制caspase-3的表达有关。     

大鼠癫癎持续状态中海马神经元bcl-2、bax、p53的表达

目的 :采用贝美格腹腔注射制作大鼠急性癫持续状态 ( SE)模型 ,观察海马神经元中 bcl- 2、bax、p5 3的表达。　方法 :通过将 SD大鼠脑海马切片行 bcl- 2、bax、p5 3的免疫组化染色 ,观察肿瘤相关基因在大鼠 SE模型海马中的作用。　结果 :bcl- 2在正常大鼠海马中不表达 ,发作高峰期在 CA 3区有弱表达 ;bax在正常大鼠海马中弱表达 ,在发作高峰期 CA3区强表达 ;p5 3(突变型 )在正常大鼠海马及 SE模型中均不表达。　结论 :急性癫持续状态可造成海马神经元的凋亡 ,其部位主要位于 CA 3、CA1区 ,而且肿瘤相关基因 bcl- 2、bax在 SE过程中发挥作用 ,而p5 3(突变型 )不发挥作用     

注射YVAD-CHO后癫痫大鼠海马组织细胞形态及Caspase-3表达的改变

目的:探讨癫痫大鼠单侧海马注射Caspase-3抑制剂YVAD-CHO后海马组织形态及Caspase-3表达的改变.方法:将YVAD-CHO注射入癫痫大鼠模型单侧海马,HE染色观察组织形态学变化,免疫组化法观察Caspase-3蛋白的表达及相应的改变.结果:HE染色显示,干预组1大鼠海马安蒙角(Cornu ammonis,CA)1-CA3区神经细胞胞质浓染,核固缩等改变,与模型组比较明显减少;免疫组化显示干预组1海马区Caspase-3蛋白的表达较模型组明显减少.结论:YVAD-CHO可在体内抑制大鼠海马神经元凋亡.     

红藻氨酸致痫大鼠海马区神经元凋亡的动态变化

目的探讨红藻氨酸(kainicacid,KA)诱导的大鼠癫痫状态海马神经元的形态学变化、凋亡情况及抗痫药物的神经保护作用。方法90只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平(CBZ)组,后两组再按癫痫发作后1h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组。KA注射后,观察大鼠癫痫发作后的行为学变化;采用HE染色法观察大鼠癫痫状态海马CA1、CA3区神经元形态学改变;采用原位细胞凋亡检测法观察癫痫状态海马CA1、CA3区神经元凋亡情况。结果KA注射后,大鼠出现严重的惊厥;在癫痫发作后12h,海马CA1区、CA3区开始出现凋亡细胞[CA1区:KA组(6.53±1.36)个,CBZ组(5.85±1.68)个;CA3区:KA组(9.58±1.63)个,CBZ组(7.36±1.27)个],48h凋亡细胞达到峰值(P<0.01)[CA1区:KA组(42.263±3.28)个,CBZ组(35.39±2.36)个;CA3区:KA组(57.64±12.76)个,CBZ组(38.37±13.65)个]。经CBZ干预后凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论癫痫发作后的迟发性神经元死亡很可能是由凋亡引起的,CBZ可抑制癫痫状态海马神经元凋亡。     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果苏木素伊红(HE)染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

癫痫持续状态幼鼠海马神经元凋亡及NGF的干预作用研究

目的观察癫痫持续状态(SE)SD大鼠幼鼠的海马区神经细胞的凋亡与Caspase3和Caspase9的表达关系,研究鼠神经生长因子(NGF)对其干预作用。方法采用氯化锂-匹罗卡品方法制备幼鼠SE模型,用TUNNEL染色观察海马区神经细胞凋亡情况,用免疫组化法分别检测Caspase3和Caspase9的表达。结果正常组TUNNEL阳性细胞在各观察点仅少量表达,SE组在8 h明显增加,72 h达到高峰,NGF组表达基本同SE组,但对应时间点显著减少(除4 h外,P<0.05);Caspase3和Caspase9在正常组仅有少量表达,SE组在4 h仅少量增加,24 h达到高峰,NGF组Caspase3、Caspase9在SE后24 h及72 h较SE组显著减少(P<0.01)。结论 SE可致幼鼠海马区神经元凋亡,随时间增加神经元凋亡加重,Caspase3和Caspase9的激活加重神经细胞的凋亡;NGF可减轻神经细胞的凋亡。     

二十二碳六烯酸抗抑郁作用及其对海马神经元caspase-3表达的影响

目的 观察二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）对抑郁症的治疗作用及其对海马神经元caspase-3表达的影响.方法 50只SD大鼠随机分为5组（空白对照组,抑郁模型组,氟西汀组,DHA组,氟西汀与DHA联合用药组）,每组10只,连续21 d每天给予不同刺激,建立慢性应激不可预见抑郁大鼠模型.21 d后强迫游泳实验进行行为学检测,HE染色检测海马CA1、CA2、CA3区锥体细胞的形态学变化.荧光实时定量PCR和Western Blot检测海马神经元caspase-3的变化.结果 行为学检测显示,抑郁模型组、DHA组、DHA联合氟西汀组大鼠在水中的游泳不动时间分别为（113.33±9.50）s、（81.67±7.68）s和（73.00±8.54）s.与抑郁模型组相比,DHA组和DHA联合氟西汀组大鼠在水中游泳不动时间减少（t=8.164,9.855,P＜0.01）.HE染色切片可见DHA使大鼠海马CA1、CA2、CA3区神经元数量部分恢复,排列致密,可减少海马神经元凋亡.qPCR和WB结果显示DHA单独或联合氟西汀可抑制海马神经元caspase-3 mRNA和蛋白的表达.结论 DHA对慢性应激不可预见抑郁模型大鼠有治疗及辅助治疗作用,其机制与DHA减少海马神经元凋亡、下调caspase-3有关.     

穴位埋药线对癫痫持续状态后神经细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨穴位埋药线法抑制癫痫持续状态(SE)后大鼠海马神经元凋亡的基因水平机制。【方法】以腹腔注射青霉素诱导大鼠SE,采用免疫组织化学法检测SE后大鼠海马神经元凋亡相关基因c-jun、bcl-2的表达。【结果】青霉素致SE后24h,穴位埋药线组、苯妥英钠组和常规针刺组与模型组比较,c—jun表达降低,bcl-2表达升高,两者分别与细胞凋亡指数(AI)呈正、负相关,其中以穴位埋药线组与模型组差异最为显著。【结论】提示穴位埋药线疗法可能通过抑制c-jun、促进bcl-2蛋白表达,阻止SE后大鼠海马神经元凋亡的发生发展,从而起治疗癫痫的作用。     

青藤碱对戊四唑致癫痫大鼠的抗癫痫及神经保护作用

目的:观察青藤碱(sinomenine,SN)对戊四唑致痫大鼠癫痫行为、认知功能及海马神经元损伤的影响。方法:亚惊厥剂量戊四唑(35 mg·kg~(-1))每隔一天腹腔注射一次,建立慢性点燃癫痫大鼠模型;采用Morris水迷宫方法检测大鼠学习记忆的能力;采用HE染色观察大鼠海马神经元形态学的变化;采用Hoechst 33258染色和western blot方法检测神经元凋亡情况。结果:连续给予戊四唑处理15次后,约70%大鼠完全点燃,癫痫发作级别随时间逐渐升高,潜伏期缩短,持续时间延长;而每天给予不同剂量SN(20、40、80 mg·kg~(-1))处理后可显著降低癫痫发作级别和点燃率,延长发作潜伏期,缩短持续时间;和正常对照组大鼠相比,戊四唑致痫大鼠学习记忆能力明显下降,而给予不同剂量SN(20、40、80 mg·kg~(-1))处理后显著改善癫痫大鼠的学习记忆能力;进一步研究发现,戊四唑导致海马CA1、CA3区神经元损伤,出现核浓缩、嗜酸性变、核深染、排列紊乱等形态学变化,而给予不同剂量SN(20、40、80 mg·kg~(-1))处理后明显减轻神经元的损伤;同时,不同剂量SN(20、40、80 mg·kg~(-1))也能明显抑制戊四唑诱导的海马CA1、CA3区神经元的凋亡;另外,和正常对照组大鼠比较,戊四唑致癫痫大鼠海马神经元Bax和活化的caspase-3表达显著增加,Bcl-2表达显著减少,而给予不同剂量SN(20、40、80 mg·kg~(-1))处理后明显减少Bax和活化的caspase-3的表达,增加Bcl-2表达。结论:青藤碱能抑制戊四唑致癫痫大鼠的癫痫发作,改善学习记忆能力,减轻神经元损伤,具有神经保护作用。     

颞叶内侧癫痫海马CA1区cytc、caspase-9、caspase-3蛋白的表达研究

大量动物实验证明癫痫发作可导致脑内神经元的凋亡和多种凋亡相关基因的表达,但在人类癫痫中的研究尚少。本文采用HE染色、原位末端标记（TUNEL）方法在光镜下观察颞叶内侧癫痫（mesial temporal lobe epilepsy,MTLE）患者致痫海马CAI区神经元凋亡的情况,采用免疫组化S—P法检测并对比MTLE海马CA1区和对照组正常海马组织神经元内凋亡相关蛋白cytc、caspase-9、caspase-3的表达。