雌激素对大鼠脑组织缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：研究雌激素对绝经后雌性大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后NF-κB基因表达和TNF-α含量的影响。方法：采用线栓法复制局灶性脑缺血-再灌注模型,应用RT-PCR法检测NF-κB基因的表达,利用放免法检测TNF-α含量。结果：与模型组大鼠比较,雌激素组脑缺血-再灌注后NF-κB表达明显减弱（P＆lt;0.01）,TNF-α含量明显减少（P＆lt;0.01）。结论：雌激素能抑制大鼠脑缺血-再灌注后NF-κB表达,降低TNF-α含量,这可能是其脑保护作用的机制之一。     

缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤后早期细胞CyclinD1mRNA表达的影响

目的观察缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤早期细胞CyclinD1mRNA表达变化的影响.方法采用大鼠原位部分缺血再灌注模型,54只SD大鼠随机分为缺血再灌注组(IR),缺血预处理组(IP)与假手术组(SO组),应用RT-PCR法检测各组复灌后0,1,2,4 h肝组织CyclinD1 mRNA的变化.结果与IR组相比,IP组在复灌早期(0,1 h),肝组织的CyclinD1mRNA表达明显增高.(0.568±0.112 vs 0.274±0.069,0.762±0.164 vs 0.348±0.093,P＜0.01).结论缺血预处理可促进肝细胞在缺血再灌注损伤后早期CvclinD1 mRNA的表达.     

血塞通对缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的：观察血塞通预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤脑细胞凋亡的影响。方法：采用线栓法复制大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型，检测再灌注后缺血脑细胞凋亡情况，并测定脑组织Ca^2＋含量变化。结果：血塞通能减轻缺血脑组织脑细胞的凋亡（P〈0．01），能降低脑组织Ca^2＋含量（P〈0．01）。结论：血塞通对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤具有明显保护作用，可能与其降低脑组织钙含量、减轻脑细胞凋亡有关。     

高迁移率族蛋白B1预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响

目的：评价高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤（spinal cord is－chemia reperfusion injury,SCII）的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠于缺血前18 h经侧脑室给予不同浓度的重组HMGB1预处理。采用Zivin改进法建立大鼠SCII模型,阻断腹主动脉45 min后行再灌注。于再灌注6、12、24 h取血清检测循环中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6 （interleukin-6,IL-6）水平,取脊髓组织检测核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）活性及其抑制蛋白（inhibitors κB-α,IκB-α）含量。评价大鼠后肢运动神经功能,观察脊髓组织病理学改变。结果：再灌注各时间点,与行单纯缺血再灌注损伤的大鼠相比,给予HMGB1预处理后大鼠后肢运动神经功能评分明显提高,脊髓前角正常运动神经元的计数增多,血清中TNF-α、IL-6水平下降,脊髓组织中IκB-α含量增高,NF-κB活性降低。结论：HMGB1预处理对大鼠SCII具有保护作用,其机制与预处理减少IκB-α降解,抑制NF-κB活性,从而减轻炎性反应有关。     

缺血再灌注后脑细胞凋亡和Caspase-3蛋白的表达

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及分子机制。方法：雄性SD大鼠，采用可逆性大脑中动脉内线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。于缺血不同断头取脑，采用免疫组织化学检测Caspase-3蛋白表达，HE染色，甲苯胺蓝染色，光镜检查细胞损伤改变，测定丙二醛（MDA）含量。结果：光镜检查发现，缺血1h未见明显的神经细胞坏死；缺血2h,3h,6h组，出现细胞坏死及凋亡改变，假手术组未见上述变化；随缺血时间的延长Caspase-3蛋白表达呈递增趋势，Caspase-3蛋白表达时相与神经细胞的凋亡基本一致；缺血再灌注2h组比缺血再灌注0.5h组MDA含量明显增加。结论：随缺血及再灌注时间延长脑损伤逐渐加重，缺血性卒中溶栓治疗应在缺血1h以内进行，Caspase-3蛋白表达增加是引起细胞凋亡的分子机制之一。     

GM-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Fas蛋白的表达与细胞凋亡的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关基因Fas在海马区表达的变化，进一步探讨脑缺血再灌注后细胞凋亡的机制和GM-1的脑保护作用。方法线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，同时给予GM-1治疗，采用TUNEL和免疫组化方法观察细胞凋亡及Fas蛋白在脑缺血再灌注后的变化规律。结果脑缺血再灌注后海马区神经细胞过度地表达Fas蛋白，并且该区出现明显的神经细胞凋亡；GM-1能够使Fas蛋白的表达高峰及神经细胞凋亡高峰下调。结论Fas的过度表达可能是脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的重要原因。GM-1可能通过抑制Fas的表达，减少神经细胞凋亡发挥脑保护作用。     

姜黄素对全脑缺血再灌注大鼠海马高迁移率族蛋白1表达及凋亡的影响

目的 观察姜黄素对全脑缺血再灌注后大鼠海马高迁移率族蛋白1(HMGBl)表达及神经元凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠192只,随机分成假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、姜黄素组(Cur组,200 mg/kg缺血前1 h腹腔注射)及溶剂对照组(SC组).建立四动脉阻塞全脑缺血冉灌注模型,在再灌注后1、3、5、7 d处死大鼠;HE染色观察海马神经细胞形态,TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,免疫蛋白印迹法对海马HMGBI表达行半定量分析.结果 IR组及SC组海马CA1区各点凋亡细胞数明显多于sH组,Cur组再灌注1、3、5、7 d凋亡细胞数分别为IR组的41%、57%、65%、70%(P＜0.05).IR组(0.685±0.050)及Sc组(0.695±0.053)再灌注1 d HMGB1表达水平明显低于SH组(0.977±0.063,P＜0.05),再灌注3 d(1.360±0.045,1.353±0.045)、5 d(1.342±0.046,1.338±0.047)、7 d(1.319±0.052,1.322±0.035)表达水平明显高于SH组(0.992±0.031,0.978±0.090,0.992±0.075,P＜0.05).Cur组再灌注1 d HMGB1表达水平(0.842±0.063)明显高于IR组、SC组但低于SH组(P＜0.05),再灌注3 d(1.125±0.023)、5 d(1.098±0.073)、7 d(1.087±0.089)表达水平明显低于IR组及sC组(P＜0.05).SC组与IR组相比差异无统计学意义.结论 SD大鼠全脑IR后1 d海马HMGB1表达明显减少,后升高并持续高表达至再灌注7 d.姜黄素减轻海马神经元凋亡及损伤的机制可能与抑制HMGB1的合成与释放有关.

Abstract：

Objective To explore the effects of curcumin on the expression of high mobility group box 1(HMGB1)and apoptotic neurons in hippocampus after global cerebral ischemia/reperfu8ion in SD rats.Methods A total of 192 male SD rats were randomly divided into 4 groups:sham group(SH),ischemia-reperfusion group(IR),cureumin group(Cur)and solvent control group(SC).Bilateral vertebrate arteries were electroeauterized and bilateral comlnon carotid arteries libemted in 3 ischemic groups.Isasteric curcumin solutions(200 mg=/kg)or menstruum were injected intraperitoneally at 1 hour preischemia in Cur and SC groups.The rats in each group were ligated for 15 minutes and then decapitated at slides.Apoptotic neurons were detected in CA1 region by TUNEL(terminal deoxynueleotidyl transferasemediated dUTP-biotin nick end labeling).Western blot was used to make a semi-deternination of HMGB1 expression.Results At each time point,tlle number of apoptotic neurons was much more in IR and SC groups than that in SH group(P＜0.05).And the number of apoptotie neurons at 1,3,5,7 d postreperfusion was only 41%,57%,65%and 70%in Cur group respectively(P＜0.05).The exPressional level of HMGB1 in IR and SC groups was significantly lower at 1d post-reperfusion(0.685±0.050:0.695±0.053 vs 0.977±0.063,P＜0.05).And it was significantly higher at 3,5,7 d post-reperfusion in IR and SC groups than that in SH groups(1.360±0.045/1.353±0.045;1.342±0.046/1.338±0.047;1.319±0.052/1.322 ±0.035 vs 0.992±0.031;0.978±0.090;0.992±0.075,P<0.05).The level at 1 d post-reperfusion(0. 842±0. 063)in Cur group was significantly higher than that in IR and SC groups but lower than that in SH group. And it was lower at 3, 5, 7 d post-reperfusion (1. 125 ± 0. 023, 1. 098 ±0. 073, 1. 087 ± 0. 089) than those in IR and SC groups (P＜0. 05). There was no significant difference of HMGB1 expression level between IR and SC groups. Conclusion The expression level of HMGB1 in hippocampus is significantly reduced at 1 d post-reperfusion. Then it significantly increases and a high level is maintained until 7 d after global cerebral ischemia/reperfusion. Cureumin can reduce hippocampal neuronal apoptosis and injury. Such an effect may be due to an inhibition of the synthesis and release of HMGB1.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性缺血再灌注损伤脑组织Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase 3表达的影响。方法 :应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,大脑中动脉阻塞 1h再灌注损伤 2 4h ,用TUNEL法和免疫组化法分别检测假手术组、缺血再灌注组和bFGF治疗组的凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数。结果 :假手术组偶见凋亡细胞和Caspase 3阳性细胞 ,缺血再灌注组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数分别为 2 5 .4 6± 5 .5 7和1 8.6 0± 3.77,bFGF组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数分别为 1 6 .72± 5 .6 3和 1 0 .5 4± 2 .0 4。与缺血再灌注组比较 ,bFGF组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数显著降低 (P <0 .0 5和P <0 .0 5 )。结论 :Caspase 3表达下降可能是bFGF减少大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的分子机制之一     

雌激素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨雌激素对雄性大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：将60只雄性SD大鼠随机分成3组，每组20只，A组：假手术组；B组：肝脏缺血再灌注组(I／R)；C组：肝脏缺血再灌注 雌激素处理组。选取肝脏损伤典型指标：血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、肝组织中中性粒细胞(PMNs)浸润量、肝脏组织形态学变化以及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等，比较各组间上述指标的变化情况，并进行统计学处理。结果：B组、C组与A组比较，血清ALT、AST、AKP以及血清TNF-α升高，但13组明显高于C组；B组、C组均可见肝脏损伤，但B组明显重于C组。结论：雌激素对肝脏I／R造成的损伤有显著保护作用，其作用机制可能与雌激素降低肝脏I／R时血清TNF-α水平有关。     

雌激素对大鼠部分肝缺血再灌注损伤的影响

目的:观察雌激素在大鼠部分肝缺血再灌注损伤中的作用.方法:60只SD大鼠随机分为雌性组(F组)、雄性组(M组)、雌性卵巢切除组(O组)、雄性雌二醇组(E2组),每组15只,分别研究雌激素在大鼠部分肝缺血再灌注损伤中的作用,以血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)水平作为评定肝损伤的指标.结果:F组的ALT、AST、AKP水平明显低于M组及O组(P＜0.05);E2组的ALT、AST、AKP水平明显低于M组及O组(P＜0.05).结论:雌激素对大鼠部分肝缺血再灌注损伤具有明显的保护作用.     

黄体酮对大鼠缺血再灌注脑组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨黄体酮对缺血再灌注脑损伤的保护机制.方法:采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),将48只SD大鼠随机等分为6组:假手术组、脑缺血再灌注组、溶剂(DMSO)对照组、黄体酮(PROG)预防组、PROG治疗组、PROG防治组,应用免疫组织化学和原位末端标记(ISEL)法检测脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达情况.结果:假手术组每高倍视野下凋亡细胞数为1.88±0.25,缺血再灌注组为41.38±3.85, DMSO组为38.13±5.69,预防组为22.88±2.70,治疗组为25.63±2.93, 防治组为20.88±2.30;缺血再灌注组每高倍视野下Bcl-2蛋白阳性细胞数为9.50±1.69, DMSO组为10.25±2.61,预防组为 17.13±1.13,治疗组为16.63±1.30,防治组为23.50±1.93;缺血再灌注组每高倍视野下Bax蛋白阳性细胞数为28.13±2.75, DMSO组为27.75±3.06,预防组为 14.25±1.83,治疗组为13.00±1.85,防治组为11.38±1.41.各PROG处理组(预防组、治疗组及防治组3项指标与缺血再灌注组、DMSO组之间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05.结论:PROG可抑制脑神经细胞中Bax表达,上调Bcl-2表达,从而抑制脑细胞凋亡,发挥脑保护作用.     

黄芪对大鼠脑缺血再灌注损伤c-fos和Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和凋亡基因c-fos、Bcl-2表达的影响。方法 40只Wistar大鼠,体质量180～220 g,随机分为黄芪组、缺血4 h再灌注1 h组(Ⅰ组)、缺血4 h再灌注12 h组(Ⅱ组)、缺血4 h再灌注24 h组(Ⅲ组)和对照组。线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型。切片分别行HE染色,应用免疫组织化学染色检测神经细胞凋亡基因c-fos、Bcl-2蛋白表达。结果对照组、Ⅰ组脑细胞未见明显变化,Ⅱ组轻度脑细胞水肿,Ⅲ组脑细胞明显水肿,黄芪组损伤区范围变小,肿胀减轻。与对照组比较,其余各组脑细胞c-fos和Bcl-2阳性表达率增高(P<0.01);黄芪组c-fos和Bcl-2阳性表达率较Ⅱ、Ⅲ组降低(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和黄芪组细胞凋亡指数较对照组明显增加(P<0.01);黄芪组较Ⅱ、Ⅲ组明显降低(P<0.01)。结论黄芪在脑缺血再灌注损伤后可抑制c-fos表达、增加Bcl-2表达,减轻脑细胞凋亡。     

缺氧诱导因子-1α在大鼠缺血再灌注脑组织中的表达

目的观察缺氧诱导因子-1α（hypoxia—inducible factor—1α，HIF—1α）在大鼠缺血再灌注脑组织中的表达，探讨其表达的意义。方法SD大鼠随机分为正常组、单纯缺血组、缺血再灌注组，应用免疫组织化学方法检测HIF-1α在大鼠大脑中动脉缺血区的表达。结果正常组未见HIF—1α表达，缺血再灌注组HIF—1α的表达显著高于单纯缺血组（P〈0．05）。结论局灶性脑缺血可诱导HIF-1α的表达且HIF-1α在发生缺血再灌注后表达增加。     

雌激素对去卵巢大鼠脑缺血再灌注后脑组织内MDA和TChE的影响

目的观察去卵巢大鼠脑缺血再灌注后自由基损伤程度,探讨雌激素对脑组织的保护作用。方法取Wistar大鼠60只,随机分为假手术组（A组）、雌激素预防组（B组）、缺血组（C组）,采用四管法复制大鼠缺血模型,于术后30天处死动物取脑组织,测定脑组织丙二醛（MDA）含量和乙酰胆碱酯酶（TChE）活力变化,并取脑组织观察海马CA1区神经细胞的病理改变。结果假手术组和脑缺血再灌注组MDA含量明显低于雌激素组,而前两组TChE活力均高于雌激素组,雌激素组与缺血组、假手术组比较均有显著性差异（P〈0.01）;缺血组脑组织海马CA1区可见固缩的或形态不规则的神经元及核,并见神经元缺失现象;雌激素组脑组织神经细胞损伤明显减轻。结论预防性应用雌激素能减少氧自由基的产生,对由缺血再灌引起的脑组织损伤有保护作用。     

大鼠局守脑缺血再灌注后GM1的保护作用及其对细胞凋亡的影响

为了探讨大鼠局灶脑缺血再灌注后单唾液酸神经节苷（ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ,ＧＭ１）的保护作用及其对细胞凋亡的影响。我们采用栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌腹腔注射给予ＧＭ１,利用ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡情况,并对病理学改变进行观察。结果：正常对照组假手术组偶可见凋亡细胞,缺血再灌注组可见大量凋亡细胞主要位于梗塞边缘区内侧,而ＧＭ１用药组与缺血再灌注组相比,凋亡细胞明显减少。光镜及电镜观察发现,缺血再     

缺血再灌注后脑细胞凋亡率的测定

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑细胞凋亡率的时程变化。方法：插线法制备大 鼠大脑中动脉梗塞再灌注（ＭＣＡＯ／Ｒ）模型,用流式细胞仪检测缺血２ｈ再灌注６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ 的凋亡率。结果：缺血再灌注４８ｈ内,随再灌注时间的增加,脑细胞凋亡率逐渐升高,以再灌注４８ｈ凋 亡率最高（１３．１０％± １．３７％）,明显高于再灌注６ｈ（３．３８％±０．７６％）, １２ｈ（６．９８％± １．６３％）,与再灌 注 ２４ｈ（１１,６８％±１.４４％）无明显差别;灌注 ７２ｈ（１０．２０％±２．３０％）明显降低。结论：ＭＣＡＯ２ｈ再灌 注后,脑细胞凋亡的出现是一个动态过程,初期升高,２４ｈ～４８ｈ达到高峰,然后缓慢下降。     

中药对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡机制的研究进展

脑血管疾病一直严重危害人类健康,其中脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的病理生理过程在这一疾病及其相应的治疗过程中发挥着重要的作用.近年来国内外的研究显示细胞凋亡与CIRI的关系密切,现将有关凋亡机制以及中药及其有效成分对抗CIRI细胞凋亡研究综述如下.     

肌苷对缺血再灌注脑组织VCAM-1表达的影响

①目的 探讨肌苷对局灶性缺血再灌注后脑组织血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）表达的影响。②方法 将健康成年雌性SD大鼠70只随机分为假手术组、治疗组和对照组，治疗组在缺血再灌注前腹腔注射肌苷注射液，另两组腹腔注射相同体积的生理盐水。后两组分别在脑缺血90min后再灌注2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d和14d等不同时间，用免疫组化技术观察VCAM-1的表达。③结果 在皮质区，VCAM-1的表达在缺血再灌注不同时间点呈现不同水平，假手术组和对照组缺血再灌注2h之前有痕量表达，VCAM-1的阳性表达在缺血再灌注6h有较明显增加，1～2d时表达达高峰，之后逐渐下降，到7d时VCAM-1的表达接近假手术组水平；在纹状体区呈现与皮质区相似的表达规律，但其表达与同时间点皮质区比较水平更高。在治疗组VCAM-1的表达规律类似于对照组，在同一时间点较对照组表达显著降低，又明显高于假手术组。④结论 适量输注肌苷可能通过VCAM-1作用机制对缺血再灌注脑组织起一定的保护作用。     

丰富环境预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠TNF-α和IL-1β蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨丰富环境预处理对缺血再灌注后大鼠梗死周围皮层炎症相关蛋白TNF-α和IL-1β表达及细胞凋亡的影响。方法 45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丰富环境预处理组,每组15只。造模前,丰富环境预处理组大鼠置于丰富环境饲养3周。采用改良Longa法建立短暂性大脑中动脉栓塞模型(tMCAO),在术中使用多普勒血流仪评估造模效果。术后1d,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估神经功能。术后3d,苏木素-伊红(HE)染色观察梗死周围皮层神经元损伤;TUNEL染色观察细胞凋亡;Western Blotting检测TNF-α和IL-1β蛋白表达。结果 与模型组相比,丰富环境预处理组mNSS评分降低(P＜0.05),梗死周围皮层神经元损伤减轻,TUNEL阳性细胞数目降低(P＜0.05),TNF-α和IL-1β蛋白表达下降(P＜0.05)。结论 丰富环境预处理可减轻大鼠脑缺血再灌注后的神经功能和神经元损伤,可能与抑制梗死周围皮层炎症反应和细胞凋亡有关。     

EPO对缺血/再灌注损伤大鼠肾脏细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对急性缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响,探讨EPO对急性肾脏I/R损伤保护作用的可能机制.方法 取30只Wistar大鼠随机分为3组,假手术对照组、I/R组和EPO干预组(I/R+T),每组10只.I/R、I/R+T组采用夹闭大鼠双侧肾动脉45 min后,再灌注12 h制备肾脏缺血再灌注损伤(IRI)模型,假手术组未行以上处理,I/R+T组术前予EPO干预.并应用细胞凋亡原位标记法(TUNEL法)、免疫组化技术等检测EPO干预后对肾脏细胞凋亡及bax、bcl-2蛋白表达的影响.结果 通过电镜观察:假手术组未发现明显凋亡,I/R+T组较I/R组凋亡指数减少(13.4±1.5 vs 28.0±2.3 P<0.05),bcl-2/bax增多(0.93±0.12 vs 0.83±0.09 P<0.05).结论 EPO对大鼠急性肾脏I/R损伤具有保护作用,其作用机制可能通过增加凋亡相关蛋白bcl-2/bax的比率,抑制细胞凋亡的过度表达.