块型重组合异种骨的诱导成骨活性实验研究

块型重组合异种骨的诱导成骨活性实验研究罗卓荆１胡蕴玉１吕荣１杨光１李雪冰１李丹１朱银善１（第四军医大学西京医院骨科西安７１００３３）关键词骨形态发生蛋白块型重组合异种骨诱导成骨中图号Ｒ６８６．３４对于长骨大节段骨缺损的骨修复治疗一直是本学科长期未能解...     

Smad蛋白在BMP-2诱导成骨分化过程中的作用

目的研究Smad蛋白在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导成骨分化过程中作用,探讨Smad蛋白在成骨分化期间信号传导的机制。方法将取自MDX大鼠颅盖骨组织分离获得成骨细胞进行培养,培养的成骨细胞分组,加入不同浓度的BMP-2或BMP-2与Trx2SARA混合物后,用反义PCR和Western Blot斑点杂交对各组诱导成骨分化的情况进行分析。体内实验中肌肉局部埋植BMP-2或BMP-2和Trx2SARA,取不同时间点处死动物,制备组织切片,用SO染色进行组织学观察。结果BMP-2处理的成骨细胞碱性磷酸酶增加,降钙素mRNA增加,Smad蛋白的表达水平呈剂量依赖性增加。Trx2SARA处理组出现碱性磷酸酶和降钙素mRNA下调。体内实验组织切片SO染色显示,BMP-2处理组大部分异位组织由增殖中、肥厚前和肥厚软骨细胞构成,而Trx2SARA处理组很少向软骨源细胞分化。结论Smad蛋白在BMP-2诱导成骨分化中发挥重要的信号传导作用。     

转化生长因子-β1对骨形态发生蛋白诱导成骨的促进作用

目的：我们通过观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ,TCF－β1）和骨形态发生蛋白(bone morpho-genetic protein,BMP)共同修复骨缺损,达到进一步阐明BMP诱导成骨机制的目的,方法：实验采用日本大耳白兔左尺骨中段12mm骨缺损实验模型,分为实验组,对照组和空白组,缺损内分别植入BMP／TGF－β1／载体,BMP／载体,载体,通过X线,组织学及电镜对比观察三组骨缺缶修复情况,结果：实验组骨缺损无论是骨痂出现还是骨接发生时间均较对照组明显提前,空白组骨缺损形成骨不连,实验组成骨细胞和软骨细胞无论出现的时间,数量和功能活跃程度均优于对照组,电镜观察见成骨细胞,软骨细胞内线粒体丰富,内质网增多,而对照组则相对较少,软骨细胞内线粒体丰富,内质网络增多,而对照组则相对较少,结论：TGF－β1具有促进BMP诱导成骨的作用,TGF－β1通过促进间充质细胞分裂增殖为BMP提供靶细胞,促进成骨细胞及软骨细胞的分裂增殖,促进骨细胞合成产生I型胶原,促进基质钙化,碱少骨吸收等作用来促进BMP的诱导成骨。     

人骨形态形成蛋白的纯化及其诱导成骨的研究

本实验采用差示沉积、超滤及羟基磷灰石柱层析法,提取和纯化了人骨基质内骨形态形成蛋白,得到纯化的人骨形态形成蛋白,分子量为17000U(约17000道尔顿).以C_3H小鼠147只为实验动物,纯化的骨形态形成蛋白的诱导成骨率为100％。     

骨形成蛋白在胫骨截骨快速延长成骨过程中的表达及意义

目的:探讨快速延长成骨过程中骨形成蛋白(BMP)的表达及意义. 方法: 制作兔胫骨截骨快速延长动物模型,分别于延长第5, 10, 15, 20, 30和40日在延长区取材,以抗骨形成蛋白单克隆抗体(BMP-McAb)行SP法免疫组化染色光镜观察. 结果: 在骨延长的整个过程中均有BMP的表达,不同时相BMP表达的部位不同. 除炎症细胞、类骨样组织及骨小梁外,几乎所有细胞及组织均有BMP存在. 间充质细胞、软骨细胞、成骨细胞、骨细胞、骨髓细胞BMP呈高表达. 结论: BMP在骨延长成骨过程中发挥着重要作用. BMP表达量不足可能是导致快速骨延长骨不连接的重要因素.     

重组人骨形态发生蛋白诱导异位成骨的病理学观察

目的：本文报告了重组人骨形态发生蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）在小鼠肌肉内诱导异位成骨的生物学作用，方法：将大肠杆功表达的ｒｈＢＭＰ－２成熟肽植入小鼠股部肌肉。结果：植入ｒｈＢＭＰ－２后ｄ１就有间充质细胞向植入区内聚集；ｄ５出现典型的软骨细胞；ｄ７钙化开始；ｄ１０形成雏形的骨髓腔，ｄ１４骨髓腔内出现幼稚的造血细胞；２１ｄ－３０ｄ形成大量网状骨小梁、骨单位、在骨小梁间隙出现骨髓细胞。结论：大肠杆菌中表达     

骨形态发生蛋白的提取,纯化及诱导成骨的实验报告

目的 提取，纯化牛骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）并验证其异位诱导成骨的活性。方法采用生物化学方法提取并纯化出ＢＭＰ，植入家兔肌肉和豚鼠颅骨进行动物实验研究，结果植入ＢＭＰ组１４ｄ即有成纤维细胞转化为软骨细胞；第２１，２８天形成软骨和骨组织，成年豚鼠颅骨缺损修复过程中，植入ＢＭＰ后第２８天即有骨痂生成，８４ｄ时颅骨缺损修复完整，结论ＢＭＰ有明显的异位诱导骨形成作用。     

骨形态发生蛋白3基因转染成纤维细胞诱导成骨的实验研究

目的 通过基因转染方法，使成纤维细胞NIH－3T3细胞具有合成及分泌骨形态发生蛋白（BMP）、体内诱导新骨生成的能力。方法 定向克隆法将BMP3基因构建于PcDNA3表达载体，脂质体介导法转染NIH－3T3细胞，G418筛选获得稳定转化体，Northern印迹法检测转染细胞有无BMP3基因表达，免疫组织化学检测转染细胞内的BMP3蛋白合成，钙钴法染色不同时相的转染细胞碱性磷酸酶并作图像分析。将转染细胞注入裸鼠肌袋，观察注射后第4周诱导新骨生成情况。结果 转染细胞体外培养6周Northern印迹法检测到有明显的BMP3基因表达，免疫组织化学染色见转染细胞培养筛选5－8周后细胞浆内有染成黄色的BMP3蛋白质颗粒出现，图像分析蛋白质生成在转染后第6周达高峰。钙钴法碱性磷酸酶染色及图像分析示转染细胞内碱性磷酸酶明显高于同期对照组，两组间有显著性差异（P＜0．01）。被转染NIH－3T3细胞裸鼠肌袋诱导成骨实验见注射后4周注射部位有大量软骨细胞出现，并伴有骨小梁生成。结论 通过基因转染方法可以使NIH－3T3细胞具有合成及分泌内源性BMP的能力，合成及分泌的BMP具有良好的生物活性，肌袋实验具有诱导成骨作用。但是，由于基因治疗的某些不可控性因素，其安全性仍有待于进一步研究。     

不同时间段内骨形态发生蛋白诱导移植气管软骨再生

目的:研究不同时间段内骨形态发生蛋白诱导犬自体移植气管软骨再生的作用.方法:36只杂种犬,随机分为A,B两组,颈部切去5个气管环,A组气管环间植入重组人骨形态发生蛋白2/胶原复合物,B组为空白对照组,然后植入自体腹腔大网膜中.在术后1,2,3,5,9,12wk分别从两组中各取3例移植段气管行组织学检查和骨钙素(BGP)的放免测定.结果:rhBMP2植入区内软骨再生存在于移植后的各个时间段,且以术后2wk至5wk较为明显.两组标本BGP水平测定均随着时间的延长而增高,除术后1wk无显著性差异(P>0.05),其余各时间段两组差异均有显著性(P<0.05).结论:rhBMP2可诱导气管移植段软骨再生,但在不同时间段的作用效果不同.     

骨形态发生蛋白2临床应用的不良反应

骨形态发生蛋白2（BMP2）是一种能够诱导骨形成的活性蛋白质,参与并调控诱导间充质干细胞向成骨细胞分化过程,于2002年被美国食品药品管理局批准用于单节段腰椎前路椎体融合术。然而在临床使用BMP2过程中,逐渐发现其可导致异位骨化、骨溶解及移植物下沉、骨囊肿形成、炎症反应相关并发症、神经根炎、逆行性射精和肿瘤形成等不良反应的发生。这些不良反应可能与BMP2的超适应证使用、超生理剂量使用存在一定相关性。本文主要对BMP2临床应用的不良反应进行综述,以为临床更加安全、有效地应用BMP2提供参考。     

稳定表达人骨形成蛋白2成纤维细胞的建立与鉴定

目的 探讨ＢＭＰ对细胞分化的调节作用,为ＢＭＰ基因疗法的建立提供依据。方法 构建了含有人ＢＭＰ２开放阅读框（１．２ｋｂ）的真核表达载体ｐＢＫ－Ｂ２利用脂质本转染方法将其导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,通过Ｇ－４１８筛选获得了性细胞克隆,细胞原位杂交和免疫组化检测ＢＭＰ２基因的稳定转染及表达情况。结果 转染细胞内有ＢＭＰ２ｍＲＮＡ的转录及其蛋白的表达,结论：人ＢＭＰ２基因ＮＩＨ３Ｔ３细胞中得到稳定有效的方法。     

人骨形态发生蛋白-2基因腺病毒载体异位成骨

目的：评价人骨形态发生蛋白2(hBMP-2)基因腺病毒表达载体(recombinant adenoviral vector carrying the human BMP-2 gene, AdBMP-2)成骨能力并探讨其成骨机制。方法：应用 AdBMP-2体外感染兔骨髓间质干细胞（BMSC），7 d后观察hBMP-2和碱性磷酸酶(ALP)的表达,21 d后观察感染细胞钙结节形成能力。同时将AdBMP-2行裸鼠腓 肠肌组织内注射，术后20 d取材，观察hBMP-2的表达及肌组织内异位成骨情况。结果：AdBMP-2可高效感 染BMSC并获得hBMP-2的有效表达，ALP表达增高并形成钙结节。AdBMP-2在体内同样表达hBMP-2， 并且以软骨化骨的方式启动成骨。结论：感染AdBMP-2的BMSC向成骨细胞分化，AdBMP-2在体内有着良好的成骨能力。     

经皮注射骨形态发生蛋白和自体红骨髓修复兔骨缺损与骨不连

目的;评价骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）与自体红骨髓复合经皮注射在修复骨缺损与骨不连中的作用。方法：２０只成年新西兰大白兔,双人则桡骨中上段截去１５ｍｍ,包括骨膜,每１０个缺损为一组,随机分为４组,分别植入骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）／自体红骨髓（ＲＢＭ）／聚乙比咯烷酮（ＰＶＰ）－Ａ组,ＢＭＰ／ＰＶＰ－Ｂ组,ＲＢＭ／ＰＶＰ－Ｃ组和ＰＶＰ－Ｄ组,植入后２ｗｋ￣８ｗｋ做Ｘ线检查、组织学检查及生物力学试验,结果：     

氯沙坦对糖尿病肾病患者血和尿中骨形态发生蛋白7浓度的影响

目的探讨氯沙坦对糖尿病肾病患者血和尿中骨形态发生蛋白7(BMP-7)浓度的影响及其可能机制。方法将76例2型糖尿病肾病患者随机分为两组:氯沙坦50 mg组(A组,n=40);氯沙坦100 mg组(B组,n=36)。观察两组治疗前、后24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血脂、血清钾和血、尿中转化生长因子β(TGF-β)和BMP-7浓度变化。结果两组患者治疗后的24 h尿蛋白、血肌酐和尿素氮较其治疗前有明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);B组治疗后的24 h尿蛋白较A组治疗后下降更明显,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后的血脂和血清钾与其治疗前相比差异均无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后的血、尿TGF-β浓度分别较其治疗前均显著下降(P<0.05);两组治疗后的血、尿BMP-7浓度分别较其治疗前均显著上升(P<0.05)。其24 h尿蛋白与其尿中TGF-β1浓度呈正相关关系(r=0.852,P<0.01),而与尿BMP-7浓度呈负相关关系(r=-0.744,P<0.05);尿TGF-β1浓度与其尿BMP-7浓度呈负相关关系(r=-0.690,P<0.05)。结论氯沙坦增加糖尿病肾病患者血和尿BMP-7浓度,同时可降低血和尿中TGF-β1浓度,减少尿蛋白排泄,有助于保护肾功能。     

胃癌组织中骨形成蛋白4的表达

目的:研究骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)在胃癌中的表达及其与临床病理参数间的关系.方法:以免疫组织化学法(SP法)检测90例胃癌及30例癌旁组织胃黏膜石蜡切片中BMP-4的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果:胃癌组织中BMP-4阳性表达率23.3％(21/90),癌旁组织胃黏膜阳性表达率为3.3％(1/30),两组间比较差异有统计学意义(χ2=6.011,P=0.014).此外,胃癌组织中BMP-4蛋白的阳性表达在不同性别、年龄(≥60岁或<60岁)及肿瘤大小(≥5 cm或<5 cm)的患者中无统计学差异;胃窦部的肿瘤及肿瘤浸润深、分化程度差及有淋巴结转移的胃癌患者BMP-4阳性表达率分别明显高于其他部位肿瘤及肿瘤浸润浅、分化程度高及无淋巴结转移者(P<0.05).结论:胃癌组织中存在BMP-4的阳性表达,其表达与胃癌的恶性程度有关.     

牛骨形态发生蛋白异位诱导小鼠成骨的超微结构观察

目的：牛骨形态发生蛋白（ｂＢＭＰ）植入小鼠肌袋后可诱导血管周围的间充质细胞分化形成软骨和骨组织．但ｂＢＭＰ诱导异位成骨过程的超微结构研究报道甚少．本研究的目的是利用透射电子显微镜（ＴＥＭ）观察ｂＢＭＰ植入区间充质细胞向生骨细胞分化及成骨的超微结构变化．方法：将牛骨中提取的ｂＢＭＰ５ｍｇ植入小鼠股部肌间隙内，术后５，９，１４和２１ｄ取材，制备光镜及电镜标本，镜下观察组织超微结构的变化．结果：ｂＢＭＰ植入后５ｄ，植入区内发现大量肥大的间充质细胞及纤维母细胞样细胞聚集；术后９ｄ，成熟的软骨细胞出现并可见丰富的细胞外软骨基质；术后１４ｄ，软骨细胞变性，基质钙化明显，骨母细胞功能活跃；术后２１ｄ，骨母细胞深陷于钙化基质中形成骨细胞，骨髓腔出现，原始骨髓形成．结论：ｂＢＭＰ能诱导具有分化潜能的间充质细胞进行分化，产生一个完整的骨发育过程．     

骨形成蛋白在黄韧带骨化中的表达定位

目的 探讨黄韧带骨化的病因。方法 对黄韧带骨化患手术切除的标本进行普通病理观察同时用免疫组化方法研究骨形态蛋白（BMP）在骨化黄韧带中的定位。结果 未骨化黄韧带中血管及胶原增生显；BMP在未骨化区域的软骨细胞中及靠近软骨区附近的少量成纤维细胞中呈阳性，亦在小血管周围未分化间充质细胞及其移行分化的软骨细胞胞质中呈阳性。结论 骨化初期韧带中血管增生及骨形成蛋白在黄韧带骨化过程中有重要作用。