起始识别复合物1对血管平滑肌细胞增殖活性的影响

目的起始识别复合物1(origin recognition complex1,ORC1)与血管平滑肌细胞增殖密切相关[1],文中探讨ORC1对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖活性的影响。方法用组织块贴片法培养大鼠胸主动脉VSMC;用流式细胞术测定VSMC静止期和增殖期的细胞周期,并计算出不同状态的增殖活性;用免疫荧光法测定ORC1在VSMC中的表达位置,用流式细胞术测定不同细胞周期中ORC1蛋白表达。结果静止期VSMC的增殖活性很低[(10.40±3.52)%],在VSMC中ORC1不表达或低水平表达。血清剌激24 h后,处于增殖期的VSMC的增殖活性明显增加,达(33.91±13.42)%,ORC1蛋白表达也明显增加(P<0.01)。结论 ORC1可能与VSMC增殖活性有关。     

ORC1在大鼠血管平滑肌细胞G1/S和S期的表达

目的检测大鼠血管平滑肌细胞(VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELLS,VSMCS)G1/S、S期中起始识别复合物(ORIGINRECOGNITION COMPLEX1,ORC1)的表达。方法采用组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉原代培养VSMCS。利用胸苷双阻断法造成细胞同步,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、流式细胞仪检测分别测定G1/S、S期VSMCS的ORC1MRNA及蛋白表达。结果经光镜、免疫组化鉴定证实分离培养的细胞为VSMCS。ORC1MRNA在GO期的VSMCS无明显表达、G1/S期达到高峰,到S、G2/M期明显减少。流式细胞仪检测的VSMCS ORC1蛋白质表达与MRNA变化相似。结论ORC1可能在VSMCS细胞周期调节过程中起重要作用。     

ORC1在大鼠血管平滑肌细胞增殖过程中的表达

目的检测不同增殖状态大鼠血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)中起始识别复合物1(origin recogn ition comp lex 1,ORC1)的表达。方法采用组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉原代培养VSMCs;提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定不同增殖状态VSMCs中ORC1 mRNA表达;采用免疫荧光、激光共聚焦显微镜检测不同增殖状态VSMCs中ORC1蛋白表达。结果经光镜、免疫荧光鉴定证实分离培养的细胞为VSMCs;处于静止状态的VSMCs无ORC1 mRNA表达,血清刺激6 h后ORC1 mRNA表达量明显增加,12~24 h达到高峰,继后逐渐减少;处于静止期的VSMCs无ORC1蛋白表达,处于增殖状态的VSMCs中有大量ORC1蛋白表达。结论ORC1可能在VSMCs增殖过程中起重要作用。     

细胞周期素依赖性激酶与肿瘤

肿瘤是遗传因素和环境因素共同作用下细胞周期紊乱、细胞失控性生长所致的一类疾病。细胞周期素依赖性激酶是调节真核生物细胞周期的关键分子之一,深入研究细胞周期素依赖性激酶在细胞周期与细胞生长中的作用,对于阐述肿瘤发生、发展的病理机制以及肿瘤治疗的新途径具有重要的意义。     

ORC1与大鼠血管平滑肌细胞DNA复制的关系及意义探讨

目的探讨大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖过程中DNA复制与起始识别复合物1(origin recognition complex 1,ORC1)基因表达的关系及意义.方法采用组织块贴片法培养大鼠胸主动脉VSMCs,利用MTT法绘制生长曲线,分析不同生长状态VSMCs的DNA合成与ORC1 mRNA和蛋白表达的关系.结果静止状态的VSMCs无ORC1 mRNA及蛋白质表达,血清刺激后12～24 h VSMCs DNA的合成量显著增加,ORC1 mRNA及蛋白质表达量与VSMCs DNA的合成量相一致.结论 ORC1与大鼠VSMCs增殖过程中的DNA复制密切相关.     

细胞周期调节蛋白与皮肤肿瘤

细胞周期调节蛋白在细胞分裂,繁殖中起一定作用,本文综述细胞周期调节蛋白在皮肤肿瘤中的表达及其相互关系,综述其在皮肤肿瘤的发病机制中的作用.     

雷帕霉素对大鼠血管平滑肌细胞起始识别复合物1 mRNA表达的影响

目的观察血管平滑肌细胞(VSMC)起始识别复合物1(ORC1)mRNA在雷帕霉素作用下的表达变化。方法采用组织块贴壁法获得VSMC并用免疫细胞化学法鉴定,含体积分数10%血清的培养基培养。血清饥饿法饥饿细胞24 h使其同步化。将雷帕霉素加入含体积分数10%血清的培养基(终浓度为10 nmol.L-1)中继续培养细胞,分别于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h、18 h、21 h、24 h收集细胞,采用反转录-聚合酶链反应技术法检测各时间点ORC1 mRNA的表达(内参为β-actin)。用Quantity One软件计算各时间点ORC1 mRNA与内参的光密度比值,并作统计学分析。结果各时间点ORC1与β-actin光密度比值均有显著性差异(F=410.170,P=0.001)。雷帕霉素作用3～12 h ORC1 mRNA的表达持续升高(与0 h比较,P<0.05),12～18 h逐渐下降(与0 h比较,P依次为0.001,0.001,1.000),18～24 h与0 h比较,无统计学差异(P依次为1.000,0.986,1.000)。结论VSMC的ORC1 mRNA表达随雷帕霉素作用时间呈动态变化。     

ORC1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)ORC1基因,探讨ORC1基因表达抑制后VSMCs增殖的变化。方法实验设置正常对照组、阴性siRNA组及阳性(ORC1 A、ORC1 B、ORC1 C)siR-NA组。应用W estern b lot检测ORC1基因表达的变化;应用MTT比色试验、3H-TdR掺入试验检测VSMCs增殖的情况。免疫细胞化学染色观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuc lear antigen,PCNA)表达。结果①siRNA转染后,3个阳性siRNA转染组ORC1基因表达水平均降低,尤以第2对阳性siRNA抑制效果最为显著,而空白对照组及阴性对照组间ORC1基因表达水平无显著差异。②siRNA转染使ORC1表达减弱后,VSMCs的MTT吸光度值3、H-TdR掺入量和PCNA表达量均较空白对照组及阴性对照组显著降低。结论RNA干扰介导的ORC1基因沉寂可显著抑制VSMCs增殖。     

西罗莫司对大鼠血管平滑肌细胞增殖、起始识别复合物1表达的影响及机制探讨

目的探讨西罗莫司对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、起始识别复合物1(ORC1)表达的影响及机制。方法细胞随机分为对照组和实验组,每组3瓶/孔,血清饥饿法培养细胞24h使其同步化。对照组采用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养,实验组采用含10μmol/L西罗莫司+10%胎牛血清的DMEM培养液培养。继续培养0～48h,采用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达,电子显微镜观察细胞超微结构,RT-PCR法检测ORC1mRNA的表达,蛋白质印迹法检测P53、cyclin D1、cyclin A和ORC1蛋白的表达。结果与对照组相比,实验组48hPCNA阳性表达率降低[(20±2.1)%vs(80±3.0)%,P<0.05],P53蛋白表达升高(P<0.05);细胞核有固缩的迹象;实验组cyclin D1蛋白表达轻微升高(P>0.05),48hcyclin A蛋白的表达下降(P<0.05)。对照组ORC1mRNA的表达在0～12h升高,24～48h降低,高峰期在12h。实验组细胞ORC1mRNA的表达始终处于高水平。与同时间对照组比较,实验组48hORC1mRNA的表达升高(P<0.05)。蛋白质印迹分析结果与之相似。结论西罗莫司抑制VSMCs增殖,同时促进其凋亡;其作用环节可能是通过阻止细胞由G0/G1期向S期转化,诱导细胞处于静止状态;ORC1的作用环节位于西罗莫司作用点的上游,进一步支持ORC1参与细胞复制起始过程。     

细胞周期素与肿瘤放射敏感性

近年研究支持肿瘤是一种细胞周期病,是在各种致瘤因素的作用下最终导致细胞周期异常而产生的,肿瘤的本质在于细胞周期调节失调失控,细胞无限制、自主的增殖和分裂。所谓的细胞周期是指细胞从上一次分裂结束到下一次分裂终末的过程[1],由G1、S、G2、M期组成。在一个细胞周期中的     

EFFECT OF SOMATOSTATIN ON THE CELL CYCLE OF HUMAN GALLBLADDER CANCER CELL

In the last decades, incidence rate of gallblad-der cancer was increasing in China, but the survivorrate was not satisfying even if the radical operationswere performed[1]. Since gallbladder cancer wasnon-sensitive to either chemotherapy or radiothera-py[2,3], many researches had been done to find somenew effective adjuvant approaches to improve the sur-vival of patient who suffered from this malignant dis-ease , especially the patients who lost the chance ofresection.Recent evidences showed t…     

谷氨酰胺联合5-氟尿嘧啶和环磷酰胺对胃癌细胞增殖的影响

目的：研究谷氨酰胺（Gln）联合5-氟尿嘧啶（5-FU）和环磷酰胺（CTX）对人胃癌SGC7901细胞周期和凋亡率的影响。方法：体外培养胃癌SGC7901细胞株,加入Gln及不同浓度的5-FU和CTX后收集细胞。应用流式细胞术检测胃癌细胞周期及凋亡率的变化。结果：5-FU加Gln时胃癌SGC7901细胞凋亡率不同,浓度由0mg/L增加到240mg/L时呈正直线相关（r=0.806,P〈0.01）,凋亡率随浓度增加而增加。CTX加Gln对胃癌细胞周期及凋亡率无显著影响（P〉0.05）。5-FU加Gln组G0/G1期细胞所占比例较CTX加Gln组明显增多（P〈0.05）。G2期5-FU加Gln组明显比CTX加Gln组低（P〈0.05）。S期两组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：Gln和5-FU影响胃癌细胞株的细胞周期和凋亡率。Gln和CTX对人胃癌细胞株的细胞周期和凋亡率均无明显影响。     

从细胞阻滞模型来看流式细胞术中细胞周期分析的误区

目的:探讨流式细胞术中细胞周期常规分析方法的误区和潜在的合理分析方法。方法:设立空白对照,观察MOLT-4细胞经0.1μmol·L-1喜树碱诱导细胞周期阻滞7h后细胞周期变化情况,并从常规DNA直方图分析法(方法一)和本实验意外发现的方法(方法二)进行细胞周期分析,并评价两种方法获得的结果。结果:方法一分析的细胞周期分布结果G0/G1期、S期和G2/M期分别为(65.42±4.73)%、(25.01±2.58)%、(9.57±1.96)%,方法二分析结果分别为(31.51±2.13)%、(59.32±5.92)%、(9.17±1.61)%。两种分析方法获得的结果存在显著差异(n=8,P<0.01)。结论:流式细胞术常规细胞周期分析方法存在严重的误区。一种新的基于细胞周期特异性标志物的定量技术或形态学方法应用于细胞周期的分析较合理。     

细胞周期及其周期调控研究的发展简史

发现细胞通过分裂的方式而增殖已经有 10 0多年的历史 ,但是直到最近 2 0年才确认了调控细胞周期的分子机制。对于细胞周期调控的研究 ,经历了发现细胞分裂、发现细胞周期和发现细胞周期的关键调控因子 3个时期。这一机制的阐明 ,必然会推动应用研究并开拓出更广阔的空间 ,使人类看到攻克癌症的曙光。     

不同剂量顺铂对宫颈癌SiHa细胞周期和凋亡影响的研究

目的 检测不同剂量顺铂(DDP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及周期的影响,探讨DDP治疗宫颈癌的作用机制. 方法 采用WST-8方法 检测DDP对人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态;用流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡和周期变化. 结果 DDP对SiHa细胞增殖的抑制作用,一定程度上呈浓度依赖性和时间依赖性,但0.01～1.00 μg/ml的DDP作用24 h和0.01～0.10 μg/ml的DDP作用48 h对细胞的抑制增殖作用不明显(P＞0.05).5.00 μg/ml 的DDP作用24 h时,Hoechst 33258荧光染色可见典型的凋亡细胞形态;1 μg/ml 的DDP作用SiHa细胞24 h时,使SiHa细胞产生明显的S期阻滞,S期细胞比率为(53.17±7.50)%,与对照组、DDP 5.00 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),致凋亡作用不明显(P＞0.05);而5.00 μg/ml DDP作用24 h时,细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率分别为(5.88±1.64)%和(5.18±1.26)%,与对照组、DDP1 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05). 结论 DDP抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,但对小剂量DDP存在一定的耐药,其耐药机制可能与S期阻滞有关;高剂量DDP抗宫颈癌细胞作用机制主要表现为致凋亡作用.     

Cell cycle analysis by cyclin E+A/DNA multiparameter flow cytometry in exponen tial growth MOLT-4 cells

Objective To establish a new method for analyzing the cell cycle in tumor which is a kind of cell cycle disease.
Methods Mixtures of cyclin E and cyclin A antibodies were incubated with fixed MOLT-4 cells, and measured by flow cytometry.
Results We developed a cyclin E+A/DNA flow cytometry analysis method, which may distinguish G₀, early G₁, late G₁, S, G₂ and M phase cells, rather than three phases in the DNA content histogram.
Conclusion Cyclin E+A/DNA multiparameter flow cytometry can simultaneously differentiate in the same sample six cell groups: G₀, early G₁, late G₁, S, G₂ and M phase cells. It performed better than any other cell cycle analysis methods that we have used and has a definite cell biology foundation.     

Cyclin/CDK——复制前复合物途径对细胞周期的调控

细胞周期蛋白(cyclin),细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK),复制前复合物(Pre-RC)是细胞周期调控的重要分子,三者形成cyclin/CDK-Pre-RC调控途径,在细胞周期中相互作用,共同完成对细胞周期的精密调控。通过对这一途径的阐释,将会推动临床研究并开拓出更广阔的应用空间。