栀子抗内毒素组分的制备及活性初步分析

目的 从中药栀子中提取抗内毒素(lipopolysaccharide,LPS)的有效成分并进行活性初步分析.方法 运用大孔树脂AB-8、聚酰胺树脂、萃取技术及高效液相色谱分离技术对栀子水提物进行分离;通过测定他与lipid A的结合强弱对分离过程进行跟踪,获得粗组分D,经过HPLC技术进一步获得与lipid A有较强结合活性的组分CJ-1;动态比浊法鲎试验检测组分CJ-1在不同浓度(0.5、1、2 mg/L)对LPS(0.2μg/L)的中和作用;ELISA法检测CJ-1组分对LPS(100μg/L)刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.结果 从中药栀子中逐步分离出与lipid A结合活性较高的组分CJ-1,当CJ-1浓度为0.2 g/L时,RU值为112 arc/s;CJ-1浓度为0.5～2.0 mg/L时,对0.2μg/L LPS介导的鲎试剂的凝结反应具有显著的抑制作用(P＜0.01,P＜0.05),并呈剂量效应关系;CJ-1浓度为50～200 mg/L时,对100μg/L的LPS介导的RAW264.7细胞释放TNF-α具有显著的抑制作用(P＜0.01,P＜0.05),并呈剂量效应关系.结论 依靠lipidA为靶点指导中药栀子水煎液分离,从中分离提取出与lipid A的结合作用较强的组分CJ-1,CJ-1在体外对LPS具有一定的中和作用.     

诃子抗内毒素活性组分的分离及活性评价

目的从诃子中分离制备具有拮抗内毒素作用的活性组分.方法应用离子色谱技术等方法,从诃子水提物中分离制备具有拮抗内毒素活性的组分;并应用生物传感器技术,对所得到的组分进行与Lipid A结合活性的筛选;利用鲎试剂动态浊度法,对筛选出的活性组分在体外进行中和内毒素活性的测定;观察其对LPS刺激的小鼠RAW 264.7细胞释放炎症介质的抑制作用;观察其对致死剂量(20 mg/kg)内毒素攻击小鼠的保护作用.结果应用离子色谱技术从诃子中分离出4个组分,其中有3个组分具有一定的结合Lipid A的活性,以3#组分结合活性最强;在体外实验中3#组分对内毒素具有直接的中和作用(P＜0.01);对LPS刺激的小鼠RAW 264.7细胞释放TNF-α具有显著的抑制作用(P＜0.01);并对致死剂量内毒素攻击的小鼠具有明显的保护作用(P＜0.01).结论从诃子中分离出的3#组分具有显著的拮抗内毒素活性.     

白鲜皮抗内毒素活性物质的分离提取与活性研究

目的 筛选与类脂A(lipid A)具有较高结合活性的中药,从中提取具有拮抗内毒素(lipopolysaccharide, LPS)活性的物质.方法 采用生物传感技术,以lipid A为靶点,检测42种中药的水提物与lipid A的结合活性;以白鲜皮为研究对象,通过大孔吸附树脂、溶剂萃取、聚酰胺柱层析和高效液相色谱(HPLC)法,分离提取与lipid A结合活性较高的组分;动态比浊法鲎试验检测HPLC产物DPR-1～3对LPS(0.1 ng/ml)的中和作用;ELISA法检测DPR-2对LPS(100 ng/ml)刺激的RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的影响.结果 8种中药水提物与lipid A具有较高的结合活性(RU＞100 arc/s);从白鲜皮中逐步分离出与lipid A结合活性较高的组分,经HPLC法获得3种物质DPR-1～3;DPR-2对LPS具有一定的中和作用,在8 μg/ml浓度以上可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6 (P＜0.05),并具有剂量效应关系.结论 从42种中药中筛选出与lipid A具有较高结合活性的中药白鲜皮,并从中分离提取出抗LPS活性物质DPR-2,其抗LPS活性可能与DPR-2对LPS的中和活性有关.     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导RAW264.7细胞Toll样受体4表达及髓过氧化物酶活性的抑制作用

目的 探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的RAW264.7细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA和蛋白表达及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响及其抗炎、抗动脉粥样硬化机制.方法 体外培养RAW264.7细胞.采用RT-PCR检测RAW264.7细胞TLR4mRNA水平,Western blotting检测RAW264.7细胞TLR4蛋白表达,比色法测定细胞培养上清中MPO活性.结果 罗格列酮浓度依赖性地下调AngⅡ诱导的RAW264.7细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,抑制AngⅡ诱导的RAW264.7细胞MPO活性.此外,TLR4阻断剂对AngⅡ诱导的RAW264.7细胞MPO活性有部分地抑制作用,而罗格列酮可增强这一抑制效应.同时罗格列酮明显地抑制TLR4特异性配体脂多糖的促MPO分泌效应.结论 罗格列酮可下调AngⅡ诱导的RAW264.7细胞TLR4表达,并可能通过干预TLR4,影响胞内信号转导途径,抑制MPO分泌,减轻炎症反应,阻止动脉粥样硬化的发生发展.     

紫堇灵的分离制备及抗炎活性

旨在从苦地丁药材中分离出紫堇灵,从TLRs/NF-κB信号传导通路角度探讨其抗炎作用机制。以80%乙醇提取、硅胶柱色谱等方法制备紫堇灵,UPLC、MS、¹H NMR、¹³C NMR等方法进行纯度及结构鉴定;利用MTT实验评价紫堇灵的细胞毒性;采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,用紫堇灵进行干预,以Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞中TLR4、TLR2、IκBα、p-IκBα、p65和p-p65蛋白的表达水平;进而通过实时荧光定量PCR、Western blot技术分别检测p65 mRNA及细胞核p65表达情况。实验发现,在LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型中,5~40 μmol/L紫堇灵呈正相关下调RAW264.7细胞中TLR4、TLR2蛋白的表达水平,抑制IκBα磷酸化并从基因水平和蛋白水平抑制p65转位入核。结果表明,紫堇灵可能是通过TLRs/NF-κB信号通路发挥对LPS致RAW264.7细胞炎症的抑制作用。     

2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对内毒素刺激巨噬细胞ST2 mRNA表达的影响

目的检测2’,5,6’,7-四羟基二氢黄酮醇（THF）对内毒素（LPS）刺激巨噬细胞ST2 mRNA表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分别检测不同浓度LPS刺激对RAW264.7细胞ST2 mRNA表达的影响及不同浓度THF对100μg/LLPS诱导的RAW264.7细胞ST2 mRNA表达的影响。结果LPS（10、100、1000μg/L）可显著上调RAW264.7细胞ST2 mRNA的表达,依LPS浓度升高ST2 mRNA表达增强,呈剂量-效应关系;而以20～160mg/LTHF干预后,则可显著下调LPS（100μg/L）上调的ST2 mRNA表达。结论THF可在基因水平上拮抗LPS对巨噬细胞ST2 mRNA表达的诱导效应。     

原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE_2生成的机制

目的：观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法：放射免疫法（RIA）检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫（RIA）法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录-聚合酶联反应（RT-PCR）法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹（western blot）法检测原花青素对NF-κB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析（EMSA）法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果：0.8,4和20mg·L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF—κB活化。结论：原花青素显著抑制LPS诱导RAW264．7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF—κB／p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现。     

牡丹皮抗内毒素活性研究

目的对传统中药牡丹皮(Paeonia suffruticosa Andr,PSA)抗内毒素(LPS)活性组分进行定向分离及体内外活性评价。方法利用生物传感器、硅胶柱层析、聚酰胺层析、离子交换-HPLC等技术对牡丹皮进行活性组分的定向分离。通过活性组分对LPS介导RAW264.7分泌细胞因子的抑制实验、对LPS和热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护实验,评价所得活性组分对内毒素的拮抗作用。结果从牡丹皮水提取物中分离到一个与Lipid A具有较高结合活性的组分(PSA-3),PSA-3在体外能抑制LPS介导的RAW264.7细胞释放TNF-α(P45μg<0.05,P90、180μg<0.01),对致死剂量LPS攻击小鼠的保护率为50%(P<0.01),对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护率为50%(P<0.05),而低结合活性PSA-1组分则不具有抑制作用,对LPS和热灭活大肠杆菌(HK-E.coli)攻击小鼠也无保护效果。结论从牡丹皮中分离到一个与Lipid A具有较高结合活性的组分,该组分在体内外对LPS均具有一定的拮抗作用。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

丹红注射液及其活性组分对脂多糖诱导的小胶质细胞NO分泌的抑制作用

目的 研究日本琵琶甲虫Blaps japonensis的化学成分及其生物活性。方法 采用多种柱色谱法对日本琵琶甲虫的50%乙醇提取物的正丁醇萃取部位化学成分进行分离和纯化,并根据其理化性质及波谱数据鉴定结构;采用MTT法进行抗肿瘤活性筛选。结果 共分离得到9个化合物,分别鉴定为N-乙酰基多巴胺（1）、(?)-N-acetylnoradrenaline（2）、1, 4- diacetamidobutane（3）、N, N′-pentane-1, 5-diyldiacetamide（4）、(1H-indol-3-yl) oxoacetamide（5）、吲哚酸（6）、吲哚醛（7）、deoxyuridine（8）和胸苷（9）。细胞毒活性筛选表明,化合物6对HL-60、SMMC-7721、A-549、MCF-7和SW480细胞株有显著抑制作用。结论 所有化合物均为首次从该昆虫中分离得到,并首次对化合物2的核磁共振波谱数据进行了归属。     

苦蘵中睡茄交酯类成分的抗炎靶标预测

目的 应用分子对接技术预测苦蘵中睡茄交酯类成分的抗炎活性靶标,并利用LPS诱导细胞炎症模型验证化合物的体外抗炎活性。方法 以计算机辅助药物设计(CADD)中的分子对接技术为研究方法,以前期从苦蘵分离鉴定的9个睡茄交酯类成分组成配体数据库,选择环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞外调节激酶(ERK)、p38、应激活化蛋白激酶(JNK)、核转录因子(NF-κB)等6个与抗炎活性密切相关的靶点组成受体数据库,对睡茄交酯类化合物的作用靶点及抗炎机制进行预测,进一步利用细胞炎症模型验证化合物对LPS诱导巨噬细胞释放炎症介质一氧化氮(NO)的抑制活性。结果 对比分析了9个睡茄交酯化合物作用于各靶点的主要活性位点,化合物1-4均对LPS诱导细胞释放NO表现出抑制活性。结论 苦蘵中睡茄交酯类活性成分可能是通过阻断ERK信号转导途径来发挥抗炎作用。     

超临界CO2 -分子蒸馏对独活化学成分的萃取与分离

目的：研究独活的化学成分并建立提取方法。方法：采用超临界CO2-分子蒸馏技术对独活化学成分进行萃取与分离，并对其提取物和蒸出物进行GC-MS分析，结果：从超临界C煤萃取物和蒸山物中分别得到37种和29种成分，结论：用超临界CO2-分子蒸馏技术提取独活化学成分是一种先进合理的提取方法。     

Influence of Radix Isatidis on the Endotoxin-induced Release of TNF-α and IL-8 from HL-60 Cells

The effects of active antiendotoxin chemical fraction isolated from Radix Isatidis (fraction D) on TNF-α and IL-8 secretion in HL-60 cells induced by lipopolysaccharide (LPS) were studied. The appropriate densities of cell suspension and fraction D solution were determined by MTT colorimetric method. Fraction D and LPS were added to HL-60 cell suspension with three different methods respectively. The contents of TNF-α and IL-8 in the cultured supernatant induced by LPS were detected by using ELISA method. The results showed that the absorbance (A) was directly proportional to the number of cells and the linearity was good in the range from 0.25 × 105 to 2 ×105 cell/mL cell suspension. The fraction D significantly inhibited the oversecretion of TNF-α and IL-8 in HL-60 cells induced by LPS at the concentration of 7. 812 mg/mL which had no cytotoxicity. It was indicated that the antiendotoxin mechanism of the active fraction from Radix Isatidis was contributed to the inhibition of the oversecretion of cytokines induced by LPS.     

LC-MS/MS定性分析大鼠尿液中益智提取物的成分及其代谢产物

目的 通过LC-MS/MS法检测大鼠尿液中益智提取物中10种活性成分的存在形式.方法 采用LC-MS/MS法检测灌胃给药后0~4 h、4~8 h、8~24 h大鼠尿液中的益智代谢产物,与给药前大鼠空白尿液MRM图进行比对.结果 实验组大鼠尿液中9种主要活性成分均以原形化合物的形式存在,而未发现山柰酚及其葡萄糖酸代谢产物.结论 大鼠灌胃益智提取物后,益智活性成分在大鼠尿液中的物质形式以原形为主,为理解这些物质在大鼠体内的消除途径提供部分参考依据.     

茯苓乙醇提取物的分离纯化及抗KBV200细胞多药耐药活性

目的 对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化,并对所得的单体化合物进行抗KBV200细胞多药耐药活性的检测。方法 采用薄层色谱、柱色谱、葡聚糖凝胶分离、高效液相色谱等方法及波谱技术对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化和结构鉴定;利用MTT法检测各化合物对KBV200细胞多药耐药性的逆转作用。结果 从茯苓乙醇提取物中分离并鉴定出8个三萜类化合物。在浓度为12.5 mg/L时,8个化合物对KBV200的多药耐药性均有一定的逆转作用,其中化合物3（去氢土莫酸）的逆转作用最强,其逆转倍数为12.6。结论 茯苓中的三萜类化合物具有逆转KBV200细胞多药耐药性的作用。     

Antioxidant and anti–acetylcholinesterase activities of extracts and secondary metabolites from Acacia cyanophylla

ObjectiveTo investigate the antioxidant potential and anti-acetycholinesterase activity of compounds and extracts from Acacia cyanophylla (A. cyanophylla).MethodsThree polyphenolic compounds were isolated from ethyl acetate extract of A. cyanophylla flowers. They have been identified as isosalipurposide 1, quercetin 2 and naringenin 3. Their structures were elucidated by extensive spectroscopic methods including 1D and 2D NMR experiments as well as ES-MS. The prepared extracts and the isolated compounds 1–3 were tested for their antioxidant activity using 1′-1′-diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) and 2,2′-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) scavenging assays and reducing power. They have been also investigated for inhibitory effect against acetylcholinesterase using the microplate assay.ResultsIn the DPPH test, the EtOAc extract of flowers exhibited the highest antioxidant effect (67.26 μg/mL). Isosalipurposide 1 showed a significant antiradical power against DPPH (81.9 μg/mL). All extracts showed a dose-dependent acetylcholinesterase inhibition. In terms of the IC50 value, the butanolic extract (16.03 μg/mL) was the most potent sample. Isosalipurposide 1 was found to be active against AChE with an IC50 value of 52.04 μg/mL.ConclusionsThe results demonstrated the important antioxidant and anti-acetylcholinesterase activity of pure compounds and extracts from A. cyanophylla.     

高良姜中的抗白念珠菌化学成分

目的 研究高良姜抗白念珠菌的活性成分。方法 以生物活性追踪结合色谱分离，用纸片扩散法检测抑菌作用，以各种色谱柱层析，包括制备高效液相色谱，得到单体化学成分，用波谱技术鉴定各化合物的结构，测定各化合物的抗菌效价。结果 高良姜三氯甲烷提取物的抑菌活性最强。从三氯甲烷提取物中分离得到6个有抑菌活性的化合物，分别鉴定为2个黄酮类化合物：高良姜素（galangin）和芹菜素（apigenin）；3个二芳基庚烷类化合物：7-（4-羟苯基）-1-苯基-4-烯-3-庚酮、5-羟基-1-（4-羟苯基）-7-苯基-3-庚酮，和1-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-7-（4-羟苯基）-3，5-庚醇；1个半日花型二萜类化合物：16-醛-8（17），12-半日花二烯-15酸。结论 抗白念珠菌实验表明，这6个化合物对白念珠菌均有一定的抑菌活性。     

水杨梅根提取物的GC-MS分离鉴定

[目的]研究水杨梅根提取物不同提取部位的主要成分。[方法]采用系统溶剂法,对水杨梅根水提液进行氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分步萃取,对各提取液进行气相色谱-质谱联用法分析其化学成分。[结果]水杨梅根提取物中含有较多的苯基及含氧基等活性基团成分。[结论]水杨梅根成分为进一步药用研究提供了依据。