肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达对NK抗性的影响及IFN-γ的调节作用

目的 探讨肿瘤细胞表面HLAⅠ类分子的表达与NK杀伤的关系及IFN－γ的调节作用。方法 用间接免疫荧光法检测7种肿瘤细胞表面HLA－ABC分子的表达;用鼠抗人HLA－ABC单抗封闭靶细胞后,观察NK杀伤的变化;用IFN-γ处理靶细胞后,观察瘤细胞表面HLA分子表达的变化及NK杀伤的变化。结果 不同肿瘤细胞株表达HLA－ABC分子的比例及荧光强度均不相同,除Karpas外,均表现为不同程度的下降。HLA－ABC表达阴性的K562细胞对NK杀伤最敏感,其他细胞的敏感性均有下降。肿瘤细胞表达HLA－ABC分子的表达多有不同程度的下降。用抗HLA单抗封闭相应位 点后,可使NK杀伤明显增强。用IFN－γ500U／ml处理48h后,白血病细胞K562、黑色素瘤细胞M21和高转移肺癌细胞PG表面HLAⅠ类分子表达明显增加,对NK杀伤的敏感性降低;而人T细胞淋巴瘤Karpas、髓样白血病细胞HL60和结直肠癌细胞HT29经处理后,HLAⅠ类分子表达无明显变化,对NK杀伤的敏感性反而明显增强。IFN－γ促进HL60和HT29细胞的凋亡。结论 NK细胞能识别HLA－ABC分子表达下降或缺陷的肿瘤细胞并发挥杀伤作用;INF－γ能恢复部分肿瘤细胞HLA－ABC分子的丢失,并能促进部分肿瘤细胞的凋亡,提高肿瘤对机体抗瘤机制的敏感性。     

苯乙酸钠增强肿瘤细胞表面HLA分子的表达

以分化绣导剂苯乙酸钠处理肿瘤细胞,以ELISA检测肿瘤细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子表达的变化。结果发现MCF-7、MDA-453、MKN-45以及Hela细胞表面HLA Ⅰ类分子表达较低,而MKN-28和3AO细胞表面HLA Ⅰ类分子高表达。MDA-453、MKN-28、MKN-45、Hela以及3AO细胞表面亦表达HLA Ⅱ类分子,而MCF-7细胞表面缺乏HLA Ⅱ类分子。苯乙酸钠能够诱导MCF-7细胞表面表达HLA Ⅱ类分子;增强MCF-7细胞表面HLA Ⅰ类分子,MDA-453、MKN-28、MKN-45、Hela以及3AO细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达。并且肿瘤细胞表面HLA Ⅰ类分子的表达与苯乙酸钠的作用时间和剂量呈正相关。     

氩氦刀靶向治疗人肝癌SMMC7721细胞及H22肝癌荷瘤小鼠实验观察

[目的]探讨体内外氩氦刀靶向治疗对肝癌细胞灭活作用的影响因素及联合高渗盐水提高冷冻疗效的可行性。[方法]通过氩氦刀对体外培养的人肝癌SMMC7721细胞予不同速度（快冻或慢冻）、低温（-40℃以下或以上）和冻融周期（1个或2个周期）冷冻处理。H22肝癌荷瘤小鼠随机分为5组：Ⅰ组为根治冷冻组，Ⅱ组为姑息冷冻组，Ⅲ组为高渗盐水注射组．Ⅳ组为姑息冷冻联合高渗盐水治疗组，Ⅴ组为无治疗组。[结果]冷冻温度低于-40℃时，细胞死亡率可达100％。冷冻温度为-40℃～20℃时，细胞死亡不完全。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均能显著抑制肿瘤生长，抑瘤率分别为99．7％、83．6％、78．9％、99.3％；以上各组与Ⅴ组比较，差异均有显著性。Ⅰ组与Ⅳ组比较差异无显著性。[结论]快速冷冻、重复冻融、-40℃以下低温可完全杀灭人肝癌细胞。冷冻与高渗盐水联合治疗是一种有效的肝癌综合治疗模式。     

重组hDCN对肝癌细胞株HepG2表面HLA分子表达的影响

目的研究peDNA3．1（＋）-核心蛋白聚糖（DCN）重组质粒对体外培养的HepG2细胞株表面HLAⅠ、Ⅱ类分子表达的影响,探讨DCN增强抗肿瘤免疫应答的作用。方法重组质粒pcDNA3．1（＋）-DCN转染HepG2细胞,用流式细胞术（FCM）检测转染前后HepG2细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达。结果HepG2细胞低表达HLAⅠ、Ⅱ类分子,经转染重组质粒作用后,HLAⅠ、Ⅱ类分子的荧光强度明显增强。结论rhDCN核心蛋白能上调肿瘤细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达,这一作用可能参与其抗肿瘤效应机制。     

转导B7-1基因消除IFN-γ对黑色素瘤转移潜力的增强作用

γ干扰素(IFN-γ)可通过增加MHCⅠ类分子或其它机制增强多种肿瘤的转移能力,而将T细胞共刺激分子B7基因导入肿瘤细胞能增强机体免疫系统对肿瘤的攻击。本文以Lipofectamine转染法将小鼠B7-1(mB7-1)基因导入B16黑色素瘤低转移株,导入空载体(只含neo基因)的B16细胞作对照。亲本B16细胞和基因转导细胞(B16-B7-1和B16-neo)经100U/ml IFN-γ预处理36小时后进行实验性肺转移试验,同时流式细胞分析细胞表面MHCⅠ类和Ⅱ类分子的表达。结果发现,IFN-γ预处理明显增强B16和B16-neo细胞的肺转移能力,而经IFN-γ预处理的B16-B7-1细胞转移能力并不增强,其实验性肺转移结节数与未经处理的对照组无差别。流式细胞分析显示IFN-γ预处理使B16、B16-neo和B16-B7-1三种细胞的MHCⅠ类(H-2K~b和H-2D~b)分子均明显增高,但IFN-γ增加B16-B7-1细胞MHCⅡ类分子I-A~b表达程度显著高于其它两种细胞。结果表明,转导B7-1基因可降低IFN-γ诱导的B16细胞转移能力,MHCⅡ类分子表达增高可能在其中起一定作用。     

肝细胞癌患者外周血性激素受体和糖皮质激素受体的含量

动物实验证实协同刺激分子CD80(B7-1)是促进抗肿瘤免疫应答的重要分子.本文应用RT-PCR,FACS技术检测了人肿瘤细胞系及EBV转化的B细胞CD80的表达,结果表明除Raji细胞、EBV转化的B细胞CD80阳性外,3AO、MCF-7、MDA-453、MKN-45、Hela细胞均为阴性.用我室建立的CD80逆转录病毒载体转染包装细胞PA317,筛选高滴度病毒上情感染人肿瘤细胞,得到CD80阳性表达的肿瘤细胞克隆.利用转染前后的人乳腺癌细胞系MDA-453作ICAM-I、HLA class Ⅰ、classⅡ分子表达的分析,结果表明转染有CD80基因的MDA-453细胞ICAM-Ⅰ、HLA classⅠ分子表达上调,class Ⅱ分子的表达未见改变.     

B超引导下经皮氩氦刀治疗肝癌

目的：探讨经皮穿刺氩氦刀治疗肝癌的原理,方法及安全性。方法：15例肝癌患者,超声引导下穿刺,CRY Ocare-TM低温手术系统冷冻头插至瘤体远端冷冻。结果：15例病人冷冻治疗后无手术死亡,无肝破裂,出血,胆瘘,皮肤冻伤及穿刺道种植转移或感染等并发症,术后有1例出现气胸及反应性胸腔积液,术后低热有8例,术前AFP值增高的8例病人,术后AFP值均有下降,其中4例恢复正常。术后彩色多普勒B超显示肝癌内血供消失,术后1－5个月所有病人均进行了一次以上CT检查,见瘤体均有不同程度缩小,增强扫描亦未见强化灶。结论：B超引导下经皮穿刺氩氦刀治疗肝癌是一种合理,安全,有效,微创的新治疗方法。     

Mncl_2增强树突状细胞HLA-DR表达的研究

目的　探索Mncl2 对树突状细胞 (Dendriticcells .DC)HLA DR表达的影响。方法　采用流式细胞仪分析Mncl2 刺激组及阴性对照组DC表面HLA DR表达水平及HLA DR阳性细胞率。结果　Mncl2 刺激组DC平均荧光强度为 165 .97,阴性对照组为 10 5 .72 (P <0 .0 1)。刺激组DC的HLA DR阳性细胞率为 89.96% ,阴性对照组为 78.73% (P<0 .0 1)。结论　Mncl2 在体外能显著增强DC表面HLA DR表达水平及总细胞HLA DR阳性细胞率。     

IGF—Ⅰ,IGF—Ⅱ及其受体在肝癌和癌旁肝组织中的表达

目的：探讨胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ及其受体在肝癌和癌旁肝组织中的表达其意义。方法：采用ＤＮＡ－ＲＮＡ原位杂交方法检测肝癌和癌旁肝中ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－Ⅱ及其本 ｍＲＮＡ的表达。结果：在肝癌组织中ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－Ⅰ受体、ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦ－Ⅱ受体ｍＲＮＡ的表达率分别为４０．０％、４６．７％、６６．７％和６３．３％，在癌旁肝组织中ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－Ⅰ受体，ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦ－Ⅱ受体ｍＲＮＡ的表达率     

制备抗原肽所用宫颈癌细胞培养方法的建立及HLA表达的检测

目的 探讨制备抗原肽所用宫颈癌细胞的培养方法及检测其HLA的表达。方法 先利用CO2孵箱和普通培养瓶进行培养，测定其生长状况，然后流式细胞仪检测HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达，再用免疫荧光法检测不同浓度IFN-γ对Hela细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达和IFN-γ对不同培养时间Hela细胞HLA分子的表达。结果 IFN-γ能够明显提高对数生长期的Hela细胞HLA-Ⅰ类分子的表达，而IFN-γ刺激前后Hela细胞HLA-Ⅱ类分子的表达均为阴性。结论 本方法可缩短细胞培养时间，利用IFN-γ诱导细胞提高HLA-Ⅰ类分子的表达，为提供制备抗原肽所用宫颈癌细胞奠定了基础。     

Circulating intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1), E-selectin and vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) in head and neck cancer

The sera from patients with nasopharyngeal carcinoma (n = 30), oral carcinoma (n = 22) and laryngeal carcinoma (n = 22) was extracted before treatment. The concentration of circulating intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1), E-selectin and vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) was measured by enzyme-linked immunoassay and compared with those from normal subjects (n = 20). The concentration of circulating ICAM-1, E-selectin and VCAM-1 was significantly increased in nasopharyngeal carcinoma. Correspondingly, VCAM-1 and E-selectin were significantly increased in laryngeal carcinoma, whereas only E-selectin was elevated in oral carcinoma. The concentrations of these adhesion molecules did not significantly differ with respect to the early and late stages of these carcinomas. Elevated levels of soluble adhesion molecules in the sera of cancer patients at three different head and neck regions, although appearing to be implicated in these tumour formations, may be unrelated to tumour progression. © 1999 Cancer Research Campaign     

三参冲剂对肺癌转移中内皮细胞及粘附因子的影响

目的中药抗肿瘤转移机理。方法 采用三参冲剂的主要成分川芎嗪、苦参碱对肿瘤细胞与内皮细胞粘附及粘附因子表达和对内皮细胞通透性进行研究,采用三参冲睦裸鼠肿瘤转移模型进行抑制转移实验及对裸鼠Ｔｉａｍ基因的影响实验。结果 中药三参冲睦肿瘤细胞与内皮细胞的粘附具有明显的抑制作用,并可明显抑制ＣＤ４４、ＣＤ４９粘附因子的表达,还可以减轻内皮细胞的通透性,保护内皮细胞的完整,阻断了肿瘤细胞与基质的粘附,从而减少     

活化白细胞黏附分子与肿瘤

活化自细胞黏附分子(ALCAM)是免疫球蛋白基因超家族成员,主要表达在白细胞和胸腺上皮细胞.ALCAM在细胞间异嗜性黏附和同嗜性黏附中起重要作用.研究表明,ALCAM在多种肿瘤细胞表面高表达,参与肿瘤的发生发展,在人类肿瘤,ALCAM的表达与乳腺癌、食管癌、结肠癌、卵巢癌、肝癌及恶性黑色素瘤等密切相关.     

胃癌中粘附分子ICAM-1、LFA-1的表达及与TNM分期关系的研究

目的研究ICAM-1、LFA-1在正常胃粘膜中及胃癌中的表达,并评价其表达与胃癌TNM分期的关系.方法正常胃粘膜组织20例,胃癌组织40例,石蜡标本SABC免疫组化染色后,结果进行半定量分析.结果正常胃粘膜组织中各抗体的表达率ICAM-1为90%(18/20)、LFA-1为15%(3/20)、CD45RA为80%(16/20)、CD45RO为70%(14/20),胃癌组中ICAM-1、CD45RO的表达率及阳性积分均低于正常胃粘膜组.LFA-1的阳性积分低于正常胃粘膜组.ICAM-1的表达率在不同TNM分期中比较T1+T2期较T3期为高,NO期较N1+N2期为高,M0期较M1期为高.结论胃癌中ICAM-1、LFA-1、CD45RO表达下降,且ICAM-1随分级增高而有下降趋势,这可能导致机体对肿瘤细胞免疫监视作用下降,有利于肿瘤的侵袭与转移.     

细胞粘附分子CD15和HLA—DR抗原在肝癌组织中的表达研究

应用免疫组化ＳＰ法观察细胞粘附分子ＣＤ１５和ＨＬＡ－ＤＲ抗原在７例正常肝组织，１３例肝硬变和４９例肝细胞癌组织中的表达。结果显示：下沉肝组织和肝硬变组织中均无ＣＤ１５表达，仅肝癌组织中出现ＣＤ１５的阳性表达，阳性率为３０．６％；ＨＬＡ－ＤＥ抗原除在正常肝组织，肝硬变伴轻，中度不典型增生病灶和肝癌组织中的肝窦内皮细胞和枯否氏细胞有阳性表达外，２２例肝癌细胞中还见阳性染色，阳性率为４４．９％。     

A novel low-molecular weight inhibitor of focal adhesion kinase, TAE226, inhibits glioma growth

Glioblastomas are highly lethal cancers that resist current therapies. Novel therapies under development target molecular mechanisms that promote glioblastoma growth. In glioblastoma patient specimens, the non-receptor tyrosine kinase focal adhesion kinase (FAK) is overexpressed. Upon growth factor receptor stimulation or integrin engagement, FAK is activated by phosphorylation on critical tyrosine residues. Activated FAK initiates a signal transduction cascade which promotes glioma growth and invasion by increasing cellular adhesion, migration, invasion, and proliferation. We find that human glioma cell lines express different levels of total FAK protein and activating phosphorylation of tyrosine residues Tyr397, Tyr861, and Tyr925. As all glioma cell lines examined expressed phosphorylated FAK, we examined the efficacy of a novel low-molecular weight inhibitor of FAK, TAE226, against human glioma cell lines. TAE226 inhibited the phosphorylation of FAK as well as the downstream effectors AKT, extracellular signal-related kinase, and S6 ribosomal protein in multiple glioma cell lines. TAE226 induced a concentration-dependent decrease in cellular proliferation with an associated G(2) cell cycle arrest in every cell line and an increase in apoptosis in a cell-line-specific manner. TAE226 also decreased glioma cell adhesion, migration, and invasion through an artificial extracellular matrix. Together, these data demonstrate the potential benefit of TAE226 for glioma therapy.     

Antitumor effect of intratumoral injection of liposome-encapsulated G-CSF gene andin situ biological characteristics of the treated tumor cells

In order to investigate the antitumor effects of thein vivo G-CSF gene therapy mediated by liposome and its mechanisms, human G-CSF gene was encapsulated into liposome and was directly injected into tumor mass of C-26 colon adenocardnoma-bearing mice. After direct intratumoral injection of liposome encapsulated G-CSF DNA, the subcutaneous tumor growth was dramatically inhibited and the survival time was prolonged significantly. Tumor regression could be observed in about 30% of C-26-bearing mice. By the analysis of the antitumor mechanisms, we found that anti-G41s (600ug/ml) clone could be selected from the tumor cells freshly separated from the treated C-26 tumor mass, and secretion of G-CSF in the supernatant could be detected. Northern-blot also confirmed the expression of hG-CSF by the tumor cells. Higher expressions of MHC class I(H-2k^d) molecule and ICAM-1 on the tumor cells could be observed. The results demonstrated that liposome can effectively transfect G-CSF gene into tumor cellsin situ, and then increase the immunogenicity of the tumor cells which may contribute to the activation of the local antitumor immune responses effectively. This work was supported by grant from Military Medical Research Foundation of china (96z032). This is one of papers of the special issue on gene therapy research (Chin J Cancer Res Vol. 9 No. 4 December, 1997).